完全弗氏佐剂致痛大鼠脊髓中谷氨酸转运蛋白表达的变化

目的：观察完全弗氏佐剂（CFA）致痛大鼠脊髓中谷氨酸转运蛋白表达的变化规律.方法：取8只大鼠足底注射CFA 100μL建立疼痛模型，观察大鼠致痛后10 d内热痛阈及触诱发痛阈的变化.另取20只大鼠经足底注射CFA 100 μL建立疼痛模型后观察大鼠脊髓内谷氨酸转运蛋白表达的变化.结果：CFA致痛后大鼠痛阈均显著低于致痛前（P＜0.01），其中以致痛后3 d内痛阈降低最为显著，以后痛阈逐渐升高，10 d后痛阈恢复至基础值的70%左右.免疫组化染色可见在正常未致痛时，大鼠脊髓中均有两种谷氨酸转运蛋白GLT-1及EAAC1的阳性表达.致痛1、3 d后，脊髓中GLT-1及EAAC1表达明显升高.致痛后7、10 d表达逐渐降低，接近致痛前的表达水平.结论：足底注射CFA后可致大鼠痛阈显著降低，脊髓中谷氨酸转运蛋白也呈先升高后逐渐降低的变化，谷氨酸转运蛋白可能参与了大鼠炎性疼痛脊髓可塑性变化.     

脑损伤大鼠皮质神经细胞凋亡过程中细胞外调节激酶通路的作用

目的:细胞外调节激酶通路在凋亡信号转导中具有重要作用,观察细胞外调节激酶信号转导通路在颅脑损伤中的作用。方法:实验于2004-09/2006-01在华北煤炭医学院中心实验室完成。选用SD大鼠70只,按随机数字表法分为2组,即对照组(n=28)和模型组(n=42),每组又分为伤后10min,30min,3h,6h,24h,48h和72h7个时相点,对照组每个时相点4只大鼠,模型组每个时相点6只大鼠。按照Mamarou方法建立大鼠重型弥漫性颅脑损伤模型,在不同时相点采用免疫组化、Western-blot法分别检测两组大鼠颅脑损伤后皮质细胞外调节激酶的表达情况,另外分别应用原位杂交方法、原位末端标记法检测半胱氨酸天冬氨酸酶3及凋亡细胞,并进行比较。结果:70只大鼠全部进入结果分析,无脱失。①模型组大鼠皮质p-细胞外调节激酶1/2蛋白在伤后10min时已较对照组明显升高(P<0.05),逐渐增强,伤后6h达高峰,24h仍有大量表达,明显高于对照组(P<0.01),至伤后48h降至对照组水平(P>0.05)。②模型组大鼠皮质半胱氨酸天冬氨酸酶3mRNA杂交阳性信号表达在伤后3h开始升高,48h达高峰,72h仍明显高于对照组(P<0.01)。③模型组大鼠皮质伤后3h偶见原位末端标记阳性细胞,6h开始增加,明显高于对照组(P<0.01),48h达高峰。④p-细胞外调节激酶1/2蛋白与半胱氨酸天冬氨酸酶3mRNA及原位末端标记阳性细胞均主要分布于损伤中心区及其周围,在分布区域上呈现很大的相似性。结论:脑损伤时p-细胞外调节激酶1/2蛋白表达呈一种过度激活状态,而且与半胱氨酸天冬氨酸酶3mRNA及原位末端标记阳性细胞在分布区域上呈现很大的相似性,推测大鼠脑损伤后细胞外调节激酶通路的过度激活是导致神经细胞凋亡的作用途径之一。     

肺功能评估的一项新指标:大鼠肺损伤时细胞外信号调节激酶的激活及意义

目的:探讨急性肺损伤(acutelunginjury,ALI)大鼠肺组织细胞外信号调节激酶(extracellularsignal-regulatedkinase,ERK)的表达激活在ALI发病机制中的意义及评估肺功能的新指标。方法:通过免疫组化的方法对ALI大鼠肺组织内Raf-1,MEK-1,ERK,磷酸化ERK(P-ERK)及一氧化氮、肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)的表达情况进行检测,并与正常对照组比较。结果:ALI肺组织内Raf-1,MEK-1,ERK,P-ERK的表达明显增强。同时,在有MEK-1,ERK,P-ERK表达的肺组织中,也有一氧化氮、TNF-α的强表达。而正常肺组织中,这些激酶及一氧化氮、TNF-α的表达强度均较弱。结论:ALI大鼠肺组织中Raf-1→MEK-1→ERK信号转导系统的激活与中性粒细胞、肺泡巨噬细胞等的功能活化、合成分泌一氧化氮、TNF-α有关,参与急性肺损伤的发病,前者可作为评估肺功能的新指标。     

阿托伐他汀对心肌梗死大鼠心肌纤维化和细胞外信号调节激酶表达的影响

目的观察阿托伐他汀对大鼠急性心肌梗死后心室重塑和心肌组织中细胞外信号调节激酶(ERK)1/2蛋白表达的影响。方法 20只雄性SD大鼠通过前降支动脉结扎法建立大鼠急性心肌梗死模型后随机分为心肌梗死组(AM I),心肌梗死阿托伐他汀组(ATV),另设假手术组(sham),每组n=10。阿托伐他汀组每天给予阿托伐他汀(10 mg/kg)灌胃,持续4周。假手术组和心肌梗死组每天给予同等量的0.9%氯化钠注射溶液灌胃。应用real-tim e PCR法检测梗死周边区心肌组织中Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA表达,应用westernb lot方法检测p-ERK1/2、ERK1/2蛋白的表达。结果与假手术组比较,心肌梗死组和阿托伐他汀组中Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达高于假手术组(P<0.01),阿托伐他汀组Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达显著低于心肌梗死组(P<0.01)。心肌梗死组和阿托伐他汀组中p-ERK1/2表达高于假手术组(P<0.01),阿托伐他汀组p-ERK1/2表达低于心肌梗死组(P<0.01)。结论阿托伐他汀可以改善大鼠心肌梗死后心室重塑,其机制可能与下调心肌组织中p-ERK1/2表达有关。     

黄芪甲苷对肺纤维化大鼠的治疗作用及对肺组织中血清和糖皮质激素调节蛋白激酶1表达的影响

【目的】研究黄芪甲苷对肺纤维化（PF ）大鼠的治疗作用及对肺组织中血清和糖皮质激素调节蛋白激酶1（SGK1）表达的影响。【方法】36只SD大鼠,随机分为对照组、模型组和黄芪甲苷干预组。模型组和干预组气管内注射博来霉素（BLM ,5 mg／kg）诱导PF ,对照组在相同条件下给予生理盐水。干预组大鼠d2开始每天经胃管灌服0．1 g／L黄芪甲苷2 m L ,其余两组相同条件下给予生理盐水。治疗的d7和d28处死动物取出肺组织,进行病理学观察;用免疫组化和RT‐PCR检测各组鼠肺组织SGK1蛋白及mRNA表达的水平。【结果】病理学观察显示：与模型组比较,干预组肺泡炎和纤维化程度均减轻,SGK1蛋白及mRNA表达显著降低;与对照组比较,干预组存在一定程度肺泡炎和纤维化,SGK1蛋白及mRNA表达明显高于对照组。【结论】黄芪甲苷可能通过抑制SGK1的过度表达,对实验性大鼠PF具有良好的治疗作用。     

U0126对糖尿病全脑缺血大鼠海马区细胞外信号调节激酶1/2和Ku70表达的影响

目的 探讨磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal regulated kinase,ERK1/2)抑制剂U0126对糖尿病大鼠全脑缺血-再灌注后海马区ERK1/2和Ku70表达的影响.方法 在河北联合大学神经外科中心实验室,采用链脲佐菌素诱导联合改良的Pulsineli 4血管阻断(4-VO)法制作糖尿病全脑缺血-再灌注模型.80只雄性Sprague-Dawlley大鼠随机(随机数字法)分为假手术组(sham operation,SO)、血糖正常全脑缺血-再灌注组(normoglycemia ischemia/reperfusion,NL/R)、糖尿病全脑缺血-再灌注组(diabetes cerebral ischemia,DCI)和DCI+ U0126干预组(尾静脉注射(0.01 mg/kg).各组分别在缺血1、6、24、48 h取脑组织,HE染色检测海马区神经细胞形态变化;免疫组化法检测海马区磷酸化ERK1/2和Ku70表达水平.以SPSS 17.0对实验数据进行统计分析,组间进行析因方差分析,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 与SO组比较,NI/R组大鼠海马区部分神经细胞出现变性坏死改变;磷酸化ERK1/2表达在1、6、24、48h显著增高(均P ＜0.05);Ku70表达在1h、6h显著增高(均P＜0.05),24、48 h降低(均P＜0.05);与NI/R组比较,DCI组脑组织形态结构损伤程度加重,1、6、24、48 h磷酸化ERK1/2显著下降(均P＜0.05);1、6、24、48 h Ku70显著下降(均P＜0.05);与DCI组比较,DCI+U0126组脑组织形态结构损伤程度加重,1、6、24、48 h磷酸化ERK1/2显著下降(均P＜0.05);1、6、24、48 h Ku70显著下降(均P＜0.05).结论 U0126通过抑制ERK1/2的激活、降低糖尿病全脑缺血大鼠海马区Ku70表达,加重对神经细胞有损伤作用.     

辛伐他汀对大鼠颈总动脉损伤后再狭窄时碱性成纤维细胞生长因子与磷酸化细胞外信号调节激酶蛋白表达的影响

目的:探讨辛伐他汀对大鼠颈总动脉损伤后再狭窄时碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)蛋白表达的影响.方法:建立血管损伤后再狭窄动物模型,分为假手术组、手术组、低剂量组和高剂量组,低、高剂量组术前3 d分别用5 mg/(kg·d)和10 mg/(kg·d)辛伐他汀灌胃,术后14 d处死所有实验动物,各取2～4 cm左侧颈总动脉用于实验.HE染色观察左颈总动脉形态学的变化:Westem blot检测血管bFGF、p-ERK1/2蛋白的表达.结果:与假手术组比较,手术组血管中膜血管平滑肌细胞(VSMC)增殖显著,排列紊乱,向管腔及內弹力板方向增生扩展,管腔严重狭窄;低剂量组血管內膜相对光滑,中膜VSMC排列趋于规整,管腔狭窄程度较轻;高剂量组血管內膜比较光滑,中膜VSMC增殖程度显著降低,VSMC排列规整,管腔狭窄程度明显减轻.与对照组比较,其他各组颈总动脉bFGF、P-ERK1/2的表达差异均有显著性(P＜0.01);与手术组比较,低剂量组bFGF、p-ERK1/2的表达差异无显著性;高剂量组则差异有显著性(P＜0.01),高剂量组与低剂量组比较差异亦有显著性(P＜0.05).结论:辛伐他汀可能通过抑制bFGF和p-ERK1/2蛋白的表达达到抑制VSMC增殖,减轻血管再狭窄的作用.     

ERK-TRPV4途径参与大鼠背根神经节持续受压后痛觉敏感的脊髓中枢敏化机制的研究

摘要 目的：探讨ERK-TRPV4途径参与大鼠背根神经节持续受压(CCD)后痛觉敏感的脊髓中枢敏化的机制。 方法：选取SPF级雄性Wistar大鼠共42只,随机分为空白对照组6只,CCD手术组36只（包括术后2d、4d、7d、10d和14d,每组6只,以及免疫荧光组6只）。利用免疫共沉淀检测正常大鼠脊髓背角中ERK与TRPV4的相互联系。利用免疫组织化学染色法,观察ERK与TRPV4的分布情况。制备CCD模型,利用western blot技术检测空白对照组及术后2d,4d,7d,10d及14d,手术侧及对侧脊髓背角ERK和TRPV4蛋白表达的变化。利用免疫荧光技术观察术后4d脊髓背角中ERK和TRPV4阳性细胞数目、神经元的形态及阳性神经元比率的变化。 结果：CCD术后第2天至第10天,手术侧脊髓背角中ERK及TRPV4表达明显升高（P<0.01）。同时,手术侧脊髓背角中ERK和TRPV4阳性细胞数目、共同阳性表达细胞数及阳性神经元细胞比率均高于非手术侧（P<0.01）。脊髓背角阳性神经元分布于灰质第Ⅰ至Ⅳ层,手术侧的神经元树突棘生成增加,胞体增大。 结论：ERK-TRPV4通路参与了CCD后痛觉敏感的脊髓中枢敏化机制。     

电针对坐骨神经损伤大鼠背根节胶质源性神经营养因子表达的影响

目的:探讨电针对大鼠坐骨神经损伤后相应背根节神经胶质细胞源性神经营养因子(glialcelllinederivedneurotrophicfactor,GDNF)表达的影响,以探讨电针对周围神经损伤的保护作用。方法:Wistar大鼠45只,5只为正常组,余40只行左侧坐骨神经切断外膜缝合。电针组每天穴位电针20min,模型组不作任何处理。再分4个亚组,每组5例。分别于术后1,2,4和8周处死,取材L5节段损伤侧背根节,免疫组化染色观测GDNF表达,并观察4周时感觉神经电生理。结果:电针组同侧背根节神经元GDNF表达伤后2周达到高峰,积分光密度值为0.699±0.053,与模型组0.419±0.093比较有显著意义(P<0.05)。伤后8周恢复正常对照水平;模型组背根节细胞GDNF表达伤后2周达到高峰保持至8周。相应的感觉神经潜伏期检查8周时电针组(0.56±0.89)ms,明显短于模型组(0.78±0.12)ms,且传导速度明显增加,波幅增大。结论:电针促进神经功能的恢复可能是通过增强脊神经节GDNF的表达而实现。     

TBOA 抑制谷氨酸转运体功能对戊四氮点燃癫痫模型的影响

目的:研究新型谷氨酸转运体抑制剂TBOA对戊四氮点燃癫痫的发生及神经病理作用,寻找治疗戊四氮点燃癫痫的新方法.方法:戊四氮慢性点燃方法进行造模,分为癫痫组和TBOA治疗组.TBOA治疗组造模前3d大鼠侧脑室注射TBOA,癫痫组侧脑室注射生理盐水.2周后处死大鼠,研究两组癫痫的发生率、海马及皮质的病理改变、神经元计数.结果:1d的癫痫发生率在癫痫组为87.5%,TBOA治疗组为40.6%,光镜显示TBOA治疗组的损害程度轻于癫痫组.l、3d时海马CAI区神经元计数癫痫组与TBOA治疗组比较差异有显著性(P＜0.01);5、7d时,癫痫组神经元计数少于TBOA治疗组(均P＜0.05).皮质区变化规律同海马CAI区.结论:早期应用谷氨酸转运体抑制剂TBOA能降低癫痫的发生率,并改善癫痫后神经病理损害.     

Selective antihyperalgesic effect of [Ser1] histogranin on complete Freund's adjuvant-induced hyperalgesia in rats.

The search for alternative pharmacotherapies that target abnormal pain has focused on N-methyl-D-aspartate glutamate receptor (NMDAR) antagonists, since they are efficacious in various chronic pain models. However, adverse effects of currently available agents limit their therapeutic usefulness. The naturally derived NMDAR antagonist peptide, histogranin, is thought to interact at a novel site on the NMDAR subunit. Previous studies in our laboratory have suggested the potential for histogranin analogs to attenuate neuropathic pain. The ability of this peptide derivative to reduce inflammatory pain was evaluated in the present study. The effect of intrathecal (i.t.) injection of the stable analog [Ser(1)] histogranin (SH) was evaluated in rats with a unilateral hind paw inflammation. Following injection of complete Freund's adjuvant into the hind paw, responsiveness to noxious thermal and mechanical stimuli were greatly enhanced (hyperalgesia). The i.t. injection of SH partially attenuated mechanical hyperalgesia for up to 2 h post-injection, with no effect on withdrawal thresholds of the non-inflamed paw. In contrast, SH had no effect on thermal hyperalgesia. No attendant motor abnormalities were noted. These results indicate that SH has selective and modest antinociceptive effects on inflammatory pain and suggests that novel histogranin analogs may be safe and useful adjuncts in the management of chronic pain.     

氯胺酮对甲醛致炎性痛小鼠背根节TrkA受体表达的影响

目的：观察N-甲基-D-天冬氨酸受体非特异性拮抗剂氯胺酮对甲醛致炎小鼠疼痛行为学的影响，以及背根节神经生长因子受体TrkA表达的变化。方法：实验于2005—02／05在华中科技大学同济医学院附属同济医院进行。取成年健康昆明种小鼠24只，随机分为正常对照组、甲醛组和甲醛＋氯胺酮组3组，每组8只。分别于甲醛组和甲醛＋氯胺酮组小鼠右后足底注入体积分数为0．05的甲醛100μL形成急性炎性痛模型。甲醛＋氯胺酮组小鼠在注入甲醛后立即经腹腔注入40mg／kg的氯胺酮。正常对照组小鼠不干预。观察甲醛注射后小鼠疼痛行为学变化，甲醛致炎2h后处死小鼠，免疫组化ABC方法检测背根节TrkA受体表达。结果：经补充后24只小鼠进入结果分析。①疼痛行为学变化：甲醛注射后1h内小鼠均出现明显的摔腿、舔足、跛行、致炎足不能着地等疼痛行为学改变，注射足呈高度肿胀。甲醛＋氯胺酮组小鼠氯胺酮注射后翻正反射立即消失，甲醛致炎后第一时相（注射后0-5min）、第二时相（注射后20-60min）的疼痛行为学反应次数显著少于甲醛组[（6．0&;#177;2．5），（113．0&;#177;9．5）次；（3&;#177;0），（75．0&;#177;4．5）次；P〈0．01]。②背根节TrkA受体阳性神经元平均灰度值：注射侧甲醛组高于甲醛＋氯胺酮组和正常对照组（205．3&;#177;11．9，121．6&;#177;7．9，116．5&;#177;7．7，P〈0．01），甲醛＋氯胺酮组和正常对照组比差异不显著（P〉0．05）。结论：氯胺酮能抑制急性炎性痛时疼痛行为学变化，并减少背根节TrkA受体的表达，这种效应可能与TrkA受体下调后初级伤害性刺激传人减少有关。     

氯胺酮对甲醛致炎性痛小鼠背根节TrkA受体表达的影响

目的:观察N-甲基-D-天冬氨酸受体非特异性拮抗剂氯胺酮对甲醛致炎小鼠疼痛行为学的影响,以及背根节神经生长因子受体TrkA表达的变化。方法:实验于2005-02/05在华中科技大学同济医学院附属同济医院进行。取成年健康昆明种小鼠24只,随机分为正常对照组、甲醛组和甲醛 氯胺酮组3组,每组8只。分别于甲醛组和甲醛 氯胺酮组小鼠右后足底注入体积分数为0.05的甲醛100μL形成急性炎性痛模型,甲醛 氯胺酮组小鼠在注入甲醛后立即经腹腔注入40mg/kg的氯胺酮。正常对照组小鼠不干预。观察甲醛注射后小鼠疼痛行为学变化,甲醛致炎2h后处死小鼠,免疫组化ABC方法检测背根节TrkA受体表达。结果:经补充后24只小鼠进入结果分析。①疼痛行为学变化:甲醛注射后1h内小鼠均出现明显的摔腿、舔足、跛行、致炎足不能着地等疼痛行为学改变,注射足呈高度肿胀。甲醛 氯胺酮组小鼠氯胺酮注射后翻正反射立即消失,甲醛致炎后第一时相(注射后0～5min)、第二时相(注射后20～60min)的疼痛行为学反应次数显著少于甲醛组眼(6.0±2.5),(113.0±9.5)次;(3±0),(75.0±4.5)次;P<0.01演。②背根节TrkA受体阳性神经元平均灰度值:注射侧甲醛组高于甲醛 氯胺酮组和正常对照组(205.3±11.9,121.6±7.9,116.5±7.7,P<0.01),甲醛 氯胺酮组和正常对照组比差异不显著(P>0.05)。结论:氯胺酮能抑制急性炎性痛时疼痛行为学变化,并减少背根节TrkA受体的表达,这种效应可能与TrkA受体下调后初级伤害性刺激传入减少有关。     

Evaluation of therapeutic potential of ivermectin against complete Freund's adjuvant-induced arthritis in rats: Involvement of inflammatory mediators

Rheumatoid arthritis is a chronic systemic inflammatory disease with genetic manifestations. According to recently published case reports, patients taking corticosteroid medication for the management of rheumatoid arthritis develop strongloidiasis and are at high risk of developing associated infections. This study explored the antiarthritic role of ivermectin, a drug used in the treatment of strongyloides and to compare its results with dexamethasone. Thirty-two male Wistar rats were randomly divided into four groups: control, diseased, dexamethasone, and ivermectin groups. Rheumatoid arthritis in all rats except the control group was induced by using complete Freund's adjuvant. After 7 days of rheumatoid arthritis induction, animals were treated with dexamethasone 5 mg/kg and ivermectin 6 mg/kg. Body weight, visual arthritic score, total leukocyte count, differential leukocyte count, proinflammatory genes, and histopathological findings were used to assess the effects of ivermectin on rheumatoid arthritis. Treatment with ivermectin showed a significant reduction in inflammatory cells levels, body weight, and visual arthritic score, indicating an improvement in the degree of inflammation as compared with the diseased group. Treatment with ivermectin and dexamethasone significantly reduced the augmentation in the mRNA expression levels of IL-17, TLR-2, TNF, and NF-κB as a result of arthritic development. Ivermectin treatment also showed a significant reduction in the severity of inflammation and destruction of joints and showed comparable effects to dexamethasone, a corticosteroid used for the treatment of rheumatoid arthritis. Ivermectin has significant antiarthritic properties and can be a novel treatment agent for the management of rheumatoid arthritis patients suffering from strongyloidiasis.     

加味补肝汤对糖尿病周围神经病变大鼠背根节p38丝裂素活化蛋白激酶表达的干预作用

目的：观察中药加味补肝汤对链脲佐菌素致糖尿病周围神经病变大鼠背根节的保护作用。方法：实验于2005—02／09在湘雅医院中西医结合研究所完成。①选用健康雄性Wistar大鼠40只。随机抽取10只大鼠为正常对照组，给于等体积的枸橼酸缓冲液一次性腹腔注射。其余30只大鼠禁食12b后腹腔内1次注射1％链脲佐菌素溶液50mg／kg，3d后血糖浓度〉16．7mmol／L者确定为糖尿病模型造模成功。随机其分为3组：模型组、加味补肝汤组、牛磺酸组，每组10只。造模稳定1周后，加昧补肝汤组应用加味补肝汤治疗，该方由枸杞15g，木瓜15g，当归10g，川芎10g，熟地12g，白芍15g，桑寄生15g，麦冬15g，天花粉15g等组成，按13．6g／（kg&;#183;d）灌胃，1次／d，连续8周。模型组及正常对照组大鼠自由进食水，牛磺酸组饮含1％牛磺酸的蒸馏水。（函8周后应用计算机图像处理分析技术对免疫组化结果进行定量分析，通过Motic Images Advanced彩色图形处理分析系统，测定免疫反应产物p38丝裂索活化蛋白激酶的灰度值，测定结果扣除背底及阴性值，免疫组化产物染色越深，灰度值就越小，抗原物质的含量就越高．表达强度越高。采用免疫组化方法检测各组大鼠背根节内p38缝裂素活化蛋白激酶表达，化学比色法测定血清丙二醛含量。③计量资料差异比较采用t检验。结果：整个观察过程中，正常对照组无动物死亡，加昧补肝汤组死亡3只，牛磺酸组、模型组各死亡2只，最终进入结果分析正常对照组10只，加味补肝汤组7只。牛磺酸组和模型组各8只。①大鼠背根节内p38丝裂素活化蛋白激酶表达强度及血清丙二醛水平；模型组明显高于正常对照组（P〈0．01），加味补肝汤及牛磺酸组低于模型组（P〈0．05-0．01）。②正常对照组未见或者及少量可见p38阳性表达，模型组、牛磺酸组、加味补肝汤组可见p38阳性细胞。以模型组阳性表达细胞多且着色深。结论：中药加味补肝汤具有抗氧化损伤、明显保护链脲佐菌素致糖尿病周围神经病变大鼠背根节的作用，可能与其能抑制p38缝裂素活化蛋白激酶通路、抗脂质过氧化反应有关。     

大鼠背根神经节持续压迫后miRNA差异表达谱的分析及功能研究

摘要 目的：对大鼠背根神经节（dorsal root ganglion, DRG）持续压迫后所致神经病理性疼痛（neuropathic pain, NP）模型的DRG组织进行miRNA测序,应用生物信息学技术分析差异表达的miRNA及其靶基因在疾病中的定位与功能。 方法：采用随机分组法将大鼠分为2组,每组12只,分别为假手术组、CCD背根神经节持续压迫（chronic compression of the dorsal root ganglion, CCD）模型组,术后进行行为学检测。确定痛觉敏感的天数后重复造模,取材后进行miRNA转录组测序。利用生物信息学手段筛选具有显著性差异的miRNA,预测相关靶基因并对其GO功能及KEGG富集情况进行分析,使用在线数据库对miRNA与靶基因之间的属性关系建立miRNA-靶基因的调控网络。最后,通过qPCR验证差异最为显著的4条miRNA在CCD模型DRG组织中的表达情况。 结果：CCD造模7天后,大鼠痛觉最为敏感。重复造模,在第7天取材并进行miRNA转录组测序。将差异表达的miRNA以|log2（fold change）|>1且P<0.05为阈值,筛选符合要求的miRNA,与假手术组相比,有57种miRNA在CCD模型组表达上调,有17种miRNA在CCD模型组表达下调。差异表达的miRNA对应的靶基因主要富集在外泌体、细胞质、细胞膜、线粒体、内质网等结构,在细胞固有免疫、炎症信号传导、氧化应激等生物学过程中发挥重要作用,在PI3K-AKT、MAPK、JAK-STAT、钙信号等通路上均存在富集。经实验验证,miR-21-3p、miR-675-5p、miR-487b-5p、miR-3585-3p的表达与测序结果一致。 结论：在大鼠背根神经节慢性压迫所致NP模型的DRG组织中,异常表达的miRNA及其富集的相关信号通路可为NP诊断和治疗的新靶点提供新的思路。     

加味补肝汤对糖尿病周围神经病变大鼠背根节p38丝裂素活化蛋白激酶表达的干预作用

目的:观察中药加味补肝汤对链脲佐菌素致糖尿病周围神经病变大鼠背根节的保护作用。方法:实验于2005-02/09在湘雅医院中西医结合研究所完成。①选用健康雄性Wistar大鼠40只。随机抽取10只大鼠为正常对照组,给予等体积的枸橼酸缓冲液一次性腹腔注射。其余30只大鼠禁食12h后腹腔内1次注射1%链脲佐菌素溶液50mg/kg,3d后血糖浓度>16.7mmol/L者确定为糖尿病模型造模成功。随机其分为3组:模型组、加味补肝汤组、牛磺酸组,每组10只。造模稳定1周后,加味补肝汤组应用加味补肝汤治疗,该方由枸杞15g,木瓜15g,当归10g,川芎10g,熟地12g,白芍15g,桑寄生15g,麦冬15g,天花粉15g等组成,按13.6g/(kg·d)灌胃,1次/d,连续8周。模型组及正常对照组大鼠自由进食水,牛磺酸组饮含1%牛磺酸的蒸馏水。②8周后应用计算机图像处理分析技术对免疫组化结果进行定量分析,通过MoticImagesAdvanced彩色图形处理分析系统,测定免疫反应产物p38丝裂素活化蛋白激酶的灰度值,测定结果扣除背底及阴性值,免疫组化产物染色越深,灰度值就越小,抗原物质的含量就越高,表达强度越高。采用免疫组化方法检测各组大鼠背根节内p38丝裂素活化蛋白激酶表达,化学比色法测定血清丙二醛含量。③计量资料差异比较采用t检验。结果:整个观察过程中,正常对照组无动物死亡,加味补肝汤组死亡3只,牛磺酸组、模型组各死亡2只,最终进入结果分析正常对照组10只,加味补肝汤组7只,牛磺酸组和模型组各8只。①大鼠背根节内p38丝裂素活化蛋白激酶表达强度及血清丙二醛水平:模型组明显高于正常对照组(P<0.01),加味补肝汤及牛磺酸组低于模型组(P<0.05～0.01)。②正常对照组未见或者及少量可见p38阳性表达,模型组、牛磺酸组、加味补肝汤组可见p38阳性细胞,以模型组阳性表达细胞多且着色深。结论:中药加味补肝汤具有抗氧化损伤、明显保护链脲佐菌素致糖尿病周围神经病变大鼠背根节的作用,可能与其能抑制p38丝裂素活化蛋白激酶通路、抗脂质过氧化反应有关。