康莱特对人结肠癌裸鼠种植瘤肝转移的影响

目的：探讨中药康莱特对人结肠癌裸鼠种植瘤肝转移的抑制作用。方法：将结肠癌LoVo细胞注入裸鼠脾脏,建立结肠癌肝转移模型。将成功制模的裸鼠随机分为4组：对照组,CTX组,康莱特组及CTX＋康莱特组。治疗45天后,处死裸鼠,计算肝转移结节数。采用ELISA法测定肿瘤组织上清液骨桥蛋白（OPN）的浓度。结果：在肝转移结节数目上,与对照组相比其余3组肝转移结节个数均降低且有统计学意义。在组织骨桥蛋白浓度上,其余3组组织骨桥蛋白浓度降低且有统计学意义。与CTX组相比,CTX＋康莱特组组织骨桥蛋白浓度降低且有统计学意义,但CTX组与康莱特组二者无统计学差异P=0.176。结论：康莱特可以抑制裸鼠结肠癌的肝转移,康莱特联合CTX具有协同作用。     

康莱特注射液对结肠癌肝转移裸鼠血浆骨桥蛋白的影响

目的　建立人结肠癌ＬｏＶｏ细胞裸鼠肝转移模型,观察康莱特注射液（ＫＬＴ）对该模型裸鼠血浆骨桥蛋白的影响。方法　将３０只裸鼠随机分为５组：对照组、环磷酰胺（ＣＴＸ）组、ＫＬＴ组、ＣＴＸ＋ＫＬＴ组和正常组。前４组将０.２ｍｌＬｏＶｏ细胞悬液（１×１０７个／ｍｌ）接种于裸鼠脾脏,建立结肠癌肝转移模型,分别经腹腔注射给予生理盐水、ＣＴＸ、ＫＬＴ和ＣＴＸ＋ＫＬＴ。正常组未接种肿瘤细胞。接种４５天后处死全部裸鼠,称取４组脾脏接种瘤和肝脏转移瘤重量,并检测血浆骨桥蛋白浓度。结果　与对照组相比,ＣＴＸ组、ＫＬＴ组、ＣＴＸ＋ＫＬＴ组的脾脏接种瘤和肝脏转移瘤重量均减轻（Ｐ＜０.０５）,其中ＫＬＴ组分别为（４０１.７±５３.１）ｍｇ和（３５３.３±３９.８）ｍｇ,ＣＴＸ组＋ＫＬＴ组分别为（２３５.０±５２.４）ｍｇ和（１８５.０±２７.４）ｍｇ。与正常组相比,其余４组裸鼠血浆骨桥蛋白浓度均升高（Ｐ＜０.０５）;对照组血浆骨桥蛋白浓度为（２.１０±０.５５）ｎｇ／ｍｌ,ＣＴＸ＋ＫＬＴ组为（０.９２±０.３１）ｎｇ／ｍｌ,两组差异有统计学意义（Ｐ＜０.０５）,而ＣＴＸ组、ＫＬＴ组与对照组比较差异无统计学意义（Ｐ＞０.０５）。结论　ＫＬＴ联合ＣＴＸ可以抑制模型裸鼠的脾脏接种瘤及肝脏转移瘤的生长,抑制其血浆骨桥蛋白的浓度。     

人结肠癌裸鼠肝转移模型的建立

目的 建立人结肠癌裸鼠肝转移模型,用于肿瘤转移防治的实验研究。方法 30只裸鼠随机分为两组,分别用肝脏注射法和脾脏注射法建立结肠癌肝转移模型, 术后待裸鼠濒临死亡或自然死亡时,观察其生存天数,解剖裸鼠,观察腹腔内转移情况和肝脏成瘤的情况。结果 两组裸鼠的肝脏成瘤率均为100%,生存期无明显差异。肝脏注射组裸鼠均于注射部位出现单一的巨大瘤结节,脾脏注射组裸鼠肝脏表面及切面见多发散在的转移瘤结节。两组的肝脏瘤组织细胞形态学相似,符合低分化腺癌的特征。结论 经脾注射法建立裸鼠结肠癌肝转移模型比较符合结肠癌体内肝转移过程的规律,是一种简便有效的、重复性好的方法。     

脾切除法建立人结肠癌细胞肝转移模型及对肝转移的评估

目的：建立类似临床大肠癌根治术后肝转移动物模型，并建立精确评估肝转移的方法。方法：在裸鼠脾内注入人结肠癌细胞５ｍｉｎ后切除脾脏。术后第３１天对裸鼠行病理检查并测定肝转移ＤＮＡ含量。结果：发现肝转移率为１００％，肝外其它脏器未见转移结节，组织学证实肝转移结节为低分化腺癌。脾内注入１０＾５癌细胞、脾切除组肝转移癌ＤＮＡ的含量比脾内注入１０＾６癌细胞、脾切除组肝转移癌ＤＮＡ的含量低６１．４％。结论：本实     

三氧化二砷抑制人结肠癌裸鼠肝转移的药效 动力学

 目的　研究三氧化二砷(As2O3 ) 对人结肠癌裸鼠肝转移的抑制作用。方法　BALB/ C2nu/ nu 裸 鼠经脾脏接种人结肠腺癌LS2174 T 细胞建立结肠癌裸鼠肝转移模型,于10 min (早期) 、10 天(中期) 、20 天(晚期) 经尾静脉注射As2O3 ,对照组注射生理盐水。观察各组裸鼠体重变化、肝转移结节的数目、大 小、瘤重以及肝脏肿瘤替代率和荷瘤鼠的生存时间。结果　与对照组相比,早期及中期治疗组裸鼠肝转 移结节的数目、大小、瘤重以及肝脏肿瘤替代率和荷瘤鼠的生存时间差异均有统计学意义( P < 0. 05) ,晚 期治疗组差异无统计学意义( P > 0. 05) 。结论　三氧化二砷对人结肠癌裸鼠肝转移有明显的抑制作用, 早期效果优于中晚期。     

胃泌素对人结肠癌裸鼠移植瘤细胞内cAMP含量的影响

目的：探讨胃泌素对人结肠癌裸鼠移植瘤细胞内环磷酸腺苷（cAMP)含量的影响。方法：建立人结肠癌SW480裸鼠移植瘤模型，实验动物随机分为5肽胃泌素（PG）组及对照组（生理盐水），观察移植瘤的体积、重量及细胞内cAMP含量的变化。结果：移植瘤的体积、重量、细胞内cAMP含量，PG组均显著高于对照组（P＜0．05，P＜0．01）。结论：胃泌素在体内使人结肠癌移植瘤细胞内cAMP含量增加，从而促进移植瘤的生长。     

流式细胞术分析胃泌素对人结肠癌SW480裸鼠移植瘤的影响

目的：探讨胃泌素对人结肠癌裸鼠移植瘤的影响。方法：建立人结肠癌SW480裸鼠移植瘤模型,实验动物分为5肽胃泌素（PG）组及对照组,观察PG对移植瘤体积、重量的影响并进行流式细胞术分析。结果：移植瘤的体积重量、细胞内DNA、蛋白质含量、S期、G2M期细胞数、增殖指数PG组显著高于对照组,而G0／G1期细胞数则显著低于对照组。结论：胃泌素在体内具有促进人结肠癌SW480细胞分和增殖的作用,为结肠癌患者施行内分泌治疗提供了实验依据。     

裸鼠转基因结肠癌肝转移模型的建立

目的 探讨裸鼠转基因结肠癌肝转移模型的建立方法。方法 应用体外转染法和体内转染法建立裸鼠转基因结肠癌肝转移的动物模型。观察肝脏转移率和自然生存期;瘤组织作病理切片;实时荧光定量（Real-Time RT-PCR）检测CD基因表达,Western blot检测目的基因蛋白表达。结果 体外转染法与体内转染法裸鼠肝脏转移率、自然生存期比较差异无统计学意义[100％(15/15),100％(15/15); (40.60±2.2297)d, (41.73±2.4919)d; P>0.05]。实时荧光定量PCR进行相对定量比较,体内转染法CD基因的表达活性低于体外转染法（P＜0.05,t=2.758）。体内转染法瘤组织CD基因蛋白表达低于体外转染法。结论 体外转染法建立裸鼠转基因结肠癌肝转移模型,目的基因在瘤组织中能更稳定、持续表达。     

DADS对人结肠癌SW480细胞裸鼠致瘤的影响

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）对人结肠癌SW480细胞裸鼠致瘤的影响。方法建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型。15只实验裸鼠分为3组,每组5只。观察DADS对裸鼠致瘤的影响,并记录各组裸鼠及其皮下移植瘤的生长情况,绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤体积和肿瘤生长抑制率。光镜下观察移植瘤组织形态学改变,采用免疫组织化学法检测瘤组织内增殖细胞核抗原（PCNA）、p21WAF1蛋白表达情况,应用流式细胞术检测移植瘤细胞周期分布。结果 DADS能明显降低人结肠癌SW480细胞致瘤性,抑制移植瘤生长,降低肿瘤组织异型性,引起细胞周期G2/M阻滞,抑制PCNA蛋白表达,增强p21WAF1蛋白表达。结论 DADS可明显降低人结肠癌SW480细胞的致瘤性,抑制SW480细胞增殖,引起G2/M期阻滞,其可能与抑制PCNA蛋白表达、增强p21WAF1蛋白表达有关。     

化疗及手术干预对结肠癌肝转移预后的影响

[目的]探讨化疗及手术干预对结直肠癌肝转移预后的影响。[方法]139例结直肠癌肝转移患者分为两组 ,肝动脉插管化疗组(HA)88例 ,全身静脉化疗组(SV)51例。术后3周开始化疗 ,4周1个疗程 ,共6个疗程。每1个疗程中 ,HA组丝裂霉素(MMC)20mg、5_Fu7g;SV组MMC10mg、5_Fu5.25g。术后随访3年 ,观察两组资料的1年、3年生存率。[结果]1年生存率HA组87.5%与SV组50.9%之间有极显著性差异(P<0.01) ,3年生存率HA组36.4%与SV组15%之间有极显著性差异(P<0.01)。[结论]结直肠癌肝转移手术后 ,肝动脉插管化疗的预后较全身静脉化疗好     

Adjuvant treatment with tumor-targeting Salmonella typhimurium A1-R reduces recurrence and increases survival after liver metastasis resection in an orthotopic nude mouse model

Colon cancer liver metastasis is often the lethal aspect of this disease. Well-isolated metastases are candidates for surgical resection, but recurrence is common. Better adjuvant treatment is therefore needed to reduce or prevent recurrence. In the present study, HT-29 human colon cancer cells expressing red fluorescent protein (RFP) were used to establish liver metastases in nude mice. Mice with a single liver metastasis were randomized into bright-light surgery (BLS) or the combination of BLS and adjuvant treatment with tumor-targeting S. typhimurium A1-R. Residual tumor fluorescence after BLS was clearly visualized at high magnification by fluorescence imaging. Adjuvant treatment with S. typhimurium A1-R was highly effective to increase survival and disease-free survival after BLS of liver metastasis. The results suggest the future clinical potential of adjuvant S. typhimurium A1-R treatment after liver metastasis resection.     

Orthotopic implantation of human colon carcinomas into nude mice provides a valuable model for the biology and therapy of metastasis

Summary Human colon carcinomas (HCC) are heterogeneous for a varriety of biological properties that include invasion and metastasis. The presence of a small subpopulation of cells with a highly metastatic phenotype has important clinical implications for diagnosis and therapy of cancer. For this reason, it is important to develop animal models for the selection and isolation of metastatic variants from human colon concers and for testing the metastatic potential of these cells. We have implanted cells from more than 100 HCC (obtained from surgical specimens) into different organs of nude mice. Regardless of their malignant potential in the patient, the HCC did not metastasize unless they were implanted orthotopically. Only when they were injected into the cecum or spleen of nude mice did they yield hepatic metastases. These metastases consisted of highly metastatic cells. The invasive phenotype was influenced by the organ environment. HCC cells in the subcutis did not produce degradative enzymes and the cells did not metastasize. In contrast, HCC cells in the cecum did both. Collectively, the results demonstrate that the orthotopic implantation of HCC cells can yield metastatic subpopulations of cells suitable for the study of metastasis.     

西妥昔单抗联合顺铂对荷食管鳞癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的 探讨西妥昔单抗联合顺铂对人食管鳞癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法 将食管鳞癌Eca-109细胞株接种于裸鼠皮下,制备裸鼠移植瘤模型.将裸鼠随机分成对照组、西妥昔单抗组、顺铂组和两药联合组.动态测量各组移植瘤体积,给药结束后取出瘤体称瘤体质量,计算抑瘤率.取血标本检测肿瘤标志CEA.采用蛋白质印迹法检测肿瘤组织中MAPK蛋白磷酸化水平.结果 对照组、西妥昔单抗组、顺铂组和联合用药组平均肿瘤体积分别为(2 056.3±787.3)、(1 642.0±850.3)、(1 540.7±427.7)和(1 299.3±583.8) mm3.析因分析显示,单药作用后肿瘤大小变化差异无统计学意义,P＞0.05,两药间无交互作用,F=0.160,P=0.691.对照组、西妥昔单抗组、顺铂组和联合用药组平均瘤质量分别为(1.84±0.75)、(1.70±0.90)、(1.27±0.51)和(0.95±0.25)g;西妥昔单抗处理后瘤体质量减轻,差异无统计学意义,F＝1.21,P=0.279;而顺铂组差异有统计学意义,F=10.382,P＝0.003;两药间无交互作用,F=0.211,P=0.649.对照组、西妥昔单抗组、顺铂组和联合用药组的抑瘤率分别为0、7.6％、31.0％和48.4％.西妥昔单抗和顺铂单药各自均能降低CEA表达水平,差异有统计学意义,P＜0.05;两药间无交互作用,F=0.601,P=0.443.药物干预后对照组、西妥昔单抗组、顺铂组和联合用药组P-MAPK蛋白表达量分别为1.530±0.77、0.791±0.08、1.705±0.12和0.901±0.85,西妥昔单抗明显下调了P-MAPK蛋白表达水平,F=669.332,P＜0.001;而顺铂上调了P-MAPK蛋白的表达,F=23.000,P＜0.001;两药联用后P-MAPK蛋白表达水平下降,两药之间无交互作用,F=1.207,P=0.279.结论 顺铂上调EGFR下游蛋白P-MAPK的活化,西妥昔单抗与顺铂联用表现为相加作用,抑制移植瘤生长作用优于单药组.     

人肝癌裸鼠连续传代的病理变化特征

目的：探讨裸鼠人肝癌20年连续传代的病理变化特征。方法：裸鼠人肝癌组织模型（SMMU-LTNM）连续观察20年（1987—2007年），皮下移植瘤传至228代，建立腹腔移植瘤、肝原位移植瘤及NOD-SCID小鼠肝原位移植瘤的病理资料，经光镜、电镜、图像分析、染色体分析、周围血液AFP检测等方法分析病理变化特征。结果：（1）上述4种肿瘤模型的局部侵袭和转移均长期存在：皮下移植瘤的局部侵袭率为59．70％（40／67），肺内转移率为37．10％（23／62）；腹腔移植瘤的肺内转移率为59．02％（36／61）；肝原位移植瘤的肝内转移率为18．18％（4／22），肺内转移率为31．82％（7／22）；NOD—SCID小鼠肝原位移植瘤的肺内转移率为53．85％。（2）皮下移植瘤的组织学变化：第10代前的瘤细胞分化和组织结构与原人肝癌近似，以Ⅱ级分化、粗梁型为主；第11代至225代瘤细胞以分化Ⅲ级、团块型为主，电镜下亦证实瘤细胞分化更差。（3）AFP检测第32代前为92500μg／L，第33代至130代AFP下降为6729μg／L，220代AFP检测为1000—5000μg／L。（4）腹腔移植瘤的瘤细胞群体与肺转移瘤的瘤细胞群体DNA含量分布范围明显增宽，2C-6C不等，峰值明显右移，前者的分布范围比后者更宽；DNA含量分别为2．60±0．20和2．10±0．26。（5）染色体检测，第55—206代（相隔12年）部分瘤细胞染色体变为裸鼠染色体。结论：裸鼠皮下移植瘤可连续传代20年，局部侵袭及转移的恶性生物学行为不变；瘤细胞分化更差，AFP下降，部分瘤细胞染色体变为裸鼠染色体。这些病理变化可能与裸鼠内环境影响和瘤细胞的多潜能分化有关。     

洋地黄毒苷对裸鼠甲状腺乳头状癌组织生长的抑制作用

目的:探讨洋地黄毒苷对裸鼠甲状腺乳头状癌的治疗效果。方法:建立裸鼠肿瘤模型后,分为空白对照组、实验组,每组8只,分别给予生理盐水、洋地黄毒苷（1 mg/kg）,隔日腹腔注射。治疗15天后,分析肿瘤体积,取下瘤体,选取实验组及空白对照组肿瘤组织进行HE染色。结果:治疗前,空白对照组与实验组裸鼠肿瘤体积分别为(109.43±7.67)mm3和(107.15±6.97)mm3。治疗15天后,空白对照组裸鼠肿瘤体积为（732.67±72.40）mm3,实验组裸鼠肿瘤体积为（251.91±27.29）mm3(实验组vs空白对照组,P<0.01）。HE染色结果示,实验组部分区域肿瘤细胞核淡染、缩小,且局部出现了变性、坏死。表明了洋地黄毒苷的抑瘤作用可能与其诱导肿瘤组织的破坏有关。结论:洋地黄毒苷可以抑制裸鼠体内甲状腺乳头状癌的生长。     

三氧化二砷联合TNP-470对裸鼠人肝癌移植瘤的影响

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）联合烟曲霉的提取物烟曲霉醇（TNP-470）对裸鼠人肝癌移植瘤生长的影响及其作用机制。方法：人肝癌转移模型（HCC）-LCI—D20原位移植瘤裸鼠32只，随机分4组（每组8只）给药：As2O3联合TNP-470组、As2O3组、TNP-470组、生理盐水（Ns）对照组，给药21天后，对裸鼠移植瘤大小、肿瘤微血管密度（MVD）、免疫组化、透射电镜结果进行观察。结果：As2O3组、TNP-470组及联合组的平均瘤重及平均瘤体积均低于对照组（P〈0．05）；计算两药相互作用系数（CDI）值：瘤重CDI（0．95）〈1，体积CDI（0．89）〈1，两药有协同抑制移植瘤生长的作用。As2O3组抑制移植瘤VEGF、EGFR的表达；TNP-470组抑制移植瘤EGFR的表达，对移植瘤VEGF的表达无影响；联合组明显抑制移植瘤EGFR的表达，抑制移植瘤VEGF的表达作用等同As2O3组。裸鼠原位移植瘤的光镜、电镜下观察结果有意义；各用药组裸鼠原位移植瘤的MVD值均低于对照组（P〈0．05）。结论：As2O3联合TNP-470协同抑制裸鼠人肝癌移植瘤的血管新生，能有效抑制移植瘤生长。     

重组人肿瘤坏死因子对裸鼠移植人肝癌的抑制作用

采用裸鼠移植人肝癌模型，观察ｒｈＴＮＦ对肝癌细胞的抑制作用，结果发现ｒｈＴＮＦ瘤内注射或腹腔注射对肝癌细胞均有抑制作用。高剂量和中剂量组对肿瘤体积的抑制率分别为３３．４％和２５．１％，１００００／只剂量的ｒｈＴＮＦ腹腔注射其抑制率为３１．６；瘤体重量的抑制在高剂量组、中剂量组和腹腔组分别为３９，３３％２９．７％。     

Rationale and methods for the use of nude mice to study the biology and therapy of human cancer metastasis

Summary Human neoplasms are biologically heterogeneous. The extensive cellular diversity found in malignant neoplasms is generated by the rapid emergence of clonal subpopulations of tumor cells with different properties that include invasion, metastasis and responsiveness to treatment. Studies in rodent systems have indicated that cancer metastases can be clonal in their origin and that different metastases can originate from different progenitor cells from the primary tumor. This metastatic heterogeneity of tumor cells has many ramifications for studies of tumor biology, in general, and studies of therapy, in particular.The heterogeneous nature of metastatic human neoplasms can now be studied under defined conditions in healthy athymic nude mice. The neoplasms must be free of mouse pathogens and the mice must be kept in specific-pathogen-free conditions. Careful consideration must be given to the intimate tumor-host relationship for each tumor system studied, because the metastatic potential of human neoplasms can vary with the site of implantation into nude mice.Several methods for studying the biology of human neoplasms in the nude mouse are described as well as techniques to assure the success of these studies. The data show that the healthy young nude mouse can be a useful in vivo model for ascertaining the metastatic potential of human neoplasms, for selecting and maintaining cell variants of high metastatic potential from heterogeneous human tumors, and for studying therapeutic agents directed against metastatic cells proliferating in visceral organs.