慢性染铅大鼠血清SOD、MDA的时间效应研究

目的研究慢性染铅大鼠血铅与血清SOD、MDA的时间变化效应,探讨SOD、MDA在铅中毒中的变化.方法SOD活性测定采用亚硝酸盐显色法,MDA含量测定采用硫代巴比妥(TBA)法.结果低剂量染铅大鼠血清SOD活力在60天以后低于对照组(P＜0.05),高剂量染铅组SOD活力30天以后明显低于对照组(P＜0.05).高剂量染铅组MDA含量30天以后明显高于对照组(P＜0.05).结论慢性染铅过程中,SOD活性随染铅时间延长逐渐降低,MDA含量随染铅时间延长逐渐增加.     

慢性染砷对大鼠大脑皮层组织细胞DNA损伤及细胞凋亡的影响

目的:通过单细胞凝胶电泳(SCGE)和免疫组织化学的方法探讨慢性染砷对大鼠大脑皮层组织细胞的影响及机制.方法:60只3周龄Wistar大鼠随机分为低剂量染砷组(A1)、高剂量染砷组(A2)和对照组(C),分别自由饮用10.0 mg/L、40.0 mg/L的三氧化二砷水溶液和自来水,喂养6个月后处死大鼠,取新鲜的大脑皮层进行SCGE实验,检测各组大脑皮层凋亡蛋白Bax的表达.结果:SCGE实验提示,染砷组大脑皮层细胞DNA损伤明显高于对照组,P＜0.01.凋亡蛋白Bax在3组均有表达,随着染毒剂量的增加Bax表达增强,A2组与C组比较P＜0.01.结论:慢性染砷可引起大鼠大脑皮层组织细胞DNA损伤和诱导细胞凋亡.     

砷对大鼠皮肤抗氧化系统影响的实验研究

目的:通过亚慢性实验,探讨砷中毒的皮肤损害机理,研究砷对大鼠皮肤脂质过氧化(LP)水平的影响.方法:SPF级大鼠40只,按体重随机分成正常对照组(C)、低剂量组(L)、中剂量组(M)和高剂量组(H)4组,分别自由饮用蒸馏水、12.5 mg/L、25 mg/L和50 mg/L的亚砷酸钠水溶液,于3个月后取材,检测皮肤超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力和丙二醛(MDA)含量.结果:随着染砷剂量的增加,低、中、高剂量组3种染毒模式于3个月后均引起皮肤SOD、GSH-Px活性显著降低(P＜0.05);而MDA含量则显著升高(P＜0.05).结论:不同剂量的砷可引起大鼠皮肤组织发生脂质过氧化,脂质过氧化可能是砷致皮肤损害的机制之一.     

三氧化二砷对体外培养大鼠软骨细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对体外培养大鼠软骨细胞活力、增殖和凋亡的影响.方法 采用细胞培养的方法,原代培养1～3天Wistar大鼠的关节软骨细胞,取第3代细胞进行实验,按染砷剂量不同分为0(对照)、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 μmol/L组.采用细胞增殖与毒性检测方法(CCK-8法),在染砷24、48、72 h测定细胞活力变化;流式细胞仪检测砷对软骨细胞周期及凋亡的影响.结果 与对照组相比,各浓度染砷大鼠软骨细胞(除0.5 μmol/L 24 h无统计学意义)活力均被抑制(P＜0.01);流式细胞仪分析结果显示,As2O3将大鼠软骨细胞周期阻滞于G2期(P＜0.05),使细胞凋亡率明显增加(P＜0.05).结论 As2O3可以抑制体外培养大鼠软骨细胞的增殖,促进细胞凋亡.     

砷中毒大鼠大脑皮层乙酰胆碱酯酶活性及其行为学变化

脑中化学物质的稳定性影响着正常人的思维、学习和行为变化,所以砷对脑发育的影响不容忽视.据Biswas[1]报道,在全身各器官中脑砷的浓度最低.但仍有部分砷通过脑脊液、血液进入脑实质,产生脑损伤.本研究通过测定不同剂量染砷大鼠大脑皮层乙酰胆碱酯酶(AChE)的活性,及其行为学变化,揭示砷中毒与大脑皮层AChE活性和行为学变化之间的关系,同时为阐明砷对脑发育的影响及砷的神经毒性机制提供依据.     

铅对大鼠肾脏SOD活性和MDA含量影响的研究

目的：研究慢性染铅对大鼠肾脏SOD活力、MDA含量的影响，探讨SOD、MDA在铅中毒中的变化。方法：SOD含量采用亚硝酸盐显色法，MDA测定采用硫代巴比妥酸（TBA）法。结果：低剂量染铅大鼠肾脏SOD活性在30天以后低于对照组（P＜0.05)，高剂量染铅组SODI知性14天后明显低于对照组（P＜0。05）。高剂量染铅组大鼠脏MDA含量在30天后明显高于对照组（P＜0。05）。低剂量组60天后高于对照组（P＜0．05）。结论：慢性染铅过程中，肾脏SOD活性随染铅时间延长逐渐降低，MDA含量随染铅时间延长逐渐增加。     

用单细胞凝胶电泳法研究慢性染砷对子代大鼠海马DNA的影响

目的：以单细胞凝胶电泳法（SCGE）研究慢性染砷对子代大鼠海马神经DNA的影响.方法：从妊娠期前2周开始,用不同剂量的含砷水和自来水分别饲种鼠及其子代大鼠.子鼠染砷7个月后（从娩出后计算）取子鼠的海马组织制备单细胞悬液,进行SCGE实验.结果：长期慢性染砷对子代大鼠海马组织DNA具有显著的损伤作用,长期高剂量染砷损伤主要以中等程度损伤为主,低剂量染砷损伤以低度损伤为主,统计分析结果提示,高染砷组相对于对照组差异显著（P〈0.01）.结论：通过SCGE实验,观察到慢性染砷可引起海马组织的细胞DNA损伤或损伤易感性增加.     

燃煤型氟中毒对大鼠睾丸组织氧化应激效应的影响

目的 研究燃煤型氟中毒对大鼠睾丸组织氧化效应的影响,探讨燃煤型氟中毒的生殖毒害机制.方法 将40只雄性SD大鼠随机分为对照组、低氟组、中氟组、高氟组4组,每组10只.各染氟组喂饲含不同比例的燃煤型氟中毒病区煤烘玉米的饲料,构建燃煤型氟中毒动物模型.分别于120、180 d分批处死,各时间点每组处死大鼠数为5只.采用HE染色,光镜下观察睾丸组织病理学改变;制备睾丸组织匀浆,检测睾丸组织中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶( SOD)、总一氧化氮合酶(T-NOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性;氟离子选择电极法检测大鼠尿氟含量及睾丸组织氟含量.结果 成功建立大鼠氟中毒模型.各染氟组大鼠睾丸组织氟含量均明显升高(P均＜0.01),睾丸生精小管均发生不同程度的损害.120d和180 d时,各染氟组大鼠睾丸组织T-NOS、iNOS活性和MDA含量均明显升高(P＜0.05或P＜0.01),且随染氟剂量增加而升高;120d和180 d时,各染氟组大鼠睾丸SOD活性较对照组明显降低(P＜0.05或P＜0.01).结论 燃煤型氟中毒可导致大鼠睾丸内氧化系统与抗氧化系统失衡,生殖细胞受损.氧化应激损伤在燃煤型氟中毒所致的雄性大鼠生殖毒性中可能发挥重要作用.     

不同价态砷染毒对大鼠丙酮酸激酶活力的影响

目的 探讨不同价态及剂量砷染毒对大鼠血清丙酮酸激酶(pyruvate kinase, PK)的影响,为阐明砷毒作用机制提供依据.方法 Wistar大鼠70只,采用喂饲法染毒,暴露于不同价态无机砷.动物随机分成7组,每组10只,雌雄各半:即正常对照组(C);亚砷酸钠低 (AL)、中 (AM)、高 (AH) 剂量组;砷酸钠低 (BL)、中 (BM)、高 (BH) 剂量组.大鼠饲养至第3个月末,用颈椎脱臼法处死.应用酶联免疫分析法(ELISA)测定大鼠在不同价态及剂量砷染毒后血清PK活性变化.结果 血清PK活性在亚砷酸钠和砷酸钠高剂量组中的比较差异有统计学意义(P<0.05),在亚砷酸钠和砷酸钠中剂量组与低剂量组比较时差异均无统计学意义(P均>0.05),在亚砷酸钠和砷酸钠与对照组比较时差异均有统计学意义(P均<0.05).结论 不同价态高剂量无机砷染毒,可导致PK活性降低,并且机制不完全相同.PK活性的改变可能是影响砷代谢及其毒作用的重要环节,低剂量染砷未见PK活性的改变.     

全身麻醉对大鼠中枢神经递质的影响

目的 探讨全身麻醉时大鼠中枢神经递质水平的变化,阐明全身麻醉对中枢可能的作用机制.方法 (1)以灌胃方式给予大鼠不同剂量的丙泊酚,观测大鼠活动和行为变化及大鼠入睡率、睡眠潜伏期、睡眠持续时间等指标,以选择合适的丙泊酚口服剂量.(2)32只SD大鼠随机分为对照组、异氟烷组、七氟烷组和丙泊酚组,麻醉状态稳定20 min后处死大鼠,取脑组织,采用酶联免疫分析法分别检测大鼠的大脑皮层、下丘脑和海马组织中乙酰胆碱(Ach)、去甲肾上腺素(NE)、γ-氨基丁酸(GABA)及谷氨酸(Glu)含量.结果 (1)在150～250 mg/kg剂量范围内,随着剂量的增加,丙泊酚对大鼠的镇静作用逐步加强(P＜0.01),再增加剂量,其镇静作用增加有限,但不良反应相应增加,甚至出现大鼠死亡;(2)与对照组比较,各麻醉组大鼠中枢神经递质Ach、NE、GABA、Glu含量均有降低(除七氟烷组下丘脑组织中GABA值略有升高,P＞0.05),尤以大脑皮层和海马组织中递质降低最为显著(P＜0.01).在3个麻醉组中,脑内不同部位神经递质降低幅度虽有不同,但仅在海马组织中,丙泊酚组Glu值大于异氟烷组和七氟烷组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 3种全身麻醉对中枢不同区域内Ach、NE、GABA、Glu神经递质均有影响,以大脑皮层和海马组织中的神经递质含量降低为主.     

大鼠亚急性染砷及预防性排砷的实验研究

目的 用植物排砷制剂对亚急性染砷大鼠进行排砷处理,观察其血砷、尿砷变化及对机体的影响.方法 取大鼠40只,随机分成正常对照组、低剂量组、高剂量组和模型组,每组10只.低剂量组、高剂量组、模型组每天腹腔注射亚砷酸钠溶液（As 2 mg/kg）,每周连续注射5 d,共4周.在染砷期间和停止染砷2周内,低剂量组、高剂量组通过喂饲法进行排砷处理.观察大鼠的中毒症状,每周末称体重并收集动物6 h尿液测定尿砷含量,染砷2周、染砷4周及停砷2周时采集动物眼眶血测定血砷含量,停砷2周时取动物血测定Hb、Cr、BUN和ALT,称量肝肾重量并计算脏器系数.结果 染砷后动物血砷明显升高,模型组的上升率比低剂量组和高剂量组大;停砷后血砷缓慢下降,低剂量组和高剂量组下降率均比模型组大,其中高剂量组与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.高剂量组尿砷含量高于低剂量组及模型组,在染砷4周高剂量组与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.01）.Hb、Cr、BUN、ALT及肝肾脏器系数无明显改变.结论 植物排砷制剂有促进砷排泄的作用.该剂量条件下的亚急性染砷,大鼠机体的损害作用不明显,利于排砷效果观察.     

亚砷酸钠和砷酸钠染毒对大鼠二氢尿嘧啶脱氢酶含量的影响

目的 分析亚砷酸钠和砷酸钠染毒对大鼠二氢尿嘧啶脱氢酶(NAD)含量的影响,寻找不同价态砷代谢的差异,为进一步阐明砷毒作用机制提供依据.方法 70只Wistar大鼠随机分成7组,第1组为正常对照组,饮用去离子水;第2～4组为染毒三价砷(iAS3+)的高、中、低剂量组,分别给予20.0、6.7、2.2 mg/kg体质量亚砷酸钠溶液;第5～7组为染毒五价砷(iAS5+)高、中、低剂量组,分别给予20.0、6.7、2.2 mg/kg体质量砷酸钠溶液.各组大鼠于染毒第3个月末处死,采集血样,并应用酶联免疫分析法(ELISA)测定大鼠血清NAD含量的变化. 结果 与对照组比较,砷酸钠高剂量组的NAD含量低于对照组(P＜0.05),其余各组与对照组比较差异均无统计学意义.亚砷酸钠各剂量组间比较,高、中剂量组NAD含量均低于低剂量组(P＜0.05).砷酸钠各剂量组间比较,高剂量组的NAD含量均低于中剂量组和低剂量组(P＜0.05).亚砷酸钠和砷酸钠对应剂量组比较,亚砷酸钠高剂量组的NAD含量高于砷酸钠高剂量组(P＜0.05),而亚砷酸钠中剂量组的NAD含量低于砷酸钠中剂量组(P＜0.05).结论 砷酸钠在高、中剂量染毒条件下分别表现为对NAD活性的抑制和促进,而亚砷酸钠对NAD活性的影响不明显,对NAD活性的影响不同可能与砷酸钠和亚砷酸钠在体内氧化还原代谢过程不同有关.     

燃煤氟对雌性大鼠下丘脑、垂体、卵巢脏器系数及组织TGF-β1表达的影响

目的 观察燃煤氟中毒模型雌鼠下丘脑、垂体、卵巢脏器系数变化及组织转化生长因子β1(TGF-β1)表达情况,探讨氟对雌性大鼠性腺轴功能影响的可能机制。方法 120只雌性SD大鼠随机均分为对照组(正常饲料)、低氟组(25 mg/kg)、中氟组(50 mg/kg)及高氟组(100 mg/kg),连续喂养5个月,各组分别于第3、4及5个月处死10只大鼠,分离大鼠下丘脑、垂体和卵巢组织称重,采用氟离子选择电极法测定雌鼠尿氟和骨氟含量,观察氟斑牙的情况,计算各组织的脏器系数;采用免疫组化法测定雌鼠性腺轴组织中TGF-β1表达水平。结果 各染氟组的尿氟、骨氟含量高于对照组(P<0.05),并随染氟剂量的增加和时间延长呈上升趋势(P<0.05);除对照组外,各染氟组均有不同程度的氟斑牙,且检出率随染氟剂量的增加而增加(P<0.05);各染氟组雌性大鼠下丘脑、垂体组织脏器系数于各染氟时间段差异无统计学意义(P>0.05),长期氟暴露条件下高剂量组雌性大鼠卵巢脏器系数高于对照组(P<0.05);长期染毒情况下雌鼠下丘脑组织中TGF-β1表达随剂量增加呈先降后升趋势(P<...     

砷中毒大鼠大脑皮层乙酰胆碱酯酶活性及其行为学变化

脑中化学物质的稳定性影响着正常人的思维、学习和行为变化 ,所以砷对脑发育的影响不容忽视。据Ｂｉｓｗａｓ[1 ] 报道 ,在全身各器官中脑砷的浓度最低。但仍有部分砷通过脑脊液、血液进入脑实质 ,产生脑损伤。本研究通过测定不同剂量染砷大鼠大脑皮层乙酰胆碱酯酶 (ＡＣｈＥ)的活性 ,及其行为学变化 ,揭示砷中毒与大脑皮层ＡＣｈＥ活性和行为学变化之间的关系 ,同时为阐明砷对脑发育的影响及砷的神经毒性机制提供依据。材料与方法一、动物与药品　选用刚断乳Ｗｉｓｔａｒ大鼠 32只 ,体重 80～1 0 0ｇ ,由天津医学实验动物中心提供。Ａｓ2 …     

乙酰甲胺磷对雄性大鼠睾丸组织抗氧化能力的影响

目的 探讨乙酰甲胺磷对雄性大鼠睾丸组织抗氧化能力的影响.方法 24只健康成年SD雄性大鼠,随机分为4组,每组6只.阴性对照组(蒸馏水)和3个不同剂量乙酰甲胺磷染毒组(11.81、23.63、47.25 mg/kg·bw),采用经口灌胃染毒方式,共染毒60d.检测睾丸组织氧化损伤指标SOD和GSH-Px活性、GSH和MDA的含量.结果 乙酰甲胺磷各染毒组睾丸组织匀浆中SOD和GSH-Px活力均呈现剂量反应关系,其中高剂量染毒组低于阴性对照组(P＜0.05).结论 乙酰甲胺磷在47.25 mg/kg剂量下,对雄性大鼠睾丸抗氧化功能有一定的抑制作用.     

不同价态无机砷染毒大鼠尿液砷形态代谢产物构成比分析研究

目的 通过不同价态染砷大鼠尿液中砷形态含量及比例的分析,寻找不同价态砷代谢和转轨间的差异,为进一步探讨砷代谢产物与砷中毒作用机制间的关系提供基础数据.方法 70只大鼠被随机分为7组,即对照组;亚砷酸钠高、中、低剂量组;砷酸钠高、中、低剂量组,70只大鼠分别经口摄入去离子水、亚砷酸钠和砷酸钠1个月后,采集各组大鼠尿样.采用高效液相色谱-氢化物发生原子荧光光谱法测定各组染砷大鼠尿液中砷形态的含量,并比较不同价态染砷组的构成比.结果 中剂量组,亚砷酸钠染毒大鼠尿液中iAs3+∶iAs5+∶DMA为36.1%∶3.0%∶60.8%;而砷酸钠染毒大鼠尿液中iAs3+∶iAs5+∶DMA为55.9%∶0.8%∶43.4%;两者差异有统计学意义(χ2=8.463,P<0.05).高、低剂量组比较差异无统计学意义.结论 不同价态无机砷的体内代谢和转轨不完全相同.     

维生素E拮抗苯并[a]芘对雄性大鼠的肝脏毒性

目的 探讨维生素E(VE)对苯并[a]芘(B[a]P)诱导的雄性SD大鼠肝损害的作用及其机制.方法 60只4周龄的雄性SD大鼠随机分为空白对照组(未处理)、溶剂对照组(植物油)、单独染B[a]P组(5mg/kg)、VE低剂量组(10 mg/kg VE+5 mg/kg B[a]P)、VE中剂量组(50 mg/kg VE+5 mg/kg B[a]P)、VE高剂量组(100 mg/kg VE+5 mg/kg B[a]P)6组,每组大鼠10只.连续灌胃30 d后,测定大鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)的活性;测定肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性和8-羟脱氧鸟苷(8-OHdG)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;H-E染色观察大鼠肝脏组织形态结构.结果 与对照组相比,单独染B[a]P组大鼠肝脏组织结构破坏,血清ALT和AST活性增加(P＜0.05),8-OHdG、MDA和TNF-α含量升高,SOD、GSH-Px活性下降(P＜0.05).与单独染B[a]P组相比,VE各剂量组大鼠的肝脏组织损伤呈现不同程度的减轻,AST、ALT活性下降,8-OHdG、MDA、TNF-α含量降低,SOD、GSH-Px活性明显改善,差异均具有统计学意义(P＜0.05);该效应具有剂量依赖性.结论 VE能拮抗B[a]P对雄性SD大鼠的肝脏毒性,起到肝脏保护作用.     

染砷大鼠脑砷代谢研究

目的研究染砷大鼠脑中砷形态代谢产物、代谢酶含量水平及其相关性,初步探讨砷代谢与砷毒性机制关联性。方法雄性清洁级Wistar大鼠20只,分成对照组及砷酸钠低、中、高剂量组4组。各组大鼠砷酸钠经口染毒3个月后处死并摘取脑组织。采用高效液相色谱-氢化物发生原子荧光光谱法(HPLC-HGAFS)测定并比较砷酸钠各剂量染毒组大鼠脑组织中砷形态代谢产物[i As(Ⅲ)、i As(Ⅴ)、总砷(Total As)含量以及一甲基化率(PMI)、二甲基化率(SMI)]及代谢酶GSSG含量、甲基转移酶活力、GST活力、GSH含量;通过试剂盒法分析各组大鼠脑中甲基转移酶的活力,并探讨大鼠脑中砷形态代谢产物与代谢酶的相关性。结果染毒组大鼠随染毒剂量和时间的增加,出现生长发育迟缓及狂躁、相互撕咬等现象;砷染毒剂量升高会促进脑中i As(Ⅲ)和总砷含量增加;同时砷染毒组脑组织中GSSG含量有所升高而GSH含量有所下降;随染毒剂量升高,GST活力也随之呈现升高趋势;与对照组比较,砷酸钠染毒各剂量组大鼠脑中PMI值均较低,SMI值有所升高(P<0.05)。砷酸钠染毒组甲基转移酶活力与i As(Ⅲ)%含量呈负相关(r=-0.714,P<0.05),与PMI和SMI均呈正相关(rPMI=0.714,rSMI=0.805,P<0.05);砷酸钠染毒组GSH含量与i As(Ⅲ)%含量呈正相关(r=0.855,P<0.05),与PMI和SMI均呈负相关(rPMI=-0.855,rSMI=-0.858,P<0.05)。结论低剂量砷酸钠染毒会打破脑组织中GSSG与GSH的动态平衡,造成脑组织的氧化损伤,砷酸钠染毒后其代谢产物在脑组织中可能具有一定的蓄积能力。     

三氧化二砷对大鼠血细胞参数影响的实验分析

目的：分析三氧化二砷（AS2O3）对实验大鼠血细胞15项参数的影响,为研究砷对血液系统的影响及其作用机制提供参考依据。方法：AS2O3经口染毒,建立砷中毒动物模型,采用F-820半自动血细胞分析仪测定实验动物血细胞参数的变化。结果：（1）红细胞参数：红细胞计数（RBC）、血红蛋白（HGB）、红细胞压积（HCT）显著降低,平均红细胞血红蛋白含量（MCH）显著升高,差异具有统计学意义（P〈0.05）;平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）随剂量增加而升高,其中高剂量组差异具有统计学意义（P〈0.05）;（2）白细胞参数：低、中剂量组白细胞计数（WBC）显著增高,差异具有统计学意义（P〈0.05）,但随染砷剂量的增加而呈下降趋势,中剂量组淋巴细胞百分数（W-SCR）显著降低,差异具有统计学意义（P〈0.01）;中性粒细胞百分数（W-LCR）出现低、中剂量组随剂量增加而显著升高,差异具有统计学意义（P〈0.01）,但高剂量组有降低的现象;淋巴细胞绝对值（W-SCC）及中性粒细胞绝对值（W-LCC）出现低剂量显著升高而随染砷剂量的增加而逐渐降低的趋势;（3）血小板参数：各AS2O3组血小板（PLT）呈下降趋势,其中以中、高剂量组下降显著,差异具有统计学意义（P〈0．05）;而血小板分布宽度（PDW）、平均血小板体积（MPV）指标呈升高趋势,其中低、中剂量组显著升高,差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论：血液系统可能是砷毒性作用较为敏感的靶系统,AS2O3可对实验大鼠血液系统产生一定的损害作用,引起火鼠血液系统红细胞、白细胞、血小板等指标发生改变。     

牛膝多糖对脑外伤大鼠脑组织中SOD与MDA影响的实验研究

目的:探讨牛膝多糖对实验性脑外伤大鼠氧化应激指标SOD与MDA的影响,以寻求治疗和预防脑外伤后继发性改变的新方法.方法:建立脑外伤大鼠模型,分别在外伤后不同时相观察正常组,模型组,牛膝多糖高、中、低剂量治疗组大鼠脑组织中SOD与MDA的变化.结果:在不同时相牛膝多糖治疗组大鼠脑组织MDA活性显著低于模型组(P＜0.05),而SOD活性则显著高于模型组.高、中剂量治疗组与低剂量治疗组相比有显著性差异(P＜0.05).结论:牛膝多糖能够提高SOD活性,降低MDA活性,提高大鼠的抗氧化能力,从而延缓和防治脑外伤发展,故可用于治疗和预防脑外伤后的二次损伤和多次损伤.