肾癌HSP70-PC体外诱导DC成熟激活特异性抗肿瘤免疫的作用

目的研究肾癌细胞株中纯化的HSP70-PC体外诱导DC成熟及激活特异性抗肿瘤免疫的作用。方法采用亲和层析及离子交换层析法纯化肾癌细胞HSP70-PC，体外致敏DC，流式细胞仪检测DC表型变化，用DC体外诱导CTL产生，MTT法比较其对不同肿瘤细胞的杀伤活性。结果HSP70-PC和TNF-α均能使DC高表达分化相关抗原CD1a、CD83、HLA—DR，肾癌细胞中纯化的HSP70-PC致敏的DC体外诱导的CTL对肾癌细胞有较高的杀伤活性。结论肾癌细胞中纯化的HSP70-PC能有效地诱导DC成熟，并使其具有活化针对肾癌细胞的特异性CTL的能力。     

sCD40L联合TB.HSP70-H22肽刺激树突状细胞诱导特异性抗肿瘤免疫的研究

目的 探讨受sCD40L与结核杆菌HSP70(mycobacterium tuberculosis heat shock protein 70,TB.HSP70)-H22肽联合刺激的树突状细胞(dendritic cell,DC)在体内外的特异性抗肿瘤免疫.方法 取小鼠骨髓于培养第7天分为未刺激组、sCD40L组、TB.HSP70-H22肽组、sCD40L+TB.HSP70-H22肽组,共4组,分别给予相应干预,24 h后取上清,ELISA法检测IL-12、IL-10,流式细胞术检测CD40、CD80,混合淋巴细胞反应(MRL)检测淋巴细胞增殖,MTT法检测对肿瘤细胞的杀伤率;建立小鼠肝癌模型,完全随机分为5组(分别给予生理盐水和以上4种干预获得的DC干预),Ⅰ组:生理盐水对照组,Ⅱ组:未刺激DC治疗组,Ⅲ组:sCD40L DC治疗组,Ⅳ组:TB.HSP70-H22肽DC治疗组,V组:sCD40L+TB.HSP70-H22肽DC治疗组,于第21天测瘤质量,ELISA法测血清IL-10、IFN-γ.结果 sCD40L+TB.HSP70-H22肽组的各项指标与其他各组相比,IL-10显著降低,其他指标均显著升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).V组与其他各组相比,IL-10和瘤质量均显著降低,IFN-γ显著上升,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 受sCD40L与TB.HSP70-H22肽复合物联合刺激后的DC被充分激活,能诱导强有力的特异性抗肿瘤细胞免疫,对H22瘤细胞产生强大的杀伤作用,显著抑制肿瘤的生长.     

热休克蛋白70-H22肽刺激DC诱导特异性抗肝癌免疫

目的 探讨热休克蛋白70(TB.HSP70)-H22肽是否能促进树突状细胞(DC)活化成熟并诱导H22特异性抗肿瘤免疫.方法 取小鼠骨髓于培养第7天分为A、B、C 3组,分别给予未刺激、TB.HSP70-H22肽(10μg/mL)、TB.HSP70-H22肽(20μg/mL)干预24h,取上清液用ELISA法检测IL-12、IL-10,用FACS法检测CD40、CD80,用混合淋巴细胞反应检测淋巴细胞增殖,用MTT法检测DC活化淋巴细胞对H22和B16肿瘤细胞杀伤率.结果 与A组比较,B、C组除对B16细胞杀伤率差异无统计学意义外,B、C组IL-10明显降低,CD40、CD80、IL-12、淋巴细胞增殖程度和对H22杀伤率均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与B组比较,C组对B16细胞杀伤率差异无统计学意义,IL-10明显降低,CD40、CD80、IL-12、淋巴细胞增殖程度和对H22杀伤率均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 TB.HSP70-H22肽能明显促进DC活化成熟,诱导H22特异性抗肿瘤免疫,为该疫苗用于肝癌免疫治疗提供了理论基础.     

HSP70-PCs的抗肿瘤作用

热休克蛋白（heat shock protein,HSP）由Ritossa在1962年研究果蝇唾液腺染色体时首先发现,是一类广泛存在于自然界生物体内、具有重要生理功能且高度保守的蛋白质。在正常细胞中有少量表达,约占细胞总蛋白的5％-10％,当细胞处于高温、感染、创伤、缺氧及恶性肿瘤等应激状态下,     

人肝癌组织热休克蛋白70的表达

为探讨人肝癌组织热休克蛋白 70 (HSP70 )的表达及意义 ,采用SABC法检测人肝癌组织HSP70的表达 ,图像分析HSP70在癌组织中的表达特点。结果显示 :2 5例肝癌组织中均存在HSP70的表达 ,不同癌组织存在胞质、胞膜和胞核表达强度及部位的差异。证实人肝癌组织存在HSP70的表达异质性 ,呈现了胞质、胞膜和胞核的表达差异 ,HSP70在人肝癌组织的表达特点为今后肿瘤抗原肽瘤苗的提取和实验研究作了铺垫。     

肝细胞肝癌中HSP70和Bcl-2的表达及意义

目的:初步研究热休克蛋白70(HSP70)及抗凋亡蛋白Bcl-2在肝细胞肝癌(HCC)中的表达及其与HCC凋亡的关系。方法:145例HCC、78例肝硬化标本经病理复查后制成组织芯片,免疫组织化学方法检测HSP70和Bcl-2的表达情况。结果:HCC组HSP70表达指数高于肝硬化组(P<0.01);HCC组Bcl-2表达指数低于肝硬化组(P<0.01);HSP70阳性表达指数与Bcl-2阳性表达指数呈负相关(P<0.05)。结论:HSP70可能作为主要的抑制凋亡蛋白参与HCC的凋亡调控,Bcl-2在HCC中凋亡抑制作用可能减弱。     

槲皮素对热休克诱导人肝癌HepG2细胞HSP70和P-gp表达的影响

目的：研究热休克诱导人肝癌HepG22细胞热休克蛋白70（HSP70）和P－糖蛋白（P-gp)随时间的表达规律，并研究应用槲皮素（Qu)对二表达的抑制效应。方法：（1）使用恒温水浴法42℃热休克HepG2细胞90min；（2）采用免疫细胞化学法，流式细胞术检测热休克前，热休克后2，4，8，12，24h时HSP70和P－gp的表达规律，以及热休克前1h应用槲皮素在热后4h二的表达。结果：（1）42℃热休克诱导HepG2细胞，HSP70表达增多，“核内迁移”，阳性细胞数升高，4h达到最高（11．47％），较对照组（6．64％）升高近2倍（P＜0．005），24h后回落到低值，细胞核内表达减少；P－gp阳性细胞数随HSP70升高后升高，12h达到最高值（96．31％），较对照组（33．95）升高近3倍（P＜0．005），24h回落到低值，同时，细胞内低水平的HSP70表达在细胞质中，少部分在细胞核内。（2）热休克前应用槲皮素能有效抑制热2休克诱导HSP70和P-gp的过量表达，槲皮素并能有效抑制二内在表达，以100－200μmol/L Qu作用明显（P＜0．005），呈浓度剂量效应。结论：（1）热休克可能诱导HepG2细胞HSP70和P－gp的过量表达，P－gp与HSP70具有相关关系；（2）槲皮素可能在转录水平上抑制HepG2细胞HSP70和P－gp的合成。     

热休克蛋白70在人肝癌细胞SMMC-7721中的表达

1　材料和方法1.1　材料　人肝癌细胞 SMMC- 772 1由本室保存 ;鼠抗人HSP70单抗、FITC标记的羊抗鼠 Ig G购自 BOSTER公司 ;ENVISION HRP标记的羊抗鼠 Ig G(即用型 )为 DAKO公司产品 .1.2　方法　 1细胞的热休克处理 :接种 2× 10 4SMMC- 772 1于置有盖玻片的 2 4孔培养板中 ,37℃培养过夜 ;将培养板置42℃水浴 2 h,分别于休克后 4,8,12 ,16 ,2 4和 48h,收集细胞爬片 ,以甲醇∶丙酮 (V/ V=1/ 1) 4℃固定 15 min,PBS(p H7.4)洗涤后 ,室温干燥备用 .2免疫组化法检测 HSP70在肝癌细胞的表达 :采用 ENVISION(两步法 ) .细…     

微波消融对小鼠肝癌细胞活性和HSP70表达的影响

[目的]探讨微波消融对小鼠肝癌细胞活性和HSP70表达的影响.[方法]建立C57BL/6J小鼠Hepa 1-6肝癌皮下移植模型,采用微波能量以不同的温度消融肝癌,分别用酶组织化学和Western blot检测被消融肝癌组织细胞琥珀酸脱氢酶（SDH）的活性和HSP70的表达,并观察消融后30 d肝癌局部残留率.[结果]经40℃、45℃或50℃,120 s的条件微波消融后,50℃组消融后24 h小鼠肝癌组织细胞的琥珀酸脱氢酶活性明显低于假消融组;该组消融后30 d肝癌局部残留率明显低于假消融组（均P＜0.01）.3个消融组消融后12 h和24 h肝癌组织HSP70的表达均明显高于相应的假消融组（均P＜0.01）,且随消融温度升高表达明显增强.[结论]微波消融可促进小鼠肝癌HSP70的表达,同时在一定消融条件下能明显降低肝癌细胞的活性.     

热诱导培养角朊细胞表达HSP70

0　引言　热休克蛋白 (HSP)是一类当细胞受到各种有害因素刺激时合成增多的蛋白质 ,在细胞内蛋白的加工过程中具有重要作用 .我们对体外培养的角朊细胞进行热处理 ,然后观察细胞中 HSP70的表达情况 ,并对其意义进行初步探讨 .1　材料和方法1 .1　材料　角朊细胞无血清培养基 (KC- SFM) (GibcoBRL) ,鼠抗人 HSP70单克隆抗体 (Santa Cruz公司 ) ,生物素化羊抗鼠 Ig G及 SABC试剂盒 (武汉博士德生物工程有限公司 ) ,HSP70寡核苷酸探针 (上海生命技术公司合成 ) .1 .2　方法　取手术包皮 (本校西京医院门诊手术室提供 ) ,用2 .5 g·…     

HSP70在大肠癌细胞的表达规律

第一军医大学细胞生物与医学遗传学教研室,广东　广州　５１０５１５　摘要目的　探讨大肠癌细胞（ＬｏＶｏ株）热休克蛋白７０（Ｈｅａｔ　ｓｈｏｃｋ　ｐｒｏｔｅｉｎ　７０,ＨＳＰ７０）热应激时表达规律,为进一步研究ＨＳＰ７０在ＴＮＦ－α诱导大肠癌细胞凋亡中的作用提供了实验依据。方法培养大肠癌细胞 （ＬｏＶｏ）,热应激（４２℃, ３０ｍｉｎ）后分别培养２、 ５、 ８、１１ ｈ,然后运用免疫组化、Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ方法分析应激后不同时间细胞内ＨＳＰ７０的表达和分布。结果热应激２ｈ后ＨＳＰ７０合成量增加,与未应激组比有显著差异（Ｐ＜０．０５）,５～８ｈ后合成量最高（Ｐ＜０．０１）,１１ｈ后明显减少,与２ｈ染色情况基本相同。并观察到热应激细胞中胞核比胞质染色深,ＨＳＰ７０有核迁移现象。少量热应激死亡细胞的特异性染色更深。结论　热应激前ＨＳＰ７０在大肠癌细胞中合成较少,热应激后合成量增加,在 ５～８ ｈ达峰值后降低。     

HSP70对严重烧伤大鼠保护作用的实验研究

目的寻找对严重烧伤早期缺血缺氧性损伤的可行性保护途径.方法构建含HSP70的重组腺病毒载体,股静脉注射该腺病毒载体48 h后,检测大鼠严重烧伤后6 h其血清中内毒素及LDH、IL-1α、IL-1β、IL-6、TNF-α细胞因子水平.结果未转染组大鼠严重烧伤后6 h血清中内毒素及检测的细胞因子水平较正常对照组明显升高.静脉注射含HSP70重组腺病毒组大鼠严重烧伤后血清中上述指标的检测水平与未转染组比较明显降低,但仍显著高于正常对照组.结论静脉注射含HSP70重组腺病毒可减轻严重烧伤后大鼠的缺血缺氧性损伤,但不能完全阻断该损伤.     

热休克蛋白70在人胶质瘤耐药过程中的作用

目的 应用热休克人胶质瘤细胞的方法,观察热休克蛋白70(HSP 70)在人胶质瘤细胞耐药过程中的作用.方法 经43 ℃热处理2 h的人胶质瘤细胞,应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组化技术检测HSP 70 mRNA及蛋白的表达情况;应用hoechst 33258荧光染色的方法观察化疗药物阿霉素(adriamycin,ADM)作用后,不同处理组人胶质瘤细胞的凋亡情况.结果 HSP 70免疫组化,HS ADM组阳性率为(61.5±18.3)%,与HS组(61.0±14.1)%比较没有统计学意义,但显著高于对照组(8.50±4.09)%(P＜0.05),RT-PCR结果与免疫组织化学一致;ADM组凋亡细胞比率为(52.7±19.1)%,显著高于对照组(6.5±3.6)%(P＜0.05),HS ADM组(25.0±10.7)%高于对照组但显著低于ADM组(P＜0.05),HS组(7.2±3.6)%与对照组没有明显差异(P＞0.05).结论 热休克的方法可以诱导人胶质瘤细胞HSP 70的表达;HSP 70可能是引起人胶质瘤细胞耐受ADM的机制之一.     

HSP70高表达的T24细胞克隆筛选及其生物学特性

目的 筛选耐热T24细胞亚克隆,研究其生物学特性变化。方法 用热暴露筛选,联合应用免疫荧光化学方法及流式细胞仪筛选高表达HSP70的T24细胞亚克隆,计数法测定其细胞生长曲线及细胞倍增时间,流式细胞仪分析其细胞周期的变化。分子生物学方法及细胞化学方法观察有无凋亡出现。结果 有限稀释法筛选获取耐热T24单克隆细胞株（HrT24)共26株,应用免疫荧光法筛选出HSP70阳性克隆12株,取荧光较强的两株命名为HrT24e,HrT24j,FCM（平均荧光强度为0．29）检测HSPs分子的阳性表达率T24,HrT24e,HrT24j分别为2．4％,37．6％,65．8％。细胞周期分析显示T24,HrT24e,HrT24j增殖指数（proliferation index,PI分别为44．3％,39．0％,38．5％,HrT24e与T24相比差异有显意义（Yates corrected,χ^2=5.56,P=0.0183),HrT24e与T24j相比差异无显意义（Yates corrected,χ^2=0.03,P=0.543)。HrT24e与HrT24j凋亡率分别为4．7％,5．9％。分子生物学方法观察到DNA凋亡梯带出现,细胞化学方法观察到凋亡小体。结论 HrT24细胞HSP70表达增加,出现了一定的增殖抑制现象,同时观察到细胞凋亡,推测它们有较好的免疫原性。     

人肾癌组织中热休克蛋白70的纯化与鉴定分析

目的探讨人肾癌组织中热休克蛋白70纯化的有效方法，并进行鉴定分析。方法应用两次亲和层析和离子交换层析获得目的蛋白，经电泳和Western-blot定性分析，应用改良的Bradford法定量分析。结果经过二次亲和层析和Mono Q柱的分离后，得到纯度较高的分子量约为70kDa的蛋白质，经免疫印迹分析证实该蛋白质即为HSP70。与其他方法相比HSP70的纯度更高，获得率接近。结论该文所述方法是一种简单有效的纯化肿瘤组织中HSP70的方法。     

重组人热休克蛋白70D的免疫佐剂样效应研究

目的：研究重组人热休克蛋白70D(rhHSP70D)蛋白的免疫佐剂样效应。方法：用rhHSP70D诱导体外培养的树突状细胞（DC），观察DC分泌前炎性细胞因子的水平、DC成熟及刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力；用rhHSP70D与OVA257-264体外交联的蛋白免疫C57BL/6小鼠，观察能否诱导产生抗原特异性免疫保护作用。结果：rhHSP70D可以明显刺激DC分泌IL-1β、IL-12p70、TNF-α等细胞因子，可以促进DC表达HLA-DR、CD86、CD40等膜分子，增强DC诱导同种异体T淋巴细胞增殖的能力；rhHSP70D-OVA257-264交联蛋白可诱导小鼠产生具有明显抗原特异性的免疫保护作用，而rhHSP70D或OVA257-264单独免疫小鼠均不能产生这种保护作用。结论：rhHSP70D能通过促进DC成熟、刺激前炎性细胞因子的分泌增强DC的免疫激发功能，rhHSP70D-抗原肽复合物免疫能够诱导产生抗原特异性的免疫保护作用，提示rhHSP70D有望作为一种新的佐剂应用于抗肿瘤及抗感染免疫治疗。     

Study on the preparation of recombinant human HSP70 and its presenting-antigen function

Heat shock protein 70 (HSP70 ) isolated fromtumor cells is conjunct with antigen- peptides so thatthe complex can activate immune response againsttumors in vivo[1— 3 ] .But this kind of complex can notbe used in tumor therapy because it is difficult toprepare on large scale.A promising solution to thisproblem will be the application of HSP70 ,which canbe prepared on large scale by genetic engineering,totumortherapy by binding antigen peptides in vitro.Inthisstudy,soluble HSP70 wasexpresse…     

抑制热休克蛋白70表达可增强宫颈癌细胞对顺铂化疗的敏感性

目的 探讨抑制宫颈癌Hela229细胞内热休克蛋白(HSP)70表达对顺铂(DDP)化疗敏感性的影响.方法 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)及集落克隆法测定各因素对Hela229细胞的抑制作用;溴化丙啶(PI)单染法及DAPI检测细胞的凋亡率;JC-1染色法测定线粒体膜电位(△Ψm)的变化;Western blotting测定相关蛋白的表达;建立裸鼠动物模型测定各因素体内的抑瘤作用.结果 宫颈癌细胞较正常宫颈细胞高表达HSP70;当HSP70抑制剂与顺铂合用,细胞的存活率较单用顺铂显著下降(P<0.01);PI与DAPI染色实验表明HSP70抑制剂能增加顺铂诱导的细胞凋亡率;JC-1染色结果显示,HSP70抑制剂处理后顺铂组细胞线粒体膜电位发生了明显的降低.Western blotting实验结果显示HSP70蛋白表达抑制剂与顺铂合用较单用顺铂显著增加促凋亡蛋Bax/caspase-3表达及caspase-3活化;明显降低抑制凋亡相关蛋白Bcl-2表达.裸鼠移植肿瘤模型结果表明HSP70抑制剂与顺铂合用能增强顺铂对模型小鼠肿瘤的抑制作用(P<0.01).结论 抑制HSP70表达可增强宫颈癌细胞对顺铂的敏感性,机制可能是通过抑制HSP70,进而调节凋亡相关蛋白的表达,促进宫颈癌细胞凋亡.HSP70有望成为宫颈癌基因治疗的一个新靶点.     

HSP70在内毒素休克大鼠胰腺的表达及其意义

目的:观察内毒素休克大鼠胰腺的病理改变及HSP70的表达情况.方法:33只健康Wistar大鼠随机分为对照组、内毒素小刑量组(5 mg/kg)及大剂量组(10 mg/kg),于处理后1 h及处死时采血测血糖及血清淀粉酶,处死后取胰腺免疫组化法测定HSP70及INs的表达.结果:内毒素休克大鼠血糖及血清淀粉酶正常(P＞0.05);胰腺组织HSP70表达增强,处理组与对照组比较强阳性表达率明显增高(P＜0.01);小剂量组的强阳性率又较大剂量组显著增强(P＜0.01).3组的Ins表达率无显著差异(P＞0.05).结论:内毒素可诱导胰腺HSP70的表达增强,从而使胰腺产生内毒素耐受.