松果菊苷对人增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1/Smads信号通路影响的实验研究

目的 基于TGF-β1/Smads信号通路探讨松果菊苷(echinacoside,ECH)对人增生性瘢痕成纤维细胞(HSFbs)的作用机制.方法 自2019年3月至2020年2月新疆医科大学第一附属医院整形外科体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞;通过CCK-8法分析ECH作用24 h和48 h细胞的抑制活性.采用划痕试验检...     

氧化苦参碱通过TGF-β-Smad信号通路调控人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及功能

目的 研究氧化苦参碱(OM)对人增生性瘢痕(HS)成纤维细胞增殖、α平滑肌肌动蛋白(α-SM-Actin),Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响,以及对Smad3和Smad7蛋白表达量的影响,探讨OM对HS成纤维细胞抑制作用的可能机制.方法 体外常规培养HS成纤维细胞,CCK-8检测不同浓度OM对细胞增殖的抑制情况;real-time PCR检测α-SM-Actin、Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达;Western blotting检测Smad3和Smad7蛋白量的改变.结果 OM干预后成纤维细胞增殖明显受抑制,抑制率呈现OM浓度依赖性.OM浓度为400 mg/L时,抑制率为53.44%;Ⅰ、Ⅲ型胶原及α-SM-Actin的mRNA相对表达量均明显低于无OM干预组细胞;Smad3蛋白表达下降了48.16%,而Smad7蛋白表达量增加了55.24%.结论 OM作用于HS成纤维细胞可产生抑制效应,其部分机制是通过TGF-β-Smad信号通路的负性调节,实现对细胞的胶原合成及收缩功能的抑制.     

苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的：探讨苦参碱（Matrine,简称Mat）的药理活性,研究苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的抑制作用,为皮肤损伤后出现的增生性瘢痕的治疗提供理论支持及实验依据。方法：将不同浓度梯度Mat作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞,测MTT反应的A。值及LDH值,利用通过流式细胞仪检测其细胞周期、DNA相对含量,用免疫组织化学检测Mat用药前后的细胞核内增殖性抗原（pr01iferatingcell nuclear antigen,PCNA）的表达。结果：增生性瘢痕成纤维细胞在一定范围内呈剂量依赖性增殖抑制,但LDH值无明显改变;DNA相对含量无明显变化,PCNA表达逐渐减弱。结论：Mat在体外能明显抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖而不引起细胞坏死性改变,但对DNA含量无明显影响。     

TGF-β与增生性瘢痕相关性的研究进展

瘢痕(scar)从病理学上可分为正常瘢痕(normal scar)和病理性瘢痕(abnormal scar)。以病理性瘢痕最多见[1],主要包括增生性瘢痕(hypertrophic scar,HS)和瘢痕疙瘩(keloid,K)。HS是由创伤、炎性反应等引起,以成纤维细胞(Fibroblast,Fb)增殖失控和胶原等大量细胞外基质(Extra cellular matrix,ECM)过度产生和沉积为特征的人类真皮区特有的纤维代谢性疾病[2-4],     

苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞超微结构的影响

目的：研究苦参碱（Matrine,Mat)对人增生性瘢痕成纤维细胞超微结构的影响。方法：将Mat作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞,利用透视电镜、扫描电镜观察细胞的形态变化。结果：Mat可使增生性瘢痕成纤维细胞的超微结构的发生变化;细胞内粗面质网减少,核糖体有部分脱粒,解聚现象,溶解体酶,核染色质浓缩集聚至核膜周边,出现凋亡早期的改变,细胞外表面较用药前光滑,合成分泌的基质明显减少,结论：Mat在体外能明显抑制增生性瘢痕成纤维细胞的功能并引起其超微结构发生改变。     

5-FU抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖与cyclinD1、CDK4和TGF-β1表达的关系

目的 研究5-FU抑制增生性瘢痕组织成纤维细胞的增殖与细胞因子cyclinD1、CDK4、TGF-β1表达的关系及其作用机制.方法 组织块法培养增生性瘢痕组织及正常皮肤组织的成纤维细胞.用不同浓度的5-FU,作用于体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞,检测MTT值;利用半定量RT-PCR分析用药前后cyclindl、CDK4、TGF-β1 mRNA表达的变化.结果 5-FU在体外能抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,其抑制率随5-FU浓度的增加而增高;并且5-FU能明显抑制cyclinD1、CDK4、TGF-β1 mRNA的表达.结论 5-FU能抑制增生性瘢痕中成纤维细胞的增殖,其机制与5-FU能明显降低cyclinD1,CDK4和TGF-β1的表达有关.     

柑皮提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原代谢的作用

目的观察柑皮提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖以及胶原代谢的影响。方法人增生性瘢痕皮肤标本取自笔者单位行整形术的2例烧伤患者。采用组织块法培养成纤维细胞后分为:实验组,细胞加入成纤维细胞培养基与柑皮提取物,并根据提取物的浓度分为2．5、5．0、10．0、25．0 mg／L4个部分;空白对照组,细胞仅加入成纤维细胞培养基;对照组,细胞加入体积分数5％乙醇与成纤维细胞培养基。采用噻唑蓝比色分析法、原位缺口末端标记法及放射免疫法观察各组成纤维细胞增殖情况,计算增殖抑制率;计算凋亡指数(AI)以及检测Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(ICTP)、Ⅰ型前胶原氨基端前肽(PINP)含量的变化。结果实验组2．5-25．0 mg／L柑皮提取物的细胞增殖抑制率分别为(7．100±0．038)％、(8．100±0．048)％、(10．900±0．055)％、(15．900±0．097)％; AI分别为69．7％、71．7％、86．4％、95．2％;ICTP分别为(17．2±0．6)、(18．3±0．6)、(19．8±0．5)、(23．2±0．6)μg／L;PINP分另0为(101．7±1．4)、(107．8±1．1)、(111．6±1．2)、(124．6±1．3)μg／L,均明显高于对照组(P<0．05)。空白对照组上述指标与对照组相近(P>0．05)。结论柑皮提取物能抑制人增生性瘢痕成纤维细胞增殖,促进其凋亡及Ⅰ型胶原分解,具有治疗和预防增生性瘢痕的作用。     

苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞合成胶原的影响

目的：研究苦参碱对人瘢痕成纤维细胞合成胶原的影响。方法：将苦参碱作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞,分别测定其分泌胶原、Ⅲ型前胶原、细胞内胶原含量。结果：苦参碱可减少瘢痕成纤维细胞分泌胶原、细胞内胶原和Ⅲ型前胶原的含量。结论;苦参碱在体外能明显抑制增生性瘢痕成纤维细胞胶原的合成。     

6-O-羧甲基壳聚糖对人增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β_1表达的影响

目的：观察不同浓度6-O-羧甲基壳聚糖（6-O-CMC）对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞（hypertrophic scar fibrob lasts,HSFBs）转化生长因子-β1（transforming growth factor-beta1,TGF-β1）蛋白及mRNA表达的影响,在分子水平上探讨其抑制增生性瘢痕生长的作用机制。方法：体外培养人HSFBs,选取第3～5代细胞进行下一步实验。实验分组采用含不同浓度6-O-CMC（0,100,200,400μg/ml）的DMEM培养液分别进行培养。培养24h后,显微镜下观察各组HSFBs形态及生长情况。收集细胞培养上清,运用双抗体夹心ELISA法检测各组TGF-β1蛋白表达水平。运用荧光定量RT-PCR技术检测各组TGF-β1 mRNA表达水平。结果：与空白组相比,三个药物剂量组HSFBs TGF-β1蛋白及mRNA的表达均减少（P〈0.05）,药物浓度越高表达量越低（P〈0.05）,且TGF-β1蛋白及mRNA表达的变化具有一致性。结论：6-O-CMC有抑制体外培养的人HSFBs TGF-β1表达的作用,初步探讨了6-O-CMC发挥抑制增生性瘢痕生长的作用机制,为羧甲基壳聚糖类药物的开发利用提供理论依据。     

三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞转分化的作用

目的 观察三七总甙（PNS）对人增生性瘢痕成纤维细胞（HSF）向肌成纤维细胞转分化的作用，探讨PNS抗瘢痕纤维化的机制。方法 体外培养HSF，采用不同浓度的PNS进行干预，根据细胞培养所加PNS浓度分为400μg／ml组、800μg／ml组及空白对照组（不加PNS）。采用细胞三维培养法检测HSF凝胶收缩情况，计算其收缩指数；免疫细胞化学染色法检测HSF中“平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达；流式细胞仪检测HSF中α-SMA阳性细胞率。结果 400μg／ml、800μg／ml组各时相点的胶原凝胶块收缩程度明显减轻，其收缩指数均小于空白对照组（P〈0．05或P〈0．01）。HSF中α-SMA阳性表达颗粒在细胞质内呈弥漫性分布；空白对照组HSF中α-SMA的阳性表达明显强于400μg／ml、800μg／ml组。400μg／ml、800μg／ml组α-SMA的阳性细胞率（31．52％、24．28％）均明显低于空白对照组（45．74％，P〈0．05）。400l,Lg／ml、800μg／ml组α-SMA的阳性细胞染色强度积分均明显低于空白对照组（P〈0．05或P〈0．01）。结论 PNS能够抑制HSF向肌成纤维细胞的转分化，具有体外抗瘢痕纤维化的作用。     

水蛭素对人增生性瘢痕成纤维细胞细胞周期的影响

目的 探讨水蛭素对人增生性瘢痕成纤维细胞细胞周期的影响,为临床应用水蛭素治疗增生性瘢痕提供理论基础.方法 用消化法进行人增生性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞的体外培养,用流式细胞仪检测不同浓度水蛭素对不同来源的成纤维细胞细胞周期的影响,用Western印迹法检测部分与细胞周期相关的蛋白（细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p27及细胞周期蛋白E（cyclin-E）的表达.结果 随着水蛭素浓度的增加,人体正常皮肤及增生性瘢痕组织成纤维细胞G1期细胞增加而S期细胞则减少,周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p27的表达上调,细胞周期蛋白E的表达下调.结论 水蛭素通过影响细胞周期调控蛋白的表达,使正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞的周期分布发生改变,导致细胞周期G1期阻滞（G1 phase arrest）,从而抑制成纤维细胞增生,因此水蛭素对于瘢痕的防治有一定的作用.     

三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1和细胞周期的作用

目的 观察三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1和细胞周期的作用。方法体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞，并应用三七总甙进行干预，用免疫细胞化学染色法结合图像分析观察TGF-β1的表达变化，用流式细胞仪测定细胞周期的变化。结果与对照组相比，三七总甙能够显著抑制细胞TGF-β1的表达，并使细胞停滞于S期，而G0-G1期、G2-M期细胞明显减少（P〈0．01）。结论三七总甙改变细胞周期和抑制增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1的表达，可能成为防治增生性瘢痕的药物。     

反义寡核苷酸对TGF-β1诱导的人增生性瘢痕成纤维细胞的影响

目的 观察结缔组织生长因子(CTGF)反义寡核苷酸(ASODN)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人增生性瘢痕成纤维细胞(HSF)的影响,探讨CTGF ASODN对人增生性瘢痕的作用.方法 将体外分离、培养的人正常皮肤成纤维细胞(NSF)和HSF分成A(NSF)、B(HSF)、C(HSF+TGF-β1)、D(HSF+TGF-β1+CTGFASODN)四组.经TGF-β1(5.0μg/L)诱导HSF后,将CTGFASODN以脂质体介导的方法转染HSF.用RT-PCR方法检测四组中CTGF mRNA的表达,用MTT比色法和流式细胞仪分别检测转染6、12、24、48、72 h的成纤维细胞的增殖和凋亡情况.结果 CTGF mRNA在NSF中的表达极其微弱;在HSF中,B组的表达量为0.31±0.14,C组的表达量为0.64±0.32,D组的表达量为0.12±0.62.A组与B、C、D组比较,其差异有统计学意义(P<0.05);而D组与B、C组比较,其差异也有统计学意义(P<0.05).结论 CTGF ASODN具有降低HSF中CTGF的表达从而延缓瘢痕纤维化的作用,可能成为治疗瘢痕增生的有效手段.     

三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1和细胞周期的作用

目的观察三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1和细胞周期的作用.方法体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞,并应用三七总甙进行干预,用免疫细胞化学染色法结合图像分析观察TGF-β1的表达变化,用流式细胞仪测定细胞周期的变化.结果与对照组相比,三七总甙能够显著抑制细胞TGF-β1的表达,并使细胞停滞于S期, 而G0-G1期、G2-M期细胞明显减少(P＜0.01).结论三七总甙改变细胞周期和抑制增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1的表达,可能成为防治增生性瘢痕的药物.     

氨甲喋呤对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的:探讨氨甲喋呤对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响。方法:以体外培养的人瘢痕成纤维细胞为实验模型,将氨甲喋呤(10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L)加入细胞培养液中进行干预并与空白对照组比较,用乳酸脱氢酶实验检测药物的细胞毒性,并通过MTT实验和羟脯氨酸测定实验分别检测药物对成纤维细胞增殖活性和胶原合成的影响。结果:10-6mol/L、10-5mol/L的氨甲喋呤对成纤维细胞的生长有抑制作用,与对照组比较差异有显著性(P<0.01),10-9mol/L～10-5mol/L的氨甲喋呤对瘢痕成纤维细胞胶原合成具有抑制作用(P<0.01)。结论:氨甲喋呤在体外对瘢痕成纤维细胞细胞增殖和胶原合成具有抑制作用。     

肝细胞生长因子对正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞的影响

目的:采用携带肝细胞生长因子(HGF)腺病毒转染正常皮肤成纤维细胞(NFB)和增生性瘢痕成纤维细胞(HFB)后,观察HGF对这两种细胞作用的差异,为HGF基因治疗病理性瘢痕提供理论基础。方法:分离培养HFB和NFB,以不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒(Ad-GFP)转染细胞,用流式细胞仪检测转染效率;以MOI为100携带HGF基因的腺病毒(Ad-HGF)转染HFB和NFB48h后,酶联免疫吸附法检测细胞上清中HGF、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达;应用免疫组织化学方法检测正常皮肤和增生性瘢痕组织中MMP-1和TGF-β1的分布。结果:NFB和HFB在腺病毒转染效率和HGF表达方面差异无显著性,但HGF能明显促进HFB分泌MMP-1,抑制HFB表达TGF-β1。结论:促进HFB分泌MMP-1和抑制HFB表达TGF-β1可能是HGF治疗病理性瘢痕的细胞和分子生物学基础。     

TGF-β_1/Smads信号通路失调控与肝胆胰纤维化疾病

<正>转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)是目前已知的与组织纤维化形成关系最为密切的细胞因子,它通过胞浆中的中介分子Smads将刺激信号传递至细胞核,     

肌成纤维细胞在病理性瘢痕形成中的机制

目的 探讨肌成纤维细胞在病理性瘢痕形成机制中的作用。方法 对1998年～2000年门诊或住院的13例增生性瘢痕，14例瘢痕疙瘩及7例成熟瘢痕患者的相应组织，应用光镜、电镜及免疫组织化学染色，进行观察、检测。结果 增生性瘢痕的超微结构中均可见典型的肌成纤维细胞；免疫组织化学染色可见有不同程度表达的肌成纤维细胞。瘢痕疙瘩及成熟瘢痕的超微结构和免疫组织化学结果均未见肌成纤维细胞。结论 肌成纤维细胞的生物学行为可能与增生性瘢痕的形成及瘢痕畸形有关，并可用于增生性瘢痕与瘢痕疙瘩的鉴别。     

成纤维细胞生长因子结合蛋白在烧伤后肉芽组织和增生性瘢痕中微血管形成的作用

目的探讨成纤维细胞生长因子结合蛋白（FGF—BP）mRNA在烧伤后肉芽组织和增生性瘢痕组织中的表达及其与微血管形成之间的关系。方法设计地高辛标记的FGF-BP寡核苷酸探针，对10例烧伤后肉芽组织，33例增生性瘢痕和9例正常皮肤进行原位杂交实验，检测各组织中FGF-BPmRNA的表达差异；采用免疫组织化学方法检测各组织中微血管数目差异。结果烧伤后肉芽组织组和增生性瘢痕（〈6个月）FGF-BPmRNA表达明显升高，FGF-BPmRNA在增生性瘢痕6个月后逐渐下降至正常水平。肉芽组织组和增生性瘢痕（〈6个月）微血管数目明显高于其他各组。FGF-BPmRNA表达与微血管数目成正相关（Spearman R=0．463，P〈0．01）。结论FGF．BP可能是影响烧伤后创面愈合和早期瘢痕增生过程中微血管形成的重要因子。     

MicroRNA-200c通过TGF-β/Smad通路抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成

目的:探讨mi croRNA-200c(miR-200c)对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的影响,并阐明其涉及的TGF-β/Smad通路机制。方法:将mi R-200c mi mics用oligofectami脂质体转染经TGF-β1诱导的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法测细胞增殖变化;3H-脯氨酸掺入法测胶原蛋白水平的变化。相关蛋白表达变化和TGF-β1分泌表达变化分别用Western blot和ELISA法检测。结果:mi R-200c明显抑制经TGF-β1诱导的人瘢痕疙瘩纤维细胞的增殖和胶原合成;mi R-200c能明显减低磷酸化Smad2和Smad3的蛋白表达水平及抑制博莱霉素诱导的TGF-β1分泌。结论:miR-200c能明显抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成,其机制可能与抑制TGF-β/Smad通路相关。