乙型肝炎病毒前S2区缺失突变与肝癌相关性研究

目的研究肝细胞肝癌（hepatocarcinoma,HCC）患者乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）前S2区缺失突变情况。方法应用PCR法扩增HBV前S区基因,应用DNAMAN软件对所测基因进行分析。结果 23.08%（6/26）的肝癌患者发现存在preS2区的缺失突变,缺失位点为nt 3223～nt 3268,缺失长度为30～45 bp。肝癌患者缺失突变发生率显著高于HBV无症状携带者。结论 HBV preS2区的缺失突变可能与肝癌的发生密切相关,该突变的发生机制仍有待进一步研究。     

肝癌患者C型乙型肝炎病毒前S基因突变研究

目的探讨肝癌患者C型乙型肝炎病毒(HBV)前S(pre-S)基因的突变情况。方法自肝癌患者血清中提取HBV基因组DNA,扩增其pre-S基因片段并进行序列分析,用MEGA3.1和C lustalx1.8作为所测基因进行分型,并对比pre-S基因序列。结果所测样品中,C型占56.0%,B型占20.0%,B/C混合感染型占24.0%。肝癌患者C型HBV前S区普遍存在基因突变。肝癌患者C型HBV pre-S1区域以个体化的点突变为主,而pre-S2区域则存在大量的缺失突变。结论 Pre-S基因是肝癌患者C型HBV的高变区。     

原发性肝癌三维适形放疗致乙型肝炎病毒再激活相关研究

目的：探讨原发性肝癌患者中三维适形放疗（three dimensional conformal radiotherapy,3D-CRT）致乙型肝炎病毒（HBV）再激活的相关因素。方法入组56例接受3D-CRT治疗的原发性肝癌患者为研究对象,并按放疗后是否接受抗病毒治疗分为A组（抗病毒治疗组,32例）和B组（未接受抗病毒治疗组,24例）。统计HBV再激活率、HBV再激活危险因素、HBV再激活相关性肝炎、丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase, ALT）升高情况、肝功能损伤程度、放射性肝损伤（radiation-induced liver disease,RILD）发生率及转归等情况。结果3D-CRT治疗后12周,A组患者的HBV再激活率低于B组（13.64%vs 41.67%）,差异有统计学意义（P＜0.05）;两组ALT升高2倍的患者比例的差异无统计学意义（P＞0.05）;A组再激活相关性肝炎发生率低于B组（6.25% vs 25.0%）,差异有统计学意义（P＜0.05）;两组患者的肝功能损伤程度的差异无统计学意义（P＞0.05）;随访3个月时A组和B组的RILD发生率（6.25%vs 16.67%）的差异无统计学意义（P＞0.05）。B组患者中,HBV再激活患者和HBV未激活患者的Child-Pugh分级构成、HBV DNA水平的差异差异均具有统计学意义（均P＜0.05）。结论3D-CRT技术是治疗肝癌的重要方案,HBV再激活及RILD是肝癌3D-CRT治疗时较为常见的并发症,3D-CRT治疗后的抗病毒治疗可以降低HBV再激活率及HBV再激活相关性肝炎的发生率。     

整合型HBVDNA前C区突变和p53基因突变与肝细胞癌发生的关系

背景与目的:乙型肝炎病毒 (hepatitis B virus, HBV)的慢性感染是肝细胞癌 (hepatocellular carcinoma, HCC)发生的主要危险因素,但其确切的作用机理还不清楚.本研究拟探讨整合型 HBV 前 C区突变、 p53基因突变与 HCC发生的关系,以期更好地了解 HCC发生的分子机理.方法 :应用聚合酶链反应技术( PCR)和聚合酶链反应-单链构象多态 (single strand conformation polymorphism analysis of polymerase chain reaction products, PCR SSCP) 技术对 28例肝癌组织、 25例癌旁肝硬化组织、 12例肝硬化组织和 15例正常肝组织标本内的整合型 HBV DNA及其前 C区基因突变和肝细胞 p53基因突变进行检测分析.结果:( 1)正常肝组织、肝硬化组织、癌旁肝硬变组织和肝癌组织中整合 HBV DNA 阳性率分别为 6.66%、 66.67%、 96.43% 和 96.43%,正常肝组织与其它三组间阳性率差异有非常显著性( P< 0.005); (2)4组整合型 HBV DNA前 C区突变率分别为 0%、 25.00% 、 48.15% 和 70.37%, 4组间的突变率差异有显著性( P< 0.05); ( 3)肝癌组织的 p53基因突变率( 57.14%)明显高于肝硬化组( 16.67%) (P< 0.05);( 4)不同肝组织中 p53基因突变率与整合 HBV DNA 阳性率、 HBV前 C区基因突变率呈正相关.结论:在肝细胞癌的发生、发展中整合 HBV DNA及其前 C区基因突变和 p53基因突变可能起协同作用.     

青少年原发性肝癌与乙型和丙型肝炎病毒感染的相关性分析

目的探讨青少年原发性肝癌(PHC)患者中乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)及HBV和HCV混合感染率及其相互关系。方法将50例青少年PHC患者纳入观察组,将同期住院的50例其他肝病患者纳入对照组,检测两组患者血清中HBV、HCV、HBV/HCV标志物阳性率等情况。结果观察组患者血清中HBsAg、抗Hbe和HBV-DNA阳性率均显著高于对照组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者血清中HBeAg阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组和对照组患者血清中抗HCV和HCV-RNA阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);HBV(+)HCV(+)和HBV(+)HCV(-)与青少年PHC发病呈正相关性(P<0.05),HBV(-)HCV(+)与青少年PHC发病无相关性(P>0.05),HBV(-)HCV(-)与青少年PHC发病呈负相关性(P<0.05)。结论 HBV感染与青少年PHC发病有着较强的相关性,属高度危险因素。     

乙肝病毒相关的肝癌p16异常甲基化

Objective： To investigate the potential linkage between high rate of p16 methylation and hepatitis B virus （HBV） infection, methylation status of p16, HBV infection markers in serum and HBV-DNA replication level in cancerous and non-cancerous tissue of 32 cases of hepatocellular carcinomas （HCC） with HBV infection and 12 HCCs without HBV infection were examined. Methods： p16 methylation was detected with methylation-specific polymerase Chain reaction （PCR）, and HBV markers were examined with real-time PCR and immunologic method. Results： Methylation of p16 promoter was found in 31 （70.5%） of 44 cancerous tissues of HCC, 2 （16.7%） of 12 HCC without HBV infection, 29 （90.6%） of 32 HCCs with HBV infection marker, p16 methylation was detected in 5 （83.3%） of 6 HCCs positive for HBsAg and HBeAg, 17 （94.4%） of 18 HCCs positive for HBsAg and negative for HBeAg, 7/8 （87.5%） of HCCs positive for other HBV infection markers, such as HBsAB, HBcAb, HBeAb. p16 methylation products were also found in non-cancerous tissues of 4 cases of HCCs with HBV infection, not detected in non-cancerous tissues without HBV infection. HBV-DNA was detected in cancerous tissues of 29/32 （90%） HCCs with HBV infection. Surprisingly, Methylation product of p16 promoter was found in all cases （29/29） of HCCs with detectable HBV-DNA in neoplastic tissue. Conclusion： Persistent HBV infection may promote p16 hypermethylation, suggesting that HBV, via enhancing the aberrant methylation of p16, indirectly involved in development of HCC.     

人乙型肝炎病毒转基因小鼠在肝癌发生研究中的应用进展

人乙型肝炎病毒转基因小鼠在肝癌发生研究中的应用进展吴万垠，于尔辛，钱耕荪（上海医科大学附属肿瘤医院２０００３２；上海市肿瘤研究所２０００３２）流行病学研究已提示人乙型肝炎病毒（ＨＨＢＶ）感染与原发性肝癌（ＰＨＣ）的发生密切相关［１，２］。多年来，受Ｈ...     

原发性肝癌组织中Fas和FasL的表达研究

为了探讨原发性肝癌组织中乙肝病毒和丙肝病毒的感染与Ｆａｓ 和ＦａｓＬ表达的关系,采用免疫组化方法观察４０ 例原发性肝癌组织中Ｆａｓ、ＦａｓＬ、ＨＢｓＡｇ 及ＨＣＶ 抗原（ＮＳ５） 的表达。结果显示：癌细胞Ｆａｓ 阳性７ 例,阳性率为１７．５％ ,ＦａｓＬ阳性６例,阳性率为１５．０％ ;癌旁肝细胞Ｆａｓ 阳性２１ 例,阳性率５２ ．５％ ,ＦａｓＬ阳性１８ 例,阳性率４５ ．０％ 。癌组织中ＨＢｓＡｇ 阳性１２ 例,阳性率为３０．０％ ;癌旁组织中２５ 例阳性,阳性率为６２ ．５％ 。１２ 例ＨＢｓＡｇ 阳性的癌组织中,Ｆａｓ 阳性６ 例,ＦａｓＬ阳性５ 例;２８ 例ＨＢｓＡｇ 阴性的癌组织中,Ｆａｓ 和ＦａｓＬ 阳性各１ 例;癌组织中ＨＣＶＮＳ５ 阳性１１ 例,阳性率为２７ ．５ ％ ,癌旁组织中其阳性率为１２ ．５％（５／４０） ,１１ 例ＨＣＶＮＳ５ 阳性的肝癌组织中,Ｆａｓ 和ＦａｓＬ 阳性各５ 例,２９ 例ＨＣＶＮＳ５ 阴性的肝癌组织中,Ｆａｓ 阳性２ 例,ＦａｓＬ阳性１ 例。２ 组比较有显著性差异（ Ｐ＜０ ．０５） 。结果表明肝癌组织中Ｆａｓ 和ＦａｓＬ的表达与ＨＢＶ 和ＨＣＶ 的感染有一定关系。癌旁肝组织Ｆａｓ 和ＦａｓＬ高表达的意义尚不清楚     

p53 249 突变Knock-in 动物模型的建立及其在肝癌发病中的作用

目的:观察p53 249突变在肝细胞癌变发生诱导的作用.方法:利用基因打靶技术在小鼠胚胎干细胞(ES)中引入p53 249编码子Arg(精氨酸)至Ser(丝氨酸)突变,然后经显微注射到小鼠囊胚中,并将注射后的囊胚植入假孕小鼠的子宫.得到嵌合小鼠后与BL/6小鼠杂交得到p53 249 Knock-in小鼠.观察分析该小鼠的生长及肝脏肿瘤发生情况及病理改变.同时用DEN(二乙基亚硝胺)分别处理及饲养含249突变的Knock-in小鼠和不含突变的野生型小鼠,观察比较两组小鼠的生长情况,30周后处死小鼠,研究两组小鼠肝脏癌变情况及病理改变.结果:p53 249编码子突变小鼠的生长和野生型小鼠生长没有明显差别.观察一年时间解剖小鼠,未见小鼠肝脏有肿瘤发生.当使用DEN处理和饲养两组小鼠时,突变组小鼠15周以后出现不同程度的饮食减退,精神不佳,体重下降等表现,而对照组小鼠无明显异常.30周处死小鼠发现90%(18/20)的突变组小鼠有肝脏肿瘤发生,病理显示为肝细胞肝癌,同时伴有肝硬化表现.而对照组小鼠仅5%(1/20)发现有肝脏肿瘤发生.结论:p53 249编码子突变在肝癌发病过程中起着非常重要的作用.     

肝细胞癌患者B和C基因型乙型肝炎病毒X蛋白的变异特点

背景与目的：X蛋白是乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)最重要的致病因子之一,它在HBV相关性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的发生发展中起着重要作用。目前已知B、C基因型HBV相关性HCC的临床及病理表现不尽相同,但目前尚不清楚这种差别是否与B、C基因型HBV X基因之间的差别有关。因此本实验拟研究B、C基因型间HBV X蛋白氨基酸差异及其在HCC患者中的变异及特点,初步探讨其与HCC发生、发展的关系。方法：PCR扩增22份乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性HCC患者血清HBV X基因,克隆、测序并以Vector NTI6．0软件分析其基因型。以DNAMAN软件对标准HBV及HCC来源的HBV X蛋白进行氨基酸同源分析。结果：检测的22个HBV X基因片段均属于B或C基因型。B、C基因型HBV X蛋白之间存在14个氨基酸的差异,HCC患者来源的B、C型HBV X蛋白存在4个氨基酸的共有变异,C型HBV X蛋白尚有6个型特异性变异。这些差异或变异氨基酸均位于X蛋白B、T细胞表位或反式激活区及调节区内。结论：B、C基因型HBV X蛋白之间存在氨基酸差异,且在HCC中发生基因型特异性变异,这些差异或变异氨基酸可能导致X蛋白免疫学功能及反式激活功能的不同。     

肝癌患者乙型肝炎病毒全基因组结构分析

目的 研究肝细胞癌患者乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)全基因组的结构及特点。方法 PCR扩增并克隆乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性肝癌患者血清中HBV全基因组DNA,测序并进行基因结构分析。结果 获得不同肝癌患者来源的22株HBV全基因组DNA,均属于C或B基因型和adr或adw2血清型。与标准株相比,肝癌患者来源的HBV在表面抗原、核心抗原的B／T细胞表位、X蛋白的反式激活区及增强子Ⅱ、核心启动子区发生了一些有意义的共有变异。结论 HBV的基因型与基因变异可能与HBV相关性肝癌的发生发展有关。     

广西HBV相关肝细胞癌及其癌旁组织中HBV S基因突变分析

目的 了解广西乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）相关肝细胞癌 (hepatocellular carcinoma,HCC)组织及其癌旁组织中HBV S基因突变分布状况。方法 收集2015—2016 年于广西医科大学附属肿瘤医院手术切除的43例HBV相关HCC患者癌组织及其癌旁组织。采用巢式PCR扩增HBV S基因片段并测序,Chromas和DNAMAN软件分析S基因序列。结果 肝细胞癌患者HBV S基因热点突变在癌组织及癌旁组织中的分布差异无统计学意义（P>0.05）;小分子蛋白（small hepatitis B surface antigen, SHBs）终止突变只存在于癌组织中,突变位点分别为sC69*、sW74*、sL94*、sW172*和sW182*。结论 广西HBV相关HCC癌组织及其癌旁组织HBV S基因热点突变分布无特异性,SHBs终止突变可能影响HCC发生发展。     

Nomograms for survival prediction in patients undergoing liver resection for hepatitis B virus related early stage hepatocellular carcinoma

BackgroundThe long-term outcomes of patients who underwent liver resection (LR) for early-stage hepatitis B virus (HBV)-related hepatocellular carcinomas (HCCs) are difficult to predict. This study aimed to develop two nomograms to predict postoperative disease-free survival (DFS) and overall survival (OS), respectively.MethodsData on a primary cohort of 1328 patients who underwent LR for HBV-related HCCs within Milan criteria at the Eastern Hepatobiliary Surgery Hospital (EHBH) from 2000 to 2006 were used to develop the nomograms by the Cox regression analyses. An internal validation cohort of 442 patients operated from 2006 to 2011 at the EHBH and an external validation cohort of 474 patients operated from 2007 to 2009 at the Zhongshan Hospital were used for validation studies. Discrimination and calibration were measured using concordance index (C-index), calibration plots and Kaplan–Meier curves.ResultsThe independent predictors of DFS or OS which included tumour stage factors, biomarker and HBV–DNA level were respectively incorporated into the two nomograms. In the primary cohort, the C-indexes of the models in predicting DFS and OS were 0.76 (95% confidence interval: 0.75–0.78) and 0.79 (0.77–0.81), respectively. The calibration curves fitted well. Both nomograms accurately stratify patients into four distinct incremental prognostic subgroups. The C-indexes of the nomogram for OS prediction was significantly higher than those of the six conventional staging systems (0.65–0.71, all P < 0.001). These results were verified by the internal and external validations.ConclusionThe proposed nomograms showed good prognostication for patients with early HBV-related HCCs after hepatectomy.     

乙型肝炎病毒及黄曲霉毒素双暴露下肝细胞癌中p53基因突变及蛋白表达的意义

目的探讨在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)和黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)双暴露下肝细胞癌(hepatocelluar carcinoma,HCC)中p53基因突变及其蛋白的表达,并分析其意义。方法根据HBV与AFB_1的暴露情况,将广西地区HCC 82例患者分为HBV(+)/AFB_1(+)(实验组A组)44例;HBV(+)/AFB1(-)(对照组B组)15例;HBV(-)/AFB_1(+)(对照组C组)15例;HBV(-)/AFB_1(-)(对照组D组)8例,另收集肝外伤、肝血管瘤等20例肝切除组织作为正常对照组。用PCR技术及免疫组化法对p53基因11对外显子的突变及蛋白的表达进行检测。结果 82例HCC患者p53exon7-249阳性突变率为40.2%,正常对照组的阳性突变率为0,实验组A组、对照组B组、对照组C组和对照组D组的阳性突变率分别为50.0%、13.3%、46.7%和25.0%,其中实验组A组比对照组B组有更高的突变率(P<0.05),其余各组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。82例HCC患者中p53蛋白的阳性表达率为74.4%,正常对照组p53蛋白表达的阳性率为0,实验组A组、对照组B组、对照组C组和对照组D组的阳性表达率分别为90.9%、46.7%、73.3%和37.5%,其中实验组A组分别比对照组B组、对照组D组有更高的阳性表达率(P<0.05),其余各组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。p53exon7-249突变与p53蛋白的表达呈正相关(P<0.05)。结论在广西地区HBV和AFB1双暴露因素下的HCC发生过程中,p53基因有更高的突变率及蛋白表达,尤以p53exon7-249突变为其特征性改变,为该地区HCC发生常见的一种分子生物学事件;p53基因的高突变率及其蛋白高表达率可能为HBV和AFB1协同作用的结果。     

广西肝癌高发区原发性肝细胞癌 HBV X 基因的整合及影响因素分析

目的 了解广西肝癌高发区乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）X区基因在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）染色体中的整合及影响因素。方法 以30例与HBV相关的原发性肝细胞癌患者为研究对象。提取HCC组织及癌旁组织标本DNA作为模板,以HBV X基因上游序列和人类基因组Alu重复序列为引物,应用重复序列-多聚酶链反应（Alu-PCR）扩增整合的HBV X片段及两侧的人类基因组DNA片段。扩增产物进行测序,计算目的片段整合率并分析相关的影响因素。结果 18例HCC组织检测到HBV X基因的整合片段,整合率为60.00%（18/30）;26例癌旁组织检测到HBV X基因的整合片段,整合率为86.67%（26/30）。癌旁组织HBV病毒整合率高于HCC组织,差异有统计学意义（χ²=5.445,P=0.020）。不同性别、年龄、HBeAg、HBV DNA、ALT、AST的HCC癌组织及其癌旁组织HBV X基因整合率比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 广西肝癌高发区癌旁组织比HCC组织HBV整合率高,说明HBV整合发生在感染早期。HBV X基因整合与HCC患者性别、年龄、HBeAg、HBV DNA、ALT、AST无明显关系。     

Hepatitis B virus reactivation after radiofrequency ablation or hepatic resection for HBV-related small hepatocellular carcinoma: A retrospective study

Background and purpose

Reactivation of hepatitis B virus (HBV) happens after systemic chemotherapy, transarterial chemoembolization (TACE) or hepatic resection for HBV-related hepatocellular carcinoma (HCC) patients. The incidence and risk factors of HBV reactivation after radiofrequency ablation (RFA) are unclear.

Patients and methods

From August 2006 to August 2011, 218 consecutive patients with HBV-related small HCC treated with RFA (n = 125) or hepatic resection (n = 93) were retrospectively studied. The incidence of HBV reactivation and risk factors were analyzed.

Results

HBV reactivation developed in 20 (9.2%) patients after treatment. The incidence of HBV reactivation was significantly lower in the RFA group (5.6%, 7/125) than the hepatic resection group (14.0%, 13/93, P = 0.034). On univariate and multivariate analyses, no antiviral therapy (OR 11.7; 95% CI 1.52–90.8, P = 0.018) and treatment with RFA/hepatic resection (OR3.36; 95% CI 1.26–8.97, P = 0.016) were significant risk factors of HBV reactivation. On subgroup analysis, the incidence of HBV reactivation was lower in patients who received antiviral therapy than those who did not receive antiviral therapy in both the hepatic resection group (2.9% vs. 20.7%, P = 0.027) and the RFA group (0% vs. 7.6%, P = 0.188), although the difference was not significant in the latter group.

Conclusion

The incidence of HBV reactivation after RFA was relatively low when compared with hepatic resection. Prophylactic antiviral therapy is recommended, especially for patients who are going to receive hepatic resection for HBV-related HCC to decrease the incidence of post-treatment HBV reactivation.