25例少见模式的乙肝血清学标志物分析

目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）血清学标志物的少见模式。方法：应用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测25000例受检者血清标本中HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBc、抗-HBcIgM。结果：发现HBV血清学标志物少见模式25例。结论：对乙肝两对半中少见模式要认真对待,仔细分析,减少误差。     

化学发光法检测乙型肝炎病毒血清标志物组合模式与分析

目的 通过化学发光定量法检测乙型肝炎病毒血清标志物,试图客观地反映乙型肝炎病毒血清标志物的分布状态及其临床意义;并同步对乙型肝炎表面抗原阳性者进行乙型肝炎病毒DNA定量测定,探讨不同乙型肝炎病毒血清标志物与病毒复制的相关性.方法 用化学发光定量法和酶联免疫吸附测定法对491例临床样本进行乙型肝炎病毒血清标志物检测及分型.对其中乙型肝炎表面抗原阳性的103例样本进行乙型肝炎病毒DNA测定.结果 491例被检者用化学发光法检出15种模式,酶联免疫吸附测定法检出仅9种模式.前者中可见乙型肝炎表面抗原与乙型肝炎抗体双阳(9例,1.84%)和乙型肝炎e抗原与乙型肝炎e抗体双阳(10例,2.03%)等少见模式.检测103例乙型肝炎表面抗原阳性者乙型肝炎病毒DNA阳性63例,占61.16%.乙型肝炎表面抗原和乙型肝炎e抗原测定值在乙型肝炎病毒DNA拷贝数不同分组中差异有统计学意义(P＜0.000 1).结论 乙型肝炎病毒血清标志物分布具有多样性;化学发光法的灵敏性和准确性优于酶联免疫吸附测定法,可为临床诊治提供可靠的实验室依据.     

乳胶层析法检测乙型肝炎病毒标志物的结果分析及应用

目的：讨论乳胶层析法与酶联免疫吸附法（ELISA）检测乙型肝炎病毒标志物的符合率。方法：分别用乳胶层析法和酶联免疫吸附法检测125例血清中乙型肝炎病毒标志物,将两种方法检测结果做以分析、比较。结果：125例血清标本中乙型肝炎病毒标志物的符合率为：HBsAg符合率98.4%;HBsAb符合率96%;HBeAg符合率100%;HBeAb符合率96%;HBcAb符合率97.6%,两种方法检测结果无显著差异。结论：乳胶层析法简便快速,但存在一定的假阳性或假阴性,不能完全替代酶联免疫吸附法进行乙型肝炎病毒标志物的检测,适用于标本初筛查及流行病学调查。     

乙型肝炎病毒标志物与原发性肝细胞癌关系研究

目的：研究乙型肝炎病毒标志物（HBV-M）与原发性肝细胞癌（PHC）间的关系。方法：采用回顾性方法分析了1995-2000年某医院PHC患者249例的HBV-M、HBVDNA、AFP及肝功能等指标,并检测其癌组织和癌旁组织中HBsAg和HBcAg的表达水平。结果：血清中HBV-M阳性率为81.5%,HBVDNA阳性率47.0%;HBV-M阳性的PHC患者发病年龄多为31～50岁;以HBsAg、HBeAb和HBcAb阳性多见;癌组织中HBsAg和HBcAg表达率分别为35.7%和12.1%,癌旁组织中分别为66.3%和30.5%。结论：HBVDNA与癌组织中HBsAg和HBcAg表达关系密切,乙型肝炎病毒感染影响PHC的发生与发展。     

乙肝血清5项指标特殊组合模式分析

随着对乙型肝炎病毒（HBV）血清学标志物检测试剂的逐步优化和检测方法的不断改进,临床上出现了HBV-M（HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb）的特殊组合模式。为提高广大医务人员的认识,我们将近6年来我院检出的HBV-M特殊组合模式作以回顾分析,现报告如下。     

LSM14A蛋白通过活化IRF3抑制乙型肝炎病毒的复制

目的 探讨RNA相关蛋白LSM家族成员14A(LSM14A)在乙型肝炎病毒(HBV)感染中的功能及其潜在的分子机制.方法 通过慢病毒包装方法构建稳定敲低LSM14A的HepG2.2.15细胞株和稳定过表达LSM14A的HepG2.2.15细胞株,利用CRISPR/Cas9技术构建LSM14A敲除的HepG2.2.15细胞.采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(Western印迹)检测敲低、过表达和敲除效果.利用RT-qPCR和Northern印迹杂交检测HBV RNA的表达水平;RT-qPCR检测HBV DNA的表达水平;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和乙肝病毒e抗原(HBeAg)的表达水平.利用Western印迹检测下游分子,RT-qPCR检测干扰素的分泌.结果 在HepG2.2.15细胞中过表达LSMJ 4A可显著抑制HBV的复制,而敲低或敲除LSM14A可显著促进HBV的复制.过表达LSM14A后,p-TBK1、p-IRF3、Ⅰ型和Ⅱ型干扰素的表达水平均显著增加.结论 在HepG2.2.15细胞中LSM14A蛋白通过促进IRF3的磷酸化诱导Ⅰ型和Ⅱ型干扰素的表达,进而抑制HBV的复制.     

HBV血清学标志物与HBV病毒载量结果回顾性分析

目前实验室检测HBV的技术手段很多,其中最常采用ELISA法检测HBV-M。HBV-M是HBV感染人体后,可在血清中检测到的抗原和抗体。此方法具有快速、价廉、简便等特点,不同的HBV-M模式可提示不同的临床意义,它与HBV感染、机体免疫应答和治疗效果等有关。但一般只是定性,不能很好地反映HBV的体内复制和传染情况。HBV     

胶体金法检测乙肝病毒血清标志物的实验研究

 目的:客观评价胶体金法检测乙肝病毒标志物(HBVM)的准确性,了解胶体金法与ELISA法之间的差异.方法:收集急诊手术患者的血清标本1100份,用胶体金法和ELISA法同时检测,以ELISA方法检测结果为参照,比较胶体金法检测HBVM的灵敏度和特异性.结果:与ELISA胶体金法为标准计算HBsAg和HBeAg的灵敏度和特异性均超过90%;其他3个抗体的灵敏度和特异性均低于80%.结论:胶体金法检测HBsAg和HBeAg适用于急诊筛检,乙肝三项抗体金标法存在较严重的漏检,不适合急诊筛查.     

乙型肝炎病毒HBeAg假阳性原因分析

目的:探讨导致HBeAg假阳性的原因.方法:用ELISA法检测42份离心与不离心标本的HBeAg.结果:不离心标本的HBeAg单独阳性率较高,离心标本无此情况.结论:假阳性与标本不离心有关.在做两对半检测时,对于单独HBeAg阳性标本需重新离心后检测,以提高检测结果的准确性.     

乙型肝炎相关性肝细胞肝癌HBV血清标志物特征探讨

目的探讨乙型肝炎相关性肝细胞肝癌（HCC）乙型肝炎病毒（HBV）血清标志物特征。方法选择2009年6月~2013年6月临床确诊的有明确HBV感染史的HCC患者312例,分析患者HBV DNA载量,定量检测HBV标志物（包括HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb）并分析其组合方式。结果①312例HCC患者中,HBV DNA阳性299例（299/312,95.83%）。HBeAg阳性者41例（41/312,13.14%）,其HBV DNA载量为（5.79±2.53）Log10copies/ml;HBeAg阴性者271例（271/312,86.86%）,其HBV DNA载量为（4.59±1.66）Log10copies/ml（P〈0.01）。②HBV标志物存在6种组合方式,6.09%患者HBsAg阴性,86.86%患者HBeAg阴性。结论 HBV DNA多为低至中等水平,HBV DNA阳性者中高病毒载量者仅为少数;HBeAg阴性者远多于HBeAg阳性者;HBsAg滴度较低,少数患者HBsAg阴性。     

三种方法检测乙肝表面抗原的结果分析

目的探讨三种方法对乙肝表面抗原的定性和定量检测的结果并进行对比分析。方法采用临床上常用的胶体金方法、酶联免疫吸附实验法(ELISA法)、化学发光微粒子免疫分析法(CMIA法)对400例标本进行乙肝表面抗原检测,分别计算ELISA法、CMIA法、胶体金法检测结果的阳性率、灵敏度和特异度。结果 CMIA方法检测乙肝表面抗原的阳性率、灵敏度和特异度高于ELISA法和胶体金法。结论 CMIA法检测乙肝病毒标志物特异性强、灵敏度高,具有很高的临床应用价值。     

乙型肝炎病毒聚合酶片段的表达及其在血清学检测中的应用

目的建立乙型肝炎患者血清HBV病毒聚合酶抗体(抗-HBp)的ELISA检测方法。方法构建HBV反转录酶/DNA聚合酶(HBV-Pol)基因原核表达载体pQE30-Pol,表达并纯化目的蛋白,用间接ELISA法检测274例乙型肝炎患者及50例正常人血清中的抗-HBp抗体,并与HBV-DNA实时荧光定量检测结果比较。结果成功将HBV-Pol基因插入原核表达载体pQE30,并在大肠埃希菌M15中获得了高效表达,表达产物以包涵体形式存在。以纯化的重组蛋白建立间接ELISA检测方法,在检测的274例乙型肝炎患者中,HBsAg+/HBeAg+/抗HBc+,HBsAg+/抗HBe+/抗HBc+,HBsAg+/抗HBc+患者血清中的抗-HBp抗体阳性率分别为97.8%、57.9%和13.2%,平均阳性率58.8%,而正常人血清抗-HBp均为阴性。运用此法测得的血清抗-HBp阳性率和实时定量PCR检测结果无统计学差异(P=0.359)。结论成功表达了HBV-Pol片段并且建立了血清抗-HBp抗体的检测方法,为进一步研究乙型肝炎患者血清HBV-Pol抗体的血清学意义奠定了基础。     

非竞争性ELISA法测定人源抗HBsAg Fab功能性亲和常数

目的　测定完全人源化基因工程抗体HBsAgFab的亲和常数。方法　采用非竞争性ELISA固相法 ,经确定最佳抗原包板浓度、最佳抗原包板时间及最佳抗原与抗体结合反应时间后 ,得到了HBsAg与抗体片段抗HBsAgFab及完整抗体抗HBsAgIgG的抗原抗体结合反应曲线 ,计算出抗HBsAgFab及抗HBsAgIgG的亲和常数。结果　人源基因工程抗体抗HBsAgFab的功能性亲和常数在 10 7～10 8M 1水平 ,比完整抗HBsAgIgG仅仅小约 1个数量级 (10 8～ 10 9M 1)。结论　该基因工程抗体与抗原结合能力较强 ,为今后开发应用Fab进行生物导向治疗提供了理论基础。     

HBsAg阳性母亲死胎肝组织中 HBV表达

目的探讨乙型肝炎病毒通过产妇传播在胎儿肝组织中表达的情况。方法采用我院行中期妊娠引产,HBsAg阳性产妇分娩的死胎30例。取肝组织用SP法检测死胎肝组织中HBcAg。结果孕妇血清乙型肝炎标志物小三阳及大三阳的母亲分娩的死胎肝组织中HBcAg阳性,分别为5/12(41.6%)及14/18(77.8%)。两者HBcAg阳性率比较,有显著性差异(P<0.01)。结论母亲静脉血乙型肝炎标志物大三阳是乙型肝炎病毒通过母婴传播在胎儿肝组织中表达的高危因素。     

医护人员HBV,HCV感染的血清流行病学研究

对北京解放军总医院２６１名经常接触病人血液的医护人员ＨＢＶ、ＨＣＶ感染的血清流行病学进行了调查，并同河北省固安县某农村自然人群作了比较。结果表明，医护人员ＨＢｓＡｇ、ＨＢＶＭ和抗ＨＣＶ阳性率分别为３．１％（８／２６１）、４５．６％（１１９／２６１）和０．８％（２／２６１），ＨＢＶ总感染率高于农村自然人群（２９．４％），而抗ＨＣＶ阳性率同我国普通人群相似（低于１％）。说明北京医护人员感染肝炎的职业威     

慢性乙型肝炎血清e系统与HBV DNA的相关性

目的　探讨慢性乙型肝炎患者血清e系统与HBVDNA的相关性。方法　采用ELISA法及荧光定量PCR法 ,检测 60例慢性乙型肝炎 (慢乙肝 )患者乙肝病毒标志 (HBV M)及血清HBVDNA含量 ,并与肝组织炎症活动度进行对比。结果　慢乙肝患者e系统与血清丙氨酸转移酶 (ALT)无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;但HBeAg阳性组血清HBVDNA含量显著高于抗 HBe阳性组 (P <0 .0 1 ) ,在各级肝组织炎症活动度组 ,其HBeAg阳性率与抗 HBe阳性率在各组间无显著差异(P >0 .0 5 )。结论　临床上不宜单独凭慢乙肝患者e系统的检测结果作为评判病人是否有HBV的复制的指标 ,而应采用荧光定量PCR法 ,动态观察慢乙肝患者血清HBVDNA水平的变化 ;有条件的地方应尽可能开展肝脏活体组织检查术 ,以正确判断肝组织的病变。     

1.3拷贝C基因型HBV转基因小鼠的制备及检测

目的制备1.3拷贝C基因型HBV转基因小鼠,为乙肝的防治提供较好的动物模型。方法采用受精卵显微注射法,制备1.3拷贝C基因型HBV转基因小鼠;采用PCR、ELISA、荧光定量PCR和免疫组化方法检测HBV基因在转基因小鼠体内的整合、复制和表达情况。结果共注射受精卵2282枚,成活2024枚,注射成活率88.7%。共移植假孕雌鼠72只,59只怀孕,假孕雌鼠妊娠率81.9%。共产下F0代小鼠185只,PCR检测共有19只整合阳性,阳性率10.3%。血清荧光定量PCR结果显示,其中6只小鼠有HBV DNA复制,拷贝数为102~103拷贝/ml;经传代产下F1代小鼠96只,PCR检测HBV DNA阳性33只,阳性率34.4%。血清荧光定量PCR结果显示,其中10只小鼠有HBV DNA复制,拷贝数为102~103拷贝/ml;F0代和F1代小鼠随机分别各取3只进行肝脏和肾脏HBsAg免疫组化检测结果均为阳性,且肾脏表达高于肝脏。结论 1.3拷贝C基因可以在上述制备成功的C型HBV转基因小鼠体内复制和表达,并且可以遗传给下一代。     

乙型肝炎、丁型肝炎病毒联合诊断芯片制备的初步研究

目的制备联合检测乙型肝炎病毒(HBV)、丁型肝炎病毒(HDV)基因芯片并进行杂交验证。方法利用Primer Premier 5．0分别针对HBV、HDV基因保守区域设计多对PCR引物,扩增后的产物克隆至pMD18-T载体,提取阳性克隆质粒进行测序分析鉴定。用PixSys5500芯片打印仪将PCR产物打印在氨基修饰的玻片上制备成检测芯片。样品荧光标记采用限制性显示(RD)技术,标记后进行杂交验证分析。结果序列分析表明,运用PCR技术得到的多个基因片段均属于HBV、HDV特异基因。杂交结果显示,敏感性、特异性、重复性等指标均佳。结论利用PCR扩增产物作为探针制备HBV、HDV联合诊断芯片是一种快速、简便的实用方法,有着广阔的应用前景;利用RD技术标记样品可提高多种肝炎病毒混合检测的敏感性。