核心结合因子α1对成骨及促进骨折愈合作用研究进展

核心结合因子α1(Cbfa1)是成骨细胞发生和分化的特异性转录因子,能够诱导多潜能间充质细胞向成骨细胞表型分化,并激活骨钙蛋白、Ⅱ型胶原蛋白、骨桥蛋白、骨涎蛋白等成骨基因转录.成纤维细胞生长因子、骨形态发生蛋白、肿瘤坏死因子α、糖皮质激素地塞米松、雌激素受体调节剂等多种因子和激素可上调或抑制Cbfa1的表达.随着深入的...     

成骨分化特异性转录因子Cbfa1

近年来随着 Cbfa1基因的克隆及其功能的阐明 ,人们对成骨分化的分子机制有了初步了解。基因敲除、基因突变等方法证实 Cbfa1作为成骨分化的特异性转录因子 ,对成骨细胞分化、骨的发育和形成具有关键作用     

成骨细胞特异性转录因子Cbfa1重组腺病毒的构建、纯化及表达

目的构建成骨细胞特异性转录因子Cbfa1重组腺病毒载体,以期用于骨缺损、脊柱融合的体内、外研究。方法以含有全长cDNA的pCMVβ/Cbfa1为模板,PCR扩增Cbfa1,T-A克隆,酶切亚克隆到穿梭质粒pAdTrack—CMV上,在BJ5183细菌内和pAdEasy-1同源重组,筛选阳性克隆,酶切、PCR及测序鉴定,线性化后脂质体法转染293T细胞进行包装、扩增,利用报告基因GFP对病毒滴度和感染效率进行监测,CsCl梯度离心纯化病毒。AdEasy1／Cbfa1感染NIH3T3细胞后Western-blotting检测Chfa1蛋白的表达。结果测序、酶切及PCR证实Cbfa1基因重组腺病毒载体构建成功。AdEasy1／Cbfa1感染NIH3T3细胞后Western-blotting检测到Cbfa1蛋白的表达。结论成功构建了含有小鼠Cbfa1基因的重组腺病毒载体,为下一步研究基因治疗骨缺损、脊柱融合奠定基础。     

转录因子c-Jun调控成骨细胞Mepe基因表达的研究

目的:探讨转录因子c-Jun对Mepe基因的转录调控作用,并寻找c-Jun在Mepe启动子上的特异性结合位点。方法:利用免疫组织化学方法定位c-Jun与Mepe在小鼠骨组织的表达;采用real-time PCR的方法检测c-Jun的表达量改变对Mepe mRNA表达的影响;应用双萤光素酶报告基因检测系统及定点突变技术分析c-Jun对Mepe基因启动子转录活性的影响。结果:转录因子c-Jun在小鼠骨细胞胞核中呈阳性表达,而Mepe在小鼠骨细胞的胞浆中有表达;real-time PCR显示c-Jun过表达后,Mepe mRNA的表达显著增加(P0.05);双萤光素酶报告基因检测系统检测显示,在成骨细胞中转染p CMV-3Tag-1-c-Jun的实验组Mepe启动子的转录活性升高(P0.05);定点突变c-Jun的潜在结合位点后,Mepe启动子的转录活性显著下降(P0.05)。结论:转录因子c-Jun可通过Mepe启动子上潜在的c-Jun结合位点上调成骨细胞中该基因的转录。     

骨形成调控机制研究进展

骨形成的调控包括对成骨细胞 (OB)分化及功能的调控 ,Cbfa1目前被认为是OB分化和功能的中心调控因子 ,其表达受许多蛋白及自身负调控的影响。OB的分化受多个生长因子家族成员的调控及分化细胞之间的相互调控 ;OB的功能还受激素、中枢神经系统、他汀类药物、细胞外间质及机械压力、年龄、性别等因素的影响。     

甲状腺转录因子1在卵巢癌组织的表达

目的:探讨甲状腺转录因子1在卵巢癌中的表达及临床意义。方法:采用免疫组化技术检测25例卵巢癌组织中甲状腺转录因子1蛋白的表达,并分析其与临床病理资料的关系。结果:甲状腺转录因子1蛋白表达位于细胞质.甲状腺转录因子1蛋白的表达与临床分期有关,晚期(Ⅲ,Ⅳ期)甲状腺转录因子1蛋白的表达水平明显高于早期(Ⅰ,Ⅱ期,P0.05),中低分化癌甲状腺转录因子1蛋白的表达明显高于高分化癌(P0.05),但甲状腺转录因子1蛋白的表达与组织学类型无关。结论:甲状腺转录因子1基因表达可能与卵巢癌的恶性程度有关.可作为预后判断的独立指标。     

骨髓基质干细胞成骨分化过程中Wnt、骨形态发生蛋白2信号通路相关因子与辛伐他汀的作用

背景：辛伐他汀可促进体外培养的人或鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞分化,但作用机制尚不清楚。 目的：观察辛伐他汀对大鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞分化过程中Wnt与骨形态发生蛋白2信号途径中相关因子表达的影响。 方法：取6周龄雌性SD大鼠双侧股骨、胫骨全骨髓进行体外成骨细胞诱导培养。实验分为对照组及SIM组。SIM组加入浓度为10-7 mol/L辛伐他汀,对照组加入等量无水乙醇和PBS。培养14 d,行碱性磷酸酶染色,28 d时,行von Kossa染色观察细胞外基质矿化情况;培养14,21 d,免疫荧光细胞化学染色观察成骨细胞中β-catenin,Smad1/5,Cbfa1的表达及分布。  结果与结论：大鼠骨髓基质干细胞经体外诱导后可分化为具有碱性磷酸酶活性和矿化细胞外基质能力的成熟成骨细胞。辛伐他汀可显著上调骨髓基质干细胞成骨分化过程中碱性磷酸酶的表达。同时,与对照组比较,SIM组β-catenin,Smad1/5,Cbfa1表达明显增多(P < 0.05),且呈现明显的核内聚集趋势。说明辛伐他汀促进骨髓基质干细胞向成骨细胞分化的作用可能与调控Wnt与骨形态发生蛋白2信号通路中相关因子的表达及细胞内分布有关。     

蝙蝠葛碱对成骨细胞分化成熟的影响

目的探讨蝙蝠葛碱对成骨细胞分化成熟的影响及其机制。方法正常人成骨细胞株(NHOst)培养在含有100ng/ml的蝙蝠葛碱的培养基中,7d后,通过相差显微镜观察细胞形态的变化,通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALPase)和硝酸银(Von Kossa)镀银染色检测钙沉积。通过RT-PCR分析核心结合因子A1(Core binding factor A1,Cbfa1)mRNA的表达。通过Western-blot检测骨基质蛋白Osteocalcin的表达。结果培养7d后,实验组细胞呈岛样生长并开始分化或熟,成熟的细胞形成骨结节,而对照组细胞则未见骨结节形成。通过碱性磷酸酶和硝酸银镀银染色发现,实验组细胞可见钙沉积,而对照组细胞未见钙沉积。实验组Cbfa1和Osteocalcin的表达都明显高于对照组。结论蝙蝠葛碱可促进骨细胞分化成熟。     

骨髓间充质干细胞诱导成骨细胞模型中活化转录因子4基因的表达

背景:研究发现活化转录因子4为近调控成骨细胞分化和功能的活化因子,在成骨细胞分化过程中起着至关重要的作用。目的:探索SD大鼠骨髓间充质干细胞成骨诱导过程中活化转录因子4基因的表达变化及其意义。方法:以全骨髓贴壁法培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,传代至第3代细胞时加入成骨诱导剂,在诱导的第0,1,4,7,10,13,16,19天分别采用PT-PCR,Western blot动态监测活化转录因子4基因及蛋白的表达变化,以未进行成骨诱导细胞做对照。结果与结论:RT-PCR结果显示,活化转录因子4 mRNA的表达随着细胞成骨分化程度加剧而升高,16 d达到峰值。Western blot分析结果显示,活化转录因子4蛋白表达量随着骨髓间充质干细胞骨化程度加剧,表达水平亦呈上升趋势,于16 d达到高峰,19 d维持在高水平状态。实验组各时间点活化转录因子4 mRNA和活化转录因子4蛋白表达与对照组相比差异有均有显著性意义(P0.05)。结果表明诱导成骨细胞中活化转录因子4表达增强,提示活化转录因子4的增强与骨髓间充质干细胞成骨分化能力呈正相关。     

Nrf2基因敲除抑制应力负荷下骨形成

目的培养核转录因子2(Nrf2)基因敲除小鼠原代成骨细胞,研究Nrf2基因在应力所致骨形成中的作用。方法选取同窝杂交出生的幼鼠分为Nrf2基因敲出组(KO)及野生组(WT),在颅骨中分离出初级2成骨细胞,在平板流动腔中进行60 min的震荡流体剪切应力实验(12dynes/cm,Fluid Shear Stress FSS),后提取RNA,进行实时定量PCR分析Nrf2 m RNA。结果震荡60 min使野生组Nrf2m RNA的表达水平增加,但基因敲出组没增加。NAD(P)H醌氧化还原酶1(NQO1)m RNA和Wnt5a m RNA在Nrf2基因敲出组成骨细胞中的表达水平较野生组显著减少,而RANK配体m RNA表达水平显著上调。FSS也刺激WT组成骨细胞中Wnt3a和Wnt5a m RNA的表达,但是在Nrf2 KO组没有作用。结论 Nrf2基因敲出抑制成骨细胞的增长和活性,提示Nrf2基因促进应力负荷下成骨细胞的生长     

血管活性肠肽在人颅脑损伤伴骨折中的表达及意义

目的探讨外周血中血管活性肠肽(VIP)在颅脑损伤合并骨折时的表达及意义。方法 ELISA检测血管活性肠肽及成骨标志性因子核心结合因子1(Cbfa1)在颅脑损伤合并骨折、单纯骨折、单纯颅脑损伤患者及正常志愿者中的表达,X射线评价颅脑损伤合并骨折及单纯骨折组的骨折愈合情况。结果血管活性肠肽在颅脑损伤合并骨折患者中的表达明显高于单纯骨折患者和正常人; Cbfa1在颅脑损伤合并骨折患者中的表达高于单纯骨折组,并且Cbfa1的表达强度与颅脑损伤程度相关,X射线证实血管活性肠肽和Cbfa1表达水平高的颅脑损伤合并骨折患者的骨折愈合加速。结论颅脑损伤导致的血管活性肠肽的高表达与骨折愈合呈正相关。     

健骨颗粒促进成骨细胞增殖的分子机制

背景：ERK是依赖于Ras途径激活的一个蛋白激酶,在成骨细胞增殖和分化过程中发挥重要作用。而PD98059是MEK特异性抑制剂,它可通过抑制MEK的活性来抑制ERK的磷酸化,从而起到阻断ERK信号通路的作用。目前有关ERK在大鼠成骨细胞增殖和分化过程中的作用研究甚少。ERK在健骨颗粒促进大鼠成骨细胞增殖和分化过程中调控的作用更未被阐明。 目的：观察ERK信号转导通路在健骨颗粒促成骨细胞增殖和分化过程中的作用。 方法：取第3代SD大鼠头盖骨成骨细胞,空白组加入生理盐水血清;中药组加入最佳浓度的健骨颗粒含药血清;阻滞剂组添加PD98059阻断剂,中药加阻断剂组添加PD98059阻断剂与健骨颗粒含药血清。用MTT法测定细胞的增殖能力,比色法测碱性磷酸酶、羟脯氨酸水平。收集细胞实时荧光定量PCR-SYBR GREEN法检测Cbfa1、Ⅰ型胶原、OSX mRNA的表达,Westren blot法检测成骨细胞ERK的表达情况。 结果与结论：添加PD98059阻断剂后,阻滞剂组和中药加阻滞剂组中ERK的表达显著低于空白组和中药组。阻断剂组的成骨细胞内碱性磷酸酶、羟脯氨酸的表达以及Cbfa1、Ⅰ型胶原、OSX mRNA表达显著低于空白组和中药组。ERK在健骨颗粒促进大鼠成骨细胞增殖和分化过程中发挥重要作用,ERK信号通路可能是健骨颗粒促进成骨细胞增殖和分化的主要途径。     

鉴定调控 L-plastin在非激素依赖型前列腺癌中表达的转录因子SP-1

目的:鉴定调控 L-plastin在非激素依赖型前列腺癌中表达的转录因子，进一步阐明非激素依赖型前列腺癌的发病机理。 方法:在鉴定L-plastin启动子近3’端－216到1序列片段存在明显的转录活性的基础上，利用TF SEARCH软件分析该片段的序列，寻找调控L-plastin表达的非甾体激素类转录因子，并用凝胶滞后实验和超滞后实验证实结合于该片段的转录因子，利用PCR定点突变法构建删除该转录因子结合位点的重组子，并检测切除该片段序列后荧光素酶活性变化。 结果:TF SEARCH软件分析表明在距转录起始点-54--41 bp处含有SP-1转录因子结合位点GGTGGGGCGGGGA，凝胶滞后实验和超滞后实验表明SP-1是结合于L-plastin启动子3’端该序列的转录因子，删除SP-1结合位点后荧光素酶活性下降。 结论:SP-1是促进L-plastin在非激素依赖型前列腺癌中表达的重要调控因子。     

微支抗种植体及不同矫治力作用下髁突软骨中核心结合因子a1的表达

背景：近年来微支抗种植体以其操作简单、创伤小、支抗强等优点被正畸医生广泛应用于口腔正畸临床,但鲜见用于Ⅱ类颌间的牵引。 目的：以微种植体为支抗,探讨不同矫治力促兔下颌前导后髁突软骨中核心结合因子a1蛋白的表达及与髁突改建的影响。 方法：8 周龄健康新西兰大耳白兔随机分为实验组和对照组,实验组根据矫治力的不同分为100 g、200 g、300 g和 400 g组。实验组动物以微型螺钉种植体为支抗,对兔下颌进行Ⅱ类颌间牵引。实验后4周取材,检测髁突软骨中Cbfa1的表达。 结果与结论：下颌持续牵引后,髁突后区各层的厚度明显高于髁突中前部。与对照组相比随矫治力的增加髁突各层厚度增加,髁突软骨中Cbfa1表达也明显增加,至200 g时达到峰值,而后随矫治力的增加,髁突各层厚度逐渐变薄,髁突软骨中Cbfa1表达也逐渐降低(P < 0.05),提示矫治力能影响髁突软骨中Cbfa1的表达,说明适宜的矫治力作用有利于髁突软骨的改建。     

氟对成纤维细胞核心结合因子α1及增殖活性量-效关系的影响

背景：氟通过刺激成纤维细胞向成骨细胞方向转化,可能在氟性骨损伤骨周化骨中起重要作用。核心结合因子α1作为成骨细胞特异性转录因子,是成骨细胞分化以及成骨的必要条件。 目的：观察不同质量浓度氟化钠干预体外培养新生大鼠皮肤成纤维细胞不同时间后核心结合因子α1的表达及成纤维细胞的增殖活性。 方法：采用细胞原代培养方法,将细胞分为对照组和7个染氟组(0.000 1,0.001,0.01,0.1,1,10,20 mg/L),分别在4个染氟时间段(24,48,72,96 h)收集细胞培养上清液,应用酶联免疫法测定核心结合因子α1的含量;采用四甲基偶氮唑盐比色法观察氟对成纤维细胞增殖活性的影响。 结果与结论：氟能提高成纤维细胞核心结合因子α1的表达,核心结合因子α1可能在成纤维细胞致氟性骨损伤骨周化骨中起重要作用。氟对成纤维细胞的增殖活性的影响呈一定的剂量-时间-效应关系,短时间-低剂量的氟可提高成纤维细胞的增殖活性,随着染氟剂量的增加及染氟时间的延长,成纤维细胞增殖活性明显减弱。     

缺氧诱导因子1研究进展

缺氧诱导因子1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)是由两个蛋白质亚基组成的二聚体转录因子,对缺氧具有特异感受性,它的表达受细胞内氧分压的严密调节。HIF-1参与体内许多缺氧反应性基因的转录调节,是机体缺氧应答反应中的关键作用因子。     

转录因子Sp1和Sp3对食管癌细胞ezrin基因的表达调控作用

目的:明确转录因子Sp1和Sp3对食管癌细胞ezrin基因的表达调控作用.方法:将转录因子表达载体CMV-Sp1和CMV-Sp3分别转染食管癌EC109细胞,采用定量RT-PCR和Western blot技术检测过表达转录因子Sp1和Sp3对ezrin mRNA和蛋白表达的影响;将ezrin基因启动子驱动的报告基因表达载体与内参照质粒pRL-TK和转录因子表达载体共转染EC109细胞,采用双荧光素酶报告基因分析系统检测转录因子Sp1和Sp3对ezrin基因启动子的激活作用以及这种激活作用是否依赖于ezrin基因的Sp1结合位点-75/-69.结果:过表达转录因子Sp1和Sp3显著提高EC109细胞ezrin mRNA和蛋白表达水平以及启动子活性.Sp1和Sp3增强ezrin基因启动子活性的作用位点不同,只有Sp1通过-75/-69位点调控ezrin基因启动子活性.结论:转录因子Sp1和Sp3可调控EC109细胞ezrin基因的表达.     

热休克因子1与恶性肿瘤

热休克因子1 (heat shock factor 1,HSF1) 是调控真核生物热休克反应的主要转录因子。HSF1的作用远不止诱导热休克蛋白（heat shock protein, HSP）表达, 也是肿瘤发生的一个有力调节因子,对肿瘤的起始和维持是必需的。HSF1在肿瘤发生中的可能机制是：作为转录因子诱导HSP90和抑制雌激素反应元件调节的基因和XAF1基因的表达;HSF1作为非转录因子诱导细胞有丝分裂停止和基因组不稳定性。