HGF对高糖诱导肾间质成纤维细胞增殖的影响

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)对高糖诱导肾间质成纤维细胞损伤的修复作用.方法将人肾脏间质成纤维细胞培养于不同浓度的葡萄糖中,其中25 mmol/L葡萄糖组培养液中加入不同浓度的rhHGF,分别于不同时间段收集细胞,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期.结果高糖作用早期细胞增殖旺盛,随着高糖的持续刺激,细胞增殖发生停滞,同时细胞出现肥大.外源性加入HGF后,对高糖造成的细胞损伤具有修复作用.结论高糖作用下的肾间质成纤维细胞早期出现自限性增殖后细胞增殖停滞,出现肥大.HGF可以通过促进细胞增殖,抑制由于高糖诱导的细胞肥大.     

高糖环境HGF和TGF-β表达对肾成纤维细胞周期的影响

目的：探讨HGF和TGF－β对高糖作用下的肾间质成纤维细胞周期的影响，以及作用机理。方法：取肾肿瘤切除的政党极肾脏组织，贴壁法培养肾间质成纤维细胞。细胞分别培养于不同的葡萄糖培养液中，另设相同渗透压的甘露醇组。采用流式细胞仪检测细胞 ,MTT产殖，RT－PCR方法对细胞表达HGF和TGF－β进行检测。结果：高浓度葡萄糖作用早期，细胞增殖旺盛，然而随着高糖的持续刺激，细胞增殖发生停滞，同时诱导细胞发生肥大反应。同时观察到高糖作用的早期HGF表达升高，随着作用的持续时间延长，其表达量下降，而GF－β出现持续的高表达，同时外源加入HGF可以抑制TGF－β的表达。结论：高糖作用下的肾间质成纤维细胞早期出现自限性增殖后细胞增殖停滞，出现肥大。这与HGF和TGF－β的表达差异相关。     

高糖环境HGF和TGF-β表达对肾成纤维细胞周期的影响

目的探讨HGF和TGF-β对高糖作用下的肾间质成纤维细胞周期的影响,以及作用机理.方法取肾肿瘤切除的正常极肾脏组织,贴壁法培养肾间质成纤维细胞.细胞分别培养于不同的葡萄糖培养液中,另设相同渗透压的甘露醇组.采用流式细胞仪检测细胞周期,MTT方法检测细胞增殖,RT-PCR方法对细胞表达HGF和TGF-β进行检测.结果高浓度葡萄糖作用早期,细胞增殖旺盛,然而随着高糖的持续刺激,细胞增殖发生停滞,同时诱导细胞发生肥大反应.同时观察到高糖作用的早期HGF表达升高,随着作用的持续时间延长,其表达量下降,而TGF-β出现持续的高表达,同时外源加入HGF可以抑制TGF-β的表达.结论高糖作用下的肾间质成纤维细胞早期出现自限性增殖后细胞增殖停滞,出现肥大.这与HGF和TGF-β的表达差异相关.     

糖对人肾成纤维细胞增殖及纤维连结蛋白分泌的影响

目的：肾间质纤维化以间质成纤维细胞增生及细胞外基质大量积聚为特征。本研究初步探讨糖尿病肾病时其间质纤维化机理。方法：应用人肾间质成纤维细胞体外培养，观察不同浓度的葡萄糖对其增殖和纤维连接蛋白（ＦＮ）分泌的影响。结果：高糖可抑制成纤维细胞增殖，但可促进其分泌ＦＮ。结论：高糖对间质成纤维细胞具有直接的作用，而参与间质纤维化     

高糖及己酮可可碱对肾间质成纤维细胞作用的研究

目的：探讨糖尿病肾病肾间质病变的机理以及己酮可可碱对肾间质成纤维细胞的作用。方法：为研究高糖对肾间质成纤维细胞的作用,应用MTT比色法检测细胞的增殖,应用流式细胞仪检测细胞周期变化,并应用ELISA法检测细胞上清液中的纤维连接蛋白。同时,本研究也观察了己酮可可碱（Pentoxifylline),一种非选择性的磷酸二酯酶抑制剂对肾间质成纤维细胞的作用。结果：高糖和己酮可可碱均可抑制细胞增殖,影响细胞周期,但高糖可促进成纤维细胞分泌细胞外基质纤维连接蛋白,而己酮可可碱可减少其分泌,且可抑制高糖对成纤维细胞的作用。结论：高糖可能通过促进肾间质成纤维细胞分泌细胞外基质在糖尿病肾病的间质病变中起作用。而己酮可可碱抑制细胞增殖及细胞外基质的分泌将有利于肾间质病变的防治。     

来氟米特抑制结缔组织生长因子诱导的肾间质成纤维细胞增殖和胶原合成的研究

目的探讨来氟米特（LEF）对人肾间质成纤维细胞增殖和胶原合成的影响。方法在体外培养的人肾间质成纤维细胞中，加入不同浓度来氟米特活性代谢产物A771726和重组人结缔组织生长因子（rhCTGF），MTT法测定两者单独及同时干预下细胞增殖情况；ELISA法测定细胞合成Ⅰ、Ⅳ型胶原的含量。结果经不同浓度的rhCTGF刺激，成纤维细胞增殖和细胞合呈Ⅰ型、Ⅳ型胶原均成剂量依赖性增加（P〈0．01）：而来氟米特作用细胞后，细胞增殖及胶原合成均呈剂量依赖性减少（P〈0．01）；在来氟米特与结缔组织生长因子（CTGF）共同作用下，细胞的增殖和胶原的合成较单用同剂量的CTGF时减少（P〈0.05）。结论rhCTGF能够促进人肾间质成纤维细胞的增殖及Ⅰ、Ⅳ型胶原合成；来氟米特则抑制细胞的增殖及细胞合成Ⅰ、Ⅳ型胶原；来氟米特对rhCTGF诱导的胶原合成增加有一定的拮抗作用。     

枸杞多糖对高糖诱导衰老小鼠角膜上皮细胞增殖的影响

目的：观察不同剂量枸杞多糖(LBP)对高糖诱导的衰老小鼠角膜上皮(MCE)细胞增殖的影响。方法：采用含有不同浓度葡萄糖(5.5 mmol/L、12.5 mmol/L、25 mmol/L、50 mmol/L、100 mmol/L、200 mmol/L)的杜氏改良Eagle培养基(DMEM)孵育MCE细胞48 h,用MTT检测不同葡萄糖浓度对MCE细胞增殖的影响。建立高糖损伤模型，用不同浓度(50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml和400μg/ml)的LBP处理葡萄糖损伤的MCE细胞48 h,观察MCE细胞增殖情况。结果：在用25 mmol/L的葡萄糖浓度处理MCE细胞，细胞增殖最强(P<0.01),葡萄糖浓度为200 mmol/L时，MCE细胞增殖力最低(P<0.01)。在所建立的高糖损伤模型(葡萄糖200 mmol/L)中LBP 200μg/ml促进MCE细胞增殖作用最强(P<0.05)。结论：一定浓度的葡萄糖可抑制MCE细胞增殖，LBP可保护高糖损伤的MCE细胞，促进其增殖。     

SIS镁合金可吸收胆管支架治疗恶性梗阻性黄疸疗效分析

【摘要】目的 探讨骨化三醇对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)诱导的大鼠心肌间质成纤维细胞增殖及其机制。方法 体外培养大鼠心肌间质成纤维细胞,分别以终浓度为10.6mol/L AngII和（或）终浓度为10.6mol/L、10.7mol/L、10.8 mol/L的骨化三醇进行干扰（骨化三醇组），对照组则在心肌间质成纤维细胞培养液中不加入干扰因素。WST1法检测心肌间质成纤维细胞数目；流式细胞仪检测细胞周期。结果 骨化三醇能抑制基础和AngII刺激状态下的大鼠心肌间质成纤维细胞增殖，经不同浓度的骨化三醇（10.6mol/L、10.7mol/L、10.8mol/L）作用48小时后，细胞G1期细胞较AngII组明显增加，分别为22.%、13%、11%（P均<0.05），并在10.6 mol/L、10.7mol/L、10.8 mol/L范围内呈浓度依赖性显著降低。结论 骨化三醇通过使大鼠心肌间质成纤维细胞停滞在G1期而达到抑制细胞的活化及增殖具有抗心肌间质成纤维细胞转分化的潜在作用。     

高糖环境中肾小管上皮细胞c-met的表达及意义

目的研究高糖作用下人近端肾小管上皮细胞c-met的表达，探讨HGF／c-met系统在糖尿病肾病中的作用。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞。细胞分别培养于不同的条件培养基中，采用MTT方法检测细胞增殖，RT-PCR方法分析c-met mRNA水平。结果在不同的条件培养基中人近端肾小管上皮细胞在12h和24h细胞增殖无明显差异（P〉0、05）。而在96h细胞增殖出现明显的变化，在HGF组细胞增殖旺盛（P〈0、05）。此外，12h在不同的条件培养基中c-met mRNA表达无差别（P〉0．05），而在24h和96hHGF组c-met mRNA出现持续高表达（P〈0．01）。结论外源性加入HGF能抑制高糖诱导的细胞凋亡，促进高糖环境中的近端肾小管上皮细胞的增殖，并能诱导其受体c-met表达。说明HGF／c-met系统局部上调在糖尿病肾脏损伤修复过程中有重要作用。     

高浓度葡萄糖对人肾间质成纤维细胞增殖及PAI-1基因表达的影响

目的探讨高糖环境下成纤维细胞的增殖情况以及I型纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)在介导肾小管-间质损伤过程中的作用. 方法采用MTT方法分别检测正常糖浓度和高糖浓度下细胞的增殖,RT-PCR方法观察PAI-1 mRNA的表达.同时将细胞培养于25mmol/L甘露醇中,观察高糖中渗透压所起的作用. 结果培养24h后,高糖以剂量依赖形式抑制细胞增殖.与正常对照组相比,高糖可以增加PAI-1的表达.甘露醇也抑制细胞增殖,同时对PAI-1的表达产生作用. 结论高糖可抑制成纤维细胞增殖,刺激PAI-1的表达.PAI-1在糖尿病肾病肾小管-间质纤维化过程中,可能具有主要的介导作用.     

高糖加高胰岛素对心肌成纤维细胞增殖的影响

目的 利用体外培养的乳鼠心肌成纤维细胞,观察高浓度葡萄糖加高浓度胰岛素对心肌成纤维细胞增殖的影响,并探讨其可能作用机制。方法 以培养的乳鼠心肌成纤维细胞为模型分组给药后,利用结晶紫染色法观察细胞的增殖情况;利用[^3H]thymidine标记法测定细胞DNA的合成;利用流式细胞仪分析细胞周期。结果与正常对照组相比,高糖、高胰岛素、高糖加高胰岛素组分别造成了心肌成纤维细胞数目、DNA合成及S＋G2＋M期细胞的百分比增加,（P〈0．01）,而高糖加高胰岛素组的各项指标值显著高于其它各组,（P〈0．01）。结论 高糖加高胰岛素具有协同促进心肌成纤维细胞增殖的作用。     

Expression of c-met Stimulated by High Glucose in Human Renal Tubular Epithelial Cells and Its Implication

The expression of c-met stimulated by high glucose in human renal tubular epithelial cells and the role of HGF/c-met system in diabetic nephropathy were examined. The proximal tubular epithelial cells were cultured in vitro under different conditions. MTT was used for the detection of cellular proliferation and RT-PCR was employed for measurement of c-met mRNA level. Our results showed that under different conditions, there were no significant differences in the proliferation of proximal tubular epithelial cells 12 h and 24 h after the culuture (P>0.05). The proliferation of proximal tubular epithelial cells showed a significant change 96 h after the culture and the cellular proliferation induced by hepatocyte growth factor (HGF) was very active (P<0.05). Moreover, no significant difference in the expression of c-met mRNA was found 12 h after the culture under dif- ferent conditions (P>0.05), while 24 and 96 h after the culture, a persistent and significantly higher expression of c-met mRNA was found in HGF-induced proliferation. It is concluded that addition of exogenous HGF could inhibit the apoptosis induced by high-level glucose, promote the proliferation of proximal tubular epithelial cells, and induce the expression of c-met. Our study suggests that local up-regulation of HGF/c-met system plays an important role in the repair of renal damage in diabetic nephropathy.     

高浓度葡萄糖对人肾间质成纤维细胞增殖及PAI-1基因表达的影响

目的：探讨高糖环境下成纤维细胞的增殖情况以及I型纤溶酶原激活物抑制物（PAI－1）在介导肾小管一间质损伤过程中的作用。方法：采用MTT方法分别检测正常糖浓度和高糖浓度下细胞的增殖，RT－PCR方法观察PAI－1mRNA的表达。同时将细胞培养于25mmol/L甘露醇中，观察高糖中渗透压所起的作用。结果：培养24h后，高糖以剂量依赖形式抑制细胞增殖，与正常对照组相比，高糖可以增加PAI－1的表达，甘露醇也抑制细胞增殖，同时对PAI－1的表达产生作用。结论：高糖可抑制成纤维细胞增殖，刺激PAI－1的表达。PAI－1在糖尿病肾病肾小管一间质纤维化过程中，可能具有主要的介导作用。     

MCI-186对高糖环境中受损人真皮微血管内皮细胞的保护作用

目的 观察高糖环境对人真皮微血管内皮细胞(HDMEC)功能的影响，探讨清除自由基对高糖所致HDMEC损伤的保护作用。方法 建立高糖环境下HDMEC培养的体外模型，并加入自由基清除剂MCI—186予以干扰，同时检测细胞的增殖、形态、黏附等生物学行为。结果 高糖环境可影响内皮细胞的增殖，改变其特异性形态，增加H2O2诱导的细胞毒性。MCI-186可缓解高糖所致的内皮细胞增殖受抑，降低内皮细胞表面黏附性，下调高糖诱导的细胞凋亡。结论 控制血糖的同时清除有害自由基，可能对糖尿病合并难愈创面的治疗起到积极作用。     

Wnt／β-连环蛋白在高糖诱导心肌成纤维细胞增殖中的作用

目的：探讨Wnt／β-连环蛋白（Wnt／[β-catenin）在高糖诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞CFs增殖中的作用。方法：分离新生乳鼠CFs,构建高糖（25mmol／L）诱导CFs增殖细胞模型。采用Wnt／β-catenin抑制剂XAV939以及激动剂SKL2001调控Wnt／8-catenin信号通路。MTr法和细胞计数检测心肌细胞增殖,Westernblot法检测大鼠CFs中β-catenin的表达,实时荧光定量PCR（qPCR）检测增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果：25mmol／L高糖刺激48h后CFs的细胞增殖显著增加,β-catenin表达显著升高（P〈0．01）,XAV939能抑制CFs增殖（P〈0．01）,降低高糖诱导β-catenin及PCNA的表达（P〈0．01）,SKL2001能对抗XAV939抑制高糖诱导CFs增殖的作用。结论：高糖诱导的CFs增殖可能与激活Wnt／β-catenin途径有关。     

心肌成纤维细胞Wnt信号通路在高糖环境下的调控变化

目的:观察乳鼠心肌成纤维细胞在高浓度葡萄糖作用下胶原蛋白分泌和细胞增殖及Wnt信号通路调控的变化。方法:基于高糖刺激诱导心肌成纤维细胞体外增殖的培养方法,CCK8法检测细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞的增殖周期;ELISA法观察细胞TGF-β1蛋白及I型、Ⅲ型胶原的分泌能力;western blot法检测蛋白β-catenin,GSK-3β,P-GSK-3β的表达水平;观察心肌成纤维细胞在高糖环境中Wnt信号通路传导的变化。结果:高浓度葡萄糖环境可以引起细胞的增殖(P0.01);促进TGF-β1的合成(P0.01);提高细胞I型、Ⅲ型胶原分泌的能力(P0.01);在分子水平上可以增强β-catenin的表达(P0.01),抑制P-GSK-3β的表达(P0.05)。结论:心肌成纤维细胞在高糖环境中增殖明显,心肌成纤维细胞TGF-β1和胶原的分泌会增加,引发Wnt信号通路的异常表达。研究其作用机制,对糖尿病心肌纤维化的防治及研究具有重大意义。     

针对结缔组织生长因子的siRNA对高糖诱导人肾小管上皮细胞肥大的影响

目的 观测人肾小管上皮细胞转染针对结缔组织生长因子(CTGF)的siRNA后对高糖诱导细胞肥大的影响.方法 细胞分6组培养:正常对照组(培养基含D-葡萄糖1 g/L),等渗对照组(培养基含D-葡萄糖1 g,L、甘露醇3.5 g/L),高糖组(培养基含D-葡萄糖4.5 g/L),高糖+空白对照组(细胞转染空质粒后培养于高糖培养基中),高糖+阴性对照组(细胞转染含无关序列的质粒后培养于高糖培养基中),高糖+干扰组(细胞转染针对CTGF的siRNA表达质粒后培养于高糖培养基中).收集各组培养至24、48、96 h的细胞,以实时PCR检测CTGF mRNA水平;Western blotting检测CTGF蛋白水平;MTT法测定细胞增殖活力;流式细胞仪测定细胞周期分布;考马氏亮蓝法测定细胞总蛋白含量.结果 高糖刺激可上调HK-2细胞的CTGFmRNA及蛋白水平,使停留于G_1期的细胞比例升高,增殖活力受抑制,细胞肥大指标胞内总蛋白含量增加:而通过特异性siRNA抑制CTGF mRNA表达后,细胞的CTGF蛋白表达随时间延长进行性降低.细胞增殖活力增强,更多的细胞由G_1期进入S期,细胞内总蛋白含量降低.结论 证实了CTGF是高糖诱导HK-2细胞肥大的重要介质.针对CTGF的siRNA能明显改善高糖诱导的肾小管上皮细胞肥大,为进一步寻找DN防治的靶点提供了新的实验依据.

Abstract：

Objective To observe the effect of transfection with small interfering RNA (siRNA) targeting connective tissue growth factor (CTGF) on human tubular epithelial hypertrophy induced by high glucose. Methods HK-2 cells were cultured in DMEM/F12 medium containing 1 g/L glucose (normal control group), 4.5 g/L glucose (high glucose group), or 1 g/L glucose + 3.5 g/L mannitol (iso-osmolar control group). The cells were transfected with pGenesil-1, pGenesil/neg, or pGenesil/siRNA-CTGF and then cultured in DMEM/F12 medium containing 4.5 g/L glucose as the high glucose + blank control group, high glucose +negative control group and high glucose+ interference group, respectively. After cell culture for 24, 48 and 96 h, the cells were collected to detect the mRNA and protein levels of CTGF by real-time PCR and Western blotting, respectively. The proliferative activities of the cells were evaluated with MTT assay, and the total cellular protein contents were determined with Bradford method. Flow cytometry was employed to analyzed the cell cycle changes. Results High-glucose significantly up-regulated the CTGF mRNA and protein levels in HK-2 cells. The cell proliferation was inhibited after high-glucose exposure with increased cell percentage in G, phase and total cellular protein content suggesting cellular hypertrophy. Transfection with siRNA targeting CTGF significantly inhibited high glucose-induced up-regulation of CTGF mRNA and protein and promoted the cell proliferation, resulting also increased cells in S phase and lowered total cellular protein contents. Conclusion CTGF is an important mediator of high glucose-induced tubular epithelial hypertrophy, and transfection with siRNA targeting CTGF can alleviate the hypertrophy, suggesting the potential value of CTGF-targeted treatment in the management of diabetic nephropathy.     

肝细胞生长因子促血管内皮细胞增殖及迁移的研究

目的:探讨重组人肝细胞生长因子(rhHGF)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖和迁移的影响及其促血管生成作用.方法:从脐静脉体外分离培养HUVEC,采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)观察rhHGF对HUVEC的增殖作用,倒置显微镜观察HUVEC的迁移,透射电镜观察超微结构的改变及流式细胞仪检测细胞周期的改变.结果:(1)rhHGF对培养的HU-VEC有显著的促增殖和迁移作用,且成浓度和时间依赖性.(2)rhHGF促使HUVEC细胞超微结构的改变,线粒体和粗面内质网增多,常染色质增多(3)细胞周期分布改变:S期、G2/M期细胞增多.结论:rhHGF能显著促进HUVEC的增殖和迁移,提示其可能具有促血管生成作用.     

SGLT1介导高糖诱导的心脏成纤维细胞激活

目的：验证高糖是否可以促进心脏成纤维细胞激活,探索钠-葡萄糖协同转运蛋白1（SGLT1）在其中的作用。方法：取4～7代心脏成纤维细胞用于实验。首先用不同浓度的葡萄糖干预细胞,光镜下观察细胞形态,MTT、EdU法测各组细胞的增殖能力,划痕实验、Transwell实验测细胞迁移能力,qRT-PCR检测细胞中SMα、Tcf21的表达情况,细胞免疫荧光法、qRT-PCR、Western blot检测细胞中SGLT1的表达情况。然后用si-SGLT1预先敲除细胞中SGLT1的表达,再次检测各组细胞中的上述指标,探索SGLT1在高糖诱导的心脏成纤维细胞激活中的作用。结果：相比于对照组,高糖干预组细胞形态变圆,细胞迁移能力和增殖能力增加,细胞中SMα、Tcf21和SGLT1的表达增加（P＜0.05）。转染si-SGLT1后细胞中SGLT1表达降低（P＜0.05）,细胞迁移能力和增殖能力降低,细胞中SMα和Tcf21的表达减少（P＜0.05）。结论：高糖通过上调SGLT1促进心脏成纤维细胞激活。     

葡萄糖对人血管内皮细胞周期和凋亡的影响

目的：观察高浓度葡萄糖对人血管内皮细胞周期和凋亡的影响。方法：用不同浓度葡萄糖（Glu）作用体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECS）24h、48h、72h，绘制细胞增殖曲线，用流式细胞仪分析细胞周期和凋亡的变化。结果：高浓度Glu(20mmol/L、40mmol/L)对内皮细胞的生长增殖有明显抑制作用，使G0/G1期细胞比例增加，S和G2/M期细胞比例下降，同时诱导了内皮细胞的凋亡，并随作用浓度增加、时间延长更为明显。结论：高糖使培养的HUVECS凋亡加速，同时抑制细胞增殖。细胞可能被阻滞在G1/S转变期。