流式细胞术检测胞内细胞因子的经验分析

目的 探讨流式细胞术检测胞内细胞因子的注意事项.方法 制备小鼠脾脏淋巴细胞悬液.采用细胞表面抗原CD4、CD25及细胞核内因子FOXP3染色检测调节T细胞,胞内因子TNF-α的检测采用PMA/Iono-mycin,anti-CD3/CD28,PMA/Ionomycin与anti-CD3/CD28联合3种方案进行刺激,比较不同刺激条件下TNF-α胞内因子的表达情况,培养后各组细胞悬液采用固定破膜处理技术进行细胞表面抗原CD3、CD4及细胞内因子TNF-α染色.结果 脾脏淋巴细胞悬液制备中研磨 、裂解红细胞及染色过程中破膜等操作的不当,均导致前向/侧向(FSC/SSC)点图中目的细胞群模糊不清,从而影响后续分析.新鲜脾脏淋巴细胞得率、CD3+T淋巴细胞得率及TNF-α表达率与冻存的脾脏各类细胞比较,差别无统计学意义(P>0.05).胞内因子TNF-α检测结果显示,刺激组PMA/Ionomycin以及anti-CD3/CD28表达率显著高于未刺激组(P<0.05),PMA/Ionomycin与anti-CD3/CD28联合刺激组的表达率也显著高于未刺激组和独立刺激组(P<0.05).结论 流式细胞术胞内细胞因子的检测有很多影响因素,包括脾脏细胞悬液制备中的研磨、裂解红细胞操作,染色处理过程中的破膜、固定,上机检测过程中补偿的调节、对照的设置等均影响实验结果,检测前应注意摸索选择适合待测胞内因子的测定条件.     

佛波酯对人外周血淋巴细胞CD3和CD4及CD8分子表达的作用

目的:分析佛波酯(PMA)对细胞表面CD3、CD4和CD8表达的影响,及与胞浆内细胞因子分泌的关系.方法:取10例健康儿童及27例呼吸道感染患儿外周血单个核细胞作体外培养后,用不同浓度及时间PMA刺激后作胞浆内细胞因子及细胞表面分子标记物分析.结果:与未刺激组相比,PMA不同浓度(5、10、20和50 ng/ml)刺激4 h后CD4表达均有明显下降,分别从41.03%、40.18%、42.29%及42.85%下调至28.22%、24.44%、26.09%及25.70%,10 ng/ml浓度刺激4、6 h后细胞表面CD4也有显著下调,分别从45.54%及40.56%下调至28.88%及20.03%,且CD4表达与胞浆内细胞因子分泌呈负相关(r=-0.601,P<0.001).PMA对CD3(刺激前后分别为49.57%及51.54%)及CD8(刺激前后分别为13.02%及12.85%)表达差异无显著性,而在CD3 T淋巴细胞中,CD4-CD8-细胞仅占5.52%.结论:PMA刺激对辅助性T淋巴细胞(Th)表面CD4表达有显著下调作用,且Th细胞胞浆内细胞因子分泌越多,CD4分子下调越明显,而PMA对CD3及CD8无明显下调作用.可采用CD3 CD8-表面标记的方法间接定义Th细胞,替代CD4分子,以避免PMA这种效应对Th1/Th2数量检测所带来的困难.     

胃癌患者外周血MoDCs功能活性检查及意义

目的以胃癌患者外周血单个核细胞培养树突状细胞(monocyte derived dendritic cells,MoDCs)为研究对象,检测功能表达,分析其临床意义,并初步探索改进MoDCs功能的方法.方法胃癌患者及健康成人外周血单个核细胞体外经GM-CSF/IL-4诱导培养MoDCs,检测其CD40、CD80和CD83表达.在DCs培养中分别加入不同浓度LPS和TNF-α,检测对DCs表面分子表达及T淋巴细胞刺激增值作用的改变.结果胃癌患者外周血培养获成熟MoDCs数量较少,其CD40、CD80、CD83表达较正常对照显著下调,对T淋巴细胞的刺激增殖作用显著低于正常.LPS(100ng/ml)和TNF-α(1 000 U/ml)能刺激CD40、CD80和CD83表达上调并改善其活化T淋巴细胞功能.结论胃癌患者MoDCs与正常成人相比有很大差异,免疫功能差.LPS、TNF-α可显著改善MoDCs功能状态,可作为以DCs为基础的胃癌生物治疗细胞来源.     

白介素-18增强T淋巴细胞直接接触激活的单核细胞分泌细胞因子的功能

目的:研究IL-18是否参与调节T细胞通过直接接触激活的单核细胞的功能及其细胞内机制。方法:采用磁珠分离技术从健康人外周血分离纯化T细胞和单核细胞,被植物血凝素(PHA)预刺激的T细胞用多聚甲醛固定后按41与单核细胞共培养。采用ELISA法测定上清中肿瘤坏死因子(TNF)-α和IL-18的含量。采用流式细胞仪分析单核细胞表面IL-18受体α链的表达(IL-18Rα)。结果:PHA刺激48 h或72 h的T细胞诱导单核细胞产生的TNF-α显著高于未接受PHA刺激的T细胞。单独培养的单核细胞和T细胞几乎不产生TNF-α。T细胞直接接触可诱导单核细胞产生IL-18,且该作用能被核因子(NF)-κB抑制剂N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)和磷脂酰肌醇(PI)3-激酶抑制剂LY294002分别抑制,但有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB203580对之无作用。与T细胞共孵育24 h的单核细胞表面IL-18Rα的表达明显上调。单克隆的IL-18中和抗体呈剂量依赖性抑制与T细胞共孵育的单核细胞产生TNF-α。IL-18不能促进单纯的单核细胞产生TNF-α,但呈剂量依赖性地促进由于接触T细胞膜而激活的单核细胞产生TNF-α,且该作用可被NAC和LY294002分别拮抗,但不受SB203580影响。结论:T细胞可通过直接接触诱导单核细胞产生TNF-α和IL-18,上调单核细胞表面的IL-18R,并激活单核细胞内的NF-κB和PI3-激酶。IL-18可增强T细胞接触激活的单核细胞分泌致炎细胞因子的功能,该作用依赖细胞内NF-κB和PI3-激酶途径的激活。     

NDV7793促进人CD4~+T细胞表达TRAIL的实验研究

目的:研究新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)弱毒株NDV7793能否促进人CD4+T细胞表达肿瘤坏死因子相关凋亡因子诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)。方法:首先用免疫磁珠分选法(magnetic activated cell sorting,MACS)分选外周血静止CD4+T细胞,然后加抗CD3抗体、抗CD28抗体和白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)使之成为能被NDV激活的CD4+T细胞。用流式细胞技术(flow cytometry,FCM)检测NDV刺激的CD4+T细胞的TRAIL的表达水平。结果:MACS法分选外周血得到的CD4+T细胞纯度达到(97.38±0.28)%;能被NDV激活的CD4+T细胞表面分子CD25和CD69双阳性表达率可达(29.30±1.08)%,与PBS阴性对照组(2.40±1.30)%相比,差异有统计学意义(P0.05);FCM检测结果显示,与对照组比较,NDV7793刺激的CD4+T细胞TRAIL表达水平均有显著升高,且在NDV7793效价为25 HU时达到最大值。结论:NDV7793可刺激CD3抗体、CD28抗体和IL-2预先活化的CD4+T细胞表达TRAIL。     

不同刺激剂对健康人和结核患者外周血T细胞产生γ干扰素和肿瘤坏死因子-α的影响

目的:检测健康人和结核患者外周血经不同刺激剂刺激后T细胞亚群产生γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化。方法:12名健康人和12例结核患者的外周血单个核细胞用佛波醇脂(PMA)+钙离子霉素(IM)、结核杆菌耐热抗原(Mtb-HAg)、植物血凝素(PHA)刺激,莫能霉素阻断,流式细胞仪检测产生IFN-γ和TNF-α的T细胞亚群比例。结果:PMA+IM刺激健康人外周血αβ T细胞产生IFN-γ的比例明显高于结核患者(P<0.01);PMA+IM、Mtb-HAg和PHA刺激健康人外周血γδ T细胞产生IFN-γ的比例高于结核患者(P<0.05~P<0.01)。PMA+IM和PHA刺激健康人外周血αβ T细胞产生TNF-α的比例均高于结核患者(P<0.05);PMA+IM和PHA刺激健康人外周血γδ T细胞产生TNF-α的比例均高于结核患者(P<0.05)。结论:经不同刺激剂刺激后,健康人γδ T细胞产生IFN-γ的比例高于结核患者γδ T细胞产生IFN-γ的比例。经PMA和PHA刺激后,健康人αβ T和γδ T细胞产生TNF-α的比例高于结核患者。     

NCTD和IFN-γ对Jurkat细胞mTRAIL表达的影响

目的 研究NCTD和IFN-γ对T细胞Jurkat TRAIL 表达的影响.方法 培养Jurkat,用不同浓度的IFN-γ和NCTD处理细胞,流式细胞术分析细胞表面TRAIL表达和细胞内活性氧水平.结果 IFN-γ以浓度依赖的方式上调Jurkat细胞TRAIL表达,而NCTD可增强IFN-γ对TRAIL的上调效应;NCTD可增加细胞内活性氧的表达.结论 NCTD可能通过活性氧调节的信号途径协同IFN-γ增强TRAIL的表达.     

口腔颌面部恶性肿瘤患者CD4+T细胞缺陷的初步分析

目的:初步探讨口腔颌面部恶性肿瘤患者免疫抑制的原因.方法:检测患者外周血淋巴细胞亚群及体外淋巴细胞增殖水平.结果:患者的 CD4+ T细胞数量增多,但对PHA和SEB刺激的反应性均低于正常人.在PHA刺激下,恶性肿瘤患者组 CD4+ T细胞百分含量呈下降趋势.结论:患者外周血中 CD4+ T细胞表面受体的vβ部分可能存在缺陷.     

牛磺酸影响人外周血T淋巴细胞增殖及分化功能的体外研究

目的：研究牛磺酸（Tau）对人外周血T淋巴细胞体外活化增殖及分化的影响及其作用机制。方法：无菌分离健康志愿者外周血淋巴细胞,建立植物凝集素（PHA）刺激T细胞体外活化增殖模型。实验设置对照组（control组）、PHA刺激组（PHA5μg/mL组）及Tau处理组（PHA+Tau 80 mmol/L组、PHA+Tau 160 mmol/L组）。细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测T淋巴细胞增殖率;瑞—吉染色法观察细胞形态及计算转化率;实时荧光定量PCR检测T细胞增殖标志物Ki67,Th1转录因子T-bet及细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),Th2转录因子GATA-3及白介素-4/6(IL-4/6),凋亡相关因子Fas、FasL基因表达水平;活性氧（ROS）试剂盒检测细胞内ROS水平。结果：与control组相比,PHA 5μg/mL组T淋巴细胞转化率、增殖率、增殖标志物Ki67、Th1相关因子T-bet、IFN-γ、TNF-α、凋亡相关因子Fas基因表达及胞内ROS水平升高（P<0.05）,凋亡相关因子FasL基因,Th2相关因子GATA-3、IL-6...     

肿瘤坏死因子和干扰素对大肠癌Fas配体表达的调控作用

目的 :探讨不同细胞因子对大肠癌细胞 Fas配体 (Fas L )表达水平的调控作用。方法 :采用 Western印迹法测定了两种细胞因子 (1× 10 6 U / L TNF-α或 IFN-γ)处理后大肠癌细胞 Fas L表达水平的变化。结果 :所检测的 6株大肠癌细胞全部表达 Fas L蛋白 ;TNF-α和 IFN-γ处理 DL D- 1细胞 10 h,显著上调其 Fas L蛋白的表达水平 ;TNF-α和 IFN-γ以及 PMA +离子霉素 (ionomycin)处理 SW6 2 0细胞 10 h,也显著上调 SW6 2 0细胞的 Fas L蛋白表达水平。 TNF-α和 PMA +离子霉素处理SW6 2 0细胞 48h进一步增加 SW6 2 0的 Fas L 蛋白表达 ,IFN- γ处理 SM6 2 0则表达增加不明显。结论 :TNF- α和 IFN- γ等细胞因子具有上调某些大肠癌细胞 Fas L 表达的作用     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。