实时荧光定量PCR检测HBV—DNA在诊断乙型肝炎中的价值

目的：分析实时荧光定量PCR（Real Time PCR）检测HBV—DNA在诊断乙型肝炎病毒（HBV）中的作用。方法：分别用实时荧光定量PCR和ELISA方法检测389份临床病人血清，并用t检验分析比较HBV—DNA阳性结果。结果：在血清学标志物组合模式中，多种组合都可检测出HBV—DNA含量，尤其是在传统认为没有HBV感染的血清中也可检测到一定程度的HBV—DNA含量。结论：实时荧光定量PCR检测HBV—DNA是乙肝病毒在体内复制和传染的可靠指标，特别是在反映HBeAg阴性的乙型肝炎患者是否有病毒复制的诊断中有重要意义。     

高血脂、肝素对乙型肝炎病毒DNA实时荧光定量PCR测定干扰机制的探讨

目的探讨高血脂、肝素对乙型肝炎病毒基因实时荧光定量PCR(HBVDNA-FQ-PCR)测定的干扰机制。方法将己经确诊的乙肝大三阳志愿者的高脂血和非脂血、肝素抗凝血和未抗凝血用实时荧光定量PCR做HBVDNA定量测定并同时做定性测定,另外将同一份乙肝大三阳标本五种不同浓度肝素抗凝,另一份不抗凝,然后分别用HBVDNA-FQ-PCR和琼脂糖凝胶电泳-溴乙锭显色法做HBVDNA定量和定性测定。结果5份非脂血和相应的高脂血HBVDNA定量结果有非常显著性差异(P<0.01),定性结果两者没有差异全部为阳性(5/5)。5份用1 500 U/ml肝素抗凝血HBVDNA定量结果都为0,定性结果都为阴性,而相应未抗凝血定量结果分别为6.35E 8,5.21E 6,7.05E 8,2.98E 7,6.33E 6,定性结果肝素抗凝和未抗凝标本都为阳性(5/5)。五种不同浓度肝素抗凝标本的HBVDNA定量结果,当肝素浓度大于1 000 U/ml时定量结果为0,肝素浓度小于100 U/ml对HBVDNA-FQ-PCR测定结果影响不大,相应的对照HBVDNA拷贝数为7.32 8E,不同浓度肝素抗凝标本的HBVDNA定性结果,当肝素浓度大于500 U/ml为阴性,小于100 U/ml为阳性。结论高血脂对HBVDNA实时荧光定量PCR的干扰机制主要是血液中的低密度脂肪(乳糜微粒等)对荧光的屏蔽或吸收作用,肝素对HBVDNA实时荧光定量PCR的干扰机制是肝素对Taq酶的抑制作用。     

沉淀煮沸裂解法煮沸时间对乙型肝炎病毒DNA检测结果的影响

目的探讨沉淀煮沸裂解法中的煮沸时间对实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测乙型肝炎病毒DNA结果的影响,规范试验操作。方法采用沉淀煮沸裂解法提取乙型病毒性肝炎(以下简称乙型肝炎)DNA,煮沸时间为5、7、9、10、11、13、15min,实时荧光定量PCR技术检测乙型肝炎DNA,比较不同煮沸时间检测乙肝DNA的结果。结果煮沸时间在(10±5)min内检测乙肝DNA的结果比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论沉淀煮沸裂解法中的煮沸时间煮沸时间在一定范围内对乙型肝炎DNA检测结果无影响。     

乙型肝炎病毒前S1抗原与HBV—DNA相关性探讨及临床意义

乙型肝炎病毒（HBV）血清免疫标志物检查是判断乙型肝炎患病程及传染性的重要标志之一。HBV-DNA是HBV复制的最直接指标；PCR检测已用于临床，前S1抗原是HBV感染与复制的又一指标，由于其仅存在于具有传染性的完整的乙肝病毒颗粒上，既可作为HBV感染的早期诊断，又可作为疗效评价的方法，有望作为乙型肝炎新的检测手段和新的具有传染性的标志物。作采用ELISA法检测乙肝两对半与Pre-S1，用定量PCR检测HBV-DNA，并探讨它们之间的相关性，现报告如下。     

扩增曲线异常对荧光定量PCR检测乙肝病毒核酸的影响

乙型肝炎病毒（HBV）DNA准确定量对乙型肝炎病人的治疗监测和预后判断有重要的临床指导意义。实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）是目前测定HBVDNA较为简便、敏感和特异的方法。影响实时荧光PCR准确定量的因素很多．我们在对血清HBVDNA定量检测中发现个别标本的PCR扩增曲线荧光强度增加特别不明显且不规则（以下称“异常扩增曲线”），致检测结果明显偏低，对此我们进行了分析。     

荧光定量PCR方法检测乙肝病毒DNA实验条件的研究

乙肝病毒血清标志物 (ＨＢＶ -Ｍ)检测是目前诊断乙型肝炎最常用的指标 ,即俗称的“两对半”。主要反映人体对乙肝病毒 (ＨＢＶ)的免疫反应状态 ,由于不同血清标志模式反映不同的临床意义 ,非传染病专业的医师很难准确掌握。因此采用简单快捷的诊断指标对乙肝早期诊断、准确判断乙肝患者的带毒状态具有重要意义。定量检测ＨＢＶＤＮＡ是衡量乙肝传染性的最精确的指标 ,是确定ＨＢＶ感染不同复制状态的非常有价值的检测手段。荧光定量ＰＣＲ(ＦＱ -ＰＣＲ)克服了常规ＰＣＲ假阳性率高的缺点 ,实现对ＨＢＶＤＮＡ的定量检测 ,可为乙型肝炎提供…     

沉淀煮沸提取方法对血清HBV DNA荧光定量检测的影响

<正>乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)是反映乙型肝炎病毒复制最可靠的实验指标,目前检测HBV DNA较多采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术[1-2],FQ-PCR检测HBV-DNA准确度和重复性除扩增原因外,血清核酸提取也是重要影响因素[3]。现应用沉淀煮沸提取法,比较不同煮沸时间及不同浓度肝素抗凝剂对HBVDNA荧光定量检测结果的影响,报道     

荧光定量PCR法检测HBV DNA同血清标志物关系的探讨

目的　探讨荧光定量PCR法 (FQ PCR)检测HBVDNA同血清标志物的关系。方法　将FQ PCR法检测HBVDNA的标本用ELISA法重新测定HBV血清标志物前S1抗原 (PreS1 )及乙型肝炎病毒标志物。结果 1 86份HBVDNA阳性标本中 ,HBsAg阳性率 98.92 % ,抗 HBc阳性率 94 .0 9 % ,有 2例HBsAg阴性 ,其中 1例为抗 HBc单独阳性。PreS1阳性率为 6 1 .83% ,HBeAg阳性率为6 6 .6 7% ,后二者同时检出率 4 2 .4 7% ,联合检出率 86 .0 2 % ,PreS1和HBeAg阳性率无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ;HBVDNA阴性而HBsAg阳性标本 1 1 4例 ,抗 HBc阳性率为 96 .4 9% ,PreS1阳性率为 2 2 .81 % ,HBeAg阳性率为 5 .2 6 % ,后二者同时检出率 3.5 1 % ,PreS1和HBeAg阳性率差异非常显著 (P<0 .0 0 1 ) ;HBV低水平和高水平复制标本PreS1和HBeAg检出率无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;HBVDNA阳性标本中 ,对于PreS1和HBeAg而言 ,PreS1单独阳性者HBVDNA对数值为 6 .6 5 4± 2 .2 0 3(x±s) ,HBeAg单独阳性者为 6 .892± 1 .5 79,同时阳性者 6 .70 6± 1 .6 4 3,均阴者为6 .32 1± 1 .76 3,四组间无显著性差异。结论　血清PreS1和HBeAg与HBVDNA关系密切 ,可作为HBV复制的标志物 ,尤其二者联合检测效果更好 ,但以HBeAg特异性较高。二者存在状态与HBV复制程度关系不     

ELISA法和DNA荧光定量PCR法检测乙肝病毒的相关性研究

乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus，HBV）DNA定量检测对乙型肝炎的诊断、抗病毒疗效观察及预后判断均具有重要意义。随着荧光定量（Fluorescent Quantitative，FQ）PCR技术的发展，由于其灵敏、快速、极低的假阴、假阳性率，该技术在临床上已被广泛应用于检测HBV-DNA，而酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清中HBV免疫标志物（Hepatitis B Virus—Marker，HBV—M）仍旧是诊断乙型肝炎的常用方法。     

溶血对荧光定量PCR检测HBVDNA结果的影响

实时荧光定量聚合酶链反应(fluorescence quantitative polymerase chain reaction，FQ-PCR)技术融汇了PCR技术的核酸高效扩增，探针技术的高特异性，光谱技术的高敏感性和高精确定量的优点，直接探测PCR过程中荧光信号的变化以获得定量的结果。由于此方法具有简便、快速、敏感、特异、无PCR后处理步骤等特点，目前HBVDNA荧光定量已成为监测治疗效果的常规手段，应用越来越广泛。在制订HBVDNA标本留取标准时，许多医院都规定溶血标本为不合格标本。因为血红素及其代谢产物为DNA     

慢性乙肝患者HBVDNA与其他实验指标的关系

为了探讨慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒DNA(HBVDNA)血清水平及临床与病理的关系,应用定量聚合酶链反应(PCR)法对HBVDNA进行了定量检测,且对其与病理分级、肝功能和HBV标志物(HBVM)的相互关系进行了探讨.     

两种核酸提取法对不同程度溶血标本HBV-DNA检测结果的比较

目的探讨一步核酸提取法和两步核酸提取法对不同程度溶血标本乙型肝炎病毒(HBV)DNA检测结果影响的差异。方法收集22例临床随机患者全血标本,离心并于当天用一步和二步核酸提取法试剂检测HBV-DNA含量后,将全血标本放4℃冰箱保存,每隔2~3 d取出分别用两种试剂检测HBV-DNA的含量。结果 22例标本随着存放时间和溶血程度的增加,其HBV-DNA含量有下降趋势;一步法在标本存放3 d后结果显著低于首次检测结果(t3d=3.981,P<0.01);二步法在标本存放19 d后结果显著低于首次检测结果(t3d=3.642,P<0.01);标本于4℃存放3天后一步法HBV-DNA的检测结果显著低于二步法(t3d=4.91,P<0.001)。结论溶血标本对二步核酸提取法试剂检测HBV-DNA含量的影响作用远低于一步法,对于临床由于特殊原因无法及时获得合格血标本时,可考虑使用二步核酸提取法试剂检测HBV-DNA的含量。     

不同程度溶血对荧光定量PCR检测HBV DNA结果的影响

采用FQ-PCR的方法测定患者血清中HBV DNA已广泛应用于HBV感染者的诊断、治疗方案的选择和疗效判定,目前临床实验室开展的质量控制大多着重于实验过程中,实验前的质量控制常被忽视。溶血是实验前质量控制的重要影响因素之一．本文着重探讨标本轻度溶血（Hb浓度为0．8～3．0g／L）、重度溶血（Hb浓度大于5．0g／L）对FQ-PCR测定HBV DNA结果的影响。     

不同程度溶血对荧光定量PCR检测HBV DNA结果的影响

采用FQ-PCR的方法测定患者血清中HBV DNA已广泛应用于HBV感染者的诊断、治疗方案的选择和疗效判定,目前临床实验室开展的质量控制大多着重于实验过程中,实验前的质量控制常被忽视。溶血是实验前质量控制的重要影响因素之一．本文着重探讨标本轻度溶血（Hb浓度为0．8～3．0g／L）、重度溶血（Hb浓度大于5．0g／L）对FQ-PCR测定HBV DNA结果的影响。     

乙肝病毒前S1抗原和e抗原联合检测同HBV复制关系的探讨

乙型肝炎病毒(HBV)前S1蛋白(PreS1)由S基因的前S1区编码,PreS1含有数个能影响HBsAg分泌的调节序列,其特定氨基酸序列可参与HBV感染靶细胞的过程[1].而机体对PreS1免疫应答可为清除肝细胞内HBV及阻止病毒侵入肝细胞提供重要的防御作用.本文以近年来发展起来的荧光定量PCR法(FQ-PCR)定量测定HBV DNA,以此作为病毒复制和传染的直接依据,来探讨HBV感染者PreS1作为病毒复制标志物的意义.     

三种HBV DNA提取方法对荧光定量PCR检测结果影响的比较

目的 研究3种核酸提取方法对黄疸、溶血和脂血标本HBV DNA荧光定量结果的影响,为进一步提高临床检验质最和改进检测技术提供理论依据.方法 采用目前临床常用的多聚糖病毒沉淀浓缩法(PEG法)、碱液直接裂解和微量核酸释放剂(Micro-Nucleic-Releaser,MNR)等3种核酸提取方法,对含有HBV的黄疸、溶血和脂血标本进行荧光定量PCR检测,研究不同标本对荧光PCR定量结果和扩增效率的影响.选择酚一氯仿提纯法作为核酸提取对照方法.结果 黄疸、溶血和脂血标本,对3种不同核酸提取方法的荧光PCR定量结果和扩增效率都产生不同程度的影响,其中完全溶血的标本对PCR扩增效率的影响最大,如定量值为4×103拷贝/ml的低拷贝完全溶血标本,MNR法测定结果为2.21×103拷贝/ml,PEG法为1.02×103拷贝/ml,碱性直接裂解法的定量值为阴性,临床自然溶血较重的标本对荧光定量检测影响较小,脂血和黄疸标本对荧光定量PCR扩增效率有明显抑制作用,但对实际定最值无明显影响;其中,MNR法在不同标本的定量重复性和荧光PCR扩增效率最好,碱液直接裂解法较差.酚.氯仿提纯法虽然获得较高的扩增效率,但存在大约有1个数量级的核酸丢失.结论 基于MNR核酸提取方法的荧光定量PCR检测,对不同的临床标本均可获得较好的扩增效率、敏感性和重复性,操作简便、快速且无核酸丢失和污染,适合临床检验应用.     

孕妇血清前S1抗原与HBV-DNA检测结果分析

乙型肝炎病毒（HBV）是一种嗜肝细胞病毒,前S1抗原位于病毒颗粒表面,在病毒感染、装配、复制和刺激机体产生免疫反应方面具有十分重要的意义。目前,临床应用于诊断乙肝有多项标志物,本文通过对11529例孕产妇进行乙肝两对半和S1抗原以及对7097例乙肝两对半中一项或以上指标阳性的孕产妇进行HBV—DNA的检测和结果分析,尝试找到最有诊断价值且简单易行的乙肝母婴传播的标志物,以降低婴儿乙肝感染率。     

实时荧光定量PCR对乙肝DNA检测的影响因素

乙型病毒性肝炎(下称乙肝)是最常见的感染性疾病之一[1-2],是由乙肝病毒(HBV)引起的、以肝脏炎性病变为主并可引起多器官损害的一种传染病,是中国当前流行最为广泛、危害性最严重的一种传染病.乙肝血清检测项目有:乙肝三系(又称乙肝两对半);前S1、S2抗原/抗体;HBV-DNA定量测试等方法.