HIF-1α、VEGF在CIA大鼠模型中的表达与意义

目的制备牛Ⅱ型胶原诱导性大鼠关节炎(collagen Ⅱ-induced arthritis,CIA)模型,探讨低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在类风湿关节炎发病中的作用。方法50只SD大鼠,随机分为对照组与模型组。建立CIA模型,动态观察各项关节炎活动指标,于造模第21、28、35、42天取踝关节行HE染色及HIF-1α、VEGF免疫组化染色,分析两者在CIA中的相关性及与关节炎活动指标、滑膜病理学评分之间的关系。结果CIA大鼠关节滑膜层和滑膜下层均表达HIF-1α、VEGF二者呈明显正相关,r为0.75(P<0.01),第21天阳性表达量最高,随病程进展,表达逐渐下降,与滑膜病理学评分、滑膜增生评分及血管生成评分呈显著正相关,r分别为0.4、0.48、0.50(P<0.05),与炎症浸润评分无明显相关r为0.30(P<0.05)。结论HIF-1α可能通过调控一系列下游靶基因,如VEGF等,促进滑膜增生及血管生成,影响类风湿性关节炎(rheumatoi...     

昆明山海棠对CIA HIF-1α的影响

目的:探讨昆明山海棠(THH)对胶原诱导性大鼠关节炎(CIA)大鼠模型中对于低氧诱导因子(HIF-1α)表达的影响。方法:建立胶原诱导性关节炎(CIA)模型,动态观察关节炎指数(AI)与HE染色关节的病理改变,免疫组化法检测HIF-1α表达。结果:THH的高中低治疗组以及地塞米松治疗组与CIA模型组和正常对照组中的HIF-1α表达有统计学意义(P<0.05)。结论:THH治疗CIA具有明显疗效,提示其作用机制与调节滑膜组织内的HIF-1α的表达有关。     

臭氧通过调节HIF-1α-VEGF信号通路治疗类风湿关节炎的实验研究

目的探索臭氧通过调节低氧诱导因子-1α（HIF-1α）-血管内皮生长因子（VEGF）通路对类风湿关节炎（RA）的治疗机制。方法将30只Wistar大鼠随机分为对照组（Con组）、类风湿关节炎组（RA组）、O3治疗组（O3组）,采用弗氏完全佐剂乳化的牛Ⅱ型胶原诱导建立RA大鼠模型。O3组大鼠右膝关节腔注射O3,Con组和RA组局部注射0.9%氯化钠溶液,治疗结束后测量各组大鼠膝关节肿胀率,并检测各组血清、关节液及滑膜组织HIF-1α和VEGF蛋白表达水平,及滑膜组织HIF-1α和VEGFmRNA表达水平。结果与Con组比较,RA组和O3组大鼠膝关节肿胀率明显增高,血清、关节液及滑膜组织HIF-1α和VEGF蛋白表达明显升高（P＜0.05）,滑膜组织HIF-1α和VEGFmRNA表达水平也显著升高（P＜0.05）。与RA组比较,O3组右膝关节肿胀率明显减小（P＜0.05）,关节液及滑膜组织中表达水平明显下降（P＜0.05）,滑膜组织上述因子mRNA表达水平也显著下降（P＜0.05）,但血清中上述细胞因子表达水平无统计学差异（P＞0.05）。结论臭氧可以通过抑制关节内HIF-1α、VEGF的表达水平,调控HIF-1α-VEGF信号通路来治疗类风湿关节炎。     

昆明山海棠对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜组织中HIF-1α表达的影响

目的探讨昆明山海棠(THH)在胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型中对外周血及滑膜组织低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响。方法将Wistar大鼠分为对照组(n=10,不做任何处理)、CIA模型组(n=10)、治疗组[包括地塞米松组(n=10)、THH高剂量组(n=10)、THH中剂量组(n=10)及THH低剂量组(n=10)]。实验前CIA模型组及治疗组大鼠建模。X线摄片观察关节的形态改变,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)以及免疫组化法分别检测HIF-1α在外周血及滑膜组织中的表达情况。结果对照组大鼠踝关节软组织结构完整,足趾关节间隙清楚,CIA模型组大鼠踝关节周围软组织肿胀,足趾关节间隙模糊、狭窄;各治疗组分别与CIA模型组及与对照组比较,大鼠在外周血及滑膜组织中HIF-1α表达差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 THH可能通过调节外周血以及滑膜组织中HIF-1α的表达而对CIA大鼠具有治疗作用。     

蒙药“里德日-5味汤”对Ⅱ型胶原蛋白导致性大鼠关节炎的治疗

目的探讨蒙药"里德日-5味汤"对Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠的治疗效果。方法建立Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠模型,采用酶联免疫吸附实验检测各组血清中的IL-6、IL-10。结果Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠有明显的局部关节肿胀。滑膜细胞增生较为明显,表现出有3-7层的增生,且在下组织中有明显的炎性细胞浸润,血管及纤维结缔组织有明显的增生出现,严重破坏了关节结构。滑膜组织中可见淋巴滤泡形成。滑膜组织见比较明显的白介素-1和肿瘤坏死因子-α表达,各关节间隙变窄,且模糊不清。结论蒙药五味汤能抑制血清中IL-6,而上调IL-10水平。蒙药五味汤对胶原诱导性关节炎大鼠有明显疗效。     

穴位埋线对CIA大鼠IL-1β、TGF-α及MVD表达的影响

目的通过观察穴位埋线对大鼠胶元诱导型关节炎(CIA)模型血清IL-1β、TNF-α表达及其滑膜新生血管的影响,探讨其对类风湿关节炎(RA)的作用机理。方法建立Ⅱ型胶原诱导大鼠胶原性关节炎模型,造模成功的大鼠随机分为模型组、来氟米特组、穴位埋线治疗组、来氟米特+穴位埋线治疗组。ELISA法血清中IL-1β、TNF-α表达含量变化和SP免疫组织化学染色法滑膜组织MVD计数。结果与模型组比较,各治疗组血清中IL-1β、TNF-α及滑膜组织MVD均明显下降(P0.01),且各治疗组之间比较无统计学差异(P0.05)。结论穴位埋线可能通过降低大鼠血清IL-1β、TNF-α表达而发挥抑制关节滑膜血管新生作用,这可能是姜黄素治疗类风湿关节炎的作用机制之一。     

血管内皮生长因子和核因素-κB在CIA大鼠滑膜组织中的表达

目的探讨胶原性关节炎大鼠滑膜组织中VEGF和NF-κB的mRNA的表达及其意义。②方法实验采用Ⅱ型胶原皮下多点注射的方法建立胶原诱导关节炎模型并进行关节指数评价。应用RT-PCR技术检测VEGF和NF-κB mRNA表达。③结果大部分大鼠在胶原致敏后2周左右发病,VEGF和NF-κB mRNA在模型组中的表达明显高于正常组,且两者的表达呈明显正相关。④结论VEGF和NF-κB参与了胶原性关节炎滑膜血管翳的形成过程,在RA的发病机制中具有重要意义。     

青藤碱对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜血管新生的影响

目的观察青藤碱对Ⅱ型胶原诱导性关节炎模型大鼠（CIA）低氧诱导因子1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）及基质金属蛋白9（MMP-9）的影响,探讨青藤碱对类风湿关节炎（RA）滑膜血管新生的作用机制。方法40 只远交群大鼠,随机选取10 只作为对照组,余30 只大鼠采用尾根部皮下注射Ⅱ型胶原和不完全弗氏佐剂的方法复制关节炎模型。15 d 后造模大鼠随机分为模型组、雷公藤组、青藤碱组,每组10 只。雷公藤组：雷公藤多甙片9.68 mg/（kg·d）灌胃给药;青藤碱组：青藤碱片100 mg/（kg·d）灌胃给药;模型组灌服等体积0.9%氯化钠注射液。1 次/d,共28 d。期间测量大鼠踝关节肿胀度。灌药28 d 后处死大鼠,免疫组织化学法检测关节滑膜组织HIF-1α水平,酶联免疫吸附试验测定血清中VEGF、MMP-9 水平。结果与模型组比较,青藤碱组和雷公藤组大鼠关节肿胀度减轻（p <0.05）;青藤碱组和雷公藤组滑膜组织中HIF-1α 表达降低（p <0.05）;青藤碱组和雷公藤组血清中VEGF、MMP-9 表达降低（p <0.05）。结论青藤碱可降低CIA 踝关节肿胀,疗效与雷公藤多甙相当。其机制可能是通过下调HIF-1α的表达及VEGF、MMP-9水平,从而减少滑膜新生血管生成。     

复原益肾汤对类风湿关节炎大鼠IL-17、TNF-α及MMP3的影响

目的:观察复原益肾汤对Ⅱ型胶原诱导的关节炎大鼠滑膜组织病理改变及相关细胞因子表达的作用,探讨复原益肾汤治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的潜在机制。方法：以Ⅱ胶原诱导大鼠RA模型,设正常对照组、模型组、甲氨蝶呤组、复原益肾汤高中低剂量组,测算大鼠足肿胀率;酶联免疫吸附试验法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)和白细胞介素-17( interleukin 17,IL-17)水平;免疫组化法检测软骨和滑膜基质金属蛋白酶3 (matrix metalloproteinase 3,MMP3)水平;光镜观察大鼠足关节滑膜组织病理学变化。结果：复原益肾汤高、中剂量组及甲氨喋林(methotrexate,MTX)组的RA大鼠关节炎症积分和Mankin’s评分较模型组均有显著降低(P<0.01);中药各组及MTX组血清中TNFα、IL-17均有显著降低(P<0.01),中药高剂量组与MTX组无统计学差异(P>0.05);中药高剂量组和MTX组中软骨层及滑膜层MMP3较模型组有显著降低(P<0.01),两者间无统计学差异(P>0.05)。结论：复原益肾汤可改善关节炎大鼠的病理损伤,其作用机制与抑制TNF-α、IL-17、MMP3等炎症介质的表达密切相关,为复原益肾汤治疗RA提供了科学依据。     

清热化瘀凝胶对Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠炎症细胞因子表达的影响

目的通过观察清热化瘀凝胶对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠滑膜及血清细胞因子表达的影响,探讨清热化瘀凝胶外敷治疗类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)的相关作用机制。方法 50只SD雌性大鼠随机分为清热化瘀凝胶外敷组、雷公藤多苷片口服组、扶他林外敷组、模型组和正常组,每组10只。观察大鼠关节肿胀度,关节病理切片,肝脏、肾脏组织病理切片,采用ELISA法检测血清及滑膜组织中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)、血管生成素1(Ang-1)和白介素1β(IL-1β)表达差异。结果清热化瘀凝胶外敷组CIA大鼠关节肿胀程度明显减轻;与模型组比较,清热化瘀凝胶组显著降低CIA大鼠血清中IL-1β(P 0. 01)、TNF-α(P 0. 001)和Ang-1(P 0. 01)的水平;滑膜组织中IL-1β(P 0. 001)、TNF-α(P 0. 01)、VEGF(P 0. 01)及Ang-1(P 0. 001)较模型组显著下降;关节病理切片显示清热化瘀凝胶可减少炎症细胞浸润、抑制滑膜组织增殖、延缓骨质破坏;肝脏、肾脏病理切片与正常组比较无异常变化。结论清热化瘀凝胶通过降低RA炎症细胞因子水平,抑制滑膜组织增殖,减少滑膜中血管新生和血管翳形成,进而控制RA病情,且安全性良好。     

青蒿琥酯对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡的影响

目的:观察青蒿琥酯对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的动物模型-胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠滑膜细胞的影响,探讨其对RA的作用机制。方法:雄性Wistar大鼠皮内注射Ⅱ型胶原,建立CIA大鼠模型,然后取其滑膜组织用胶原酶消化法进行原代培养。取3~5代的传代细胞,进行后续实验。流式细胞仪检测青蒿琥酯和甲氨喋呤对滑膜细胞凋亡率的影响,电镜观察青蒿琥酯作用下滑膜细胞的形态。结果:青蒿琥酯高、中浓度可导致滑膜细胞的凋亡率增加(P<0.05),电镜下可以观察到青蒿琥酯引起滑膜细胞凋亡。结论:青蒿琥酯对实验性RA的作用与诱导滑膜细胞凋亡有关。     

益气活血解毒中药对胶原诱导性关节炎大鼠NF-κB信号通路相关因子表达的影响

目的探讨益气活血解毒中药对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠炎症细胞因子及NF-κB信号通路关键因子表达的影响。方法以牛Ⅱ型胶原尾根及背部多点注射制作CIA大鼠模型,以免疫抑制剂来氟米特为阳性对照药物,益气活血解毒中药干预,病理切片HE染色,观察大鼠足跖关节的病理改变,细胞因子芯片检测CIA大鼠血清中炎症细胞因子的含量,real-time PCR检测NF-κB信号通路中关键因子的基因表达改变。结果益气活血解毒中药可以明显抑制关节滑膜组织增生,缓解炎性渗出,缩小纤维素样坏死区范围,并显著降低CIA大鼠外周血血清中肿瘤坏死因子(TNF)α、白细胞介素(IL)-1β、IL-5、IL-6、IL-10的含量,NF-κB mRNA表达与模型组相比均显著下降(P0.01或P0.05),NF-k B抑制蛋白激酶mRNA表达有下降趋势,统计学分析差异无显著性。结论益气活血解毒中药可以通过干预与类风湿关节炎(RA)相关的炎症细胞因子和NF-κB信号通路相关因子的表达,抑制病变组织的炎症反应,修复炎症所导致的关节损伤,达到治疗RA的目的,这是益气活血解毒中药干预RA免疫炎症反应的关键作用机制之一。     

沙利度胺对CIA鼠关节滑膜中MCP-1的影响

目的以胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠为模型,观察沙利度胺对CIA鼠关节滑膜组织中单核细胞趋化蛋白（MCP-1）的影响。方法利用牛Ⅱ型胶原建立Wistar大鼠CIA模型,造模成功后随机分为正常对照组、生理盐水CIA模型对照组、吲哚美辛阳性药物对照组和沙利度胺治疗组。结果在胶原第1次免疫后第11～13天,CIA鼠模型建立,关节肿胀在第17天达高峰,沙利度胺给药后能显著降低足肿胀的程度,减轻关节炎症评分指数,抑制炎症细胞浸润,减少滑膜细胞增生,并减少鼠滑膜组织中MCP-1的表达。结论沙利度胺的抗炎作用可能与抑制关节滑膜组织中趋化因子MCP-1的表达相关。     

羊源Ⅱ型胶原蛋白诱导关节炎模型相关指标的检测

目的检测羊源Ⅱ型胶原蛋白诱导关节炎模型相关指标,分析此模型的相关指标与牛Ⅱ型胶原蛋白诱导的关节炎模型的异同。方法分别用牛、羊Ⅱ型胶原蛋白免疫动物,比较两组免疫大鼠足趾容积、关节炎肿胀评分、血清细胞因子的检测和关节滑膜病理改变。结果羊Ⅱ型胶原蛋白成功诱导出关节炎模型,与牛Ⅱ型胶原白诱导关节炎模型在造模成功率上差别无统计学意义,其中羊Ⅱ型胶原蛋白诱导组大鼠关节发病时间、关节肿胀达高峰时间及肿胀程度均早于和重于牛Ⅱ型胶原蛋白诱导组。羊Ⅱ型胶原蛋白诱导组血清细胞因子IL-1β、TNF-α升高较牛胶原蛋白诱导组更为显著(P<0.01)。病理切片显示两模型组关节滑膜均有炎细胞浸润,滑膜细胞层次增多,排列紊乱,但牛组重于羊组。结论羊Ⅱ型胶原蛋白可诱导大鼠关节炎。     

龙须藤提取物对胶原诱导性关节炎模型大鼠的影响

目的研究龙须藤乙酸乙酯提取物对胶原诱导性关节炎模型大鼠滑膜组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)的影响,探讨其作用机理。方法建立胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型,观察大鼠足趾肿胀度的变化,用免疫组化法检测大鼠踝关节滑膜组织中TNF-α、IL-6、IL-8的含量。结果龙须藤乙酸乙酯提取物能抑制大鼠足趾肿胀及滑膜组织中TNF-α、IL-6及IL-8的表达。结论龙须藤乙酸乙酯提取物对类风湿性关节炎有一定的治疗作用,其作用机理是降低滑膜组织中TNF-α、IL-6、IL-8的表达水平。     

气候因素对Ⅱ型胶原蛋白所致类风湿关节炎模型大鼠关节炎症、免疫脏器指数及组织形态的影响

目的观察气候因素对Ⅱ型胶原蛋白所致类风湿关节炎(RA)模型大鼠关节炎症、免疫脏器指数及组织形态的影响。方法将40只SD大鼠随机分为空白组、Ⅱ型胶原组、Ⅱ型胶原+人工风寒湿组(简称风寒湿组)、Ⅱ型胶原+人工风湿热组(简称风湿热组)4组,每组10只,雌雄各半。空白组给予等量生理盐水,Ⅱ型胶原组皮下注射Ⅱ型胶原佐剂混合液,其余2组采用Ⅱ型胶原佐剂混合液诱导,外加人工气候因素制备RA大鼠模型。造模28 d后,比较各组大鼠的关节炎评分、胸腺指数、脾脏指数,并观察各组大鼠左后肢踝关节的组织形态改变。结果与空白组比较,各模型组大鼠均出现了不同程度的足趾关节肿胀,关节炎评分均显著升高,差异有高度统计意义(P0.01);各模型组脾脏指数均有所升高,其中风寒湿组与空白组比较差异有统计意义(P0.05);组织形态观察,造模后,Ⅱ型胶原组、风寒湿组和风湿热组大鼠踝关节出现不同程度的滑膜增生、淋巴细胞浸润。结论气候因素对Ⅱ型胶原蛋白所致RA模型大鼠关节炎症、组织形态具有一定的影响,能加重RA大鼠关节的病理损伤。     

犀角地黄汤对胶原诱导性关节炎大鼠模型滑膜组织中磷脂酶C-γ1表达的影响

目的 探讨大鼠胶原诱导性关节炎(CIA)模型形成及应用犀角地黄汤治疗过程中大鼠关节滑膜组织中磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)的表达情况,进一步探讨犀角地黄汤治疗类风湿关节炎的作用机制.方法 SD大鼠构建CIA模型,运用实时荧光定量反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)法检测空白对照组、模型组和实验组大鼠在第42天关节滑膜组织中PLC-γ1的表达情况.结果 模型组大鼠关节滑膜组织中PLC-γ1的相对表达量(0.125±0.001)明显高于空白对照组(0.031±0.001)(P＜ 0.01),犀角地黄汤实验组PLC-γ1的相对表达量(0.072±0.001)低于模型组(P＜0.05).结论 犀角地黄汤可降低大鼠关节滑膜组织中PLC-γ1的表达,对类风湿关节炎急性期有一定的治疗作用.     

RNA干扰沉默STAT3对胶原诱导大鼠类风湿性关节炎的治疗作用

目的: 研究小干扰RNA(siRNA)干扰沉默信号转导和转录激活因子3(STAT3)对大鼠类风湿关节炎(RA)的治疗作用,评价其有效性,为RA的基因治疗提供实验依据。方法: 采用鸡Ⅱ型胶原诱导方法建立大鼠 RA(CIA)模型,实验分为正常组(非关节炎大鼠)、模型组(不给予治疗的关节炎大鼠)、阴性对照组(给予乱码RNA的关节炎大鼠)和治疗组(给予STAT3特异干扰siRNA的关节炎大鼠),实验中siRNA均由慢病毒颗粒包载。实验期间观察大鼠一般情况,每7 d检测大鼠关节病变程度并记录,实验第35天处死大鼠后观察其关节病理切片并进行评分;Western blotting法检测大鼠滑膜组织中STAT3蛋白表达水平;RT-PCR法检测大鼠滑膜组织中STAT3 mRNA表达水平。结果: 与模型组和阴性对照组比较,治疗组大鼠临床及形态学表现均明显减轻。与正常组比较,模型组和阴性对照组大鼠滑膜组织中STAT3 mRNA和蛋白表达水平明显增加(P<0.05或P<0.01),治疗组差异无统计学意义(P>0.05);模型组与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,治疗组大鼠滑膜组织中STAT3 mRNA和蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。结论: 局部注射siRNA阻断STAT3的表达可明显改善RA大鼠关节的组织病理学表现,其机制可能与STAT3 mRNA和蛋白表达水平降低有关。     

桂皮醛对关节炎大鼠炎症因子及骨桥蛋白的作用

目的 探讨桂皮醛(Cin)对Ⅱ型胶原诱导的关节炎(CIA)大鼠的作用及对骨桥蛋白(OPN)水平的影响。方法 选取20只SPF级SD健康雄性大鼠,随机选取5只大鼠为对照组,其余大鼠建立Ⅱ型CIA大鼠模型。取造模成功的大鼠随机分为模型组、低剂量Cin组、高剂量桂Cin组,每组5只。造模成功后连续给药3周,1次/天,低、高剂量Cin组分别给予剂量为100、200 mg/kg的Cin灌胃处理,正常组和模型组使用等量生理盐水灌胃处理。观察Cin对CIA大鼠关节炎评分影响,检测各组大鼠血清中OPN、白介素-6(IL-6)、IL-17和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,免疫组织化学法(IHC)检测滑膜组织中OPN表达,Western blot法检测滑膜组织中OPN的蛋白表达,RT-QPCR方法检测软骨中OPN mRNA水平,HE染色观察各组大鼠关节组织病理改变。结果 与对照组比较,模型组大鼠关节炎评分显著升高,血清中OPN、IL-6、IL-17和TNF-α的水平显著升高,OPN在滑膜、软骨表达水平升高,关节组织出现明显的炎症细胞浸润和滑膜增生;与模型组比较,低、高剂量Cin组能够降低大鼠关节炎评...     

五味润僵汤治疗类风湿关节炎的实验研究

目的:研究五味润僵汤对类风湿性关节炎患者的疗效。方法:建立Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠模型。测量大鼠足肿胀度,计算肿胀率及关节炎指数。采用酶联免疫吸附测定法检测各组血清中的TNF-α和IL-1B表达的影响,并与模型组、正常组进行对比研究。结果:CIA大鼠有明显持续的局部关节肿胀的临床表现。给药后各组治疗均能减少大鼠足爪肿胀和关节指数,与模型组相比差异显著(P<0.01)。正常组的血清中TNF-α和IL-1B呈低表达,与模型组血清中的TNF-α和IL-1B的高表达有显著性的差异(P<0.01)。治疗组血清中TNF-α和IL-1B较接近于正常组的表达,与模型组差异有显著性(P<0.01)。结论:五味润僵汤治疗Ⅱ型胶原诱导性关节炎具有显著疗效,能够明显减轻大鼠的足爪肿胀,降低血清中TNF-α和IL-1B水平。