聚羟基乙酸负载软骨细胞修复同种异体甲状软骨缺损

目的　探讨聚羟基乙酸 ( polyglycolicacid ,PGA)负载软骨细胞在有免疫力动物修复同种异体甲状软骨缺损的可行性。方法　酶消化法获取 3天龄新西兰乳兔肋软骨和关节软骨细胞 ,采用组织工程技术制备软骨细胞 PGA复合物 ,体外共同培养 1周后用于修复同种异体成年新西兰白兔甲状软骨缺损 (实验组 7只 )。设单纯PGA材料修复组 (对照A组 4只 )和单纯软骨细胞修复组 (对照B组 4只 )作为对照实验。分别于术后不同时间取材 ,对甲状软骨缺损的修复效果进行大体和组织学评价。结果　体外培养阶段可见黏附于PGA纤维表面的细胞分泌出丰富的软骨基质 ,呈蜘蛛网状分布于PGA纤维之间。术后 4周大体观察 :实验组修复区呈淡黄色 ,与正常软骨界限分明 ;组织学检查 :修复区内有软骨细胞生成和基质分泌 ,但与正常软骨间存在界面无细胞区 ,未见明显炎细胞浸润。 8周 :实验组修复区色乳白 ,与正常软骨仍有界限 ;镜下见修复区软骨细胞较成熟 ,软骨基质含量丰富。1 2周 :实验组修复区呈瓷白色 ,界面区软骨细胞不明显 ,但修复区软骨细胞数量、形态和基质与正常软骨相似。各时间点对照组大体观察修复区均呈不同程度的凹陷 ,暗红色 ,部分软组织充填其中 ,质软 ;组织学及特殊染色检查未发现软骨样结构及其分泌的基质成分。新生软骨     

一般问题

20 0 4 0 4 81　　聚羟基乙酸负载软骨细胞修复同种异体甲状软骨缺损 /孙安科… / /中华耳鼻咽喉科杂志 - 2 0 0 3;38(5 ) - 347～ 35 0目的 :探讨聚羟基乙酸 (PGA)负载软骨细胞在有免疫力动物修复同种异体甲状软骨缺损的可行性。方法 :酶消化法获取 3天龄新西兰乳兔肋软骨和关节软骨细胞 ,采用组织工程技术制备软骨细胞PGA复合物 ,体外共同培养 1周后用于修复同种异体成年新西兰白兔甲状软骨缺损 (实验组 7只 )。设单纯PGA材料修复组 (对照A组 4只 )和单纯软骨细胞修复组 (对照B组 4只 )作为对照实验。分别于术后不同时间取材 ,对甲…     

实验性变应性鼻炎鼻粘膜神经生长因子的测定

目的 探讨同种异体预定形态组织工程化软骨在有免疫功能动物体内构建的可 行性及其对甲状软骨缺损的修复能力。方法 利用组织工程技术制备同种异体片状和“C” 型半管状工程化软骨;将4周形成的片状工程化软骨用于修复12只新西兰大白兔甲状软骨大 片缺损;一定时间取材,分别对预定形态工程化软骨的构建情况及其修复效果进行大体和组 织学评价。 结果 ①构建4周形成的预定形态工程化软骨呈乳白色,有弹性和支撑力,8周时软骨 呈瓷白色,镜下观察显示软骨组织特征;②甲状软骨缺损修复术后4、8、12周观察,修复区 愈合良好,组织学 检查修复区与正常软骨间的界面区可见软骨细胞生长及软骨基质生成,无免疫排斥迹象。 结论 在有免疫功能的动物体内可形成同种异体预定形态组织工程化软骨,获取的工程化软 骨对甲状软骨缺损有良好的修复效果,无明显免疫排斥反应。     

同种异体工程化软骨的构建和修复甲状软骨缺损的实验研究

目的探讨同种异体预定形态组织工程化软骨在有免疫功能动物体内构建的可行性及其对甲状软骨缺损的修复能力.方法利用组织工程技术制备同种异体片状和"C”型半管状工程化软骨;将4周形成的片状工程化软骨用于修复12只新西兰大白兔甲状软骨大片缺损;一定时间取材,分别对预定形态工程化软骨的构建情况及其修复效果进行大体和组织学评价.结果①构建4周形成的预定形态工程化软骨呈乳白色,有弹性和支撑力,8周时软骨呈瓷白色,镜下观察显示软骨组织特征;②甲状软骨缺损修复术后4、8、12周观察,修复区愈合良好,组织学检查修复区与正常软骨间的界面区可见软骨细胞生长及软骨基质生成,无免疫排斥迹象.结论在有免疫功能的动物体内可形成同种异体预定形态组织工程化软骨,获取的工程化软骨对甲状软骨缺损有良好的修复效果,无明显免疫排斥反应.     

同种异体软骨修复甲状软骨缺损的实验研究

目的　观察用不同类型的同种异体软骨修复喉软骨缺损的效果。方法　取新西兰白兔16只 ,平均分成两组。在每只兔的双侧甲状软骨切除 6mm× 3mm× 1mm全层软骨。一组动物将RPMI 16 4 0液和甲醛保存 30d的同种异体甲状软骨 (大小为 5mm× 2mm× 1mm)分别植入甲状软骨两侧缺损处 ,另一组动物于甲状软骨两侧缺损处分别植入新鲜的自体和异体软骨。分别于术后 7、30、180及 36 0d时处死取材 ,用大体观察、HE染色及免疫组织化学方法观察移植修复效果。结果经连续 1年观察 ,RPMI 16 4 0液保存的及新鲜的同种异体软骨与自体软骨移植排斥反应轻 ,均能较好修复甲状软骨缺损 ,而甲醛保存软骨早期有明显炎性细胞浸润 ,移植 180d至 36 0d时软骨基质明显吸收 ,软骨细胞退变 ,甲状软骨缺损区为纤维结缔组织修复。结论　RPMI 16 4 0液保存的及新鲜的同种异体软骨都具有活性 ,和自体软骨一样是软骨缺损修复的良好材料 ,可应用于临床     

同种异体工程化软骨的构建和修复甲状软骨缺损的实验研究

目的 探讨同种异体预定形态组织工程化软骨在有免疫功能动物体内构建的可行性及其对甲状软骨缺损的修复能力。方法 利用组织工程技术制备同种异体片状和“C”型半管状工程化软骨；将4周形成的片状工程化软骨用于修复12只新西兰大白兔甲状软骨大片缺损；一定时间取材，分别对预定形态工程化软骨的构建情况及其修复效果进行大体和组织学评价。结果 ①构建4周形成的预定形态工程软骨呈乳白色，有弹性和支撑力，8周时软骨呈瓷白色，镜下观察显示软骨组织特征；②甲状腺软骨缺损修复术后4、8、12周观察，修复区愈合良好，组织学检查：修复区与正常软骨间的界面区可见软骨细胞生长及软骨基质生成，无免疫排斥迹象。结论 在有免疫功能的动物体内可形成同种异体预定形态组织工程化软骨，获取的工程化软骨对甲状腺软骨缺损有良好的修复效果，无明显免疫排斥反应。     

软骨膜和脱钙骨基质联合移植修复鼻翼软骨缺损

目的探讨软骨膜与同种异体脱钙骨基质（demineralized bone matrix,DBM）联合移植对鼻软骨缺损的修复效果。方法新西兰兔18只随机分为3组,每组6只。制作鼻翼软骨和软骨膜缺损模型,于缺损处移植修复组织。A组为自体耳软骨膜包裹同种异体DBM;B组为自体耳软骨;C组为自体耳软骨膜。10周后取缺损处软骨行大体和病理组织学观察,S100（Soluble protein-100）、转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）免疫组化染色,评价修复效果。结果 A、B两组所得软骨细胞和基质与正常软骨相类似,两组比较差异不明显。C组所得软骨细胞少,基质浅淡,S100、TGF-β1染色阳性细胞少,与A、B组比较均有统计学意义（P〈0.01）。结论软骨膜与同种异体DBM联合移植对鼻软骨缺损的修复效果与自体软骨基本一致,明显优于自体软骨膜移植。     

转化生长因子β1和同种异体软骨细胞及高孔隙率聚乳酸复合物修复兔耳廓软骨缺损

目的　观察加入转化生长因子 β1(transforminggrowthfactor beta 1,TGF β1)的同种异体软骨细胞 /高孔隙率聚乳酸 (poly DL lactide,PDLLA)支架复合物修复兔耳廓软骨缺损的效果。 方法18只大白兔随机分为同种异体软骨细胞 /PDLLA复合物加TGF β1组 (复合物组 )、同种异体软骨细胞 /PDLLA复合物组 (复合物对照组 )和不用任何修复材料的空白对照组 ,每组 6只。分别于 4、12、18周取材 ,行HE和甲苯胺蓝染色 ,观察各组兔耳廓软骨缺损修复情况。结果　术后 18周 ,TGF β1复合物组修复软骨缺损的效果无论从大体标本观察或是病理组织学检查都比复合物对照组的修复效果好 ,空白对照组为纤维组织修复。结论　同种异体软骨细胞 /PDLLA复合物移植可形成组织工程化软骨修复兔耳廓软骨缺损 ,TGF β1可提高同种异体软骨细胞 /PDLLA复合物移植修复兔耳廓软骨缺损的质量。     

转化生长因子β1和同种异体软骨细胞及高孔隙率聚乳酸复合物修复兔耳廓软骨缺损

目的 观察加入转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta1，TGF-β1)的同种异体软骨细胞／高孔隙率聚乳酸(poly-DL-lactide，PDLLA)支架复合物修复兔耳廓软骨缺损的效果。方法 18只大白兔随机分为同种异体软骨细胞／PDLLA复合物加TGF-β1组(复合物组)、同种异体软骨细胞／PDLLA复合物组(复合物对照组)和不用任何修复材料的空白对照组，每组6只。分别于4、12、18周取材，行HE和甲苯胺蓝染色，观察各组兔耳廓软骨缺损修复情况。结果 术后18周，TGF-β1复合物组修复软骨缺损的效果无论从大体标本观察或是病理组织学检查都比复合物对照组的修复效果好，空白对照组为纤维组织修复。结论 同种异体软骨细胞／PDLLA复合物移植可形成组织工程化软骨修复兔耳廓软骨缺损，TGF-β1可提高同种异体软骨细胞／PDLLA复合物移植修复兔耳廓软骨缺损的质量。     

同种异体软骨细胞修复耳廓缺损的动物实验研究

目的探讨兔同种异体软骨细胞和自行制备生物材料高孔隙率聚乳酸(poly—DL-lactide,PDLLA)支架复合物修复兔耳廓软骨缺损的可行性。方法 18只大白兔分为软骨细胞/PDLLA复合物移植组、单纯PDLLA对照组和空白对照组,将体外培养的兔同种异体软骨细胞和自行制备的PDLLA支架形成复合物,修复兔耳廓软骨缺损。分别于植入后6周、12周、18周取材,HE和甲苯胺蓝染色了解兔耳廓缺损修复情况。结果术后18周,软骨细胞/PDLLA复合物移植组软骨缺损区为软骨组织修复,新生软骨与正常软骨问连接好,单纯PDLLA对照组和空白对照组为纤维软骨或纤维组织修复。结论同种异体软骨细胞/自制PDLLA复合物移植可较好地修复兔耳廓软骨缺损。     

同种异体组织工程化软骨组织形成的初步研究

目的：探讨以同种异体的软骨细胞作为种子细胞、以聚乳酸(PLA)作为支架，应用组织工程学方法在体内形成新生软骨组织的可能性，为组织工程软骨修复喉、气管软骨缺损提供实验依据。方法：将出生3～5d的新西兰大白兔乳兔四肢关节软骨组织酶解，分离出软骨细胞，体外扩增后，将其接种到PLA三维可吸收支架上；将软骨细胞-PLA复合物移植到成年新西兰大白兔的背部皮下，经过7周的体内培养，将组织标本行大体观察和组织学检查。结果：软骨细胞-PLA复合物在同种异体的动物体内有新生组织形成，经组织学染色，证实为软骨组织；随着植入时间的延长，软骨基质的分泌增加，炎性细胞的浸润逐渐减轻。结论：同种异体的软骨细胞-PLA复合物在有免疫力的动物体内能够形成新生软骨组织，这一方法为喉、气管软骨缺损的修复提供了一条新的途径。     

同种异体组织工程软骨修复兔气管软骨缺损实验研究

已有采用组织工程软骨修复裸鼠气管软骨缺损及同种异体组织工程软骨修复甲状软骨缺损等相关研究报道[1,2 ] ,在此基础上 ,我们采用同种异体组织工程软骨修复兔气管软骨缺损。一、材料和方法1 采用短期固定培养法构建兔软骨细胞 聚羟基乙酸(ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌｉｃａｃｉｄ ,ＰＧＡ)复合体[3 ] (图 1,2 ) ,复合培养 3周后行同种异体移植。2 软骨细胞 ＰＧＡ复合体同种异体皮下移植 :0 5～ 1ｋｇ新西兰兔 12只 ,每只兔背部皮下移植 3ｍｍ× 3ｍｍ的软骨细胞 ＰＧＡ复合体各 2块 ,移植术后 1、2、3和 4个月分批取出标本 ,每批 3只 (6块标…     

同种异体组织工程软骨修复气管壁缺损的实验研究

目的　探讨以同种异体的软骨细胞作为种子细胞 ,可吸收材料PLA作为支架 ,应用组织工程学方法形成的新生软骨组织修复动物气管壁缺损的可行性。方法　将出生 3～ 5d的新西兰大白兔乳兔四肢关节软骨组织酶解 ,分离出软骨细胞 ,接种到PLA可吸收支架上 ,移植到成年新西兰大白兔的背部皮下 ,7周后形成新生软骨组织修复实验动物颈部气管前壁约 10mm× 10mm大小的缺损 ,术后观察 8周 ,组织标本行大体观察和组织学检查。结果　软骨细胞 PLA复合物在同种异体的动物体内形成新生组织 ,经组织学染色 ,证实为软骨组织。新生组织工程软骨修复动物气管壁缺损后 8周 ,气管管腔通畅 ,无狭窄 ;组织学染色证实修复处软骨组织生长良好 ,无坏死 吸收。结论　同种异体幼年动物的软骨细胞 PLA复合物在有免疫力的动物体内形成的组织工程软骨可以作为气管壁缺损的修复材料。     

气管食管科学

20030418’同种异体组织工程软骨修复兔气管软骨缺损实验研究/吴海涛…//中华耳鼻咽喉科杂志一2002,37(4)一310 采用同种异体组织工程软骨修复兔气管软骨缺损,结果显示组织工程软骨同种异体移植术早期存在炎症细胞浸润,术后1个月最明显,2个月后明显减少,这与移植初期异体软骨细胞尚未被软骨基质完全包埋引起排异反应及与PGA降解时引起无菌性炎症反应有关;3~4个月后,异体软骨细胞已被软骨基质完全包埋,PGA也已完全降解、吸收,所以新软骨周围基本上无炎症细胞浸润,说明组织工程软骨同种异体移植后远期排异反应并不明显。图4参4(勤思)200304…     

内衬上皮的管状组织工程软骨构建的实验研究

目的研究以聚丙交酯-乙交酯共聚物[poly（DL-lactide-co-glycolide）,PLGA]包埋甲壳胺无纺布为细胞支架,在有免疫力的动物体内构建内衬上皮的管状组织工程软骨的可行性,为喉、气管缺损的修复探索新方法。方法取1月龄兔耳廓软骨,收集体外培养第3～4代的软骨细胞,接种于经多聚赖氨酸处理的以PLGA包埋甲壳胺无纺布的片状细胞支架材料上,体外培养7～10d后包裹于兔腹部缝制的皮管上并深埋于体内,分别于6、12、18周取材行大体和组织学观察以及HE染色、甲苯胺蓝染色和Masson＇s三色染色。结果同种异体软骨细胞/PLGA包埋甲壳胺无纺布的细胞支架复合物体外培养1周时有基质产生;植入体内6周后,复合物中有基质分泌,软骨细胞不成熟;12周时,软骨细胞接近成熟并形成凹陷,内衬上皮的管状组织工程软骨形成;18周时,新生软骨基本接近正常软骨。结论以PLGA包埋甲壳胺无纺布为细胞支架,同种异体软骨细胞与细胞支架所形成的复合物在有免疫力的动物体内可构建出内衬上皮的管状组织工程软骨。     

自体骨髓间质干细胞诱导的软骨细胞修复兔耳廓软骨缺损

目的探讨自体骨髓间质干细胞（Bone marrow mesenchymal stemcells,BMMSC）诱导的软骨细胞修复兔耳廓软骨缺损的可行性。方法取新西兰大白兔BMMSC体外培养扩增,以含转化生长因子（TGF-β1）、地塞米松和维生素C的培养液做诱导培养,实验组以诱导后的软骨细胞与聚丙交酯-乙交酯共聚物Poly（dl-lactideco-glycolide）（PLGA）包埋甲壳胺无纺布的新型支架形成复合物修复兔自体耳廓软骨缺损;对照组以PLGA/甲壳胺无纺布支架修复兔耳廓软骨缺损。分别于移植后6周、12周、18周取材,行HE和甲苯胺蓝染色,观察各组兔耳廓软骨缺损修复情况。结果术后18周,实验组缺损区完全由软骨组织修复,缺损表面光滑,软骨陷窝明显,与周围正常软骨组织无明显界限;对照组为纤维组织修复。结论自体BMMSC诱导的软骨细胞可用于修复兔耳廓软骨缺损。     

气管食管科学

20021433游离兔耳软骨移植修复广泛气管前壁缺损的研究/张瑞林…//华西医科大学学报一2002,33(2)一270一273 目的:探讨用游离兔耳廓软骨修复广泛气管前壁缺损的可行性,并观察自体移植与异体移植的差异。方法:取新西兰大耳白兔2。只,分为自体移植组(n一10)与异体移植组(n一10),取右耳游离耳廓软骨行自体或异体移植修复8~10环气管前壁缺损,术后l、2、4、8于口12周每组分别处死1~2只行内窥镜检查、生物力学测试及组织学观察。结果:18只兔存活,内窥镜发现气管狭窄不明显,以癖痕增生为主。生物力学测试发现,移植软骨单位最大应力在。、4、8、12周…     

鼻中隔软骨细胞细胞组织工程法构建预定形态软骨

目的 探讨利用人算中隔软骨细胞组织工程方法构建预定形态软骨的可能性。方法 将人鼻中隔软骨细胞播种在聚乙醇酸（polyglycoli acid,PGA)无纺网支架材料上，制成片状和管状结构，埋入裸裸鼠体内，经4、6、8周后取材作大体及组织学观察。结果 大体观察见裸 本内形成了预定的片状和管状软骨。组织学观察：6周时软骨细胞基本成熟，Masson三色染色显示胶原形成，番红花－“O”染色证实其基质中存在糖多糖。对照组于6周时PGA纤维基本消失。结论 人鼻中软骨细胞与PGA无纺网复合可在裸鼠体内形成预定形态软骨。     

自制NECM修复兔耳廓软骨缺损的试验研究

目的本研究的目的在于评价自制同种异体天然细胞外基质(Nature Extracellular Matrix,NECM)在修复兔耳廓软骨缺损中的价值,从而在体外研究的基础上进一步证实我们采用的去污剂-酶四步法制作的NECM在组织工程学中的可行性.方法选用10只新西兰大白兔,于其双耳廓制造1.0×.0cm大小的软骨缺损后,分别作以下研究:①灰兔NECM修复兔耳廓缺损.②灰兔NECM复合软骨膜修复兔耳廓缺损;③不植任何材料的空白对照.术后4、6、12、24周取材并行组织学检查.结果NECM植入后4、6周有轻重不一的炎症反应,第12周炎症反应消失,NECM周边无包裹现象.第12周时NECM复合软骨膜组有软骨膜细胞长入NECM,此时的软骨膜细胞多处于增殖期,24周时软骨膜细胞继续增殖分化细胞逐渐长入NECM深部,且部分软骨膜细胞发育成熟.单纯NECM修复组,第6周出现纤维结缔组织长入NECM,12、24周纤维结缔组织逐渐长入NECM深部,并逐渐取代NECM.结论①NECM可诱导软骨膜细胞增殖分化生长,修复软骨缺损:②NECM具有较好的组织亲和性和相容性;③软骨膜细胞可以作为NECM再生软骨的种子细胞的来源;④软骨膜可以阻止纤维结缔组织侵入修复区NECM.     

气管食管科学

20050095同种异体组织工程软骨修复气管壁 缺损的实验研究/吕威…//中国耳鼻咽喉颅底 外科杂志.2004,10(30.129～131 目的:探讨以同种异体的软骨细胞作为种子细 胞,可吸收材料PLA作为支架,应用组织工程学方 法形成的新生软骨组织修复动物气管壁缺损的可行 性。方法:将出生3～5d的新西兰大白兔乳兔四肢 关节软骨组织酶解,分离出软骨细胞,接种到PLA …