分泌抗巨细胞病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株的建立

用CMV-AD_(169)病毒株免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP_(2/0)细胞融合,获得5株分泌抗CMV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,其细胞培养上清液效价(ELISA)为1∶32～1∶128,腹水效价为10~4～10~5,经证实McAb为IgG2a或IgM,均具有HCMV种特异性,可作为特异、敏感的免疫试剂,用于巨细胞病毒感染的早期快速诊断。     

抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体的制备及其鉴定

目的制备抗呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）的单克隆抗体，并对其特性进行系统地鉴定。方法以活的ＲＳＶＬｏｎｇ株滴鼻（ＴＣＩＤ５０为１×１０－６，取１００ＴＣＩＤ５００１２５ｍｌ进行）加ＲＳＶ感染Ｈｅｐ２细胞（ＣＰＥ达～）腹腔注射免疫Ｂａｌｂ／ｃ鼠，用细胞融合技术制备能稳定分泌抗ＲＳＶ的单克隆抗体细胞株。结果细胞融合一次成功，融合率为９６％，抗ＲＳＶ抗体阳性孔率为６５％。鉴定１株杂交瘤细胞Ｆ３株，染色体数为９８条，抗体亚类属ＩｇＧ１，对ＲＳＶ抗原特异；在无补体存在的情况下其腹水抗体中和效价为１∶１２８，且具融合抑制活性，腹水融合抑制效价为１∶６４。结论Ｆ３株单克隆抗体为抗ＲＳＶＦ蛋白的ＭｃＡｂ。     

重组人内抑素单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的制备抗重组人内抑素(ES)单克隆抗体(McAb)并进行鉴定。方法利用重组人ES为抗原,免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术将免疫小鼠的脾细胞与同源小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,间接ELISA法对细胞培养上清进行筛检,对能稳定分泌抗重组人ES的细胞株,进行扩大培养。体内诱生法制备腹水并对其初步鉴定。结果获得3B4、1D10、1G5、2D10,4株能稳定分泌抗重组人ESMcAb的杂交瘤细胞株,并对3B4和1D10两株给予鉴定,其免疫亚型为IgG2a、IgG3。腹水ELISA效价为10-6、10-5。通过蛋白免疫印迹法和免疫组化证明抗体有特异性和敏感性。结论成功制备分泌抗重组人ES的杂交瘤细胞株,为研究人ES的表达及相关领域奠定了基础。     

抗人A血型单克隆抗体的制备及其初步鉴定

分别用A型全血球和提取A型膜抗原免疫8周龄Balb/c鼠,进行细胞融合,建立了10株抗A型血型单克隆抗体。特异性鉴定表明仅与A、AB型血球发生盐水凝集。无冷凝集现象。培养上清和腹水与2％A型血球盐水凝集效价分别在1:32～128和1:512～4096,对200人份献血员血液标本检定,其中6株与标准人血清符合率达100％,A亚型鉴定10株全部属抗A_1亚型。免疫球蛋白亚类测定除A_4株是IgG_3,余均属IgM。     

人骨肉瘤OS-732单克隆抗体的制备及纯化

目的制备、纯化抗人骨肉瘤OS-732单克隆抗体。方法通过杂交瘤细胞腹腔注射BALB/c小鼠制备腹水,ProteinA-Sepharose CL-4B亲和层析法纯化单抗,SDS-PAGE、免疫组化及ELISA检测该单抗的性质。结果SDS-PAGE鉴定单抗纯度达到93%,ELISA检测抗体免疫活性效价为1×10-7。结论制备、纯化了具有较高纯度及生物活性的的抗骨肉瘤OS-732单克隆抗体,为下一步骨肉瘤靶向治疗打下了基础。     

抗人IgM单克隆抗体的制备及其特征研究

以人IgM作为抗原免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤技术获得5株分泌抗人IgM单抗的杂交瘤细胞株.通过酶联免疫吸附试验、免疫双向扩散试验证明:该组单抗仅与人IgM起反应,而不与其他各类免疫球蛋白反应。间接免疫荧光试验证明:该组单抗测得不同人群外周血淋巴细胞阳性数与用抗B细胞单抗和直接免疫荧光法测得的结果接近.免疫转印试验证明抗体作用的分子量为50～70kd(dalten法定单位为u,换算系数0.9921,下同).提示为IgM.本文还对单抗应用价值进行了讨论。     

生物合成法制备~3H标记的单克隆抗体

BALB/C 小鼠腹腔经硅胶或液体石蜡处理后,接种分泌抗胎儿甲种球蛋白的单克隆抗体杂交瘤株(10~7细胞).接种后24h 开始向腹腔注射8μci~3H—亮氨酸溶液,每日1次,共5次.接种后第7d 处死小鼠.取腹水、肝、脾和脑组织.腹水经离心后分离为腹腔细胞和上清.上清经DEAE—纤维素离子交换层析分离为单克隆抗体和其他组分.各组织、单克隆抗体及其他组分经适当处理后用液体闪烁仪检测其放射性.结果发现,各组织(细胞)中以杂交瘤细胞(占腹腔细胞的78.5%)的比放射性最高,层析所分离出的蛋白质组分中以单克隆抗体的比放射性最高.     

用单克隆抗体快速检测细胞培养中人巨细胞病毒的研究

用抗人巨细胞病毒(HCMV)早期抗原的单克隆抗体,通过间接免疫荧光技术和间接免疫酶染色,对细胞培养中的CMV早期抗原(EA)进行检测。检测结果,132份临床标本中有43份常规细胞培养(CCC)出现HCMV特征性细胞病变(CPE),其中40份在接种后24h早期抗原检测(DEA)阳性,敏感性达93%;其余89份CCC阴性,有5份DEA阳性,特异性为94.4%.同时用HCMVAD169进行的试验结果表明,HCMV感染细胞24h即可在接种10~(-5)病毒稀释度的细胞培养瓶中检测到CMV-EA,而同一稀释度CCC则于21d才能观察到CPE出现。提示DEA不仅敏感特异,而且与CCC相比,其最大的优点是快速,可在接种标本后24h甚至更短的时间内完成,CCC则平均需要16d。     

分泌抗B型流感病毒抗体杂交瘤细胞的制备及鉴定

目的 制备抗B型流感病毒的单克隆抗体，用以建立特异、灵敏、简便的B型流感金标试纸检测方法。方法 将B型流感病毒为完全抗原免疫BALB/c小鼠，得到的脾细胞与SP2／0细胞融合，获得稳定分泌抗流感B单抗的杂交瘤细胞株，对抗体进行鉴定。结果 用杂交瘤技术，得到了3株可稳定分泌抗流感B单抗的杂交瘤细胞株，能分泌高滴度的针对B型流感病毒的特异单抗。结论 所获抗B型流感病毒杂交瘤细胞株单克隆抗体，为金标法快速诊断B型流感感染奠定了基础。     

人血管生成素相关蛋白2单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备人血管生成素相关蛋白2(angiopoietin-related protein 2,ARP2)的单克隆抗体.方法:用RT-PCR方法获取人脾脏组织ARP2基因序列,构建pET32a-ARP2,经电穿孔导入大肠杆菌诱导表达,获得可溶蛋白样品和包涵体蛋白样品,回收、纯化蛋白,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术建立产生ARP2抗杂交瘤细胞株,Western印迹鉴定.结果:获得融合蛋白的相对分子质量为570 000,与理论计算值相符,纯化后蛋白浓度＞90%,杂交瘤细胞培养上清抗体效价为1:104,腹水抗体效价为1:107～1:108,抗体亚型为IgG2a类,Western印迹示目的蛋白相对分子质量为570 000,免疫组化显示该抗体能特异结合人ARP2.结论:制备的抗ARP2单克隆抗体可用于ARP2蛋白鉴定.     

肺炎支原体种特异性单克隆抗体杂交瘤制备及鉴定

目的　制备抗肺炎支原体种特异性单克隆抗体。方法　以纯化的肺炎支原体膜蛋白抗原 (相对分子质量为43× 10 3)加福氏免疫佐剂免疫 8周龄雌性BALB c小鼠 ,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2 0 Ag14融合 ,以酶标记免疫吸附测定法 (ELISA)筛选和鉴定所制备的单克隆抗体。结果　共筛出 3株分泌抗肺炎支原体种特异单克隆抗体杂交瘤 ,经免疫鉴定其分泌的免疫球蛋白类型为IgG1、IgG2a及IgM ,与肺炎支原体有很强的亲和力 ,与种属相近的其它 6株支原体没有交叉反应。结论　本次筛选制备的单克隆抗体杂交瘤能分泌高浓度的肺炎支原体单克隆抗体 ,并且有很强的种特异性。     

抗人肝微粒体蛋白单克隆抗体细胞系的建立及鉴定

目的 初步建立抗人肝微粒体蛋白单克隆抗体规模化制备技术平台,为制备抗人细胞色素P450(CYP450)亚型蛋白的单克隆抗体奠定基础.方法 按常规方法进行细胞融合,以酶联免疫吸附测定法(ELISA)筛选杂交瘤,以ELISA、免疫组化(HI)、免疫印迹(Western Blot)、免疫沉淀(IP)对单克隆抗体加以鉴定.结果 进行6次融合,共筛出216株杂交瘤,其分泌抗体类型为IgG1、IgG2a、IgG2b、及IgM.免疫组化(IH)图片上,人肝细胞浆内均可见阳性颗粒.免疫沉淀(IP)和免疫印迹(Western Blot)结果显示,所制备抗体与人肝微粒体蛋白有特异性结合.结论 筛选制备的单克隆抗体杂交瘤能分泌抗人肝微粒体蛋白单克隆抗体,并且有较强特异性,为下一步研究提供了基础与技术平台.     

抗ANXA2单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的制备ANXA2特异性单克隆抗体(McAb),为研究ANXA2的生物学功能和检测该蛋白提供有力的抗体工具。方法用经IPTG诱导表达的基因重组PGEX-4T-1-ANXA2抗原免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法筛选抗ANXA2杂交瘤细胞,用ELISA法鉴定所得单抗腹水的效价及Western blot鉴定McAb特异性。单抗纯化和Eu3+标记后,分别包被聚苯乙烯板及作为铕标单抗,利用时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)筛选出检测ANXA2蛋白的最佳配伍单抗。结果经细胞融合、筛选、克隆化,获得了16株可分泌高效价单抗的杂交瘤细胞,间接ELISA显示16株McAb与空载体PGEX-4T-1均未发生交叉反应,抗体特异性良好,16株抗体腹水效价为1∶8 000~1∶256 000,培养上清效价为1∶256~1∶512,纯化的腹水单抗经配对试验,2D6和9H9-Eu3+配对最佳。结论获得16株能稳定分泌高特异性抗ANXA2的杂交瘤细胞,能用于后续研究。     

分泌抗人喉癌单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及临床意义

用喉癌抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的脾细胞与ＮＳ－１小鼠骨髓瘤细胞融合，经筛选获得４株分泌抗人喉癌单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株，均收集到腹水型ＭｃＡｂ，并验证其滴度高，纯化效果好，特异性强。用其中３株ＭｃＡｂ混合，对１２４例喉癌及４０例正常人血清予以检测，结果喉癌患者血清中喉癌相关抗原水平明显高于对照组，Ｐ＜０．０１，且随病情的加重，喉癌相关抗原水平呈上升趋势。故本室建立的抗人喉癌混合ＭｃＡｂ可作为一种较为理想的肿瘤标记物，为喉癌的诊断、病情监测、预后判定提供了一种敏感、特异的测试手段。     

抗幽门螺杆菌单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)全菌的单克隆抗体并对其特异性进行初步鉴定。方法用培养的幽门螺杆菌超声破菌后的上清和沉淀为抗原分别免疫BALB／c小鼠,通过杂交瘤技术制备单克隆抗体并测定抗体免疫球蛋白亚类、效价及亲和力,用重组表达的Hp Lpp20、HspA、urease A、CagA、urease B、catalase蛋白鉴定抗体。结果共获得34株抗Hp的单克隆抗体,其中抗上清31株和抗沉淀3株,34株抗体中针对Lpp20、HspA、urease A、CagA、urease B、catalase蛋白的抗体分别为3、2、4、1、5、2株,目前已鉴定的部分单克隆抗体的亚类均为IgGl,细胞培养上清的效价为1:16-1:32,腹水效价为1:32000～1:64000,抗体亲和常数介于1×10-10mol／L-5．2×10-12mol／L。结论获得特异性针对幽门螺杆菌的单克隆抗体,为幽门螺杆菌的诊断和疫苗研究奠定基础。     

人Ⅰ型丙氨酸氨基转移酶单克隆抗体的制备及鉴定

目的 通过构建人Ⅰ型丙氨酸氨基转移酶(ALT1)的原核表达载体,并用纯化的ALT1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备有生物活性的单克隆抗体.方法 用GST-ALT1融合蛋白作为免疫原,通过杂交瘤技术制备抗ALT1的单克隆抗体,用间接ELISA、Dot-Elisa、Western blot等方法对抗体的抗原结合特性进行鉴定.结果 获得1株能稳定分泌抗ALT1单克隆抗体的细胞株8A9,亚类鉴定这种单抗为IgG2.间接ELISA法测定细胞株腹水抗体的效价为10×10~5.Dot-ELISA、Western blot显示ALT1单克隆抗体能特异性地识别免疫原.结论 成功制备ALT1单克隆抗体.