高糖环境HGF和TGF-β表达对肾成纤维细胞周期的影响

目的：探讨HGF和TGF－β对高糖作用下的肾间质成纤维细胞周期的影响，以及作用机理。方法：取肾肿瘤切除的政党极肾脏组织，贴壁法培养肾间质成纤维细胞。细胞分别培养于不同的葡萄糖培养液中，另设相同渗透压的甘露醇组。采用流式细胞仪检测细胞 ,MTT产殖，RT－PCR方法对细胞表达HGF和TGF－β进行检测。结果：高浓度葡萄糖作用早期，细胞增殖旺盛，然而随着高糖的持续刺激，细胞增殖发生停滞，同时诱导细胞发生肥大反应。同时观察到高糖作用的早期HGF表达升高，随着作用的持续时间延长，其表达量下降，而GF－β出现持续的高表达，同时外源加入HGF可以抑制TGF－β的表达。结论：高糖作用下的肾间质成纤维细胞早期出现自限性增殖后细胞增殖停滞，出现肥大。这与HGF和TGF－β的表达差异相关。     

HGF对高糖诱导肾间质成纤维细胞增殖的影响

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)对高糖诱导肾间质成纤维细胞损伤的修复作用.方法将人肾脏间质成纤维细胞培养于不同浓度的葡萄糖中,其中25 mmol/L葡萄糖组培养液中加入不同浓度的rhHGF,分别于不同时间段收集细胞,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期.结果高糖作用早期细胞增殖旺盛,随着高糖的持续刺激,细胞增殖发生停滞,同时细胞出现肥大.外源性加入HGF后,对高糖造成的细胞损伤具有修复作用.结论高糖作用下的肾间质成纤维细胞早期出现自限性增殖后细胞增殖停滞,出现肥大.HGF可以通过促进细胞增殖,抑制由于高糖诱导的细胞肥大.     

高糖及己酮可可碱对肾间质成纤维细胞作用的研究

目的：探讨糖尿病肾病肾间质病变的机理以及己酮可可碱对肾间质成纤维细胞的作用。方法：为研究高糖对肾间质成纤维细胞的作用,应用MTT比色法检测细胞的增殖,应用流式细胞仪检测细胞周期变化,并应用ELISA法检测细胞上清液中的纤维连接蛋白。同时,本研究也观察了己酮可可碱（Pentoxifylline),一种非选择性的磷酸二酯酶抑制剂对肾间质成纤维细胞的作用。结果：高糖和己酮可可碱均可抑制细胞增殖,影响细胞周期,但高糖可促进成纤维细胞分泌细胞外基质纤维连接蛋白,而己酮可可碱可减少其分泌,且可抑制高糖对成纤维细胞的作用。结论：高糖可能通过促进肾间质成纤维细胞分泌细胞外基质在糖尿病肾病的间质病变中起作用。而己酮可可碱抑制细胞增殖及细胞外基质的分泌将有利于肾间质病变的防治。     

地塞米松对肾间质成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的 探讨糖皮质激素在肾脏病治疗中可能的作用机理。方法 采用ＭＴＴ比色法和Ｌ－＾３Ｈ－脯氨酸掺入法,观察地塞米松对体外培养的肾间质成纤维细胞增殖及胶原合成的影响。结果 一定浓度范围内地地塞米松抑制成纤维细胞的胶原合成,但未见其对细胞增殖有影响。结论 糖皮质激素可作用于肾间质成纤维细胞,抑制胶原的合成,从而可延缓肾间质纤维化的进程。     

黄芪对人肾间质成纤维细胞增殖和转化生长因子-β1表达的影响

目的：探讨黄芪对肾间质纤维化改善的作用机制。方法：体外培养人肾间质成纤维细胞（KFB），传至3代后分为3组：对照组（常规培养），血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）培养组（在培养液中分别加入10^-8mol／L、10^-7mol／L和10^-6mol／L的AngⅡ），黄芪注射液干预组（分别于培养液中加入10^-6mol／L的AngⅡ和10mg／L、20mg／L和40mg／L黄芪注射液）。作用48h后，各组用MTT比色法测定细胞增殖情况，用ELISA法测定细胞培养上清液中TGF-β1的水平。结果：AngⅡ可促进KFB增殖，刺激TGF-β1的分泌，且呈剂量依赖性（r分别为0.612和0.723，P〈0.05）；黄芪注射液可抑制AngⅡ的上述作用，且呈剂量依赖性（r分别为-0．561和-0．689，P〈0．05）。结论：黄芪可以通过抑制成纤维细胞增殖和TGF-β1的分泌，延缓肾间质纤维化进展。     

高糖加高胰岛素对心肌成纤维细胞增殖的影响

目的 利用体外培养的乳鼠心肌成纤维细胞,观察高浓度葡萄糖加高浓度胰岛素对心肌成纤维细胞增殖的影响,并探讨其可能作用机制。方法 以培养的乳鼠心肌成纤维细胞为模型分组给药后,利用结晶紫染色法观察细胞的增殖情况;利用[^3H]thymidine标记法测定细胞DNA的合成;利用流式细胞仪分析细胞周期。结果与正常对照组相比,高糖、高胰岛素、高糖加高胰岛素组分别造成了心肌成纤维细胞数目、DNA合成及S＋G2＋M期细胞的百分比增加,（P〈0．01）,而高糖加高胰岛素组的各项指标值显著高于其它各组,（P〈0．01）。结论 高糖加高胰岛素具有协同促进心肌成纤维细胞增殖的作用。     

高浓度葡萄糖对人肾间质成纤维细胞增殖及PAI-1基因表达的影响

目的：探讨高糖环境下成纤维细胞的增殖情况以及I型纤溶酶原激活物抑制物（PAI－1）在介导肾小管一间质损伤过程中的作用。方法：采用MTT方法分别检测正常糖浓度和高糖浓度下细胞的增殖，RT－PCR方法观察PAI－1mRNA的表达。同时将细胞培养于25mmol/L甘露醇中，观察高糖中渗透压所起的作用。结果：培养24h后，高糖以剂量依赖形式抑制细胞增殖，与正常对照组相比，高糖可以增加PAI－1的表达，甘露醇也抑制细胞增殖，同时对PAI－1的表达产生作用。结论：高糖可抑制成纤维细胞增殖，刺激PAI－1的表达。PAI－1在糖尿病肾病肾小管一间质纤维化过程中，可能具有主要的介导作用。     

高糖通过上调Axl受体表达促进心肌成纤维细胞增殖

目的探讨不同浓度糖在心肌成纤维细胞增殖中的作用及Axl酪氨酸激酶受体在血糖调控心肌成纤维细胞增殖中的作用。方法分别用不同浓度糖孵育乳鼠心肌成纤维细胞,48h后分别检测细胞增殖、细胞周期以及Axl mRNA的表达量。结果 (1)高糖组心肌成纤维细胞增殖显著高于正常糖组[OD490:正常糖组(5mmol/L)0.358±0.023;高糖组(25mmol/L)0.446±0.036;P<0.01]。(2)高糖显著促进Axl表达上调(Ct值:正常糖组28.996±0.579;高糖组27.253±0.548;相对表达量:1∶2.63;P<0.05)。(3)高糖显著促进心肌成纤维细胞进入增殖周期(正常糖组G1%73.89±5.52;G2+S+M%26.11±5.52;高糖组G1%63.22±6.52;G2+S+M%36.78±6.52;P<0.05)。结论高糖能够通过上调Axl受体表达促进离体培养乳鼠心肌成纤维细胞增殖,Axl受体在糖尿病性心肌病变中有可能扮演重要作用。     

肌肽对高糖环境下心肌成纤维细胞增殖的影响及机制

目的 探讨肌肽(carnosine)对高糖诱导的大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖的影响及作用机制.方法 以CFs为研究对象,采用WST-1法观察肌肽抑制高糖诱导CFs的增殖;乳酸脱氢酶(LDH)法检测肌肽对细胞膜的毒性作用;Western blot法观察细胞周期蛋白P21及MAPK通路相关蛋白P38、P-p38的表达水平.结果 肌肽显著抑制了高糖诱导的CFs增殖,在5～30 mmol/L范围内呈一定的浓度依赖效应,且与p38 MAPK信号通路相关.结论 肌肽可通过P38MAPK信号通路抑制高糖诱导的CFs增殖.     

来氟米特抑制结缔组织生长因子诱导的肾间质成纤维细胞增殖和胶原合成的研究

目的探讨来氟米特（LEF）对人肾间质成纤维细胞增殖和胶原合成的影响。方法在体外培养的人肾间质成纤维细胞中，加入不同浓度来氟米特活性代谢产物A771726和重组人结缔组织生长因子（rhCTGF），MTT法测定两者单独及同时干预下细胞增殖情况；ELISA法测定细胞合成Ⅰ、Ⅳ型胶原的含量。结果经不同浓度的rhCTGF刺激，成纤维细胞增殖和细胞合呈Ⅰ型、Ⅳ型胶原均成剂量依赖性增加（P〈0．01）：而来氟米特作用细胞后，细胞增殖及胶原合成均呈剂量依赖性减少（P〈0．01）；在来氟米特与结缔组织生长因子（CTGF）共同作用下，细胞的增殖和胶原的合成较单用同剂量的CTGF时减少（P〈0.05）。结论rhCTGF能够促进人肾间质成纤维细胞的增殖及Ⅰ、Ⅳ型胶原合成；来氟米特则抑制细胞的增殖及细胞合成Ⅰ、Ⅳ型胶原；来氟米特对rhCTGF诱导的胶原合成增加有一定的拮抗作用。     

肝细胞生长因子对高糖及结缔组织生长因子培养的肾小管上皮细胞纤维化的影响

目的：探讨肝细胞生长因子（HGF）对高糖及结缔组织生长因子（CTGF）诱导肾小管上皮细胞（HKC）纤维化的影响.方法：体外培养HKC,分别在高糖及CTGF环境下加入不同浓度人重组肝细胞生长因子（rhHGF）,以RT-PCR检测转化生长因子β1（TGF-β1）、CTGF、以及纤维化指标Ⅳ型胶原（COL4A1）、纤连蛋白（FN）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）等的基因表达.结果：高糖及CTGF刺激下,细胞因子和纤维化指标表达均不同程度增加,其中,CTGF作用下,COL4A1表达明显低于高糖组（P＜0.01）.高糖及CTGF环境下加入rhHGF后,纤维化指标显著降低（P＜0.01）,其中高糖＋rhHGF组,CTGF表达减少,TGF-β1表达无明显改变（P＞0.05）.结论：HGF可通过抑制TGF-β下游因子CTGF的表达,发挥抗肾小管上皮细胞纤维化作用,但CTGF并不是其惟一的阻断途径.     

单宁酸对高糖下大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响

目的：探讨单宁酸（GLTN）对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞（GMC）增殖的抑制作用及对细胞周期的影响,阐明GLTN对糖尿病肾病（DN）发生发展的延缓作用。方法：实验细胞分成正常糖对照组（D-葡萄糖5.5 mmol·L^-1,NC组）、高糖组（D-葡萄糖30 mmol·L^-1,HC组）、高糖+5 mmol·L^-1 3-氨甲苯甲酰胺（3-AB,AB组）、高糖+20 μmol·L^-1GLTN（G20组）和高糖+40 μmol·L^-1 GLTN（G40组）。MTT法观察不同时间点（4、8、24、48和72 h ）各组GMC的增殖情况,流式细胞术观察细胞周期,Western blotting法检测转化生长因子β1（TGF-β1）和结缔组织生长因子（CTGF）的蛋白表达情况。结果：与NC组比较,高糖组GMC增殖水平升高（P<0.01）,于48 h时达高峰;S期细胞百分比明显升高（P<0.01）。与HC组比较,各给药组GMC增殖水平均明显下降（P<0.01）,S期细胞百分比降低（P<0.01）。与NC组比较,各给药组S期细胞百分比明显升高（P<0.05或P<0.01）,TGF-β1和CTGF蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01）,但与HC组比较明显下降（P<0.01）。结论：单宁酸可通过阻滞细胞周期,下调TGF-β1和CTGF的表达,抑制高糖诱导的大鼠GMC的增殖,从而对DN的发生发展起到一定的延缓作用。     

肝细胞生长因子缓解梗阻性肾病肾小管间质纤维化

目的 研究肝细胞生长因子(HGF)缓解梗阻性肾病肾小管间质纤维化的机制。方法 18只Wistar大鼠随机分为假手术组、单侧输尿管梗阻组和HGF治疗组。rhHGF(500μg-1．kg-1．d^-1)大鼠皮下注射21d后，采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β1 mRNA表达水平；Western杂交检测α-SMA蛋白的表达；底物酶谱法检测MMP2、9的活性；判断纤维化程度通过测定肾组织羟脯氨酸含量。结果 HGF能明显降低梗阻肾TGF-β1 mRNA和α-SMA蛋白表达，增加MMP2、9的活性，降低肾组织羟脯氨酸的含量。结论 HGF能有效缓解梗阻性肾病肾小管间质纤维化，有望成为临床治疗梗阻性肾病的方法之一.     

糖肾宁对自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠肾组织HGF表达的影响

目的 探讨糖肾宁对自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠肾组织肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)表达的影响。方法 采用自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠建立糖尿病肾病模型,根据小鼠随机血糖,采用分层随机法分为模型组、缬沙坦组和糖肾宁组,以C57BL/6J小鼠作为空白组,每组均为20只。药物连续干预12周,测定糖化血红蛋白(hemoglobin A1c, HbA1c)、血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血清肌酐(serum creatinine, SCr),采用Western blotting法检测肾组织HGF蛋白表达水平。结果 与空白组比较,模型组HbA1c、BUN、SCr明显升高(P<0.05),肾组织HGF表达明显降低;与模型组比较,缬沙坦和糖肾宁组HbA1c无明显变化(P>0.05),肾组织HGF表达明显升高,BUN、SCr均有不同程度的降低(P<0.05),缬沙坦和糖肾宁组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 糖肾宁可降低糖尿病小鼠BUN、SCr,升高肾组织HGF蛋白表达量,抑制肾脏纤维化,具有防治糖尿病肾病的作用。     

Expression of c-met Stimulated by High Glucose in Human Renal Tubular Epithelial Cells and Its Implication

The expression of c-met stimulated by high glucose in human renal tubular epithelial cells and the role of HGF/c-met system in diabetic nephropathy were examined. The proximal tubular epithelial cells were cultured in vitro under different conditions. MTT was used for the detection of cellular proliferation and RT-PCR was employed for measurement of c-met mRNA level. Our results showed that under different conditions, there were no significant differences in the proliferation of proximal tubular epithelial cells 12 h and 24 h after the culuture (P>0.05). The proliferation of proximal tubular epithelial cells showed a significant change 96 h after the culture and the cellular proliferation induced by hepatocyte growth factor (HGF) was very active (P<0.05). Moreover, no significant difference in the expression of c-met mRNA was found 12 h after the culture under dif- ferent conditions (P>0.05), while 24 and 96 h after the culture, a persistent and significantly higher expression of c-met mRNA was found in HGF-induced proliferation. It is concluded that addition of exogenous HGF could inhibit the apoptosis induced by high-level glucose, promote the proliferation of proximal tubular epithelial cells, and induce the expression of c-met. Our study suggests that local up-regulation of HGF/c-met system plays an important role in the repair of renal damage in diabetic nephropathy.     

肝细胞生长因子诱导糖尿病大鼠早期肾小球肥大

目的 :检测链脲佐菌素 (STZ)诱导的糖尿病 (DM)大鼠早期肾脏中肝细胞生长因子 (HGF)和P2 1的表达 ,探讨HGF在DM大鼠早期肾小球肥大中的作用。方法 :STZ诱导DM大鼠动物模型后第 3,7,14d ,分别用免疫组化法、ELISA法和RT PCR检测了肾脏中HGF蛋白及mRNA的表达 ,同时用免疫组化法检测了肾脏中P2 1蛋白的表达。结果 :STZ诱导的DM大鼠早期 ,HGF在肾脏中的表达主要位于肾小球内 ,HGF蛋白和mRNA均于STZ注射后的第 3d开始升高 ,并于第 7d时达到高峰 ;肾小球内P2 1蛋白的表达于STZ注射后的第 7d达到高峰 ;DM大鼠肾小球内HGF蛋白水平和P2 1蛋白积分呈正相关 (r=0 .9346 ,P <0 .0 1)。结论 :STZ诱导的DM大鼠早期肾小球内有HGF的表达 ,其表达可能与DM早期肾小球肥大有关。     

2型糖尿病肾病大鼠肾小管间质病变及TGF-β1、HGF和CTGF表达的变化及意义

目的通过2型糖尿病肾病(T2DN)大鼠模型,探讨早期糖尿病肾病(DN)肾小管间质的病理变化及转化生长因子β1(TGF-β1)、肝细胞生长因子(HGF)和结缔组织生长因子(CTGF)表达变化及意义。方法高热量饲料喂养加腹腔注射链脲佐菌素(STZ),复制T2DN模型。14周和20周时用HE染色及PASM染色方法观察肾小管及间质的病理变化;用免疫组织化学的方法观察肾小管间质中TGF-β1、HGF和CTGF的表达变化,并进行半定量分析。结果模型组大鼠具有血糖异常、胰岛素抵抗及肾小球高滤过率、白蛋白尿等特点;部分肾小管上皮细胞萎缩、脱落、空泡化,基底膜增厚及小管间质纤维化。免疫组织化学方法提示TGF-β1和HGF14周及20周时在2组大鼠小管间质的表达差异有统计学意义(P<0.01);CTGF在2组大鼠肾小管间质有少量表达,差异无统计学意义。结论早期DN大鼠模型中肾小管间质已开始出现纤维化改变;TGF-β1、CTGF和HGF在早期DN的肾小管及间质中的表达发生变化,提示TGF-β1、CTGF和HGF在肾小管间质的表达失衡与DN肾小管病变的进展相关。     

高糖对体外培养的足细胞自噬的影响

目的:研究不同葡萄糖浓度?不同作用时间对体外培养的足细胞自噬的影响?方法:体外培养小鼠永生性足细胞系,给予不同浓度的葡萄糖(5.6?11.0?20.0?30.0 mmol/L)刺激,作用时间分别为6?12?24?36 h?Western blot检测足细胞自噬标记蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ的表达;透射电镜观察足细胞自噬小体的形成;荧光显微镜观察足细胞转染GFP-LC3荧光蛋白后绿色荧光蛋白颗粒的变化?结果:①与0 h相比,30 mmol/L葡萄糖刺激后足细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达随着作用时间的延长逐渐增加,到24 h时增加最明显,差异有显著性(P < 0.05)?24 h时,透射电镜下足细胞自噬小体形成最多;荧光显微镜下足细胞转染GFP-LC3绿色荧光蛋白颗粒最多?②与对照组5.6 mmol/L相比,随着葡萄糖刺激浓度的增加足细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达明显增加,30 mmol/L浓度时最明显,差异有显著性(P < 0.05)?结论:高糖呈浓度和时间依赖性增加体外培养的足细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达?诱导足细胞自噬体的形成?     

黄芪注射液对高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响

[目的] 研究黄芪注射液对高糖环境下肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡的影响。[方法] 传代培养人近曲肾小管上皮细胞,细胞用无血清培养基同步化24 h后,将细胞分为5组:低糖对照组、高糖组、高糖+不同浓度黄芪注射液组(2、20、200 μg/mL),每组设3个复孔。将细胞置于37 ℃恒温培养箱中培养至24、48、72 h,收集细胞及细胞上清液。用流式细胞仪测定细胞凋亡率。[结果] 24、48、72 h,低糖对照组细胞凋亡率明显低于高糖组(P<0.05)。细胞培养24 h,黄芪干预组200和20 μg/mL细胞凋亡率明显低于高糖组(P<0.05)。细胞培养48和72 h,黄芪注射液干预组细胞凋亡率明显低于高糖组(P<0.05)。黄芪注射液干预组各组之间凋亡率比较差异也都有显著性(P<0.05),其干预作用呈剂量依赖性。[结论] 黄芪注射液能抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞的凋亡,有助于糖尿病肾病的治疗。