抗肿瘤药物敏感实验试剂盒的建立及其稳定性的观察

目的：为了对MTT法抗肿瘤药物敏感试验方法进行规范,制备成试剂盒,并对试剂盒的稳定性进行了观察。方法：试剂盒组成：（1）预加抗肿瘤药物的细胞培养板,将各种抗肿瘤药物稀释到工作浓度后加入48孔细胞培养板中,冷冻干燥,真空包装。（2）淋巴细胞分离液。（3）含10%牛血清的DMEM培养基。（4）5%的MTT溶液。（5）GKN溶液。以新鲜加抗肿瘤药物的细胞培养板为对照,测定试剂盒的稳定性。结果：由冷冻干燥、真空包装的预加药的细胞培养板组成的试剂盒保存6个月和12个月后,与对照组比较,结果没有显著性差异（P〉0.05）。结论：该试剂盒操作简便,稳定性好,利于临床推广使用。     

ＭＴＴ法抗肿瘤药敏试验影响因素的探讨

目的：对于采用ＭＴＴ法进行抗肿瘤药物敏感试验过程中的多种影响因素进行分析,观察抗肿瘤药物包被板的稳定性。方法：分离人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）,用ＭＴＴ法测定抗肿瘤药物敏感性,观察红细胞、血小板、３种ＤＭＳＯ及不同浓度ＭＴＴ对实验结果的影响;监测肿瘤药物包被板的稳定性。结果：一定浓度范围的红细胞和血小板均可影响实验结果;进口和国产分析纯的ＤＭＳＯ与ＭＴＴ的呈色反应是一致的,吸光度（Ａ值）与ＭＴＴ呈浓度依赖性;冷冻干燥的抗肿瘤药物包被板的稳定性优于未经冷冻干燥的药物包被板。结论：明确实验过程中多种影响因素,有助于规范ＭＴＴ法体外抗肿瘤药敏试验。     

人非小细胞肺癌体外抗肿瘤药物敏感性的实验研究

目的 通过检测非小细胞肺癌(non-small-cell-lung-cancer,NSCLC)患者的术后标本探讨NSCLC对临床常用的5种抗肿瘤药物的敏感性,为指导临床个体化治疗提供依据。方法 自2007年11月—2008年11月,对60例NSCLC术后新鲜标本采用肿瘤细胞原代培养技术,同时应用药敏(MTT法)检测其对临床常用于治疗NSCLC的5种抗肿瘤药物(诺维本、健择、泰索帝、泰素、顺铂)的抑制率和敏感性。结果 60例NSCLC术后新鲜标本MTT法的临床总体评价率为96.67%(58/60)。不同抗肿瘤药物个体间的药物敏感性存在着明显差异;结论 (1)不同个体的肿瘤细胞对抗肿瘤药物的敏感程度存在着异质性,临床应根据药敏结果,选择相对敏感的抗肿瘤药物,制定个体化治疗方案,以提高治疗疗效;(2)MTT法的临床总体评价率令人满意,可在实际工作中应用推广。     

人脑胶质瘤原代细胞培养及体外药物敏感度的实验

目的 探索人脑胶质瘤细胞原代培养的方法,研究不同胶质瘤患者对抗肿瘤药物的敏感度。　方法 采用组织块培养法对39例人脑胶质瘤细胞进行原代培养,用MTT法检测胶质瘤细胞对阿霉素(ADM)、顺铂(DDP)、长春新碱(VCR) 、威猛(teniposide,VM 26)和5 氟尿嘧啶(5 Fu) 5种化疗药物的敏感度,并对其结果进行分析。结果 脑胶质瘤细胞原代培养37例成功,2例失败,成功率94.9%;37例培养成功者药敏检测显示不同个体对不同抗肿瘤药物的抑制率存在明显差异,各药物的平均抑制率依次为VM 26>DDP>5 Fu>ADM>VCR,其敏感率分别为56.8%、51.4%、37.8%、24.3%和13.5%。 结论 体外胶质瘤细胞原代培养和MTT法检测化疗药物的敏感度是可行的,检测化疗药物敏感度对胶质瘤患者个体化的化疗具有一定价值。     

乳腺癌原代细胞培养及体外药敏试验的应用研究

目的 :通过乳腺癌体外原代细胞培养 ,对乳腺癌近年常用的化疗药物进行敏感性检测 ,探讨乳腺癌在不同化疗药物之间的敏感性差异 ,以期指导临床化疗。方法 :通过体外肿瘤细胞药敏试验即MTT法实验对 82例乳腺癌新鲜标本进行体外肿瘤细胞原代培养及化疗药物的敏感性检测 ,并将其化疗药物的敏感性结果进行比较。结果 :无论是单药组间比较 ,还是联合药物组间比较 ,其敏感性均无差异 (P >0 0 5 )。乳腺癌对各单药的敏感性分别与对其相应的联合药物的敏感性比较 ,敏感性均有显著差异 (P <0 0 1)。其中 ,以 5 FU加MMC和 5 FU加MTX的敏感性为好 ,敏感率分别为 78 0 5 %、79 2 7%。结论 :体外肿瘤细胞原代培养及化疗药物的敏感性检测对临床肿瘤化疗用药有很强的预见性 ,且能发现耐药病例 ;对乳腺癌患者进行化疗时 ,应尽量选择联合用药方案。     

乳腺癌原代细胞培养及体外药敏试验的应用研究

目的:通过乳腺癌体外原代细胞培养,对乳腺癌近年常用的化疗药物进行敏感性检测,探讨乳腺癌在不同化疗药物之间的敏感性差异,以期指导临床化疗.方法:通过体外肿瘤细胞药敏试验即MTT法实验对82例乳腺癌新鲜标本进行体外肿瘤细胞原代培养及化疗药物的敏感性检测,并将其化疗药物的敏感性结果进行比较.结果:无论是单药组间比较,还是联合药物组间比较,其敏感性均无差异(P＞0.05).乳腺癌对各单药的敏感性分别与对其相应的联合药物的敏感性比较,敏感性均有显著差异(P＜0.01).其中,以5-FU加MMC和5-FU加MTX的敏感性为好,敏感率分别为78.05%、79.27%.结论:体外肿瘤细胞原代培养及化疗药物的敏感性检测对临床肿瘤化疗用药有很强的预见性,且能发现耐药病例;对乳腺癌患者进行化疗时,应尽量选择联合用药方案.     

光敏剂photofrinⅡ预激活联合化疗药物对K562细胞杀伤作用的研究

目的:通过体外研究探讨光敏剂photofrinⅡ预激活后对人白血病K562细胞株的杀伤作用及其与化疗药物配伍能否产生协同或拮抗效应.方法:以K562细胞株为研究对象,采用MTT法检测photofrinⅡ预激活后对K562细胞株的抑制作用,同时检测photofrinⅡ预激活后分别与顺铂(DDP)、5-氟脲嘧啶(5-FU)、阿霉素(ADM)联合应用对K562细胞的杀伤作用,Burgi法分析联合用药效果.结果:photofrinⅡ预激活后能明显抑制K562细胞株的增殖,并且这种作用呈剂量依赖性,但其抑瘤作用较后激活组降低.photofrinⅡ预激活后分别与DDP、5-FU、ADM联合,增加了化疗药物的抑瘤作用.结论:photofrinⅡ预激活后能够抑制K562细胞株的增殖,与DDP、5-FU、ADM联合使用具有相加作用.     

胃癌细胞原代培养药敏检测的临床应用研究

目的 :探讨胃癌对不同化疗药物的敏感性差异 ,从而对围手术期辅助化疗及晚期患者化疗起指导作用。方法 :应用MTT比色法测定了 15 1例体外原代胃癌细胞对化疗药物的敏感性。结果 :无论是单药组间比较 ,还是联合药物组间比较 ,其敏感性的差异均有极显著意义 ,P <0 0 1;其中 ,单药以羟基喜树碱 (HCPT)和丝裂霉素 (MMC)的敏感性为好 ,其敏感率分别为 6 2 91%、5 2 98% ;联合药物以 5 -氟尿嘧啶 (5 FU)加HCPT和 5 FU加MMC的敏感性为好 ,其敏感率分别为 76 82 %、6 0 93%。各单药分别与其对应的联合药物比较 ,除MMC与 5 FU加MMC、多柔比星 (ADM )与 5 FU加ADM及斑蝥酸钠(奇宁 )与 5 FU加奇宁的敏感性差异无显著意义外P >0 0 5 ,其余药物的敏感性差异均有显著意义 ,P<0 0 5。结论 :体外肿瘤细胞药敏试验对临床肿瘤化疗用药有很强的预见性 ,且能发现耐药病例 ;胃癌对联合药物的敏感性明显优于单药     

乳酸脱氢酶检测化疗药物敏感性与MTT法及集落形成试验的比较

用集落形成试验、MTT吸收光度法和乳酸脱氢酶(LDH)测定3种方法检测5种常用抗肿瘤药物——阿霉素(ADM)、5—氟脲嘧啶(5—Fu)、丝裂霉素(MMC)、长春新碱(VCR)和氨甲喋呤(MTX)对人宫颈癌Hela细胞系的细胞毒作用。显示三种方法的检测结果有良好的相关性,均以ADM和MMC最有效。在这三种方法中,以集落形成试验最敏感;MTT法成功率高,实用于临床选择有效的化疗药物;而用药后LDH值的升高则是化疗有效的可靠指标。     

亚砷酸As(Ⅲ)诱导人肺癌A549细胞氧化应激反应的实验研究

目的:探讨亚砷酸As(Ⅲ)对人肺癌A549细胞氧化应激的诱导作用。方法:将处于对数生长期的A549细胞暴露于不同浓度的亚砷酸As(Ⅲ)溶液(以砷浓度计分别为0、2.5、5、10和20μg/mL)中培养24 h,采用CCK-8法检测细胞存活率;用2.5和5μg/mL的亚砷酸As(Ⅲ)溶液染毒A549细胞24 h,并设对照组(含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基),采用ELISA法检测细胞培养液中的超氧化物歧化酶(SOD)浓度,荧光探针DCFH-DA检测细胞内活性氧(ROS)的表达水平。结果:随着亚砷酸As(Ⅲ)溶液染毒浓度的升高,A549细胞的存活率呈逐渐降低的趋势(r=0.99,P<0.05)。2.5和5μg/mL亚砷酸As(Ⅲ)溶液染毒24 h后,细胞培养液中SOD的浓度分别为(0.72±0.05)、(1.10±0.16)ng/mL,均高于对照组的(0.56±0.03)ng/mL(P<0.05);细胞内ROS的相对荧光强度分别为(169.31±6.13)%和(242.60±2.35)%,均高于对照组的(100±2.80)%(P<0.05)。结论:A549细胞暴露于亚砷酸As(Ⅲ)溶液可致细胞存活率降低,细胞培养液中SOD和细胞内ROS浓度均升高;氧化应激可能是亚砷酸As(Ⅲ)致A549细胞毒性的机制之一。     

能量限制对肝癌细胞ＨeｐＧ２增殖和化疗药物顺铂作用的影响

目的　观察能量限制对肝癌细胞系ＨｅｐＧ２增殖的影响以及能量限制后化疗药物顺铂对ＨｅｐＧ２细胞增殖抑制和凋亡诱导作用的影响。方法　分别在高糖（２５ｍｍｏｌ／Ｌ）和低糖（５ｍｍｏｌ／Ｌ）环境中培养肝癌细胞系ＨｅｐＧ２,应用葡萄糖检测试剂盒检测细胞内葡萄糖浓度的差异;应用ＭＴＴ和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的差异;应用流式细胞仪检测高、低剂量化疗药顺铂对细胞周期和凋亡的影响。结果　与高糖环境培养的细胞相比,低糖环境培养的细胞其胞内葡萄糖浓度降低（P＜０.０５）、增殖能力减弱（Ｐ＜０.０５）;流式细胞仪分析结果显示,低剂量顺铂组低糖环境下ＨｅｐＧ２细胞周期阻滞在Ｓ期的百分比增高,高剂量顺铂组低糖环境下ＨｅｐＧ２细胞的凋亡率增加（P＜０.0５）。结论　能量限制可抑制肝癌细胞系ＨｅｐＧ２的增殖,并可增强化疗药物顺铂对ＨｅｐＧ２细胞的增殖抑制和凋亡诱导效应。     

羟基磷灰石纳米粒子对人白血病细胞K562毒性作用的研究

目的:探讨羟基磷灰石(HAP)纳米粒子体外抑制人白血病细胞K562的生长增殖作用。方法:采用MTT法检测HAP和联合应用化疗药物对K562细胞的增殖抑制及化疗增敏作用。结果:(1)HAP和抗癌药物对K562细胞增殖均有抑制作用;(2)K562细胞生长抑制率与HAP的浓度和作用时间呈明显正相关性;(3)HAP与化疗药物合用具有更良好的抑癌效果。结论:HAP纳米粒子明显抑制K562细胞生长,具有体外抗白血病作用和化疗增敏作用。     

MTT法体外药敏实验预测宫颈癌细胞药物敏感性的初步探讨

背景与目的:近年来,宫颈癌新辅助化疗逐渐受到重视,应用广泛,但不同个体对不同化疗药物敏感性不同.本研究通过宫颈癌体外药敏实验来预测肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,为临床筛选对宫颈癌相对敏感的化疗药物提供参考依据.方法:采用MTT法测定9种药物对32例宫颈癌患者的原代培养癌细胞的抑制水平.结果:①宫颈癌细胞对9种药物的敏感性依次为:力扑素＞泰素＞卡铂＞异环磷酰胺＞鬼臼乙叉甙＞氟尿嘧啶＞顺铂＞博来霉素＞环磷酰胺,力扑素、泰素和卡铂对肿瘤细胞的平均抑制率(IR)较高,分别为56.56%、55.66%和46.81%,与其它药物相比,差异有显著性(P＜0.05).②对Ⅰ b1期宫颈癌细胞,泰素、力扑素和卡铂IR值较其它药物高,分别为58.71%、53.00%和49.25%;对Ⅰ b2期宫颈癌细胞,力扑素和泰素的IR值较其它药物高,分别为65.26%和50.06%.③对于宫颈中分化鳞癌细胞,泰素、力扑素和卡铂IR值较其它药物高,分别为52.01%、49.21%和40.24%;对低分化鳞癌细胞,力扑素、泰素和卡铂的IR值较其它药物高,分别为61.16%、60.62%和48.75%.结论:①MTT法作为一种应用广泛的药敏实验方法,对宫颈癌新辅助化疗筛选敏感药物、选择临床化疗方案有一定的参考价值.②力扑素、泰素和卡铂对宫颈癌细胞较其它药物敏感.     

Effect of First Line Gastric Cancer Chemotherapy Regime on the AGS Cell Line - MTT Assay Results

Background: Combination chemotherapy regimes are common treatments for cancer. The aim of this study was to evaluation the effect of individual chemotherapeutic agents in comparison with a first line chemotherapy regime treatment in the AGS gastric cancer cell line by MTT assay. Materials and Methods: In this experimental study, AGS cells were grown in RPMI-1640 supplemented with 10% fetal calf serum and 100 IU/ml penicillin, and 10 μg/ml streptomycinin, under a humidified condition at 37°C with 5% CO2. All cells were washed with PBS and detached with trypsin, centrifuged and 8000 cells re-plated on to 96- well plates. LD50 doses of Epirubicin, Cisplatin and 5-fluorouracil were added to each well in mono or triple therapy. Anti-proliferative activities were determined by MTT assay after 24, 48 or 72 h. Results: Results of MTT assays showed that there were no significant differences among 3 drugs in monotherapy (p=0.088), but there was significant difference between combination therapy with epirubicin (P=0.031) and 5FU (p=0.013) on cell survival at 24 h. After 48 and 72 hours, cell viability showed significant differences between the 3 drugs (p=0.048 and P=0.000 for 48 and 72 h, respectively) and there was significant difference between combination therapy with epirubicin (P=0.035 and P=0.002 for 48 and 72 h, respectively). Conclusions: The results showed no significant differences between these chemotherapy drugs each given alone, but combination therapy with 3 drugs had significant effects on cell viability in comparison with epirubicin alone.     

Vergleich von zwei verschiedenen Techniken im mykologischen Primärscreening: Standardreihenverdünnungstest und Mikrotitrationstest

Zusammenfassung: Der Standard-Reihenverdünnungstest (RVT) im Reagenzglas und ein neu entwickelter Reihenverdünnungstest (MTT) in einer Mikrotitationsplatte (96 U-förmige Vertiefungen à 230 μl) wurden im mykologischen Basisscreening (4 Testkeime: Trichophyton mentagrophytes; Trubrum; Candida albicans; Aspergillus niger) anhand der ermittelten minimalen Hemmkonzentrationen (MHK_s) von 13 Standardpräparaten und 62 Screening-Substanzen (chemische Verbindungen mit unbekannter Wirkung gegen Pilze) statistisch verglichen. Unter den gewählten Versuchsbedingungen (Bebrütungszeit RVT: 10 Tage; MTT: 5 Tage) resultierten vergleichbare MHK_s. Die Vorteile des MTT gegenüber dem RVT sind schnelle, raumsparende Durchführbarkeit, routinemäßige Doppelbestimmung der MHK, obwohl der Präparatdurchsatz um ca. 127% bei kostenneutraler Personalsituation gesteigert wurde, und sicherheitstechnische Vorteile. Die Kosteneinsparungen durch Rationalisierung ergaben sich aus der vielfältigen Gebrauchsfunktion der Mikrotitrationsplatte in Verbindung mit einem Multikanalpipettiersystem. Summary: Minimum inhibitory concentrations (MIC_s) of 13 standard drugs and 62 test substances (chemical compounds with unknown antifungal activity) against Trichophyton mentagrophytes; T. rubrum; Candida albicans and Aspergillus niger were determined in the standard serial dilution test (SDT) using test tubes and in a newly developed serial dilution test (MTT) using microtitration plates (96 U-shaped wells 230 μl deep) and compared statistically. Under the selected test conditions (10 days incubation time for SDT and 5 for MTT) both methods gave statistically identical values. The advantages of MTT over SDT are less time and space requirements, routine duplicate determination of MIC values, unchanged personnel costs although the number of compounds tested was increased about 127%, and greater safety during testing. Cost savings by rationalization were achieved by using a micropipette delivery system for dispensation into the wells of the microtitration plate.     

MTT肿瘤药物敏感试验的方法学研究

目的：对MTT法肿瘤药物敏感试验的方法进行选择,旨在建立一种MTT肿瘤药敏试验的规范化操作流程。方法：MTT法测定K562细胞对抗癌药卡铂与紫杉醇的敏感性实验及其影响因素。结果：在每孔K562细胞数为5×10^3（浓度为5×10^4个/ml）、药物作用时间48h、MTT20μl作用6h、单波长570nm处测OD值时,药物对肿瘤细胞的抑制率较高,实验效果较好。结论：规范化的MTT肿瘤药敏试验可以为临床医师开展和实现化疗个体化提供较为可靠的实验依据。     

化疗药物对原代胃癌细胞的体外杀伤效应及其与端粒酶逆转录酶mRNA表达的关系

目的观察化疗药物对原代胃癌细胞的体外杀伤效应,并探讨其与胃癌组织中端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达的关系。方法将68例新鲜胃癌组织制备单细胞悬液,台盼蓝染色计数活细胞,分别加入紫杉醇(TZX)、阿霉素(ADM)、顺铂(CDDP)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)和丝裂霉素(MMC)培养48 h。四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察药物作用后肿瘤细胞活力及代谢活性变化。用原位杂交技术检测hTERT mRNA的表达。结果不同个体的肿瘤细胞对化疗药物敏感性不同,与肿瘤分化有关,TAX、CDDP、5-Fu、ADM和MMC的胃癌细胞抑制率分别为(40.6±6.9)%、(38.4±7.8)%、(38.9±9.2)%、(31.6±8.5)%和(28.9±9.8)%。全组hTERT mRNA表达阳性率为90.0%,hTERT mRNA阳性者对5-Fu和ADM有较强的耐药性。结论hTERT mRNA的高表达可能是胃癌原发性耐药的标志之一,MTT比色法体外药敏实验有助于筛选胃癌的个体化有效化疗药物。     

雷帕霉素和罗格列酮对人乳腺癌细胞生长的影响*

目的:探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）特异性抑制剂雷帕霉素和过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR γ）激动剂罗格列酮对人乳腺癌细胞株MCF-7 体外培养的抑制作用,为临床靶向治疗提供试验依据。方法:取对数生长期的乳腺癌MCF-7 细胞株,按2.0 × 10 6细胞/孔接种24孔板,按照析因试验安排4 个试验组:①雷帕霉素组（8 ×10-5 mg/L）;②罗格列酮组（50μ mol/L）;③联合组;④、实验对照组（不做任何处理的常规培养细胞）。 各组各浓度分别设3 个复孔,实验重复3 次。采用MTT 比色法观察雷帕霉素和罗格列酮对体外培养的MCF-7 细胞系生长的抑制作用;应用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期变化。结果:罗格列酮和雷帕霉素均能有效的抑制体外培养的乳腺癌细胞株MCF-7 的生长,雷帕霉素的抑制率最大（P<0.05）。 联合用药不增加细胞生长抑制率（P<0.05）。 结论:体外培养抑制试验证明雷帕霉素、罗格列酮均能有效的抑制乳腺癌细胞株MCF-7 的生长。雷帕霉素联合罗格列酮不增加细胞凋亡。雷帕霉素和罗格列酮对MCF-7 细胞株的干预作用是通过周期阻滞完成的。      

孕激素对孕激素受体阴性的子宫内膜腺癌细胞JEC的影响

目的探讨不同浓度的孕激素(progesterone,P)对孕激素受体(progesterone receptor,PR)阴性的子宫内膜腺癌细胞系JEC细胞增殖和细胞周期的影响及其机制。方法取JEC细胞体外培养,加入含不同浓度P的培养液,采用细胞计数法、四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术(FCM)的方法,观察JEC细胞的增殖活性和细胞周期时相变化;同时用FCM检测加入P前后JEC细胞中p21蛋白的表达;用免疫组织化学法及图像分析,检测加入P前后JEC细胞内Cyclin A的表达。结果(1)细胞计数法和MTT法显示,P可使JEC细胞数明显减少;(2)1×10-5mol/L的P作用72 h,可使JEC细胞G₀/G₁期比例增加,S期及G2/M比例减少;(3)P对JEC细胞内p21蛋白的表达无影响。(4)P可明显抑制JEC细胞内Cyclin A蛋白的表达。结论 PR阴性的JEC细胞生长可受到孕激素的调控,其作用具有剂量和时间效应.这种调控可能与Cyclin A有关,但与P21蛋白无关。