人肺癌组织线粒体ATPase 6基因突变研究

目的：了解人肺癌组织ATPase6基因变异,探讨线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）突变与肿瘤发生的关系。方法：采用酚-氯仿法提取肺癌组织总DNA,用PCR产物直接测序方法,对37例肺癌组织mtDNA ATPase6基因序列进行分析,运用DNAStar软件将所得序列与mtDNA剑桥修订序列进行对照。结果：共发现28个碱基序列变异,没有检测到新的多态性位点,各亚型间在ATPase6基因碱基变异率没有显著性差异。在24例肺癌病例的ATPase6基因中检测到了碱基突变,突变率为64.8%。结论：在肺癌组织中存在ATPase6基因的高频率变异,这种变异可能在肺癌发生、发展中发挥重要作用。对ATPase6基因突变的进一步研究将有助于评价肺癌的DNA损伤和恶性程度,进一步研究这些变异对细胞功能的影响可能有助于阐明线粒体在肿瘤发生中的作用。     

线粒体DNA变异与肿瘤的相关性研究进展

肿瘤的发生发展是一个较为复杂的生物学过程,其中线粒体在肿瘤细胞代谢过程中扮演重要角色。线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）变异包括点突变、缺失、插入以及拷贝数变异等,这些变异可能参与肿瘤细胞的增殖、生长、侵袭和转移。本文就mtDNA突变、拷贝数改变、mtDNA与核基因（nuclear DNA,nDNA）的比值,以及mtDNA变异与肿瘤发生发展的相关性研究及临床进展进行综述,旨在为深入认识mtDNA变异与肿瘤发生发展的关系并为临床治疗提供更多的参考依据。      

乳腺浸润性导管癌线粒体DNA D-loop区碱基突变的检测分析

目的:研究乳腺癌患者的癌组织和癌旁正常组织线粒体DNA(mtDNA)D-loop区碱基突变差异.以探讨mtDNAD-loop区碱基突变与乳腺癌发生发展的相关性.方法:采用聚合酶链反应和DNA测序相结合的方法,对20例乳腺浸润性导管癌患者癌组织和癌旁组织线粒体D-loop区进行扩增并测序分析.结果:11例乳腺癌患者癌组织mtDNA D-loop区存在突变,类型以点突变为主,同时发现在线粒体DNA的某些位点发生突变的频率明显较高.结论:mtDNA D-loop区碱基在癌组织中的突变率较癌旁正常组织显著增高,提示mtD-NA D-loop区碱基突变可能在乳腺癌发生发展中发挥重要作用.     

肺癌线粒体DNA突变的研究

背景与目的：近年来已经在多种肿瘤中发现了线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA)突变,但其意义尚不明确。本研究通过检测肺癌组织中的mtDNA突变,探讨mtDNA突变在人肺癌发生中的作用。方法：提取58例肺癌组织及其相应病灶的远端非癌肺组织和外周血淋巴细胞的总DNA（包括核DNA和mtDNA),用巢式PCR（nested PCR)方法扩增相互重叠且涵盖mtDNA全长的58个DNA片段。经PCR产物直接测序法测定mtDNA序列,通过与外周血淋巴细胞比较,确定肺癌组织mtDNA突变。结果：在36例（62．1％）肺癌组织中发现66个突变,其中点突变58个,插入突变4个,缺失突变4个。这些突变分散地分布于mtDNA,以D－loop区突变最多,为18个,在多肽编码区没有明显的热点突变区。在多肽编码区检出的43个点突变中,20个突变不改变氨基酸编码序列。在8例病灶远端非癌肺组织中发现了与相应肿瘤相同的突变。结论：肺癌组织中mtDNA突变可能是随机发生的,且大部分突变对肿瘤的发生可能没有影响,但其有望成为一种肿瘤诊断的分子标记。     

鼻咽癌组织线粒体DNA突变的研究

[目的]通过检测鼻咽癌组织中线粒体DNA(mitochodrial DNA,mtDNA)部分区域的突变,探讨mtDNA突变在人鼻咽癌发生中的作用.[方法]提取23例鼻咽癌组织及其同一患者外周血白细胞的总DNA,经PCR扩增mtDNA,产物直接测序测定mtDNA序列.[结果]23例鼻咽癌组织中8例(34.8%)发现33个突变,包括点突变27个,插入突变3个,缺失突变3个;这些突变分布于mtDNA序列中,27个mtDNA突变位于D-loop区,其中21个是属于基因库中的多态变化,6个为新发现的突变;另外6个mtDNA突变位于线粒体编码区.[结论]鼻咽癌组织线粒体DNA的D-loop区是一个高度多态性和突变性的区域,mtDNA的突变可能与鼻咽癌的发生有一定的联系,有望成为肿瘤诊断的分子标记.     

线粒体DNA控制区研究进展

哺乳动物线粒体DNA(mitochondrialDNA,mtDNA)控制区由中央保守区、ETAS区和CSB区构成。近十年的研究发现线粒体基因组的缺陷和衰老、肿瘤、神经退行性疾病、肌病、心肌病以及糖尿病的关系密切。由于控制区调控整个线粒体DNA的复制和转录,因此,该区的碱基突变可能引起线粒体DNA复制和转录速度加快,造成突变的线粒体DNA相对增多,经过长期的累积可能导致肿瘤的发生。过去的研究主要注重线粒体的形态结构和能量代谢的异常,近年来研究发现控制区某些区段的突变率是核基因组的100～200倍。因此,控制区的突变在肿瘤发生中的作用和地位越来越受到重视。mtDNA的拷贝数远高于nDNA,它的突变较容易被检测到。因此,寻找与特定肿瘤相关的特异性mtDNA控制区突变成为近年来研究的热点之一。     

线粒体DNA控制区研究进展

哺乳动物线粒体DNA（mitoehondrial DNA，mtDNA）控制区由中央保守区、ETAS区和CSB区构成。近十年的研究发现线粒体基因组的缺陷和衰老、肿瘤、神经退行性疾病、肌病、心肌病以及糖尿病的关系密切。由于控制区调控整个线粒体DNA的复制和转录，因此，该区的碱基突变可能引起线粒体DNA复制和转录速度加快，造成突变的线粒体DNA相对增多，经过长期的累积可能导致肿瘤的发生。过去的研究主要注重线粒体的形态结构和能量代谢的异常，近年来研究发现控制区某些区段的突变率是核基因组的100～200倍。因此，控制区的突变在肿瘤发生中的作用和地位越来越受到重视。mtDNA的拷贝数远高于nDNA，它的突变较容易被检测到。因此，寻找与特定肿瘤相关的特异性mtDNA控制区突变成为近年来研究的热点之一。     

肺癌细胞系线粒体DNA非编码区序列变异研究

背景与目的 线粒体DNA（mtDNA）非编码区在mtDNA转录过程中起重要的调控作用，mtDNA非编码区的突变将直接影响其转录和翻译，从而改变细胞的能量代谢。本研究的目的是分析7种肺癌细胞系mtDNA非编码区序列的变异情况并探讨其意义，为肺癌细胞系mtDNA变异研究提供基础信息。方法 培养7种常用肺癌细胞系，包括人肺腺癌A549、SPC-A-1、Calu-3、LTEP-a-2，人肺扁平上皮癌QG-56，人高转移肺癌95-D以及人小细胞肺癌NCI-H446，应用改良一步法提取7种肺癌细胞系mtDNA，以剑桥mtDNA序列为标准，分析非编码区序列变异情况。结果 7种肺癌细胞系mtDNA非编码区存在不同程度的碱基变异，其中LTEP-a-2细胞系变异率最高，为1．82％，A549细胞系最低，为0．21％。结论 率先成功完成了7种人肺癌细胞系mtDNA整个非编码区的测序，揭示了这7种肺癌细胞系mtDNA非编码区碱基变异背景，为后续实验研究提供了理论基础和参考依据。     

线粒体DNA损伤与胃癌发生关系的研究

目的:检测胃癌线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)的突变和不稳定性,探讨mtDNA损伤与胃癌发生的关系及其作用机制。方法:采用PCR扩增22例胃癌组织和对应的远端正常胃黏膜组织mtDNA控制区(D-loop)以及编码基因,利用变性高效液相色谱(denaturinghigh performance liquid chromatography,dHPLC)和DNA测序检测分析mtDNA的变异情况(包括种系性突变、体细胞突变和不稳定性)。结果:22例胃癌组织其线粒体不稳定性(mitochondrial genome instability,mtGI)的发生(13/22,59.1%)与mtDNA体细胞突变(10/22,45.5%)呈正相关,r=0.894 4,χ2(Pearson未校正法)=14.400 0,P=0.000 1。肠型胃癌患者12S rRNA位点损伤度(每例2.32个/1 000 bp)是弥漫型胃癌(每例0.86个/1 000 bp)的2.7倍,t=2.638 6,P=0.015 8。结论:mtDNA损伤可能参与肠型胃癌的发生,mtDNA损伤致癌可能需要2次打击激活。     

线粒体DNA中D-loop区突变在非小细胞肺癌中的意义

目的： 探讨线粒体DNA中D-loop区突变在非小细胞肺癌中的意义及其临床应用的可能性。方法：提取20例非小细胞肺癌患者的癌组织及癌旁组织细胞的线粒体DNA (mtDNA),PCR扩增D-loop区并进行测序,然后以人类基因组中的D-loop区序列为对照,分析基因突变。结果：20例非小细胞肺癌患者的癌组织及癌旁组织mtDNA的D-loop区均发生突变,总突变数265个,其中癌组织特异性突变69个,癌旁组织特异性突变96个,共同突变50个,突变主要集中于D-loop的HVRII区。结论：线粒体DNA中D-loop区的突变主要集中于HVRII区,在非小细胞肺癌的发生发展中可能有重要作用。     

乳腺癌线粒体基因组控制区突变的研究

目的:通过测定乳腺癌线粒体基因组控制区突变的频率和分布,探讨其在肿瘤发生中的作用。方法:提取30例乳腺癌患者的癌及癌旁正常组织细胞总DNA,PCR扩增线粒体DNA(mitochondrialDNA,mtDNA)基因组控制区D-loop区,单链构象多态性(single-strandconformationpolymorphism,SSCP)筛查突变标本,基因测序分析突变。结果:在30例乳腺癌组织中9例(30%)乳腺癌共发现14个新的突变位点,其中6例在多聚胞嘧啶区(D310区)的311~313位点出现了CC或CCC删除。结论:乳腺癌线粒体DNA显示了高频率的D-loop区的突变,D310区是点突变、插入/缺失突变的热点。D-loop区尤其是D310区的变化在肿瘤的形成中可能扮演了重要角色。     

Lewis肺癌的RAPD分析及其差异片段克隆

目的 检测Lewis肺癌的遗传改变,寻找与癌变相关的DNA序列或片段。方法 用105条引物对Lewis肺癌及其来源小鼠C57BL／6J正常组织基因组DNA进行随机扩增多态DNA（RAPD）扩增,比较肿瘤组织与正常组织的扩增图,对差异很明显的片段回收、克隆和测序,序列与GenBank数据库进行同源性比较。结果 105条引物中有25条引物扩增出的条带在肿瘤组织与其相应正常组织间存在差异。引物AB7－2和AB7－11扩增所得差异片段L7－2和L7－11回收纯化后克隆测序。L7－2片段长730bp,该序列与已知序列没有任何相关性。L7－11长779bp,与小鼠的V kappa 21-11gene在核酸水平具有90％的同源性。结论 本研究用RAPD技术检测出Lewis肺癌存在一定程度的遗传改变,并发现与Lewis肺癌发生相关的DNA序列L7－2和L7－11,这种改变可能与肺癌的发生相关。     

DNA amplification on chromosome 6p12 in non small cell lung cancer detected by arbitrarily primed polymerase chain reaction.

Gene amplification is clearly an important aspect of tumour growth and development and has prognostic significance in certain tumours. The identification and genetic characterisation of new areas of amplification in human malignancy remains an important goal in understanding the underlying genetic lesions within these tissues. In the present work, arbitrarily primed-PCR (AP-PCR) has been applied to detect and characterise amplified DNA fragments in human non small cell lung cancer (NSCLC). Our results show that gains of genomic sequences occur at high frequency (64% of all genomic changes analysed). Moreover, we succeeded in detecting a genomic sequence that is highly amplified in one of the tumours analysed. The amplification intensity of this DNA fragment was also increased in 29 (45%) of the 65 NSCLC patients from our study. The amplified DNA fragment was isolated and identified as a 600 bp sequence mapped to chromosome 6p12. This sequence did not show significant homology with known human DNA sequences. Interestingly, a gene related to cancer processes, the pim-1 oncogene, is placed neighbouring to this region on chromosome 6. Survival studies revealed that disease-free interval of NSCLC patients was shorter in patients bearing the amplified sequence (p = 0.05 by the Breslow test). Our findings suggest that the amplified sequence located on chromosome 6 might be relevant in the pathogenesis of human NSCLC. Int. J. Cancer (Pred. Oncol.), 84:344-349, 1999.     

Mitochondrial DNA 4977 BP deletion mutations in lung carcinoma

BACKGROUND: The most common and also the most often assayed mtDNA deletion mutation, degrees mtDNA 4,977 sub has been demonstrated in various types of human cancer. However, knowledge about degrees mtDNA 4,977 in lung carcinoma is poor. AIM: To study the 4,977 bp deletions of mitochondrial DNA ( degrees mtDNA 4,977) in lung cancer, adjacent histologically normal and normal lung tissue and its potential roles in the development of cancer. MATERIALS AND METHODS: Thirty-seven matched lung cancer/adjacent histologically normal and 20 histologically normal lung tissue samples in subjects without lung cancer were analyzed by PCR technique. RESULTS: degrees mtDNA 4,977 deletions were detected in 54.1% (20/37) of lung cancers, 59.5% (22/37) of adjacent normal and 30.0% (6/20) of normal lung tissue samples. No significant difference was found in the frequency of degrees mtDNA 4,977 deletions between the tumor and adjacent normal lung tissues (P value = 0.815). Moreover, no significant difference was found in the frequency of degrees mtDNA 4,977 deletions between the tumor and histologically normal lung tissues in subjects without lung cancer (P value=0.101). However, the correlation between degrees mtDNA 4,977 deletion and age and smoking factors was present in our data. STATISTICAL ANALYSIS: Fisher's exact test was used to assess the difference in different groups by the Scientific Package for Social Sciences (SPSS), version 10.0, Statistical analysis software. CONCLUSIONS: Mitochondrial DNA 4,977 bp deletion, which is not specific to lung cancer, may reflect the environmental and aging process influences operative during tumor progression.     

肺鳞癌患者线粒体DNA编码区序列突变研究

背景与目的 吸烟是肺癌发病的重要因素,但吸烟在肺癌发生发展中的机制目前尚不清楚.本研究旨在分析肺鳞癌患者外周血白细胞、癌旁组织及癌组织线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)编码区序列的突变情况,并探讨其临床意义.方法 应用改良一步法制备15例肺鳞癌患者外周血白细胞、癌旁组织及癌组织mtDNA,PCR产物直接测序,对比分析编码区序列突变情况.结果 15例肺鳞癌患者癌组织mtDNA编码区中,有11例(73.33%)发生突变,共发现18个突变,其中10例患者有长期吸烟病史.结论 肺鳞癌患者mtDNA编码区突变可能与吸烟密切相关.     

Polι基因在人肺癌组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的：检测DNA聚合酶ι（polymerase iota,Polι）基因在人肺癌组织、癌旁组织及正常肺组织中的表达,结合肺癌临床病理特征及预后分析Polι在肺癌发生、发展中的意义。方法：选取2001年1月至2003年8月在山东大学齐鲁医院胸外科行手术治疗的明确诊断为原发性肺癌的患者,应用免疫组化和RTPCR方法检测62例肺癌组织、30例癌旁组织和30例正常肺组织标本中Polι的表达水平,采用SPSS13.0软件对数据进行统计学分析。结果：人肺癌组织、癌旁组织和正常肺组织中Polι表达率分别为54.8%、333%和10.0%,不同类型肺癌组织中Polι表达无显著性差异（P>0.05）,随着肺癌分化程度升高,Polι表达下降（P<0.05）,Ⅲ期和Ⅳ期肺癌组织中Polι表达明显高于Ⅰ期和Ⅱ期（P＜0.05）,生存3年以下肺癌Polι表达明显高于3年以上者（P<0.05）,吸烟者Polι表达高于非吸烟者（P<0.05）。结论：Polι高表达在肺癌发生、发展中起到重要作用,可能作为肺癌生物学特征和预后判断的参考指标。     

喉鳞状细胞癌组织中线粒体基因4977bp缺失突变的检测

背景与目的:线粒体DNA4977bp缺失突变是机体衰老的分子生物学标志之一,已证实其存在于多种实体性肿瘤中,该突变与喉鳞状细胞癌之间的关系尚不明确。本文旨在探讨喉鳞状细胞癌组织中线粒体基因4977bp缺失突变的发生情况及其与喉癌组织分化水平之间的关系。方法:取喉癌组织35例,均经病理证实为喉鳞状细胞癌。提取肿瘤组织总DNA,利用聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)对线粒体基因4977bp缺失进行检测。PCR产物直接测序。结果:35例标本中有20例(57.14%)检测到线粒体基因4977bp缺失突变,其中7例高分化喉鳞癌中有5例,24例中分化喉鳞癌中有15例,4例低分化喉鳞癌未检测到该缺失突变。经统计学分析,高分化、中分化级别喉鳞癌组织4977bp缺失突变发生率与低分化相比有显著性差异(P<0.05),而高分化和中分化之间无显著性差异(P>0.05)。结论:喉鳞状细胞癌组织中存在线粒体DNA4977bp缺失突变,该突变的发生可能与肿瘤组织分化水平有关。