高迁移率族蛋白1在内毒素急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能改变中的作用

目的探讨高迁移率族蛋白1（HMGB1）在内毒素急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能改变中的作用。方法脂多糖（LPS）注射复制大鼠急性肺损伤模型，在LPS致伤后不同时相点（有或无正丁酸钠SB干预时）获取肺组织及肺泡巨噬细胞（AM）。RT—PCR检测肺组织HMGB1 mRNA表达，应用鸡红细胞吞噬实验检测AM的吞噬功能，并对二者做平行比较。结果与对照组比较，LPS致伤后6、12、24h时相点AM吞噬率及吞噬指数明显降低；SB干预组AM吞噬功能于24h时相点出现较明显下降。与LPS组比较，6～12h时相点AM吞噬功能无明显降低，差异有统计学意义（P〈0．01）；LPS致伤后6～24h肺组织HMGB1 mRNA表达明显增高。正丁酸钠（SB）处理组动物肺组织于伤后6～12h肺组织HMGB1 mRNA表达均显著抑制，与LPS组比较，差异有显著性意义（P〈0．05）；相关性分析显示，肺泡巨噬细胞吞噬率及吞噬指数与肺组织HMGB1表达水平呈显著负相关。结论HMGB1高表达可能参与AM吞噬功能改变；AM吞噬功能减低可能是HMGB1参与急性肺损伤发生、发展的机制之一。     

低氧诱导高迁移率组蛋白B1对人胰腺癌细胞凋亡抵抗和迁移的作用研究

目的 观察低氧诱导人胰腺癌细胞系(SW1990)分泌高迁移率组蛋白B1(HMGB1)作用,并探讨胞外HMGB1在胰腺癌细胞凋亡抵抗及转移中的作用.方法 取对数生长期SW1990细胞分别给予以下处理:(1)常氧+PBS;(2)低氧+PBS;(3)低氧+HMGB1(100μg/L);(4)低氧+HMGB1(100μg/L)+EP(胞外HMGB1特异性抑制剂).细胞处理72 h后,ELISA检测(1)及(2)2组细胞培养上清中HMGB1表达的差异;AnnexinV/PI流式细胞术检测(2)、(3)、(4)各组细胞的凋亡率;Transwell迁移实验检测(2)、(3)、(4)各组细胞迁移能力差异;Western-blotting检测(2)、(3)、(4)各组细胞凋亡相关蛋白(Bcl-2)及迁移相关蛋白(E-cadherin、MMP-9)表达的差异.结果 ELISA结果显示低氧条件下,细胞培养上清中HMGB1表达含量升高,是常氧条件下的5倍;AnnexinV/PI流式细胞术检测以上3组细胞的凋亡率分别为:(23.47±2.20)%、(6.57±1.20)%、(20.03±1.89)%;低氧+HMGB1处理组细胞凋亡比率明显低于其他2组,差异有统计学意义(P<0.05);Transwell迁移实验中各组穿至下室的细胞数分别平均为(161.3±16.0)、(399.7±13.0)、(184.3±16.0)个,差异有统计学意义(P<0.05),提示低氧条件下HMGB1能明显促进人胰腺癌SW1990细胞的迁移;Western-blotting结果显示HMGB1处理组Bcl-2及MMP-9表达增高,E-cadherin表达降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 低氧可以促进肿瘤细胞释放HMGB1,从而促进人胰腺癌SW1990凋亡抵抗与迁移.     

胰高血糖素样多肽1抑制高糖诱导的高迁移率组蛋白B1表达及机制研究

目的 研究胰高血糖素样多肽1(glucagon like peptide 1, GLP-1)对高糖环境下培养的人视网膜微血管内皮细胞(human retinal capillary endothelial cells, HRCEC)中,高迁移率组蛋白B1(high mobility group box-1 protein, HMGB1)表达的影响及相关机制。方法 高糖刺激HRCEC不同时间(24h、48h及96h)后,分别使用不同浓度的GLP-1(10mmol/L、100nmol/L及1000nmol/L)刺激HRCEC 96h后,分别通过RT-PCR、ELISA及Western Blot检测HMGB1的mRNA、分泌及蛋白水平。使用高糖和GLP-1刺激细胞1h后,Western Blot检测HMGB1表达相关信号通路(p38 MAPK、JNK和NF-κB)磷酸化水平。结果 相较于正常糖水平,高糖促使HMGB1的mRNA、分泌及蛋白水平显著升高,GLP-1可有效抑制这一效应。高糖可显著性激活p38 MAPK、JNK和NF-κB,而GLP-1则抑制高糖所诱导的这些信号通路激活。结论 GLP-1可能通过抑制高糖刺激下HMGB1的表达及炎症信号通路激活,从而抑制糖尿病视网膜病变的发生及发展。     

急性坏死性胰腺炎肺损伤大鼠高迁移率族蛋白B1的表达及意义

目的:观察急性坏死性胰腺炎(ANP)肺损伤大鼠血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达,探讨HMGB1在急性坏死性胰腺炎并发急性肺损伤(ALI)中的意义及机制。方法:将100只SD大鼠随机分成假手术组(SO组)和模型组(ANP组)。各组分别在6h、12h、24h、36h、48h采用酶联免疫吸附法测定血清中HMGB1,同时行动脉血气分析,观察胰腺和肺组织病理形态学的改变。结果:ANP组血清HMGB1从12h开始明显上升,48h达到高峰,与SO组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。随着胰腺损伤的逐渐加重,肺损伤程度也在逐渐加重,PaO2进行性下降,PaCO2进行性升高。结论:血清HMGB1的增高与急性坏死性胰腺炎致ALI病情严重程度呈正相关。     

“嗅三针”对帕金森病小鼠黑质高迁移率组蛋白B1及核因子-κB表达的影响

目的 观察“嗅三针”对帕金森病（Parkinsons disease,PD）小鼠黑质高迁移率组蛋白1（high mobility group box 1,HMGB1）及核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）蛋白表达水平的影响,探讨“嗅三针”改善PD的作用机制。方法 采用随机数字表法将健康雄性C57BL/6小鼠分为空白组、模型组、电针组、左旋多巴组,每组10只;除空白组外,其余每组采用脂多糖经鼻滴注制作小鼠PD模型。先采用Morris水迷宫试验对各组小鼠进行行为学检测,再采用免疫组织化学法检测小鼠黑质细胞中HMGB1的表达,蛋白免疫印迹法检测 HMGB1、NF-κB蛋白在黑质中的表达水平。结果 模型组小鼠抵达终点时间多于空白组（P<0.05）;电针组到达终点时间较模型组明显减少（P<0.05）。与空白组比较,模型组黑质中HMGB1阳性细胞数升高（P<0.05）,HMGB1、NF-κB蛋白表达水平升高（P＜0.05）;与模型组比较,电针组黑质中HMGB1阳性细胞数降低（P<0.05）,电针组黑质中HMGB1表达水平下降（P＜0.05）。结论 “嗅三针”可改善PD小鼠空间记忆能力,抑制PD小鼠神经炎症,这可能与其抑制黑质区HMGB1表达有关。     

高迁移率族蛋白B1在免疫应答中作用的研究进展

高迁移率族蛋白B1(HMGB1)是一种DNA结合蛋白,在细胞外有细胞因子功能,能启动免疫反应,引起细胞炎性效应。生理状态下,HMGB1有核结合蛋白的作用,释放进入细胞间隙后,则表现出晚期炎性因子作用。HMGB1的识别及跨膜信号转导需要一系列分子的参与,其受体主要是晚期糖基化终产物、Toll样受体等。HMGB1作为一个内源性分子,促进免疫反应和组织内稳态。     

丙酮酸乙酯对烫伤大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1表达和肺损伤的影响

目的 观察丙酮酸乙酯(ethyl pyruvate,EP)对烫伤大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)表达水平及急性肺损伤的影响.方法 采用大鼠30%总体表面积Ⅲ度烫伤延迟复苏模型,78只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为假烫伤组(n=18)、烫伤组(n=30)、EP治疗组(n=30),每组分别在假伤或伤后第8、24、72小时活杀留取肺组织.HMGB1基因/蛋白表达分别采用逆转录聚合酶链反应及蛋白免疫印记法、免疫组化方法检测;髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性采用酶学分光光度法测定;并采用HE染色、光镜下观察肺组织病理改变.结果 与假烫伤组比较,烫伤组肺组织HMGB1基因/蛋白表达于伤后8～72 h显著增强(P＜0.05,P＜0.01),同时肺组织MPO活性在8 h及24 h明显升高(P＜0.01),病理学观察见肺组织炎细胞浸润,正常结构破坏,其中以24 h改变最重.与烫伤组比较,EP治疗组大鼠肺组织8～72 h时间点HMGB1表达显著下调(P＜0.05),肺组织MPO活性在8、24 h时间点显著下降(P＜0.01),EP治疗组8～72 h肺组织病理形态损害明显减轻.结论 HMGB1作为晚期炎症因子参与了烫伤后肺组织炎症反应的病理过程,EP治疗可明显下调肺组织HMGB1表达,并有助于降低肺组织MPO活性,从而减轻烫伤延迟复苏所致急性肺损伤.     

EGCG对百草枯致小鼠急性肺损伤的保护作用

目的 研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)在百草枯(paraquat,PQ)致小鼠急性肺损伤中的保护作用.方法 72只C57BL小鼠随机分为空白对照(NS)组,百草枯对照(PQ)组,EGCG对照组,EGCG处理组.空白对照组给予生理盐水60mg/kg腹腔注射,百草枯组给予PQ60mg/kg腹腔注射.EGCG对照组和EGCG处理组给予EGCG 4.0mg/kg腹腔注射.给药后观察各组小鼠肺组织病理改变,酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及高迁移率蛋白(high-mobility group box 1,HMGB1)的含量,real-time PCR法测定肺组织TNF-α,HMGB1 mRNA表达水平.并观察HMGB1在肺组织中表达的改变.结果 百草枯对照组小鼠染毒后6h血清及肺组织TNF-α、HMGB1水平即明显高于NS对照组(P＜0.05).经EGCG处理组小鼠百草枯中毒第3天血清HMGB1和TNF-α水平低于PQ对照组(P＜0.05或P＜0.01).与百草枯对照组小鼠相比,EGCG处理组小鼠百草枯染毒后肺组织炎性改变明显减轻,肺组织HMGB1表达也明显减弱.结论 EGCG可明显减轻百草枯中毒导致的急性肺损伤.     

甲基强的松龙对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤高迁移率蛋白1表达的影响

目的 探讨高迁移率蛋白1 （HMGB1）在脂多糖诱导的急性肺损伤中的作用,以及甲基强的松龙注射剂干预后其在急性肺损伤中的表达变化.方法 将54只清洁级成年雄性SD大鼠随机分成3组：①正常对照组（N组）：每只大鼠经尾静脉途径给予生理盐水2 mL/kg,1h后再经尾静脉途径给予生理盐水1 mL/kg;②急性肺损伤组（ALI组）：尾静脉注射脂多糖6 mg/kg,1h后再经尾静脉途径给予生理盐水1 mL/kg;③甲基强的松龙干预组（MPN组）：每只大鼠经尾静脉途径给予脂多糖6 mg/kg,1h后再经尾静脉途径给予甲基强的松龙20 mg/kg.三组分别于注射后12、24、36 h麻醉处死后采集标本,每个时相点取6只大鼠.采用免疫组织化学法和实时定量PCR（Real-Time PCR）法检测各组各时相点大鼠肺组织HMGB1表达水平,同时观察肺组织病理学改变,并测定干湿重比（W/D）.采用SPSS 20.0统计学软件分析,数据处理采用方差分析.结果 N组中大鼠肺组织有少量HMGB1mRNA及其蛋白表达,ALI组和MPN组大鼠肺组织中HMGB1 mRNA及其蛋白表达水平明显高于N组,差异均有统计学意义（均P＜ 0.05）,24 h表达达峰值;同一时相点ALI组大鼠肺组织HMGB1 mRNA及其蛋白表达水平高于MPN组,差异有统计学意义（P＜0.05）.ALI组大鼠与MPN组不同时相点W/D增高,与N组比较差异有高度统计学意义（P＜ 0.01）,MPN组与ALI组比较W/D下降（P＜ 0.05或P＜ 0.01）.与N组比较,ALI组和MPN组组织病理学有不同程度的病理损害,MPN组比ALI组坏死程度轻,炎症细胞浸润少.结论 HMGB1在炎症后期持续性高水平表达,在ALI发生、发展过程中,尤其是ALI后期失控性炎性反应过程中可能发挥重要作用.甲基强的松龙注射剂通过影响HMGB1 mRNA及其蛋白表达,对脂多糖所致的急性肺损伤有一定的保护作用.     

高速泳动族蛋白B1和自噬在急性肺损伤致病中的作用机制

急性肺损伤(acute lung injury,ALI)是危重患者病程中出现的一种危及生命的临床综合征.鉴定早期诊断ALI的新型生物标志物和寻找更有效的治疗方法是当前研究的热点.高速泳动族蛋白B1 (high mobility group box-1 protein,HMGB1)是一种与脓毒症、恶性肿瘤和免疫性疾病密切...     

高迁移率族蛋白B1在香烟诱导的慢性阻塞性肺疾病模型大鼠肺部的表达

目的观察高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠及断烟后大鼠肺部的表达。方法雄性SD大鼠随机分为正常对照组、COPD组及断烟组,每组10只。采用烟熏法建立COPD大鼠模型,HE染色观察支气管肺组织病理形态学改变,免疫组化法检测HMGB1的表达。结果 COPD组和断烟组肺平均内衬间隔显著高于正常对照组(P<0.05),而COPD组和断烟组比较差异无统计学意义;免疫组化染色可见HMGB1主要分布于支气管及肺泡上皮细胞,3组间平均积分光密度(AIOD)比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论单纯被动吸烟可复制COPD模型,HMGB1可能与COPD的发病有关。     

丙酮酸乙酯对脓毒症急性肺损伤大鼠的 作用及其机制研究

目的 探讨丙酮酸乙酯（EP）对脓毒症急性肺损伤（ALI）大鼠的作用及其可能的作用机制。 方法 选取健康成年雄性SD 大鼠40 只,采用随机数字表法分为对照组、假手术组、ALI 组和EP 组,每组10 只。 ALI 组和EP 组采用盲肠结扎穿孔法复制大鼠脓毒症模型,假手术组仅翻动盲肠,不做结扎穿孔。EP 组术后 腹腔注射EP 溶液（40 mg/kg,间隔6 h）,对照组、假手术组和ALI 组腹腔注射等量乳酸林格液（间隔6 h）。 模型复制24 h 后心脏采血处死大鼠。酶联免疫吸附试验检测肺组织匀浆中高迁移率族蛋白B1（HMGB1）、 Toll 样受体4（TLR4）及核因子κB（NF-κB）的表达;计算肺组织湿干重比;HE 染色后光镜下观察肺组 织病理结构变化。结果 ALI 组、EP 组HMGB1、TLR4 及NF-κB 水平高于假手术组（P <0.05）,且EP 组 低于脓毒症ALI 组（P <0.05）;对照组与假手术组HMGB1、TLR4 及NF-κB 水平比较,差异无统计学意义 （P >0.05）。ALI 组、EP 组肺组织湿干重比高于假手术组（P <0.05）,且EP 组低于ALI 组（P <0.05）;对照 组与假手术组肺组织湿干重比比较,差异无统计学意义（P >0.05）。对照组和假手术组肺组织结构完整,肺泡 间隔无水肿、炎症;ALI 组肺泡结构破坏严重,肺泡间隔增宽,肺间质明显渗出、出血和大量炎症细胞浸润; EP 组肺泡结构较完整,与ALI 组相比,肺间质渗出、出血及炎症细胞浸润症状明显减轻。结论 EP 可能通过 抑制HMGB1/TLR4/NF-κB 信号通路,减轻肺组织炎症反应,改善肺损伤程度从而对脓毒症ALI 发挥保护作用。     

蜂蛰伤致急性肾损伤患者高迁移率族蛋白B1的水平及意义

目的 通过检测蜂蛰伤致急性肾损伤患者血清高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)的水平,探讨其与蜂蛰伤致急性肾损伤的发生和发展的关系.方法 收集30例蜂蛰伤致急性肾损伤患者和28例健康对照者的血清标本.应用抗体夹心ELISA方法检测血清HMGB1的水平;应用全自动生化分析仪、全自动血液分析仪检测生化指标,并分析HMGB1水平与各生化指标的相关性.结果 蜂蛰伤致急性肾损伤患者血清中HMGB1水平为(6.49±3.73 ng/mL),明显高于健康对照者的(1.01 ±0.67) ng/mL(P ＜0.01).血清HMGB1水平明显与血清肌酐、肌酸激酶、肌红蛋白、尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶、尿α1微球蛋白呈正相关(P＜0.01),而与血总胆红素及血红蛋白无明显相关(P＞0.05).结论 蜂蛰伤致急性肾损伤患者血清HMGB1水平明显增高,且与疾病的发生发展密切相关,其可能通过影响肾小管功能参与蜂蛰伤致急性肾损伤的发生发展.     

High mobility group box 1 protein: possible pathogenic link to atrial fibrillation

Atrial fibrillation (AF) is the most common sustained dysrhythmia in clinical practice. The bulk of evidence suggests that inflammatory processes, oxidative stress and matrix metalloproteinase are associated with development of AF. However, these agents may be involved in high mobility group box 1 protein (HMGB1). We hypothesized that HMGB1 may be a possible pathogenic link to AF. A growing body of evidence supports these hypotheses. First, the level of serum HMGB1 is significantly increased in patients with AF including paroxysmal and persistent AF. Second, HMGB1 has been identified as a new pro-inflammatory cytokine in cardiovascular diseases, along with tumor necrosis factor (TNF)-α, interleukin (IL)-6, and C-reactive protein, and there is cross-talk between HMGB1 and inflammatory cytokines. Third, oxidative stress is involved in the release of the pro-inflammatory cytokine, HMGB1, indicating there is cross-talk between oxidative stress and inflammation, and oxidative stress may reinforce the effect of inflammation on the pathogenesis of AF and inflammation may play a more important role in the pathogenesis of AF. Fourth, HMGB1 can promote matrix metalloproteinase-9 upregulation and activation. Fifth, HMGB1 receptors (receptor for advanced glycation end products, Toll-like receptor-2,4) may mediate the atrial structural remodeling or be up-regulated in patients with non-valvular AF. These results suggest that HMGB1 may participate in the pathogenesis of AF and provide a potential target for pharmacological interruption of AF.     

Changes of High Mobility Group box 1 in Serum of Pig Acute Hepatic Failure Model and Significance

The role of the high mobility group box 1 （HMGB-1） in acute hepatic failure and the effect of artificial liver support system treatment on HMGB-1 level were investigated. Pig models of acute hepatic failure were induced by D-galactosamine and randomly divided into two groups with or without artificial liver support system treatment. Tumor necrosis factor-α （TNF-α） and interleukin-1β （IL-1β） levels were detected by the enzyme linked immunosorbent assay （ELISA）, the expression of HMGB-1 by Western blot, and serum levels of HMGB-1, liver function and hepatic pathology were observed after artificial liver support system treatment. The levels of TNF-α and IL-1β were increased and reached the peak at 24th h in the acute hepatic failure group, then quickly decreased. The serum level of HMGB-1 was increased at 24th h in the acute hepatic failure group and reached the peak at 48th h, then kept a stable high level. Significant liver injury appeared at 24th h and was continuously getting worse in the pig models of acute hepatic failure. In contrast, the liver injury was significantly alleviated and serum level of HMGB-1 was significantly decreased in the group treated with artificial liver support system （P〈0.05）. It was suggested that HMGB-1 may participate in the inflammatory response and liver injury in the late stage of the acute liver failure. Artificial liver support system treatment can reduce serum HMGB-1 level and relieve liver pathological damage.     

调控高迁移组蛋白1诱导大鼠肺泡巨噬细胞表达诱生型一氧化氮合酶的信号通路

目的观察细胞外信号调节激酶(ERK)、p38分裂原激活的蛋白激酶(p38MAPK)及核因子-κB(NF-κB)在高迁移组蛋白1(HMGB1)诱导大鼠肺泡巨噬细胞表达诱生型一氧化氮合酶(iNOS)中的作用。方法体外培养的大鼠原代肺泡巨噬细胞(PRAMs)分别与ERK抑制剂PD98059、p38MAPK抑制剂SB203580和NF-κB抑制剂PDTC,以及PD98059联合SB203580共孵育2h后,培养基中分别加入重组人HMGB1作用6h。采用逆转录聚合酶链式反应检测培养细胞中iNOSmRNA表达,用Greiss法测定培养上清中NO2-/NO3-的含量。结果PD98059、SB203580和PDTC均可显著下调HMGB1诱导PRAMs表达iNOSmRNA和产生NO(P<0·05)。联合使用PD98059和SB203580可增强抑制iNOSmRNA表达和NO产生(P<0·05)。结论信号分子ERK、p38MAPK和NF-κB均参与了HMGB1诱导大鼠肺泡巨噬细胞表达iNOS和产生NO。     

支气管哮喘小鼠模型肺组织和肺泡灌洗液高迁移率族蛋白B1的表达及地塞米松的干预作用

目的 探讨支气管哮喘小鼠模型肺组织和肺泡灌洗液的高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达变化及地塞米松的干预作用.方法 18只雌性Balb/C小鼠,随机分成3组,分别为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,鸡卵白蛋白(OVA)组,OVA/地塞米松治疗组;制作支气管哮喘模型;全身体积描记法检测小鼠气道反应性,支气管肺泡灌洗液(BALD作细胞分类计数,酶联免疫吸附试验(EUSA)测定BALF上清中HMGB1含量,左肺行苏木精-伊红(HE)染色,蛋白免疫印迹方法检测右肺组织HMGB1表达.结果 1、成功制作支气管哮喘模型.2、BALF中HMGB1含量变化:OVA组肺泡灌洗液中HMGB1含量(6.31±4.05ng/ml)显著高于对照组(2.59±0.73ng/ml)(P=0.017);与OVA组比较,OVA/地塞米松组(3.39±0.50ng/ml)小鼠支气管肺泡灌洗液HMGB1含量无显著降低(P=0.052).3、肺组织HMGB1的表达情况:OVA组小鼠肺组织HMGB1相对表达量(HMGB1/TUBULIN)(2.08±0.87)显著高于对照组(0.93±0.18)(P<0.05);与OVA组比较,OVA/地塞米松组小鼠肺脏HMGB1表达量(1.15±0.48)无显著减低(P=0.133).结论 HMGB1在支气管哮喘小鼠的肺组织和支气管肺泡灌洗液中表达明显增加,但地塞米松无明显拮抗效果.提示HMGB1可能是哮喘防治的新靶点.