激光捕获显微切割技术及其在肿瘤研究中的应用

激光捕获显微切割技术是近几年才发展起来的技术，国内尚无有关这方面完整的文献报道，本文简要综述其一般情况及在肿瘤学研究中的应用。     

激光捕获显微切割技术及其在肿瘤研究中的应用

激光捕获显微切割技术是近几年才发展起来的技术,国内尚无有关这方面完整的文献报道,本文简要综述其一般情况及在肿瘤学研究中的应用.     

激光捕获显微切割技术应用研究新进展

对疾病发生过程中的组织损害要进行分子水平分析,首要步骤就是纯净目标细胞的分离。近年发展起来的激光捕获显微切割(1aser capture microdissection,LCM)技术可以在显微镜直视下快速、准确地获取所需的单一细胞亚群,甚至单个细胞,从而成功解决了组织中细胞异质性问题。本文介绍了LCM技术的原理及其优缺点,并对其在DNA分析和基因表达分析两个方面的应用研究新进展进行综述,同时对LCM技术的发展和完善提出了可能的方向。     

联合应用激光捕获显微切割技术及乙酰化稳定同位素标记定量技术在结直肠癌蛋白质组学研究中的价值

目的应用蛋白质组学技术,建立结直肠癌蛋白质组差异表达谱,筛选结直肠癌发生发展相关差异蛋白质。方法应用激光捕获显微切割技术,获取20例结直肠腺癌及配对的正常黏膜、20例绒毛状腺瘤、8例结直肠癌肝转移灶的靶细胞;然后应用基于乙酰化稳定同位素标记的定量蛋白质组学策略寻找差异蛋白。结果获得具有定量信息的高可信度蛋白873个。其中腺癌与正常黏膜、腺瘤及肝转移灶之间差异显著的蛋白质(定量比值≥2或≤0.5)分别为137、119和77个。结直肠癌与正常黏膜之间的差异蛋白在定位上几乎分布于细胞的各个部位。结论联合应用激光捕获显微切割技术及乙酰化稳定同位素标记定量技术进行结直肠癌蛋白质组学研究,发现的差异蛋白功能上参与多种生物学过程,表明本研究所采取的技术策略有很好的蛋白鉴定覆盖率,可成为研究肿瘤蛋白质组学的有效策略。     

LCM和TMAs技术在肿瘤分子病理学研究中的意义和应用

整个人类基因组序列的破译提供了人类基因最基本的结构信息 ,同时一些功能性基因组技术的出现 ,如ｃＤＮＡ微阵列技术 ,蛋白质组学技术的产生 ,使人们可以同时观察多个基因的表达信息。但是 ,目前深入了解肿瘤的发生发展过程 ,还面临着许多困难 ,如在同时观察大量组织标本中的基因表达情况 ,即高通量的基因原位表达信息 ,以及如何降低肿瘤组织的异质性问题等方面 ,仍然存在不少问题。为了解决这些难题 ,许多新的技术应运而生。目前在肿瘤分子病理学中最为重要的新技术应用当属激光捕获显微切割技术 (ｌａｓｅｒｃａｐｔｕｒｅｍｉｃｒｏｄｉ…     

激光捕获显微切割和基因芯片技术用于肿瘤实质细胞转录组的构建

目的：联合应用激光捕获显微切割和基因芯片技术构建纯化肿瘤实质细胞转录组。方法：应用激光捕获显微切割技术从肿瘤组织冰冻切片中获取纯化肿瘤实质细胞，提取RNA并对其进行线性扩增得到aRNA，合成cRNA探针后与全基因组基因芯片Affymetrix HG—U133．Plus 2．0 Gene—Chip杂交构建全基因组表达谱。结果：从5例结肠癌组织样本中各获取了3mm。细胞，抽提获得RNA118．4～300．3ng，混合后取100ng进行线性扩增获得aRNA 7ug。基因芯片各项质控标准符合基因表达谱芯片操作指南，共有18205条转录本表达，代表15276个基因。结论：联合应用激光捕获显微切割和全基因组基因芯片技术可构建纯化肿瘤实质细胞转录组。     

激光捕获显微切割技术应用于子宫内膜癌相关基因的研究

目的：摸索一条可行的技术路线，运用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection，LCM)获取无间质混杂的人正常子宫内膜腺管上皮细胞与子宫内膜癌细胞，用于进行子宫内膜癌相关基因差异表达的研究。方法：采用LCM技术分别从正常子宫内膜组织及子宫内膜癌组织冰冻切片中捕获子宫内膜腺管上皮细胞及子宫内膜癌细胞，提取微量RNA，并对微量RNA进行纯化及浓缩，用RT—PCR验证捕获细胞RNA中β-actin基因表达水平。结果：分别从冰冻切片中捕获子宫内膜腺管上皮细胞及子宫内膜癌细胞各50000 Shootings。对照实验Ⅰ、Ⅱ证实经LCM后RNA完整性较好。确定了LCM Shooting次数与可获得RNA量间对应关系。捕获细胞所提取的RNA中β-actin基因表达完整。结论：通过LCM技术可以从冰冻切片中捕获单一类型的目的细胞，此过程不会造成细胞RNA明显降解，可以应用于下游的实验研究。     

激光显微切割与蛋白质组学技术在口腔癌中的应用

目的 在蛋白水平研究口腔癌的疾病特征,以利于早期诊断及治疗.方法 通过激光显微切割获取单纯的细胞,再用蛋白质组学技术研究分析这些细胞所表达的蛋白质.结果 许多蛋白质在质和量上的变化,与口腔癌的发生、发展有密切关系.结论 激光显微切割与蛋白质组学技术的应用,将促进口腔癌研究的进一步深入.     

激光捕获显微切割技术应用于子宫内膜癌相关基因的研究

目的:摸索一条可行的技术路线,运用激光捕获显微切割技术(lasercapturemicrodissection,LCM)获取无间质混杂的人正常子宫内膜腺管上皮细胞与子宫内膜癌细胞,用于进行子宫内膜癌相关基因差异表达的研究。方法:采用LCM技术分别从正常子宫内膜组织及子宫内膜癌组织冰冻切片中捕获子宫内膜腺管上皮细胞及子宫内膜癌细胞,提取微量RNA,并对微量RNA进行纯化及浓缩,用RTPCR验证捕获细胞RNA中β-actin基因表达水平。结果:分别从冰冻切片中捕获子宫内膜腺管上皮细胞及子宫内膜癌细胞各50000Shootings。对照实验Ⅰ、Ⅱ证实经LCM后RNA完整性较好。确定了LCMShooting次数与可获得RNA量间对应关系。捕获细胞所提取的RNA中βactin基因表达完整。结论:通过LCM技术可以从冰冻切片中捕获单一类型的目的细胞,此过程不会造成细胞RNA明显降解,可以应用于下游的实验研究。     

激光捕获显微切割结合RNA线性扩增技术在膀胱移行细胞癌相关基因研究中的应用

目的当对有间质细胞混杂的膀胱移行上皮细胞与膀胱移行细胞癌进行基因差异表达分析时,激光捕获显微切割技术(lasercap-turemicrodissection,LCM)是不可缺少的,然而从LCM所得的细胞中获取足够RNA量相当困难。本文首次将LCM与RNA线性扩增结合用于膀胱癌相关基因研究,目的是确定一条切实可行的技术路线,将膀胱移行上皮细胞从膀胱粘膜中分离出来,将膀胱癌细胞从肿瘤间质细胞中分离出来,并对其进行RNA体外线性扩增,以备进一步研究。方法采用LCM技术分别从正常膀胱粘膜及膀胱癌组织冰冻切片中获取膀胱移行上皮细胞及膀胱癌细胞,提取RNA,并对微量RNA进行体外线性扩增。然后用RT-PCR验证扩增前、后RNA中β-actin基因表达水平。结果对照实验I证实经LCM后RNA完整性较好;经对照实验Ⅱ初步确定设定条件下LCMshooting次数与可获得RNA量间对应关系。从膀胱粘膜种捕获膀胱移行上皮细胞25万shootings;从膀胱癌组织中获取癌细胞20万shootings。产物RNA扩增后获得片段大小为0.5-2.5kh的aRNA,且β-actin基因表达表达完整。结论LCM结合RNA体外线性扩增技术能成功地获取较为单一的研究目的细胞,扩增后RNA完整性较好,能用于进一步研究中。     

蛋白质组学技术与肿瘤标志物研究

肿瘤标志物一般指肿瘤组织及细胞所产生的异常表达的活性物质包括激素、酶、特异性和非特异性的糖蛋白或糖脂等 ,但随肿瘤分子生物学研究的进展 ,肿瘤标志物的范围进一步扩展。肿瘤标志物最初的研究可追溯到 1 848年 ,英国医生 Bencejones发现骨髓瘤患者尿中的一种球蛋白可以作为诊断此病的标志 ,后来将此蛋白称为本琼氏蛋白以纪念此人的贡献。但此后很长一段时间 ,肿瘤标志物研究几乎处于停滞的阶段。直到 1 975年单克隆抗体技术问世之后 ,研究者得以从肿瘤抗原的角度用微量抗原制备大量的抗体来寻找特异性的标志物。后来采用免疫检测技术…     

免疫组织化学双标记结合激光显微切割技术在霍奇金淋巴瘤诊断中的应用

 目的 探讨IHC双标记技术结合LCM技术在研究HL肿瘤细胞与背景细胞中的应用。 方法 选取10例HL标本,10%中性福尔马林固定,石蜡包埋组织,采用不同的抗原修复方法,通过IHC 双标记与LCM技术获得单一的肿瘤细胞和背景细胞。 结果 在10例HL标本中通过IHC双标记与LCM技术获得单一的肿瘤细胞和背景细胞,二者表现出不同的 颜色以及表达不同的CD分子。 结论 通过IHC双标记与LCM技术获得单一的肿瘤细胞和背景细胞,IHC双标记在HL研究中起着区分不 同细胞的作用。     

激光捕获显微切割结合RNA线性扩增技术在膀胱移行细胞癌相关基因研究中的应用(英文)

目的当对有间质细胞混杂的膀胱移行上皮细胞与膀胱移行细胞癌进行基因差异表达分析时,激光捕获显微切割技术(laser cap-ture microdissection,LCM)是不可缺少的,然而从 LCM 所得的细胞中获取足够 RNA 量相当困难。本文首次将 LCM 与 RNA 线性扩增结合用于膀胱癌相关基因研究,目的是确定一条切实可行的技术路线,将膀胱移行上皮细胞从膀胱粘膜中分离出来,将膀胱癌细胞从肿瘤间质细胞中分离出来,并对其进行 RNA 体外线性扩增,以备进一步研究。方法采用 LCM 技术分别从正常膀胱粘膜及膀胱癌组织冰冻切片中获取膀胱移行上皮细胞及膀胱癌细胞,提取 RNA,并对微量RNA 进行体外线性扩增。然后用 RT-PCR 验证扩增前、后 RNA 中β-actin 基因表达水平。结果对照实验Ⅰ证实经 LCM 后 RNA 完整性较好;经对照实验Ⅱ初步确定设定条件下 LCM shooting 次数与可获得 RNA 量间对应关系。从膀胱粘膜种捕获膀胱移行上皮细胞25万 shootings;从膀胱癌组织中获取癌细胞20万 shootings。产物 RNA 扩增后获得片段大小为0.5～2.5kb 的 aRNA,且β-actin 基因表达表达完整。结论 LCM 结合 RNA 体外线性扩增技术能成功地获取较为单一的研究目的细胞,扩增后 RNA 完整性较好,能用于进一步研究中。     

利用显微切割技术构建喉癌差异基因组表达谱

[目的]通过激光捕获显微切割技术（LCM）构建喉部纯化组织差异基因表达谱,筛选与进展期喉癌相关的候选靶基因。[方法]采用激光捕获显微切割技术纯化分离8例声门型喉癌组织标本中的癌细胞及对应癌旁组织的黏膜上皮细胞,结合HGU133.Plus2.0芯片技术,构建16例喉部纯化组织标本差异基因组表达谱,筛选出进展期喉癌相关靶基因;采用QRT-PCR检测特异性的候选靶基因的表达情况。[结果]将不同分期的喉癌组与癌旁正常上皮组基因表达谱分别进行组内、组间比较,共筛选出与喉癌临床进展相关的候选靶基因761个;对部分特异性基因如KRT19、KRT23基因进行mRNA水平的检测,其结果与基因表达谱的结果具有一致性。[结论]利用激光捕获显微切割结合寡核苷酸芯片技术构建喉癌差异基因表达谱,可准确、高效地筛选出与喉癌临床进展相关的候选靶基因。     

微阵列技术在肿瘤研究中的应用

微阵列技术 (ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ)又常称为微排列或微点阵 ,目前新兴的ＤＮＡ芯片 (ＤＮＡｃｈｉｐ)即是微阵列中最主要的一种 ,微阵列与ＤＮＡ芯片二者的名词常混用。微阵列根据其在固相载体上排列的探针不同 ,可大致分为两类 :一类是ｃＤＮＡ或寡核苷酸微阵列 (ｃＤＮＡｍｉｃｒｏａｒｒａｙ) ;另一类是组织微阵列 (ｔｉｓｓｕｅｍｉｃｒｏａｒｒａｙ)。肿瘤的发生、发展涉及多个基因的改变 ,由于技术上的不足和缺陷 ,在肿瘤的基因表达和基因间相互作用的研究上 ,不但费时费力 ,而且事倍功半 ,长期停留在零敲碎打的水平上。自 1995年微…     

二甲双胍在肿瘤治疗基础研究中的进展

二甲双胍是治疗2型糖尿病的一线药物。临床流行病学研究发现在2型糖尿病患者中, 相较于胰岛素及其他口服降糖药物治疗组, 二甲双胍治疗组的恶性肿瘤发病率和死亡率均显著降低。同时, 基础研究证实在体外培养细胞及体内动物模型中二甲双胍可抑制多种恶性肿瘤细胞的生长。其可能的机制为调节体内胰岛素/IGF-1轴间接抑制肿瘤生长; 直接作用于肿瘤细胞并抑制其生长。这些结果提示二甲双胍具有抗肿瘤的作用, 可能成为恶性肿瘤辅助治疗的新手段之一。      

生物芯片技术及其在肿瘤研究中的应用进展

生物芯片是近几年来发展起来的一项新兴生物技术，用芯片制作的仪器具有体积小、便于携带，无污染，分析速度快、所用样品少等优点，广泛应用于基因表达分析、新基因发现、基因组文库作图、基因突变及多态性分析，疾病诊断、药物筛选，基因测序等领域，本文就其在肿瘤研究中的应用，存在的问题及发展前景作一简要综述。     

mRNA差异显示技术及其在肿瘤研究中的应用

mRNA差异显示技术是目前用于分析基因表达差异的方法，近年来发展迅速，广泛应用于肿瘤等生物学各领域。现综述mRNA差异显示技术的新发展及其在肿瘤研究中的应用。