胚胎大鼠脊髓神经干细胞体外培养与定向分化为胆碱能神经元的研究

为了研究胚胎大鼠脊髓源神经干细胞(ESCSCs)的培养和体外分化为胆碱能神经元的情况,本文从孕龄13d的胚胎大鼠脊髓组织中分离获得神经干细胞,采用含表皮生长因子(EGF)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的无血清限定性培养基培养,并通过添加维甲酸(RA)、音猬因子(SHH)和神经营养因子-3(NT-3)等诱导因子,进行干细胞体外诱导,用免疫荧光细胞化学方法观测其向胆碱能神经元分化的情况。结果表明:从胚胎脊髓中可分离得到大量的神经干细胞,通过含EGF和bFGF的限定性培养基培养可获得干细胞球,通过添加RA、SHH和NT-3等诱导因子后,可见有胆碱能神经元生成。本研究结果提示,胚胎大鼠脊髓神经干细胞在添加EGF与bFGF的限定性培养基中可以增殖并长期保持稳定的ESCSCs性状,在添加特殊因子的条件下,并在体外ESCSCs可以被定向诱导分化为胆碱能神经元。     

BDNF、NGF对体外长期培养的胚基底前脑胆碱能神经元的影响

本文探讨了脑源性神经营养因子、神经生长因子对体外长期培养的胚基底前脑胆碱能神经元是否具有延缓退变的作用。实验分为脑源性神经营养因子组、神经生长因子组、脑源性神经营养因子加神经生长因子组及单纯对照组。取孕 17d SD大鼠胚基底前脑原基制成细胞悬液接种于 2 4孔培养板中 ,按分组加入含相应神经营养因子和不含神经营养因子的 DMEM培养液 ,分别于体外培养 12、18、2 4、3 0 d后进行乙酰胆碱酯酶组织化学反应。显微镜下计数各孔中乙酰胆碱酯酶阳性神经元数 ,每孔随机测量和计数 2 5个乙酰胆碱酯酶阳性神经元的平均胞体直径、发出的突起数和最长突起长度。数据用方差分析和 SNK检验进行统计学处理。结果显示 ,在培养的 4个时期 ,含脑源性神经营养因子组、神经生长因子组和脑源性神经营养因子加神经生长因子组的各项数据均明显地优于单纯对照组 ;脑源性神经营养因子加神经生长因子组的各项数据 ,特别是最长突起长度优于单独使用脑源性营养因子或神经生长因子组。提示 :脑源性神经营养因子和神经生长因子不仅对体外培养的胚胆碱能神经元发育生长具有促进作用 ,而且还可延缓体外长期培养的大鼠胚基底前脑胆碱能神经元的退变 ;两者的联合使用还可对延缓其退变具有协同作用     

脑衍生神经营养因子基因编码中一个雌激素反应单位的鉴定

前脑神经元生存、分化和维持受控于几种局部和远隔神经营养因子,这些神经营养因子以特异配体方式对前脑特定靶神经元产生作用。体外实验表明NGF(神经生长因子)、脑衍生神经营养因子(BDNF)、NT_3(神经营养因子3)对胆碱能神经元的生存分化有促进作用。雌激素调节细胞许多基因转录,包括结构蛋白、类固醇、肽类神经信号传导及其受     

BDNF在脊髓损伤修复中的双重作用及其表观遗传调节因素

正脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)是中枢内神经营养因子家族的重要一员,与神经生长因子(nerve growth factor,NGF)和神经营养素(neurotrophin-3/4,NT3/4)等一起发挥神经元保护作用,不仅作用于发育中神经元分化、轴突生长和突触形成,而且参与成体神经元突起修剪、损伤轴突再生和突触可塑性活动[1,2]。成体中枢神经系统内BDNF等神经营养因子含量显著减少,神经保护功能降低,给予外源性神经营养因子有助于改善损伤后神经     

神经节苷脂GM_1对神经生长因子作用的调节

<正> 脑是一个动力学器官。中枢神经系统内的神经元能够对它们微环境内的化学信号起反应,此过程被广义地称为神经可塑性。在各种分子的调节之中神经可塑性的表达受到一些神经营养因子的调节。这些神经营养因子都是蛋白质,它们对不同种类神经元的存活、维持和修复能力发生影响,神经生长因子(NGF)就是一个典型的例子。消除神经元的靶区或阻断突触连接则使神经元丧失充分的营养支持,导致萎缩和死亡。 NGF的作用并不局限于神经元发育过程的某些固定时期,成年动物的中枢和周围神经系统的神经元均能对NGF起反应。在实验性损毁、中断海马产生的NGF向隔区的胆碱能神     

脑源性神经营养因子在大鼠海马CA3区发育过程中的表达

采用免疫组织化学ＡＢＣ 法,研究脑源性神经营养因子在大鼠海马ＣＡ３ 区发育过程中的表达,观察其免疫反应产物的分布。结果表明：脑源性神经营养因子阳性物质在生后零天（Ｐ０）组位于ＣＡ３ 区细胞周围间质内;Ｐ１０,Ｐ１５ 和Ｐ２０ 组脑源性神经营养因子免疫反应产物位于锥体细胞内,幅射层内可见阳性苔藓纤维终末,这些终末随生后日龄增加而增加。Ｐ３０ 组脑源性神经营养因子免疫反应产物仅见于细胞周围间质内,未见细胞胞浆内有阳性物质分布,但偶见脑源性神经营养因子阳性细胞核位于ＣＡ３ 区锥体细胞层,辐射层内有较多的苔藓纤维阳性终末。本研究结果提示,发育早期大鼠海马ＣＡ３ 区脑源性神经营养因子分布于细胞周围间质而生后１０ 至２０ 天发育期间,ＣＡ３ 区锥体细胞合成脑源性神经营养因子并可沿神经元轴突顺行运输、传递信息。     

发育中的感觉神经元的存活

<正> 发育中的脊椎动物的感觉神经元在它们的轴突到达靶区后对神经趋向因子(neurotrophic factors)变得依赖起来。对四组鸡胚胚板起源的感觉性脑神经元进行研究,揭示了这一变化过程,即这些神经元的轴突穿越不同的距离才抵达外周及中枢的靶区(结状节的神经元走的距离最长,以后依次分别为岩节、膝状节、前庭神经节神经元)。虽然距靶区远的神经元的轴突生长要快些,但是它们到达靶区的时间还是要比那些离靶区近的神经元到达的时间长。在体外,神经趋向因子非依赖性生存的持续时间及神经趋向因子依赖性的开始的时间与体内神经到达并支配靶区的时间过程是相关的:那些靶区近、先支配靶区的神经元(前庭神经节神经元)在没有对来源于脑的神经趋向因子(BDNF)反应前只生存短时间,而靶区较     

发育中的感觉神经元的存活

<正> 发育中的脊椎动物感觉神经元在轴突抵达靶器官后需依赖神经营养因子存活。这个过程可通过研究鸡胚从神经板分化而来的4群脑感觉神经元而得知,因这些感觉神经元的轴突在到达它们周围和中枢的靶器官前须经过不同距离(结神经元距离最远,继之是岩神经元、膝神经元和前庭神经元)。虽然离靶器官远的神经元轴突生长速度快[Davies,Nature 337,553(1989)],     

脑源性神经营养因子研究现状

本文主要综述了脑源性神经营养因子（ｂｒａｉｎ－ｄｅｒｉｖｅｄｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ，ＢＤＮＦ）的发现、生化特性、与神经生长因子（ＮＧＦ）和神经营养因子Ⅱ（ＮＴ－３）属于同一基因家族以及靶源性等概念：总结了脑源性神经营养因子对运动神经元、胆碱能神经元、多巴胺神经元及感觉等其它神经元的效应作用，并展望了应用脑源性神经营养因子治疗运动神经元病变及老年神经系统退行性疾病的前景。     

GDNF的研究进展

<正> 1993年Lin等从大鼠B49胶质细胞系中分离、纯化并成功克隆了一种新的神经营养因子即胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)。最初,因其对多巴胺能神经元具有特异性营养活性而被广泛重视。后来的研究发现,GDNF对胆碱能运动神经元也有强的活性[1]。此外,其对感觉神经元、交感神经元也有一定的作     

脑源性神经营养因子促进低血糖幼鼠海马神经干细胞的定向分化

背景：有研究表明脑源性神经营养因子可以维持神经元的存活、影响神经元的迁移,在体外可以促进神经干细胞的存活和分化。 目的：探讨脑源性神经营养因子对低血糖幼鼠海马神经干细胞定向分化的作用。 方法：取新生1 d低血糖模型大鼠脑海马组织进行原代、传代及单细胞克隆培养。培养的细胞一部分进行神经干细胞鉴定,另一部分依据培养液中脑源性神经营养因子质量浓度的不同将单克隆细胞分为0,100,200 μg/L组,取第4代细胞进行诱导分化,行神经元特异性烯醇化酶免疫荧光染色,计数阳性细胞比例。 结果与结论：单克隆培养后3组细胞均呈巢蛋白阳性,诱导分化后细胞呈行神经元特异性烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白阳性;100,200 μg/L组神经干细胞生长较快,且分化为神经元特异性烯醇化酶阳性细胞比例较高(P < 0.05),但两组神经干细胞之间差异无显著性意义(P > 0.05)。提示脑源性神经营养因子促进低血糖幼鼠海马神经干细胞向神经元定向分化。     

周围神经修复与再生研究进展

周围神经修复与再生基础研究涉及到诸多因素:神经营养因子对神经元胞体的保护;神经再生微环境的重建;桥接物与神经缺损的修复与再生;神经末梢及效应器的再生与重建等。为进一步探讨周围神经的修复与再生,现综述如下。 一、神经营养因子对损伤神经元胞体的保护 周围神经损伤虽然局限于神经元轴突的部位,但作为基础研究应分为对神经元胞体、神经轴突、神经末梢和效应器四个     

Genistein对去卵巢大鼠基底前脑胆碱能神经元影响的体内研究

本文旨在研究染料木素(genistein)对去卵巢大鼠基底前脑胆碱能神经元的影响。雌性大鼠双侧卵巢切除2周后用genistein和雌激素替代治疗1周。称子宫重量以确定手术是否成功及雌二醇(E2)的治疗是否有效。用免疫组化染色、RT-PCR和Westernblot等方法对胆碱能神经元数量、ChAT基因和蛋白的表达量进行检测。结果显示:去卵巢3周后子宫变轻,雌激素替代治疗能增加去卵巢子宫的重量,而genistein替代治疗对去卵巢子宫的重量影响不明显;去卵巢3周后,内侧隔核(MS)和斜角带垂直臂核(VDB)内的胆碱能神经元数量、ChAT基因和蛋白的表达量均明显减少,雌激素和genistein替代治疗后能显著增加去卵巢大鼠MS和VDB内的胆碱能神经元数量、ChAT基因和蛋白的表达量。本研究结果提示:genistein对去卵巢大鼠基底前脑胆碱能神经元具有类似雌激素样神经保护作用,而对子宫影响不明显。     

NGF、BDNF和NT-3在正常成年大鼠主要脑区表达的免疫组织化学研究

目的研究神经生长因子(NGF)﹑脑源性神经营养因子(BDNF)﹑神经营养素-3(NT-3)在正常成年大鼠主要脑区的表达。方法将正常成年大鼠用4%多聚甲醛灌注固定后取脑制成20μm厚的冰冻切片,应用上述3种因子的抗体进行免疫组织化学染色。结果3种因子的表达既有共同点也有不同点:共同点是在主要脑区都能表达,不同点是在单个细胞中,BDNF主要表达于胞浆边缘;NGF在大部分神经元的整个细胞都表达,但少量神经元则在胞核无表达;NT-3则与BDNF相似。结论3种因子在正常成年大鼠主要脑区都能表达。     

神经营养因子治疗帕金森病的研究进展

<正> 自50年代发现神经生长因子以来,人们对各种类型的神经营养成份进行了广泛的探索.神经营养因子是能支持神经元生存,诱导神经突起生长和维持神经元功能的一类化学因子.这类因子主要是多肽或蛋白质,老年性神经退行性变与这类因子有关.仅文献报道具有特异性的神经营养作用或促进神经突起生长作用的各种因子至少有20种以上,但真正称得上神经营养因子的,只有神经生长因子(NGF),脑源性神经营养因子(BDNF)和睫状神经营养因子(CNTF).此外,神经营养素3(NT-3)和神经营养素4/5(NT4/5)亦符合神经营养因子的标准.多巴胺能神经元与帕金森病(PD)的产生有直接关系.PD是中老年常见的神经系统变性疾病.其主要原因是患者脑黑质多巴胺能神经元损伤,表达的酪氨酸羟化酶(TH)减少或活性降低,造成脑内多巴胺含量明显减少,引起全身肌张力增高,肌肉强直,随意运动减少,动作缓慢,面部表情呆板并产生静止性震颤等症状.     

促肾上腺皮质激素对隔-海马胆碱能神经元的跨突触性调节

隔区内的各种神经介质,包括P-物质,β-内啡肽可能是通过对胆碱能神经元胞体发挥作用而影响隔-海马神经元的活动。促肾上腺皮质激素(ACTH 1—24)和α-促黑色细胞素(α-MSH),在一定程度上也影响隔-海马神经元乙酰胆碱(ACh)的转换。这种影响在切断海马的传入纤维后也不被阻断,从而推论:这些神经介质直接作用于海马。实验表明:ACTH是通过隔区内肽能神经元而影响隔-海马胆碱能神经元活动的。     

脑源性神经营养因子干预腰椎管狭窄症大鼠神经元活性、疼痛及相关因子的变化

背景：研究发现,脑源性神经营养因子缺失会导致中枢运动结构的神经退行性病变,从而导致多种运动神经疾病的发生,而腰椎管狭窄症作为慢性进行性神经功能障碍症候群,脑源性神经营养因子可能成为治疗该病的有效靶点。目的：探究脑源性神经营养因子对腰椎管狭窄症大鼠神经元活性、疼痛及缺氧诱导因子1α/血管内皮生长因子的影响。方法：选取40只SPF级SD雄性大鼠,随机取30只建立腰椎管狭窄模型,剩余10只为正常组。建模成功后将大鼠随机分为模型组、神经生长因子组及脑源性神经营养因子组。神经生长因子组大鼠腹腔注射1 500 U的神经生长因子,脑源性神经营养因子组大鼠鞘内注射20μL 10 mg/L的脑源性神经营养因子,均1次/d,持续30 d;正常组、模型组同期灌胃同体积生理盐水。给药结束后,观察并记录大鼠运动功能及体表疼痛情况,CT检测腰椎管密度,神经干动作点位传导速度测定仪检测大鼠神经传导速度,TUNEL法检测脊髓组织神经元活性,免疫印迹法检测缺氧诱导因子1α/血管内皮生长因子蛋白表达。结果与结论：(1)与正常组比较,模型组大鼠平板运动距离、体表疼痛值、神经传导速度均明显降低(P <0.05);与模型...     

大鼠海马CA1和CA3区发育过程中酪氨酸激酶受体B的分布

为了观察脑源性神经营养因子的特异性受体—酪氨酸激酶受体 B在发育过程中的大鼠海马 CA1和 CA3区的分布 ,本研究使用免疫组织化学 A BC法研究了生后几个时间段的酪氨酸激酶受体 B的分布特点。结果表明 :其免疫阳性产物仅出现在神经元胞体中且只位于胞浆 ,胶质细胞中未见分布。生后零天组偶见免疫阳性细胞 ;生后 5天组免疫阳性细胞较生后 0天组明显增多 ,但分布也尚较少 ;生后 10、15、2 0、30天 4组免疫阳性细胞呈明显的逐渐增多趋势。成年组的免疫阳性细胞与生后 30天组无明显差别。本实验结果提示 :发育早期大鼠海马 CA1和 CA 3区锥体细胞产生酪氨酸激酶受体 B,并通过对它的分泌调节 ,控制脑源性神经营养因子对神经元的作用 (突触的发生、发育、维持及神经元损伤后修复等     

睫状神经营养因子在脊髓损伤中的研究进展

脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的修复是神经科学领域研究的热点问题."神经营养因子理论"认为,神经营养因子能促进神经元的存活、分化和修复.睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)是目前研究比较多的营养因子之一.它不仅对体内外多种神经元包括感觉、运动、交感、副交感神经元及神经胶质细胞的存活具有促进作用,而且在促进轴突再生、防止受损神经元退变、维持运动神经元功能及诱导神经元和胶质细胞的分化方面也具有重要作用.近年来,关于CNTF在脊髓损伤修复中的作用也有较多的研究,现将对CNTF及其在脊髓损伤中的研究进展做一概述.     

神经生长因子偶联物对老年性痴呆动物模型的保护作用

目的探讨神经生长因子偶联物(NGF-Tf)对老年性痴呆(AD)大鼠的影响.方法以手术切断大鼠双侧隔-海马胆碱能通路的方法建立AD动物模型,每天从大鼠尾静脉注射NGF-Tf.通过水迷路试验观察大鼠的记忆和方向辨别能力;对海马和隔区行神经组织学检查;应用酶组织化学技术显示相应区域的ChAT,采用计算机病理图像分析系统测定酶活性以判断其胆碱能功能状态.结果水迷路试验中,NGF-Tf组在10s内抵达平台的正确反应平均数提高(p<0.05).光镜下,NGF-Tf组隔区仅见轻微萎缩性改变,而模型组隔区萎缩性改变较明显,表现为神经元数目明显减少,细胞轮廓不清,有胶质细胞增生;正常对照组、NGF-Tf组和模型组的海马区未见明显病理性改变.ChAT染色统计结果显示,正常对照组、NGF-Tf组大鼠的海马区及隔区IOD值与模型组比较,均有显著性差异(p<0.01).结论 NGF-Tf能穿透血脑屏障,有效防止模拟AD病变的大鼠的基底前脑胆碱能神经元的变性和死亡,改善其记忆和方向辨别能力,促进其胆碱能神经元的功能恢复.