克拉霉素/氟罗沙星对铜绿假单胞菌生物被膜体外作用研究

目的 :探讨克拉霉素和氟罗沙星对铜绿假单胞菌 (PA)生物被膜的影响。方法 :选取临床分离的呼吸道PA7株 ,用平板法培养细菌生物被膜 ,银染色法鉴定 ;微量稀释法检测克拉霉素和氟罗沙星对PA的最低抑菌浓度(MIC) ;噻唑兰法测定活菌数 ;结晶紫染色法观察不同浓度药物对PA粘附性的影响。结果 :1/16MIC、1/4MIC克拉霉素可减少细菌对硅胶膜粘附(P<0 05) ,且可显著增强1/4MIC、1/2MIC的氟罗沙星对铜绿假单胞菌生物被膜的抑菌活性 (F=20 193 ,P<0 01)。结论 :克拉霉素与氟罗沙星联合应用对生物被膜铜绿假单胞菌呈抗菌协同作用     

克拉霉素和头孢硫脒对铜绿假单胞菌生物被膜的体外作用

目的探讨克拉霉素和头孢硫脒对铜绿假单胞菌(PA)生物被膜的影响。方法选取临床分离的呼吸道PA7株,用平板法培养细菌生物被膜,银染色法鉴定;微量稀释法检测克拉霉素和头孢硫脒对PA的最低抑菌浓度(MIC);噻唑兰法鉴定活菌数;结晶紫染色法观察不同浓度药物对PA粘附性影响。结果1/16MIC、1/4MIC克拉霉素可减少细菌对硅胶膜粘附(P<0.05),且可显著增强1/4MIC、1/2MIC的头孢硫脒对铜绿假单胞菌生物被膜的抑菌活性(F=20.193,P<0.01)。结论克拉霉素与头孢硫脒联合应用对生物被膜铜绿假单胞菌呈抗菌协同作用。     

亚胺培南联合罗红霉素对铜绿假单胞菌生物被膜的作用

目的本实验研究了罗红霉素对铜绿假单胞菌生物被膜合成的抑制及其与亚胺培南的抗菌增效作用。方法色氨酸法测定多糖蛋白复合物（GLX）;噻唑兰法测定活菌数。结果1／16MIC、1／4MIC的罗红霉素可以显著抑制细菌生物被膜多糖蛋白复合物的合成。1／16MIC、1／4MIC的罗红霉素可以显著增强1／4MIC,1／2MIC及1MIC的亚胺培南对生物被膜细菌的抑菌活性。结论罗红霉素本身对铜绿假单胞菌并无抑菌活性而可以抑制多糖蛋白复合物的合成,显示罗红霉素能提高亚胺培南对生物被膜的渗透从而增强其对铜绿假单胞菌生物被膜的抑菌活性。     

克拉霉素和乙酰螺旋霉素对铜绿假单胞菌生物被膜的作用

目的 :研究克拉霉素 (CAM)、乙酰螺旋霉素 (ASM)对铜绿假单胞菌生物被膜 (BF)合成的影响及其与环丙沙星 (CIP)的相互作用。方法 :色氨酸法测定BF中的多糖蛋白复合物 (GLX) ;高氯酸 蒽酮反应物法定量测定BF的己糖成分 ;噻唑兰法测定活菌数。结果 :1/ 16最低抑菌浓度 (MIC)、1/ 4MIC的CAM可抑制BF中GLX、己糖的合成 ,且可显著增强 1/ 4MIC、1/ 2MIC的CIP对有BF的铜绿假单胞菌的杀菌作用 (P <0 0 5 ) ,而ASM则无以上作用。结论 :CAM可抑制铜绿假单胞菌BF的形成 ,并可增强CIP对有BF的铜绿假单胞菌的杀菌作用 ;而ASM则无抑制铜绿假单胞菌BF的作用     

大环内酯类药物对铜绿假单胞菌生物被膜的影响

目的观察不同结构的大环内酯类药物对铜绿假单胞菌生物被膜的影响,为临床合理应用大环内酯类药物治疗细菌生物被膜病提供理论依据.方法平板培养法培养细菌生物被膜,银染法鉴定,经不同浓度大环内酯类药物与加替沙星对生物被膜处理后,MTT法测定存活细菌数;结晶紫染色法观察不同浓度大环内酯类药物对铜绿假单胞菌粘附性的影响.结果1/16、1/4MIC的克拉霉素、阿齐霉素可减少加替沙星作用后被膜存活菌数(P＜0.05),并可减少细菌对硅胶片的粘附(P＜0.05),而螺旋霉素无明显作用.结论减少细菌的粘附,防止细菌生物被膜的形成,是克拉霉素、阿齐霉素可与抗菌药物(加替沙星)起到协同杀菌作用的可能原因之一.     

克拉霉素与加替沙星联用对大鼠铜绿假单胞菌生物被膜肺部感染的治疗作用

目的观察克拉霉素与加替沙星联用对大鼠铜绿假单胞菌生物被膜肺部感染的治疗作用.方法建立铜绿假单胞菌生物被膜慢性肺感染的大鼠病理模型,应用克拉霉素(100 mg*kg-1)、加替沙星(25 mg*kg-1)单独或联合治疗,观察感染症状、病理、细菌学以及免疫学变化.结果克拉霉素与加替沙星联合治疗 2 wk 后,可基本清除生物被膜感染肺内细菌,血清抗菌抗体接近正常,病理以修复期改变为主.结论克拉霉素与加替沙星联合应用对铜绿假单胞菌生物被膜感染治疗作用明显.     

克拉霉素对铜绿假单胞菌生物被膜的影响

目的研究克拉霉素对铜绿假单胞生物被膜生物特性的影响.方法采用平板法建立生物被膜模型,银染法快速鉴定;结晶紫染色法测定生物被膜中细菌的粘附性;浓度梯度渗透法测定生物被膜的渗透性;采用卡唑/乙醇法测定克拉霉素对藻酸盐的合成抑制作用.结果采用平板法7天可建立稳定的生物被膜,1/4MIC克拉霉素与8×MIC加替沙星联合应用后光密度值由0.126±0.011显著的降低至0.114±0.012,4μg/ml组、8μg/ml组、16μg/ml组加替沙星的渗透浓度(μg/ml)可由1.210±0.091、2.911±0.112、5.911±0.213显著的增加至1.730±0.132、3.911±0.111、7.902±0.354;80μg/ml、40μg/ml、20μg/ml、10μg/ml克拉霉素组中藻酸盐的含量(μg/108CFU)由10.07±0.55显著的降低至2.34±0.21、4.91±0.16、7.22±0.36、8.82±0.50.结论克拉霉素可降低铜绿假单胞菌生物被膜中细菌的粘附性,增强加替沙星在生物被膜中的渗透能力,抑制铜绿假单胞菌藻酸盐的合成.     

克拉霉素对铜绿假单胞菌生物被膜的影响

目的 :研究克拉霉素对铜绿假单胞菌生物被膜生物特性的影响。方法 :采用结晶紫染色法测定生物被膜中细菌的粘附性 ;浓度梯度渗透法测定生物被膜的渗透性 :采用卡唑 /乙醇法测定克拉霉素对藻酸盐的合成抑制作用。结果 :采用平板法 7d可建立稳定的生物被膜 ,1/4MIC克拉霉素与 8×MIC加替沙星联合应用后光密度值由 ( 0 .12 6± 0 .0 11)显著的降低至 ( 0 .114± 0 .0 12 ) ,4μg/ml组、8μg/ml组、16 μg/ml组加替沙星的渗透浓度 ( μg/ml)可由 ( 1.2 10± 0 .0 91)、( 2 .911± 0 .112 )、( 5 .911± 0 .2 13)显著的增加至 ( 1.730± 0 .132 )、( 3.911±0 .111)、( 7.90 2± 0 .35 4) ;80 μg/ml、40 μg/ml、2 0 μg/ml、10 μg/ml克拉霉素组生物被膜中藻酸盐的含量 ( μg/108CFU)由 ( 10 .0 7± 0 .5 5 )显著的降低至 ( 2 .34± 0 .2 1)、( 4 .91± 0 .16 )、( 7.2 2± 0 .36 )、( 8.82± 0 .5 0 )。结论 :克拉霉素可降低铜绿假单胞菌生物被膜中细菌的粘附性 ,增强加替沙星在生物被膜中的渗透能力 ,抑制铜绿假单胞菌藻酸盐的合成。     

多尼培南对铜绿假单胞菌生物被膜形成和群体感应系统的影响

目的：探究新型碳青霉烯类抗生素多尼培南（doripenem,DOR）对临床分离铜绿假单胞菌生物被膜形成的抑制作用,及对其群体感应系统相关基因LasR、RhlR、PqsA、PqsE、PqsR表达量的影响。方法：用结晶紫染色法测定30株临床分离铜绿假单胞菌形成生物被膜能力和多尼培南对生物被膜形成的抑制作用;微量肉汤稀释法测定最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）和最低抑制生物被膜浓度（minimal biofilm inhibitory concentration,MBIC）;活菌计数法绘制多尼培南对生物被膜内细菌的杀菌曲线;采用实时定量荧光PCR （real-time PCR）法测定多尼培南对群体感应（quorum-sensing,QS）系统相关基因表达量的影响。结果：30株铜绿假单胞菌中的29株（97%）形成生物被膜;多尼培南具有较强的抗铜绿假单胞菌浮游菌和生物被膜抑制活性,MICR为0.5～1μg·mL-1,MBICR为1～4μg·mL-1;显著下调LasR、RhlR、PqsA、PqsE、PqsR的表达量。结论：临床分离铜绿假单胞菌具有高生物被膜形成率,多尼培南对铜绿假单胞菌生物被膜具有抑制作用,可能与其下调QS系统相关基因有关。     

抗菌肽BF-30体外抗耐药细菌生物被膜的研究

BF-30是金环蛇Cathelicidin基因编码的一种直链多肽,由30个氨基酸构成。基于细菌生物被膜与细菌耐药性的关系,研究了BF-30对铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌生物被膜的抑制作用及机理。当BF-30浓度为1/2×MIC时,可有效的抑制铜绿假单胞菌及金黄色葡萄球菌生物被膜的形成。以铜绿假单胞菌PAO1为研究对象,进一步考察亚抑菌浓度的BF-30抑制生物被膜形成的作用机理。实验结果表明,BF-30能够有效减少PAO1胞外鼠李糖的含量,从而降低细菌形成生物被膜的能力,但对PAO1表面的疏水性并无影响。此外,亚抑菌浓度的BF-30可剂量依赖性的降低细菌群体感应系统中绿脓菌素的释放量而不影响细菌对过氧化氢的敏感性,表明BF-30可通过群体感应系统调节生物被膜的形成。因此,BF-30有望用于治疗细菌生物被膜引起的各类慢性感染疾病。     

尿激酶或蚓激酶与氟罗沙星联合应用对细菌生物被膜的影响

目的:研究尿激酶(UK) 或蚓激酶(EK) 与氟罗沙星(FLRX) 联合应用对细菌生物被膜的影响。方法:最低抑菌浓度测定采用标准微量稀释法;以银染法快速鉴定细菌生物被膜(BBF) ;扫描电镜(SEM) 观察BBF形态;用甲基四氮唑蓝(MTT) 比色法测定BBF中活菌数。结果:经FLRX处理BBF的SEM图像示细菌形态仍保持短杆状,但细菌数量及菌体间纤维样黏液物质显著减少;经UK或EK与FLRX合用处理后的BBF图像显示细菌破碎、形态不一,菌数和菌体间粘液丝均比单用FLRX时明显减少。对活菌数影响与电镜图像结果一致。结论: UK或EK与FLRX合用对铜绿假单胞菌BBF的抑制具有明显的协同效应。     

Modulation of biofilm of strains isolated from patients with chronic obstructive pulmonary disease by levofloxacin, moxifloxacin, ciprofloxacin, amoxicillin/clavulanic acid and ceftriaxone

The ability of levofloxacin, moxifloxacin, ciprofloxacin, amoxicillin/clavulanic acid and ceftriaxone to interfere on biofilm produced by Pseudomonas aeruginosa, Haemophilus influenzae and Streptococcus pneumoniae isolated from patients with chronic obstructive pulmonary disease was evaluated. The effects of antibiotics were evaluated on formation of biofilm (at 1/2, 1/4 and 1/8 X MIC) and on preformed biofilm (at epithelial lining fluid peak concentrations) by means of a spectrophotometric method. Levofloxacin was the most active compound followed by ciprofloxacin, moxifloxacin and amoxicillin/clavulanic acid and ceftriaxone. Levofloxacin may contribute to clear the reservoir of pathogens involved in chronic obstructive pulmonary disease, thus leading to decreased occurrence of acute exacerbations.     

环丙沙星体外诱导铜绿假单胞菌对群体感应系统正常与缺陷最低抑菌浓度的影响

目的：探究群体密度（QS）系统正常与缺陷的铜绿假单胞菌（PA）通过环丙沙星诱导后对其最低抑菌浓度（MIC）影响的区别。方法：将PA按照前期研究的基因测序方法分成正常组和缺陷组。采用琼脂倍比稀释法测定对环丙沙星的MIC值,用1/2MIC、1MIC、2MIC、4MIC的环丙沙星各诱导5代,保存1代、3代和5代的菌株。诱导浓度和诱导代数对MIC值的影响采用重复测量方差分析方法,正常组与缺陷组的比较采用秩和检验。结果：两组组内比较：在同一浓度下,2组各随着诱导代数增加MIC值均增加（P均<0.05）;在同一代数下随着诱导浓度的增加,正常组第3代和第5代的MIC值也增加（P均<0.05）,缺陷组第3代和第5代的MIC值差异有统计学意义（P均<0.05）。2组组间比较：QS系统分组与诱导代数无交互效应（P>0.05）,且缺陷菌株MIC值都低于正常菌株;与诱导浓度存在交互效应（P<0.05）。固定代数固定浓度两组MIC值比较：在1MIC诱导的第3代和第5代,2组之间有统计学差异（P<0.05）。结论：不同诱导浓度对QS系统正常组和缺陷组MIC值的影响有区别。     

罗红霉素与乙酰螺旋霉素对眼部金黄色葡萄球菌生物膜的影响

目的:比较罗红霉素与乙酰螺旋霉素对眼部金黄色葡萄球菌生物膜的影响及与环丙沙星合用的抗菌协同作用。方法:用0.22μm微孔膜构建金黄色葡萄球菌生物膜模型;测定罗红霉素、乙酰螺旋霉素及环丙沙星的最低抑菌浓度(MIC)值;银染金黄色葡萄球菌生物膜,扫描电镜(SEM)观察生物膜形态结构,连续稀释法进行活菌计数。结果:生物膜(BF)可在7 d内稳定形成,1/16MIC、1/4MIC浓度罗红霉素显著减少单用环丙沙星组中的BF活菌数(P<0.05),乙酰螺旋霉素没有明显作用。结论:罗红霉素能显著提高环丙沙星对BF中金黄色葡萄球菌的抗菌活性。     

尿激酶或蚓激酶与氟罗沙星联合应用对细菌生物被膜的影响

探讨尿激酶或蚓激酶与氟罗沙星联合应用对铜绿假单胞菌生物被膜的影响。MIC采用微量稀释法测定,应用银染法快速鉴定细菌生物被膜,应用扫描电镜观察细菌生物被膜中细菌的形态并用MTT法测定生物被膜中细菌数。扫描电镜显示通过尿激酶或蚓激酶与氟罗沙星联合应用,细菌生物被膜有显著改变,生物被膜中的细菌数量比单独应用氟罗沙星显著减少。实验结果表明尿激酶或蚓激酶与氟罗沙星联合应用表现出协同效应。     

利用MIC法筛选不同厂家生产的同一种抗菌药物

目的了解不同厂家生产的左氧氟沙星注射液和环丙沙星注射液的最低抑菌浓度（MIC），为临床医生合理选药提供依据。方法用琼脂稀释法和肉汤稀释法检测来自7个厂家的左氧氟沙星注射液和4种环丙沙星注射液对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌的MIC。结果同一种抗菌药物的MIC从0．06-4．0μg／mL不等，高低相差60倍以上（相差6个质控浓度）；7个厂家左氧氟沙星对铜绿假单胞菌的MIC从0．25～4．0μg／mL不等，高低相差16倍（相差4个质控浓度）。结论当一个医院同时存在多个厂家的同一种抗菌药物时，应该选用敏感性较高（MIC较低）的药物。     

Effects of iron depletion on antimicrobial activities against planktonic and biofilm Pseudomonas aeruginosa

Objectives Iron plays an important role in the development of Pseudomonas aeruginosa biofilm. Here we evaluated effects of iron depletion on the antimicrobial activity of ceftazidime, tobramycin and ciprofloxacin against planktonic and biofilm Pseudomonas aeruginosa. Methods We tested the sensitivities of wild‐type PAO1, type‐IV pilus mutant PAO‐ΔpilHIJK and the quorum‐sensing mutant PAO‐JP2 P. aeruginosa planktonic cultures and biofilms to antibiotics under iron‐depleted conditions. Key findings In planktonic bacteria, the minimum concentration that inhibited visible growth (MIC) of ciprofloxacin was increased slightly in an iron‐depleted environment in all three strains, whereas the MIC of tobramycin was similar in iron‐depleted and control environments. The MIC of ceftazidime increased in the PAO‐JP2 strain when iron was depleted. Tobramycin achieved the best bactericidal effect in biofilms. Viable counts were reduced by one log under iron‐depleted conditions in all three strains when tobramycin reached 4 MIC and when ceftazidime and ciprofloxacin reached 8 MIC. Conclusions This study suggests that once the biofilm is formed, iron depletion may only slightly promote the bactericidal effect of antibiotics on PAO1, PAO‐ΔpilHIJK and PAO‐JP2. Although these changes were relatively small, iron as one of the environmental factors should not be ignored when evaluating bactericidal effect of antibiotics. The combination of an iron chelator and antibiotics may have therapeutic value under certain bacterial growth conditions.     

Therapeutic possibilities for diffuse panbronchiolitis

Diffuse panbronchiolitis can be thought of as one of the biofilm diseases of which cystic fibrosis is another example. The patient often has persistent infection with Pseudomonas aeruginosa and, in 1982, the survival rate to 5 years in these patients was only 37%. Recently, the prognosis of these patients has remarkably improved by using long-term treatment with 14-membered macrolides. However, the reason for the effect of macrolides in these patients is still obscure. To try to understand this pneumonia, some experiments were performed to assess the effect of macrolides on P. aeruginosa biofilm. An in vitro biofilm of P. aeruginosa was prepared on Teflon after 6 days' incubation and the effects of antibiotics on the biofilm were assessed. Floating, but not biofilm bacteria were killed by meropenem, ciprofloxacin, tosufloxacin and cefoperaxone. Ciprofloxacin with either azithromycin or clarithromycin killed bacteria within the biofilm, whereas ciprofloxacin with clindamycin, josamycin or other 16-membered macrolides was ineffective. Clarithromycin destroyed the biofilm, releasing the bacteria into the medium. The ability of P. aeruginosa to adhere to murine tracheal cells was also reduced by clarithromycin. These kinds of macrolides may have some sort of permeability effect on the biofilm surface and this may bear some relation to the good clinical performance of macrolides in diffuse panbronchiolitis.