人NRAMP1 基因3′UTR多态性与新疆汉族人群结核病易感性的研究

目的:探讨人NRAMP1 -3′UTR 基因多态性与新疆汉族人群结核病易感性的相关性.方法:选取新疆汉族活动性结核病患者215 例, 新疆汉族人群正常对照214 人,用聚合酶链反应限制性片断长度多态性(PCR-RFLP) 的方法对NRAMP1 -3′UTR 进行基因扩增,根据基因型对样本分组,经统计学处理,研究NRAMP1 -3′UTR 与结核病易感性的关系.结果:在新疆汉族人群肺结核病患者中3′UTR TGTG/ TGTG基因型148 例(68.8 %) ,TGTG/ TGTG缺失基因型52例(24.1 %) ,TGTG缺失/ TGTG缺失基因型15例(6.9 %) ; 新疆汉族人群正常对照TGTG/ TGTG基因型则为150 例(69.4 %) ,TGTG/ TGTG缺失基因型36例(16.6 %) ,TGTG缺失/ TGTG缺失基因型30 例(13.8 %) .新疆汉族人群正常对照组TGTG/ TGTG基因型明显高于新疆汉族人群结核病患者χ2 = 7.92 , P < 0.05 .结论:NRAMP1 基因汉族3′UTR TGTG缺失等位基因多态现象与新疆汉族人群结核病易感性有相关性.     

人NRAMP1基因3′UTR多态性与新疆汉族人群结核病易感′性的研究

目的：探讨人NRAMP1-3′UTR基因多态性与新疆汉族人群结核病易感性的相关性。方法：选取新疆汉族活动性结核病患者215例,新疆汉族人群正常对照214人,用聚合酶链反应限制性片断长度多态性（PCR-RFLP）的方法对NRAMP1-3′UTR进行基因扩增,根据基因型对样本分组,经统计学处理,研究NRAMP1-3′UTR与结核病易感性的关系。结果：在新疆汉族人群肺结核病患者中3′UTR TGTG／TGTG基因型148例（68．8％）,TGTG／TGTG缺失基因型52例（24．1％）,TGTG缺失／TGTG缺失基因型15例（6．9％）;新疆汉族人群正常对照TGTG／TGTG基因型则为150例（69．4％）,TGTG／TGTG缺失基因型36例（16．6％）,TGTG缺失／TGTG缺失基因型30例（13．8％）。新疆汉族人群正常对照组TGTG／TGTG基因型明显高于新疆汉族人群结核病患者χ2=7．92,P〈0．05。结论：NRAMPI基因汉族3′UTRTGTG缺失等位基因多态现象与新疆汉族人群结核病易感性有相关性。     

维生素D受体基因FokI位点多态性与维吾尔族小儿尿路结石的关系

目的探讨维生素D受体(VDR)基因FokI位点多态性与维吾尔族小儿尿路结石的关系。方法选择维吾尔族尿路结石患儿74例(病例组)及维吾尔族正常儿童103例(对照组),应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析VDR基因FokI位点多态性与维吾尔族小儿尿路结石的关系。结果病例组及对照组VDR基因Fo-kI位点基因型分布差异有统计学意义(χ2=7.818,P<0.05),基因型Ff占病例组58.1%,明显高于对照组。结论 VDR基因FokI位点多态性与维吾尔族小儿尿路结石有相关性,VDR基因FokI可能作为泌尿系结石的候选基因。     

NRAMP1基因多态性与类风湿性关节炎遗传易感性的关联性研究

目的：研究探讨自然抗性相关性巨噬细胞蛋白1（NRAMP1）基因在宁夏人群类风湿性关节炎中的作用。方法：应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）法检测NRAMP1基因3’UTR、D543N两个多态性位点的基因型,进行类风湿性关节炎发病危险因素病例对照研究。结果：（1）NRAMP1-3’UTR位点TGTG＋/del基因型在病例组中的分布频率显著高于对照组（P=0.039）,差异具有显著性意义;3’UTR位点TGTGdel/del基因型在病例组和对照组中的分布差异无显著性意义（P=0.423）。（2）NRAMP1-D543N位点GA基因型在病例组中的分布无显著性意义（P=0.835）;D543N位点AA基因型在病例组和对照组中的分布差异无显著性意义（P=0.722）。结论：NRAMP1-3’UTR位点与类风湿性关节炎的易感性具有相关性。     

NRAMP1基因多态性与重庆市汉族人群肺结核易感相关性研究

目的:研究(Natural-resistanee-associated macrophage protein1,NRAMP1)NRAMP1基因rs17235409A/G、ra17235416TGTG/(-)位点多态性与重庆地区汉族人群肺结核易患性的关系.方法:采用病例对照研究.按肺结核诊断标准(GB 15987-1995),在重庆市、重庆市沙坪坝区结核病防治所选取初治、肺结核痰涂片阳性的汉族肺结核确诊病例100例;对照为同样诊断标准排除肺结核等疾病的汉族正常人,共106例.用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性的方法对NRAMP1基因rs17235409A/G、rs17235416TGTG/(-)进行基因分型,用检验分析这2个位点多态性与结核病易患性的关系,数据分析利用SAS8.2软件进行.结果:病例组中NRAMP1基因rs17235409 GG、GA+AA基因型频率分别为67.00%、33.00%;对照组中分别为87.34%、12.26%,组间分布差异有统计学意义,x2=12.694 8,P＜0.05.具有GA或(和)AA基因型的个体患肺结核的OR为3.523 5,OR95%CI为1.762 3～7.0449.rs17235416TGTG/(-)多态性基因频率在病例和对照组间有显著性差异(x2=7.377 3,P＜0.05).拥有TGTG/(-)+TGTG(-)/(-)基因型的个体的OR值为2.340 2,OR95%CI为1.267 0～4.322 2.结论:NRAMP1 rs17235409A/G、NRAMP1 rs17235416TGTG/(-)2个位点多态性均与重庆市汉族人群肺结核易患性相关,可能是重庆地区汉族人群肺结核易患性的影响因素.NRAMP1rs17235409A等位基因、rs17235416 TGTG(-)等位基因可能是重庆市汉族人群肺结核发生的危险因素.     

NRAMP1基因多态性与云南汉族人群耐多药肺结核的关联

目的 探讨云南地区汉族人群NRAMP1基因3'UTR位点单核苷酸多态性与耐多药肺结核发生的关系,并寻找基因型的影响因素。方法 应用聚合酶链式反应检测NRAMP1基因3'UTR位点的多态性,比较感染组（耐多药肺结核患者）与对照组（健康体检人群）基因型的分布频率和等位基因的频率差异,并对感染组基因型的影响因素进行二分类logistic回归分析。结果 300例感染组与300例对照组NRAMP1基因3'UTR位点的基因型TGTG+/+分布频率为60.7%/71.3%,基因型TGTG+/-分布频率为33.0%/24.7%,基因型TGTG-/-分布频率6.3%/4.0%,两组比较χ²=7.779,P=0.020。基因型TGTG+/-增加了耐多药肺结核的易感性（OR:1.573,95%CI:1.097~2.255）,等位基因TGTG-亦增加了其的易感性（OR:1.516,95%CI:1.136~2.022）。在影响因素分析中,患者的依从性（OR=3.919,95%CI=1.071~14.343）、药物的不良反应（OR=0.212,95%CI=0.062~0.728）、合并结核性胸膜炎（OR=0.159,95%CI=0.049~0.523）是等位基因TGTG缺失的影响因素。结论 云南汉族人群耐多药肺结核的发生与NRAMP1基因3'UTR位点的TGTG缺失有关,而TGTG缺失又与患者的依从性、药物不良反应、合并结核性胸膜炎有关。     

VDR基因多态性与耐多药肺结核的关联

目的探讨云南地区汉族人群VDR基因FokI、TaqI位点单核苷酸多态性与耐多药肺结核发生的关系,并寻找基因型的影响因素。方法应用聚合酶链式反应检测VDR基因FokI、TaqI位点的多态性,比较感染组(耐多药肺结核患者)与对照组(健康体检人群)基因型的分布频率和等位基因的频率差异,并对感染组基因型的影响因素进行二分类Logistic回归分析。结果 300例感染组与300例对照组VDR基因FokI位点的基因型FF分布频率为29.8%/33.0%,基因型Ff分布频率为45.5%/53.3%,基因型ff分布频率24.7%/13.7%,两组比较χ~2=11.783,P=0.003。等位基因F分布频率52.5%/59.7%,等位基因f分布频率47.5%/40.3%,两组比较χ~2=6.256,P=0.012。VDR基因TaqI位点的基因型TT分布频率为55.8%/61.7%,基因型Tt分布频率为36.4%/32.7%,基因型tt分布频率7.8%/5.6%,两组比较χ~2=2.700,P=0.259。等位基因T分布频率73.8%/78.0%,等位基因t分布频率26.2%/22.0%,两组比较χ~2=... 更多     

VDR基因多态性与宁夏回族儿童哮喘相关性研究

目的探讨VDR（维生素D受体）基因BsmI、ApaI、TaqI和FokI位点的单核苷酸多态性与宁夏回族哮喘发病的关系。方法采用PCR-RFLP方法分析VDR基因4个多态位点（FokI,BsmI,TaqI,APaI）的基因型及基因频率。结果 FokI位点的基因型分布与基因频率分布在宁夏回族病例组与宁夏回族对照组及在回族病例组与汉族病例组之间差异有统计学意义（P〈0.05）,表明FokI位点可能是宁夏回族儿童的一个哮喘易感位点,同时也可能是宁夏回族儿童哮喘与宁夏汉族儿童哮喘之间存在差异性的一个位点。BsmI、ApaI及TaqI位点的基因频率与基因型频率分布在宁夏回族病例组与宁夏回族对照组及在宁夏回族病例组及宁夏汉族病例组之差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 VDR基因的FokI位点与宁夏回族儿童哮喘存在显著相关性,可能是宁夏回族儿童哮喘的易感因素。     

维生素D受体基因多态性与新疆南疆地区维吾尔族小儿上尿路含钙结石易感性的关系研究

目的：探讨维生素D受体（VDR）基因多态性与新疆南疆地区维吾尔族小儿上尿路含钙结石的关系。方法选择新疆南疆地区维吾尔族上尿路含钙结石患儿89例（病例组）和同地区正常儿童121例（对照组）,提取外周血基因组DNA,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法检测并分析 VDR的ApaI、TaqI、FokI基因多态性的分布频率及其与小儿上尿路含钙结石的关系。结果病例组和对照组 VDR基因的Fok I等位基因多态性分布频率差异有统计学意义（χ2＝15．04;P ＜0．001）,两组ApaI和TaqI等位基因多态性分布频率差异无统计学意义（χ2＝0．350,P ＝0．552;χ2＝2．930,P ＝0．093）;两组FokI的基因型差异有统计学意义（χ2＝11．621,P ＜0．001）,两组ApaI和TaqI的基因型分布频率差异无统计学意义（χ2＝0．287,P ＝0．592;χ2＝2．483,P ＝0．115）。FokI基因型的分布频率在男性中有统计学意义（χ2＝8．497,P ＝0．004）,在女性中无统计学意义（χ2＝3．230,P ＝0．072）;ApaI和TaqI基因型分布频率无论在男性还是女性中均没有统计学意义（χ2＝1．938,P ＝0．164;χ2＝0．828,P ＝0．363和χ2＝1．667,P＝0．197;χ2＝0．937,P ＝0．333）。结论维生素D受体（VDR）的FokI基因多态性可作为新疆维吾尔族小儿上尿路含钙结石的基因标记物,f等位基因可作为含钙结石危险因素的标志;ApaI和TaqI基因多态性与含钙结石的形成没有关系。     

ELOVL2和SLC11A1基因多态性与新疆地区人群结核病易感性的相关性

目的研究超长链脂肪酸延伸酶2基因(ELOVL2)和溶质载体蛋白家族11A成员1基因(SLC11A1)单核苷酸多态性(SNP)与新疆维吾尔族人群结核病(TB)易感性的相关性。 方法选择维吾尔族TB患者178例为TB组,142例健康人为对照组。采用高通量测序检测各组ELOVL2基因rs1570069、rs2236212、rs3798719位点和SLC11A1基因rs17235409、rs17235416位点的多态性,分析不同遗传模型下基因多态性与TB易感性的相关性。 结果两组间各位点基因型、等位基因分布的差异ELOVL2无显著性(P＞0.05),而SLC11A1有显著性(P＜0.05)。隐性遗传模型下,rs17235409的GA+AA基因型、rs17235416的AT+TT基因型是TB的危险因素；超显性遗传模型下,rs17235409的GG+AA基因型、rs17235416的AA+TT基因型是TB的保护因素(P＜0.05)。 结论ELOVL2基因多态性与新疆维吾尔族人群TB易感性可能不相关；SLC11A1基因多态性与新疆维吾尔族人群TB易感性可能相关。     

Ｌｉｍｓ Ｅ：一个新的ＬＩＭ同源域基因的克隆和初步分析

目的:克隆与分析小鼠不同剪切的Lims基因.方法:应用巢式RT-PCR,以小鼠cDNA为模板,扩增Lims基因不同剪切子,构入PinPointTM Xa-1T质粒,测序鉴定.结果:测序表明克隆了新的Lims基因变异剪切体Lims E,该变异剪切体编码区为1 164 bp.编码387个氨基酸.结论:比较基因组学分析显示,成功地克隆了一新的小鼠Liras基因剪切子Lims E,为进一步研究Lims基因在细胞发育中的功能打下了基础.     

沙眼衣原体ompA基因克隆及其在真核细胞中的表达

目的克隆D型沙眼衣原体(Ct)ompA基因,构建真核表达重组质粒,转染真核细胞,为核酸疫苗的研制作准备.方法用PCR技术从D型Ct基因组DNA中扩增ompA基因片段,重组入pUCm-T克隆载体.将pUCm-T/ompA中的ompA外源基因片段经酶切、连接等反应,亚克隆入pcDNA3.1真核表达载体,进行序列分析和酶切鉴定后,运用脂质体将重组体pcDNA3.1/ompA转染HeLa细胞,免疫组化法观察目的的基因的表达.结果从D型Ct基因组DNA中扩增出特异的ompA基因片段;序列测定证实与GenBank登陆的D型Ct一致;重组质粒pcDNA3.1/ompA在HeLa中获得表达.结论Ct ompA基因能够在体外真核细胞表达,为进一步研究Ct致病机制及DNA疫苗的研究提供理论依据.     

穿梭质粒pZH32的构建

以pS189、pSV_2gpt、pMCi5为材料,构建了以EB病毒为基础,以酪氨酸tRNA琥珀突变校正基因SupF为靶基因,以黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因Eco gpt为选择标记基因的穿梭质粒pZH32。pZH32长9.4kb,克服了以SV40为基础的穿梭质粒自发突变率高以及宿主范围局限的缺点。SupF基因遗传背景清楚,长度126bp,便于进行序列分析。gpt基因使转化克隆的筛选更加方便。有利于建立一种化学诱变剂的分子检测系统,研究基因突变的类型和突变机制。     

哺乳动物性别决定基因的研究进展

目的了解哺乳动物性别决定基因的作用与功能。方法查阅本领域国内外文献并进行综述。结果SRY、SOX9、WT1、SF1、AMH及DAX1等基因都参与哺乳动物性别决定。结论性别决定基因的研究对性分化与发育异常等临床疾病的诊断和治疗具有十分重要的意义。     

人B7-1/Sart3融合基因的克隆和表达

目的：构建人共刺激分子CD80(B7-1)、T细胞识别的鳞状细胞癌抗原3(Sart3)融合基因真核表达载体，并分别在原核和人成纤维细胞中表达。方法：采用RT-PCR技术，从人胎盘组织抽提的总RNA中克隆Sart3基因的部分cDNA序列(第1～1281bp)．此段序列包括已报道的能诱导HLA限制性细胞毒性T淋巴细胞的抗原表位。然后将不含终止密码子的B7-1 cDNA和Sart3 cDNA共克隆入真核表达载体pEGFP-N1，测定核苷酸序列确定重组成功后，分别转染大肠杆菌和人成纤维细胞，利用流式细胞仪和Western blot检测B7和Sart3的表达。结果：构建人B7、Sart3融合基因真核表达载体B7sart3／pEGFPN。测序结果与GenBank的B7、Sart3相应序列(NM_005191、NM_014706)一致．阅读框无改变。流式细胞仪测定发现在转染的人成纤维细胞表面有明显的荧光增强．免疫印迹发现融合蛋白可以与抗B7抗体反应，融合蛋白分子量与B7-Sart3-EGFP的预测分子量相当。结论：成功构建真核表达载体B7Sart3／pEGFPN，并在人成纤维细胞中表达。为下一步研究将SART3蛋白作为肿瘤疫苗应用于骨肉瘤的生物治疗打下基础。     

GFP-pl6融合基因表达载体的构建

本文报道了以ＧＦＰ（绿色荧光蛋白）基因为报告基因，ｐｌ６基因为目的基因，将ｐｌ６基因分别插入ＧＦＰ基因的上游和下游，构建成ＧＦＰ－ｐｌ６融合基因表达载体ｐＣｐｌ６Ｇ和ｐＣＧｐ１６，并通过酶切、电泳技术对重组体进行了鉴定。该表达载体的构建成功为开展ｐｌ６转基因动物模型的建立及其特性研究奠定了基础     

肿瘤特异性报告基因载体的构建

目的：将构建一种能在肿瘤组织中进行肿瘤行异性表达的逆转录病毒载体，增强肿瘤基因治疗的靶向性。方法：PCR法获得HER2基因的启动子片段并将其克隆至逆转录病毒载体P^LXSN中，再将突变型绿色荧光蛋白（mtGFP)基因克隆至该启动子下游。结果：质粒P^LHSN经EcoR I和BamH I酶切后可切出510bp和5.8kb两条片段；质粒P^LHGSN经BamH I酶切可切出520bp和6.7kb两条片段。结论：成功构建了携带HER2基因启动子和mtGFP报告基因的逆转录病毒载体。     

Rh(-)献血者128例基因分型

目的：探讨Rh(-)献血者RhD基因分型的临床意义。方法：采用PCR－－SSP技术检测郑州市128例Rh（－）献血者的RhD基因结构，用氯仿／三氯甲烷法放散检测D^u检测，结果：RhD基因多态性存在3种基本形式，其中外显子完整存在32例（25．00％），全部为D^u型，完全缺失85例（66．41％），部分缺失11例（8．59％），其中2例为D^u型。结论：RhD基因的丰富多态性对于确保输血安全具有指导意义。     

慢性胃炎胃粘膜上皮细胞中bax、fas、p16基因的表达

目的:探讨bax、fas和p16在胃粘膜病变发生发展过程中的作用及意义.方法:应用免疫组织化学方法,检测慢性浅表性胃炎(CSG)和轻、中、重度慢性萎缩性胃炎(CAG)患者胃粘膜上皮细胞中bax、fas(促凋亡基因)和p16(增殖负调控基因)基因蛋白的表达情况.结果:CSG和轻、中、重度CAG胃粘膜中bax的表达率分别为41.75%、72.41%和78.26%,fas的表达率分别为39.81%、65.52%和78.26%,p16的表达率分别为9.71%、24.14%和30.43%.轻、中、重度CAG与CSG比较,bax、fas、p16的表达差异有显著性意义P<0.05～0.01.轻、中、重度CAG间比较,差异无显著性意义.结论:bax、fas和p16的高表达,使得细胞增殖/凋亡的比例失衡,在胃粘膜病变的发生发展中可能有重要意义.     

应用RNA干扰抑制目的基因在小鼠体内表达

目的研究RNA干扰(RNAi)对体外和体内基因表达的沉默作用。方法以PCR方法从基因组DNA中克隆出依赖于RNA聚合酶Ⅲ的H1启动子,并用于驱动RNAi片段的合成;构建特异性针对目的基因(绿色荧光蛋白,GFP)的RNAi载体(Pi)。将RNAi干扰载体和GFP载体转染NIH3T3细胞,应用荧光显微镜观察、RT-PCR、流式细胞技术(FACS)分析上述细胞中RNAi对目的基因GFP表达的抑制效果,进一步在个体水平将RNAi载体注入小鼠体内,研究RNAi对GFP表达的抑制情况。结果RNAi能有效地使NIH3T3细胞中GFP表达量降低约60%以上,并能有效地抑制GFP在转基因小鼠体内的表达。结论RNAi技术能抑制目的基因在体内外的表达,是一种有效的基因治疗工具。