MACC1基因siRNA对肺癌SBC-5细胞增殖和迁移的影响

目的：探讨MACC1（metastasis-associated in colon cancer l）基因特异性siRNA（small interfering RNA）对肺癌细胞系SBC-5体外增殖和迁移的影响。方法：化学合成MACC1基因特异性siRNA,阳离子脂质体LipofectamineTM 2000转染肺癌细胞系SBC-5细胞,RT-PCR和Western blot方法检测转染后SBC-5细胞中MACC1基因和蛋白的表达情况;MTT法检测细胞的生长增殖状况;划痕试验观察细胞迁移能力的改变。结果：MACC1基因特异性siRNA转染细胞后,SBC-5细胞MACC1的mRNA和蛋白表达水平明显降低,MTT试验和划痕试验观察到转染MACC1-siRNA的SBC-5细胞增殖、迁移能力明显减弱。结论：MACC1基因特异性siRNA可以明显抑制肺癌SBC-5细胞增殖和迁移,MACC1可能成为肺癌治疗的新靶点。     

siRNA 沉默artemin 蛋白对食管癌TE11细胞侵袭能力的影响

目的:通过siRNA 干扰技术沉默ARTN 基因在人食管癌细胞TE11中的表达,研究其对人食管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:设计并合成3 条特异性针对ARTN 基因的siRNA ,构建了真核表达载体pSilencer 2.1-ARTN-siRNA,转染到TE11细胞中,经Real-time PCR和Western blot检测ARTN 在mRNA 和蛋白水平的表达;通过MTT 比色法、细胞划痕实验和Boyden小室侵袭实验观察转染pSilencer 2.1-ARTN-siRNA 后细胞增殖、迁移和侵袭能力的改变。结果:转染重组质粒pSilencer 2.1-ARTN-siRNA后人食管癌细胞TE11中ARTN 的mRNA 表达受到抑制,蛋白表达降低;通过体外实验表明,细胞的增殖能力、迁移能力和侵袭能力均减弱。结论:siRNA 沉默ARTN 基因的表达可降低人食管癌细胞TE11的增殖、迁移和侵袭能力,ARTN 可能是食管癌的一个生物治疗靶点,有望成为治疗食管癌的新途径。      

沉默S100A4基因对人膀胱癌T-24细胞生物学特性的影响

目的:探讨应用siRNA 技术沉默S100A4基因表达后,对人膀胱癌细胞系T-24增殖、凋亡及细胞侵袭能力的影响。方法:设计并合成S100A4 基因特异性的siRNA 序列,转染人膀胱癌细胞系T-24,48h后应用RT-PCR 和Western blot法检测在mRNA 和蛋白水平siRNA 对S100A4的影响,MTT 法检测T-24细胞增殖能力,流式细胞术检测转染S100A4 siRNA 后T-24细胞凋亡率,Transwell 法观察siRNA 抑制S100A4 后对人膀胱癌细胞系侵袭能力的影响。结果:与空白对照组、阴性对照组相比,S100A4 siRNA转染组T-24细胞的S100A4基因和蛋白表达降低(P＜0.05)。MTT法检测发现S100A4 siRNA转染组细胞增殖率明显下降（P＜0.01）;流式细胞术检测siRNA转染组细胞凋亡率高于其他各组,差异具有统计学意义（P＜0.05）;Transwell小室实验检测发现T-24细胞侵袭能力明显下降（P＜0.05）。结论:膀胱癌细胞中S100A4 表达与癌细胞侵袭、增殖和凋亡能力有关。S100A4 siRNA 能够抑制T-24细胞S100A4的表达,进而抑制细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡。S100A4基因和蛋白表达与膀胱癌的生物学特性密切相关,可能成为预测其发生转移和复发,以期指导临床治疗的重要指标。     

干扰FBXO2表达对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移及EMT的影响

目的：探讨F框蛋白2（F-box only protein 2,FBXO2）基因在人胃癌细胞系中表达及其对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT 的影响。方法：选择胃癌细胞系 MGC-803、AGS、SGC-7901、MKN-28以及正常胃黏膜上皮细胞株 GES-1,qPCR 法检测细胞中FBXO2 mRNA表达水平。设计靶向抑制FBXO2表达的特异siRNA,并瞬时转染MGC-803细胞,转染siRNA无义序列的为阴性对照。qPCR法检测转染48 h后MGC-803细胞中FBXO2 mRNA表达水平;用MTT法、细胞划痕愈合法、Transwell小室法检测降低 FBXO2表达对细胞增殖、迁移和侵袭的影响,WB 法检测细胞中 EMT 相关蛋白 E-cadherin、N-cadherin、vimentin的表达。结果：4种胃癌细胞中FBXO2 mRNA表达水平显著高于胃黏膜上皮细胞GES-1（P<0.05或P<0.01）。与阴性对照组相比,siRNA[1]FBXO2组MGC-803细胞中FBXO2 mRNA表达下调（P<0.01）,该细胞的增殖、迁移和侵袭能力受到显著抑制（P<0.05或P<0.01）,E-cadherin蛋白表达明显升高（P<0.01）,N-cadherin、vimentin蛋白表达显著降低（均 P<0.01）。结论：低表达的 FBXO2可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,该抑制作用可能与EMT过程有关。     

非小细胞肺癌中PAX6表达及其对肿瘤细胞增殖与侵袭作用机制研究

背景与目的：转录因子PAX6主要表达于胚胎期,不同肿瘤中PAX6呈现高表达,通过不同的信号通路发挥肿瘤抑制或促进作用。检测PAX6在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达,通过RNAi下调其表达,研究PAX6对肿瘤细胞侵袭和增殖力以及cyclin E、p38表达水平的影响。方法：应用蛋白印记检测86例NSCLC肿瘤组织及癌旁配对组织以及2例细胞系中PAX6的表达情况。应用PAX6特异性siRNA序列,转染NSCLC细胞系A549,MTT法、Transwell小室、划痕实验检测转染前后细胞增殖、侵袭和迁移能力的对比。蛋白质印记法(Western blot)检测转染前后cyclin E及p38表达情况。结果：对比癌旁组织及正常人支气管上皮细胞16HBE,PAX6在NSCLC组织及A549细胞系中显著高表达。选取高效siRNA序列转染细胞系后,PAX6表达的下调抑制了肿瘤细胞的增殖及集落形成,G1期细胞比例增加,细胞侵袭及迁移力均下降。PAX6基因敲低细胞cyclin E及p38活性受到抑制,表达下调。结论：PAX6通过调控MAPK通路及cyclin E的表达加速肿瘤细胞的增殖、侵袭及迁移,是潜在的NSCLC诊疗靶点。     

MACC1基因与肾癌转移的相关性及其对细胞侵袭能力的影响

目的:探讨MACC1基因与肾癌转移的相关性,及其表达降低对肾癌细胞侵袭能力的影响。方法:应用荧光定量PCR检测原发未转移肾癌和原发伴转移肾癌组织中MACC1 mRNA的表达。设计并合成MACC1基因特异性的siRNA,转染肾癌Caki-1细胞,检测转染后MACC1蛋白的表达以及Caki-1细胞的侵袭能力。结果:原发伴转移肾癌组织中的MACC1 mRNA表达较原发未转移肾癌明显增加(P<0.05)。siRNA-MACC1能够明显抑制Caki-1细胞中MACC1蛋白的表达(P<0.05)。MACC1蛋白表达抑制的Caki-1细胞的侵袭能力明显降低(P<0.05)。结论:MACC1基因与肾癌的转移相关,其表达抑制能够降低Caki-1细胞的侵袭能力。     

慢病毒载体介导的RNA干扰下调膜联蛋白A1对小细胞肺癌细胞生物学行为的影响

目的:探究AnnexinA1对小细胞肺癌细胞生物学行为的影响。方法:构建干扰AnnexinA1的慢病毒载体,转染至SBC-5细胞株;体外增殖、迁移、侵袭实验观察下调AnnexinA1表达对小细胞肺癌细胞株生物学行为的影响。结果:干扰AnnexinA1的细胞株ANXA1 RNAi-SBC-5构建成功。与转染空载体的对照细胞相比,抑制AnnexinA1的表达能够显著抑制SBC-5细胞的增殖、迁移、侵袭能力。结论:AnnexinA1表达可能与肺癌骨转移密切相关。     

CDKL1对胃癌细胞迁移及侵袭的作用

目的:探讨细胞周期素依赖激酶样蛋白1(CDKL1)对胃癌细胞系SGC7901迁移及侵袭的作用.方法:将胃癌细胞系SGC7901分为实验组及对照组,采用慢病毒转染siRNA至胃癌细胞构成实验组,转染无意义序列作为对照组.通过细胞划痕实验检测胃癌SGC7901细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测其侵袭能力;Western blot检测CDKL1低表达后对胃癌细胞中AEG-1和MMP-9蛋白表达的影响.结果:与对照组相比,CDKL1低表达后实验组细胞迁移及侵袭能力明显降低(P＜0.05),实验组胃癌细胞中AEG-1和MMP-9蛋白的表达水平明显下降(P＜0.05).结论:特异性下调CDKL1基因可抑制胃癌细胞的迁移及侵袭能力,表明CDKL1基因可促进胃癌细胞的侵袭以及转移,并且与AEG-1和MMP-9密切相关.     

肾癌细胞增殖过程MACC1和c-MET调控机制的探讨

目的:探讨MACC1和c-MET与肾癌的相关性,明确两者之间调控关系及对肾癌Caki-1细胞增殖的影响。方法:应用荧光定量PCR检测67例肾癌及相应癌旁正常组织中MACC1和c-MET mRNA的表达。设计并合成MACC1基因特异性的siRNA,转染肾癌Caki-1细胞,检测转染后MACC1和c-MET蛋白的表达以及Ca-ki-1细胞的细胞抑制率。结果:肾癌组织中的MACC1和c-MET mRNA表达较癌旁正常组织中均有明显增加(P<0.05),且两者呈正相关。siRNA-MACC1能够明显抑制Caki-1细胞中MACC1蛋白的表达,P<0.05。MACC1蛋白表达抑制的Caki-1细胞中c-MET蛋白的表达亦降低(P<0.05),细胞抑制率明显升高,P<0.05。结论:MACC1和c-MET都与肾癌相关,MACC1能够调节下游基因c-MET的表达,影响肾癌细胞的增殖能力,发挥促进肿瘤生长的作用。     

RACK1通过影响MCM7磷酸化促进肺癌细胞的增殖

目的:研究蛋白激酶C受体1(receptor for activated C kinase 1,RACK1)基因沉默或过表达对大细胞肺癌细胞系H460及肺腺癌细胞系A549细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:采用脂质体转染法分别将针对RACK1基因的RACK1 siRNA和重组质粒pCMV-sport6-RACK1转入H460和A549细胞中.采用MTT法和集落形成实验分析RACK1基因对细胞增殖的影响,FCM检测其对细胞周期的影响;采用酵母双杂交法、免疫共沉淀法、激光共聚焦显微术及磷酸化蛋白免疫共沉淀法检测RACK1表达与肺癌细胞增殖之间的关系.结果:转染RACK1 siRNA后,H460和A549细胞中RACK1蛋白的表达量明显下调,细胞的增殖能力和集落生成数明显降低,S期细胞所占比例明显下降(P＜0.01);转染pCMV-sport6-RACK1后,H460和A549细胞中RACK1蛋白的表达量明显上调,细胞的增殖能力增强,倍增时间增加,集落生成数明显增多,S期细胞所占比例明显升高(P＜0.01).采用酵母双杂交法和免疫共沉淀法检测发现,RACK1与MCM7存在直接作用.RACK1进入细胞核内,与微小染色体维持蛋白7 (minichromosome maintenance protein 7,MCM7)特异性结合,促进MCM7蛋白磷酸化.结论:RACK1通过直接与MCM7结合促进MCM7蛋白磷酸化途径,继而促进肺癌细胞增殖.     

siMDR1重组慢病毒载体的构建及其对A549和A549／DDP细胞的影响

背景与目的:肿瘤细胞的多药耐药性(multidrug resistance,MDR)是导致化疗失败的最主要原因,也是癌症术后复发及转移的主要原因.本研究旨在探讨MDR1基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)重组慢病毒对人肺腺癌A549细胞和对顺铂耐药的A549/DDP细胞的MDR1基因的抑制作用.方法:设计获得针对MDR1的短发卡状RNA(small hair pin RNA,shRNA)的寡核苷酸序列,退火后插入线性化的pSUPER载体(H1启动子下游).把构建获得的载体转染A549细胞,RT-PCR法检测其对MDR1的干扰作用,筛选确定MDR1基因RNAi有效靶序列;合成靶序列的01igo DNA,与含启动子和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的PTM载体连接产生PTM-siMDR1慢病毒载体;用重组慢病毒体外感染A549和A549/DDP细胞.结果:成功构建可以表达针对MDR1的发卡状RNAi,能有效的下调MDR1的表达.成功构建获得针对MDR1基因的慢病毒载体PTM-siMDR1,包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为0.5×109TU/mL.感染PTM-siMDRI的A549/DDP细胞对顺铂的敏感性明显提高,逆转倍数达3.81倍.结论:siiDR1重组慢病毒载体感染A549/DDP细胞,能明显改善其对顺铂的耐药性.     

Follistatin suppresses the production of experimental multiple-organ metastasis by small cell lung cancer cells in natural killer cell-depleted SCID mice.

PURPOSE: Follistatin (FST), an inhibitor of activin, regulates a variety of biological functions, including cell proliferation, differentiation, and apoptosis. However, the role of FST in cancer metastasis is still unknown. Previous research established a multiple-organ metastasis model of human small cell lung cancer in natural killer cell-depleted SCID mice. In this model, i.v. inoculated tumor cells produced metastatic colonies in multiple organs including the lung, liver, and bone. The purpose of this study is to determine the role of FST in multiple-organ metastasis using this model. EXPERIMENTAL DESIGN: A human FST gene was transfected into the small cell lung cancer cell lines SBC-3 and SBC-5 and established transfectants secreting biologically active FST. The metastatic potential of the transfectants was evaluated using the metastasis model. RESULTS: FST-gene transfection did not affect the cell proliferation, motility, invasion, or adhesion to endothelial cells in vitro. I.v. inoculated SBC-3 or SBC-5 cells produced metastatic colonies into multiple organs, including the lung, liver, and bone in the natural killer cell-depleted SCID mice. FST transfectants produced significantly fewer metastatic colonies in these organs when compared with their parental cells or vector control clones. Immunohistochemical analyses of the liver metastases revealed that the number of proliferating tumor cells and the tumor-associated microvessel density were significantly less in the lesions produced by FST transfectants. CONCLUSIONS: These results suggest that FST plays a critical role in the production of multiple-organ metastasis, predominantly by inhibiting the angiogenesis. This is the first report to show the role of FST in metastases.     

凋亡抑制因子（ARC）对肺癌细胞侵袭能力及对Akt蛋白磷酸化的影响

目的:探讨含有Caspase富集功能域的凋亡抑制因子（ARC）对肺癌细胞侵袭能力及对细胞中蛋白激酶B（Akt）蛋白磷酸化的影响。方法:人正常肺细胞MRC-5和肺癌细胞A549、SPC-A1、H322经细胞蛋白提取后,Western blot检测细胞中ARC表达水平。把ARC小干扰RNA组（ARC siRNA组）、siRNA对照组（siRNA-NC组）转染至人肺癌细胞中,同时设置未转染组（只加入转染试剂）,培养48 h后,Western blot检测细胞中ARC、Akt、磷酸化的蛋白激酶B（p-Akt）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）表达水平,Transwell小室检测细胞侵袭能力。结果:人肺癌细胞A549、SPC-A1、H322中ARC表达水平明显高于正常人肺细胞MRC-5（P＜0.01）。肺癌细胞A549中ARC表达水平最高,后续选用A549细胞继续研究。ARC siRNA组细胞侵袭能力及细胞中ARC、p-Akt、MMP-2表达水平均明显低于未转染组（P＜0.01）。siRNA-NC组细胞侵袭能力及细胞中ARC、p-Akt、MMP-2表达水平与未转染组相比差异没有统计学意义（P＞0.05）。结论: ARC在肺癌细胞中表达上调,干扰ARC后肺癌细胞的侵袭受到抑制,细胞中Akt磷酸化水平降低。     

下调TSG101基因表达对胰腺癌细胞系PANC-1增殖的影响

目的:研究通过siRNA下调TSG101的表达对胰腺癌细胞系PANC-1生长、增殖及细胞周期的影响。方法:将合成的TSG101 siRNA片段插入至带有绿色荧光蛋白基因(GFP)的pGenesil-1质粒中,用lipo-fectamine 2000将质粒转入胰腺癌细胞系PANC-1后,Western blot鉴定siRNA对TSG101蛋白干扰效率。然后用MTT、流式细胞术检测TSG101下调的细胞生长、增殖能力及细胞周期的变化。结果:TSG101 siRNA有效下调其在胰腺癌细胞系PANC-1中的表达,下调TSG101基因的表达后显著抑制了PANC-1细胞的生长、增殖能力。与随机对照siRNA及阴性对照细胞相比,MTT分析显示有效转染TSG101 siRNA的细胞从第4天开始增殖能力明显下降(P<0.05),流式细胞术分析示细胞周期阻滞在G1期,增殖指数(PI)下降(P<0.05)。结论:下调TSG101在胰腺癌细胞系PANC-1表达后能够导致细胞周期的阻滞并有效抑制细胞生长、增殖。利用RNA干涉技术下调内源性TSG101表达有望成为一种有效的胰腺癌基因治疗方法。     

αvβ_3整合素在小细胞肺癌骨转移细胞株SBC-5中的表达及意义

目的：分析αvβ3整合素在特异性小细胞肺癌骨转移细胞株中的表达,探讨肺癌骨转移的机制。方法：RT-PCR、Western-blot和免疫荧光染色检测小细胞肺癌特异性骨转移细胞株SBC-5和非骨转移细胞株SBC-3中αvβ3整合素的表达差异。结果：αvβ3整合素在SBC-5细胞株中的表达显著高于SBC-3细胞株。结论：αvβ3整合素可能与小细胞肺癌骨转移的发生相关,可能促进了小细胞肺癌骨转移的发生。     

Livin靶向siRNA诱导大肠癌细胞调亡的作用

Objective:To construct siRNA recombinant expression vector targeting Livin gene and observe the apoptosis induction effecl of it in human colon cancer cells.Methods:SiRNA recombinant expression vector targeting Livin gene was constructed and transfected into human colon cancer cell.The effect of siRNA recombinant expression vector was detected by RT-PCR,Westem blot,MTT reduction assay and flow cytometry.Results:It was confirmed by restriction endonuclease and sequence analysis that siRNA recombinant expression vector targeting Livin gene was constructed successfully.Inhibition ratio of Livin siRNA at mRNA and protein levels were 30.18% and 28.88%.The growth of cancer cells was inhibited significantly and the apoptotic ratio was 13.36±1.45%.Conclusion:The siRNA recombinant expression vector targeting Livin gene has been constructed successfully.It not only can inhibit the expression of Livin gene but also can induce apoptosis in human colon cancer cells remarkably.     

Cytotoxic effect of herbal medicine sho-saiko-to on human lung-cancer cell-lines in-vitro

The cytotoxic effect of a herbal medicine Shosaiko-to (TJ-9) was examined by the MTT assay on 7 human lung cancer cell lines (4 non-small cell carcinomas, 3 small cell carcinomas) and on 5 hepatocellular carcinoma cell lines. TJ-9 showed a dose-dependent cytotoxicity in all cell lines except one (SBC-5). Of the seven herbs in TJ-9, Scutellaria root showed the strongest cytotoxicity followed by the Glycyrrhiza root. Among baicalin, baicalein and wogonin from the Scutellaria root, cytotoxicity was observed only with baicalin. The SBC-5 cell line which was resistant to TJ-9 showed a lesser sensitivity to both Scutellaria root and baicalin. TJ-9 showed almost equal cytotoxicity in cisplatin (CDDP)-sensitive PC-10 and CDDP-resistant SBC-4 cell lines, and in H69 and H69/CDDP cell lines. TJ-9, Scutellaria root and baicalin were all less cytotoxic for human lymphocytes and bone marrow cells than for a lung cancer cell line of SBC-4. These results suggest that TJ-9 and its components may be useful anticancer agents for the treatment of lung cancer.