丙戊酸对人卵巢癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的：探讨丙戊酸（valproic acid,VPA）对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用。方法：建立24只人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机分成4组,每组6只： (1) 治疗组：包括①VPA组;② 顺铂（diamminedichloroplatinum,DDP）组;③VPA+ DDP组;(2) 对照组。观察各组裸鼠皮下移植瘤生长情况、裸鼠体重的变化,采用流式细胞术（flowcytometry,FCM）检测肿瘤细胞凋亡率、细胞周期时相、裸鼠肝、脑组织细胞的凋亡率和肿瘤细胞中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的蛋白含量。结果：治疗组皮下移植瘤抑瘤率分别为40.7%、45.3%、58.0%,差异有统计学意义(P＜0.05);治疗组的凋亡率分别为（27.05±1.63）％、（35.93±3.89）％、（42.59±2.55）％,高于对照组（16.73±2.82）％;肿瘤细胞出现明显的凋亡形态学变化,S期细胞显著减少;各组肝脏和脑组织细胞凋亡率均较低,差异无统计学意义(P＞0.05);治疗组中VEGF蛋白含量明显低于对照组。结论：VPA对卵巢癌皮下移植瘤生长有抑制作用,其作用的实现可能与其诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤血管生成有关。VPA与顺铂联合应用其抑瘤作用增强,而对肝细胞和脑细胞毒性较低。     

丙戊酸长期给药对抑制PC3细胞系裸鼠移植瘤生长的影响

目的 探讨丙戊酸(VPA)长期给药抑制人雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞裸鼠移植瘤生长的效应。方法 建立PC3细胞裸鼠移植瘤模型，实验组给予含0.4%丙戊酸钠饮用水，对照组给予纯的饮用水，给药4周，每隔2d测量肿瘤体积1次。取裸鼠移植瘤组织，免疫组化检测p21WAF/CIP和Ki67，Western blot检测p21WAF/CIP和乙酰化H3（Ac-H3）蛋白的表达，Tunnel法检测肿瘤细胞的凋亡。结果 对照组肿瘤体积大于实验组，肿瘤生长抑制率为77.27%。实验组p21WAF/CIP表达强于对照组(P＜0.01)，而Ki67表达弱于对照组。实验组Ac-H3表达增加(P＜0.01)。实验组平均每个视野中凋亡细胞数高于对照组（P＜0.01）。结论 VPA长期给药对PC3细胞移植瘤生长抑制作用明显，该作用是通过抑制细胞增殖、诱导凋亡实现的。     

丁酸钠抑制人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的研究

目的:观察丁酸钠对卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用,探讨其作用机制。方法:建立卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为4组,两治疗组分别采用不同方案以不同剂量丁酸钠进行治疗,两对照组同法注射同体积磷酸盐缓冲液(PBS)。治疗结束,取裸鼠心、肝、肾、肠等脏器做组织学观察,取肿瘤组织进行光学显微镜、电子显微镜观察,并用末端脱氧核苷酰转移酶穴TDT雪介导的脱氧尿嘧啶缺口末端标记法(TUNEL)进行分析,计算凋亡率。结果:各治疗组肿瘤体积明显缩小,细胞凋亡率显著增高,(P<0.01)。结论:丁酸钠可能通过诱导肿瘤细胞凋亡而抑制裸鼠卵巢癌移植瘤的生长,用药越早效果越显著。     

CD59-siRNA对人卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的作用

目的探讨针对CD59的siRNA(CD59-siRNA)对人卵巢癌裸鼠移植瘤CD59的沉默效应及其抑瘤作用。方法采用脂质体转染法将CD59干扰质粒(T组)和空质粒(V组)转染A2780细胞,获得稳定表达细胞株,将T组、V组A2780细胞和未转染(C组)的A2780细胞分别接种于裸鼠皮下建立肿瘤模型,通过绘制肿瘤生长曲线、RT-PCR和免疫组织化学法研究其抑瘤效应和对CD59基因及蛋白的沉默效应。结果与V组和C组比较,T组肿瘤体积和质量明显减小(F=301.88、5.39,q=4.01~30.41,P<0.05),CD59基因及蛋白表达减少(F=817.77、247.71,q=26.59~52.25,P<0.05)。结论特异性沉默CD59基因的siRNA表达载体可以明显抑制CD59的表达及卵巢癌在体内的生长。     

丙戊酸对体外培养的卵巢癌细胞上皮性钙粘附素表达的影响

目的：探讨丙戊酸(valproic acid,VPA)对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞上皮性钙粘附素（E cadherin）表达的影响。方法：将VPA以不同浓度(0、1、2、3、4、5?mmol/L)不同作用时间(24、48、72?h)作用于SKOV3细胞,相差显微镜下观察细胞形态的变化；用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖；用流式细胞仪测定细胞周期动力学变化；用免疫细胞化学方法检测E cadherin蛋白表达情况；用流式细胞术测定SKOV3细胞E cadherin蛋白含量。结果：①3?mmol/L作用48?h后SKOV3细胞形态出现明显变化；②不同浓度(0、1、2、3、4、5?mmol/L)VPA作用不同时间(24、48、72?h)后, SKOV3细胞增殖活性比较,差异有统计学意义(P<0.05) ；不同浓度(0、1、2、3、4、5?mmol/L)VPA作用不同时间(48、72?h)后,首先引起细胞周期分布的改变,随剂量的加大和用药时间的延长,凋亡率逐渐升高；③3?mmol/L VPA作用48?h后,与对照相比，SKOV3细胞浆中的棕色颗粒明显增多；④VPA作用48?h后, SKOV3细胞E cadherin蛋白含量明显增多(P<0.05)。结论：VPA可以抑制SKOV3的生长，并且在蛋白水平上调卵巢癌细胞分泌E cadherin。     

顺铂及拓扑替康对卵巢癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的 :了解顺铂 (DDP)、拓扑替康 (TPT)单独及联合应用对卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用。方法 :裸鼠右侧背部皮下接种人卵巢癌SKOV3细胞 ,2 1d后分 4组治疗 ,每组 6只动物。对照组 ,腹腔注射无菌生理盐水 ;DDP组 ,腹腔注射DDP 3mg·kg-1 ;TPT组 ,腹腔注射TPT 5mg·kg-1 ;DDP +TPT组 ,腹腔注射DDP 3mg·kg-1 ,6h后腹腔注射TPT 5mg·kg-1 ;上述药物均每 4d注射 1次 ,共注射 4次 ,于实验第 39d处死裸鼠。治疗期间观察并记录各组裸鼠皮下移植瘤的生长情况 ,计算肿瘤体积、肿瘤生长抑制率 ,绘制肿瘤生长曲线。结果 :各治疗组治疗后肿瘤体积和抑瘤率与对照组相比差异均具有统计学意义 (P <0 .0 5 )。与DDP及TPT组比较 ,DDP +TPT联合用药组肿瘤体积明显减小 (P <0 .0 0 1 ) ,抑瘤率明显增高 (P <0 .0 0 1 )。结论 :DDP与TPT联合用药比 2药单独应用抑制肿瘤生长的作用更强 ,二者具有协同抗癌作用     

抗血管内皮生长因子抗体对人浆液性卵巢癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的研究抗血管内皮生长因子抗体(抗VEGF抗体)对浆液性卵巢癌生长的抑制作用。方法首次采用人浆液性卵巢癌组织直接接种而建立的裸鼠皮下移植瘤动物模型,观察有中和活性的抗人VEGF121单克隆抗体对肿瘤生长的影响。实验用BALB裸鼠分为两组,每组各6只,治疗组给予抗VEGF 121抗体,100μg/次;对照组给予等体积的磷酸盐缓冲液,均为腹腔内注射,自肿瘤接种后24 h起,每周2次,共9次;肿瘤接种一周起每次给药前测量肿瘤的长径及短径,并计算各时点体积;治疗结束后24 h处死动物,测量肿瘤的重量及计数肿瘤组织中的微血管密度(MVD)。结果①抗体治疗组与对照组裸鼠的体积逐渐出现差异,这种差异随时间的推移逐渐增大,接种第22天差异有显著性(P<0.05),并持续至实验结束。②用药结束后24 h处死裸鼠,治疗组平均瘤重为(0.70±0.11)g,对照组平均瘤重为(1.19±0.18)g,两组相比较有显著性差异(P<0.01)。③对照组肿瘤组织中微血管较密集,MVD值为7.60±1.14,治疗组肿瘤组织中的微血管明显减少,MVD值为4.80±0.83,两组相比较差异有显著性(P<0.05)。结论抗VEGF121单克隆抗体能够有效抑制裸鼠体内浆液性卵巢癌皮下移植肿瘤的血管形成,从而达到抑制肿瘤生长的目的。     

CO2对人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤生长和转移的影响

目的探讨不同压力持续性CO₂气腹对人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤生长和转移的影响。方法将体外培养的人卵巢癌细胞株SKOV3分别暴露于不同压力（8、10、12mmHg）和作用时间（1、3h）的CO₂环境中，对照组细胞放入CO₂培养箱常规培养。收集各组细胞后接种于裸鼠腋下，建立有差异的裸鼠皮下移植瘤模型并绘制肿瘤生长曲线。接种6周后脱臼处死全部裸鼠，测量移植瘤的体积和重量，采用免疫组织化学法检测各组中增殖细胞核抗原（PCNA）和nm23-H1蛋白的表达。结果接种7d后各组均明显成瘤，各CO₂气体处理组的皮下移植瘤生长速度均快于对照组，其皮下移植瘤体积和重量也高于对照组（P＜0.01）。各CO₂处理组中肿瘤细胞PCNA蛋白表达阳性率均高于对照组（P＜0.01），各组间nm23-H1蛋白表达阳性率差异无统计学意义(P＞0.05)。结论CO₂气体本身对人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤的生长有明显的促进作用，对转移影响不大     

罗格列酮联合顺铂对子宫内膜癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的  探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂罗格列酮（ROZ）与顺铂联合应用对子宫内膜癌KLE细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用。方法  构建子宫内膜癌裸鼠模型。成瘤后,将其随机分成6组：生理盐水对照组（A组）,顺铂1mg/kg（B组）,顺铂3mg/kg（C组）, ROZ 50mg/kg（D组）,顺铂1mg/kg＋ROZ 50mg/kg（E组）,顺铂3mg/kg＋ROZ 50mg/kg（F组）。顺铂采取隔天腹腔注射给药,ROZ采取每天灌胃给药。每隔3d测量肿瘤体积,观察药物对肿瘤生长的影响,绘制肿瘤生长曲线。实验第38天处死裸鼠,分离皮下移植瘤并称量其质量计算抑瘤率;免疫组化SP法检测种植瘤组织中核转录因子κB（ NF-κB）、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因（PTEN）蛋白的表达。结果  B、C、D、E、F组抑瘤率分别为：24.41% 、43.34%、49.67%、78.02%、84.78%,与A组比较差异均具有统计学意义（P<0.05）。E、F组抑制子宫内膜癌的作用强于B、C、D组。免疫组化结果显示PTEN表达增强, NF-κB表达减弱（P<0.05）。结论  ROZ、顺铂可抑制子宫内膜癌移植瘤生长,两者联合应用具有协同作用。     

CO2对卵巢癌移植瘤生物学行为及顺铂敏感性的影响

目的  探讨体外模拟的二氧化碳（CO2）气腹环境对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生物学行为的影响,以及CO2气腹环境作用后该移植瘤对化疗药物敏感性的变化。方法  将体外培养的人卵巢癌细胞(SKOV3)暴露于12mmHgCO2环境下分别持续1h(a组)、3h(b组),对照组(c组)细胞放入CO2培养箱中常规培养。将裸鼠配对后随机分为A、B、C 3组（每组10对）,分别于各组裸鼠左侧肩胛部皮下接种上述对应a～c组细胞悬液。明显成瘤后3d,将每组的10对裸鼠再随机分为：A1、B1、C1组（用药组）,腹腔注射顺铂（DDP）5mg/kg,0.5mL,每周1次,共3周;A2、B2、C2组（非用药组）,仅腹腔注射生理盐水0.5mL,每周1次,共3周。停药后次日脱臼处死全部裸鼠,测量肿瘤的体积和体质量,采用免疫组化法检测黏附分子CD44v6和抑癌基因nm23-H1在各组移植瘤中的表达。结果  ①CO2气体处理组的皮下移植瘤增殖速度快于对照组(P＜0.01),CO2作用3h组快于1h组(P＜0.01);②CO2处理组的移植瘤对DDP的敏感性较对照组降低(P＜0.01);③各组间肿瘤组织的CD44v6和nm23 H1的表达差异无统计学意义(P＞0.05)。结论  ①CO2气体对SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤的增殖有促进作用;②CO2环境作用后,移植瘤对DDP的敏感性下降;③CO2气体对肿瘤转移影响不大。     

人卵巢癌顺铂耐药细胞裸鼠腹腔转移模型的建立

目的　探讨建立人卵巢癌顺铂耐药细胞裸鼠腹腔转移模型的方法。方法　人卵巢癌细胞株 3AO和顺铂耐药细胞株 3AO/cDDP细胞体外培养。 4× 10 6个 3AO、3AO/cDDP分别接种于裸鼠腹腔 96h后 ,各随机分为 2组 ,分别腹腔内注射生理盐水和顺铂 (cDDP) ,观察各组裸鼠的致瘤率、生存期和生存延长率。采用流式细胞技术观察转移瘤LRP、MRP基因的表达情况。转移瘤瘤体行病理学检查。结果　 3AO、3AO/cDDP细胞的裸鼠致瘤率差异无显著性 ,P >0 .0 5 ;cDDP能提高 3AO荷瘤鼠的生存期及生存延长率 ,与 3AO/cDDP荷鼠相比 ,差异有显著性 ,P <0 .0 5 ;3AO/cDDP转移瘤的LRP、MRP基因的表达水平显著高于 3AO转移瘤 ,P <0 .0 5 ;病理学检查提示裸鼠腹腔转移瘤细胞具人恶性特征。结论　该方法建立裸鼠卵巢癌腹腔转移模型具有成瘤率高的特点 ,并能保持顺铂耐药特征。     

siRNA介导RRM2基因沉默治疗人卵巢癌裸鼠移植瘤

目的 探讨siRNA沉默核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)基因联合顺铂治疗人卵巢癌裸鼠移植瘤的可行性。 方法 常规体外培养人卵巢癌细胞株SKOV3,采用皮下注射法建立卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,将24只荷瘤鼠随机分为对照组、顺铂组、siRNA组、siRNA联合顺铂组,每组6只,分组给药。观察肿瘤生长情况,测瘤体积并计算肿瘤生长抑制率。采用RT-PCR和免疫组织化学方法分别检测肿瘤组织中RRM2 mRNA及蛋白表达。 结果 对照组、siRNA组、顺铂组和siRNA联合顺铂组平均肿瘤体积分别为(358.28±46.40)、(261.38±52.49)、(261.65±31.97)、(189.37±41.67)mm³,单药作用后肿瘤体积差异有统计学意义(F_siRNA-RRM2=22.399,P_siRNA-RRM2<0.001;F_顺铂=22.254,P_顺铂<0.001);两药间无交互作用(F=0.474,P=0.499)。对照组、siRNA组、顺铂组和siRNA联合顺铂组肿瘤生长抑制率分别为0、36.39%、41.10%、64.33%。siRNA-RRM2与顺铂单药各自均能降低RRM2 mRNA表达水平(F_siRNA-RRM2=9.37,P_siRNA-RRM2=0.006;F顺铂=11.90,P顺铂=0.003)和蛋白表达水平(F_siRNA-RRM2=8.71,P_siRNA-RRM2=0.008;F顺铂=13.01,P顺铂=0.002);两药间无交互作用(F_{RRM2 mRNA}=3.93,P_{RRM2 mRNA}=0.061;F_RRM2蛋白=1.72,P_RRM2蛋白=0.204)。 结论 单用siRNA或联用顺铂均可有效抑制人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤瘤体的生长,可能与其沉默RRM2基因表达有关,特异性沉默RRM2或可成为卵巢癌治疗的一个新思路。     

青蒿琥酯诱导胃癌BGC-823细胞死亡的实验研究

目的观察青蒿琥酯（ART）对胃癌细胞株BGC-823的裸鼠移植瘤生长的影响,并探讨其可能的作用机制。方法将胃癌BGC-823细胞注射至裸鼠右侧背部近腋下部位皮下,建立荷瘤裸鼠模型并随机分为空白对照组（0mg/kgART组）、60mg/kgART组、120mg/kgART组、240mg/kgART组,每组5只。各组裸鼠每天腹腔注射ART1次（空白对照组注射0.9%氯化钠溶液）,连续15d,观察裸鼠移植瘤生长情况,并采用RT-PCR、免疫组化及Westernblot法测定血管内皮生长因子（VEGF）及钙中性蛋白酶2（Calpain2）表达情况。结果4组裸鼠移植瘤体积比较有统计学差异（P＜0.05）,两两比较亦有统计学差异（均P＜0.05）,与空白对照组比较,60mg/kgART组、120mg/kgART组、240mg/kgART组裸鼠移植瘤体积均明显缩小,ART表现出剂量依赖性的抑瘤作用。4组胃癌BGC-823细胞VEGF、Calpain2mRNA与蛋白表达水平比较均有统计学差异（均P＜0.05）,两两比较亦有统计学差异（均P＜0.05）,与空白对照组比较,60mg/kgART组、120mg/kgART组、240mg/kgART组细胞VEGFmRNA与蛋白相对表达水平均下降,Calpain2mRNA与蛋白相对表达水平均升高,且VEGF相对表达水平随ART浓度升高而降低,而Calpain2相对表达水平随ART浓度升高而升高。结论ART在胃癌移植瘤模型体内起剂量依赖性的抑瘤作用,该作用机制可能与下调VEGF的表达、上调Calpain2的表达有关。     

溶血磷脂酸诱导人卵巢上皮癌裸鼠腹腔移植瘤生长研究

目的 观察溶血磷脂酸(LPA)对卵巢上皮性癌裸鼠腹腔移植瘤生长及转移的作用.方法 建立人卵巢上皮性癌腹腔移植瘤模型,16只裸鼠随机分为2组即对照组和LPA处理组,将6×106个未经处理的卵巢上皮癌细胞株SKOV3和用LPA刺激后的SKOV3细胞分别注入2组裸鼠腹腔,待裸鼠自然死亡后,观察移植瘤大小、重量、腹腔转移灶的数目及腹腔脏器转移情况.结果 两组成瘤率均为100%,但LPA组移植瘤生长速度、重量和腹腔转移灶数目均高于对照组(P＜0.01).结论 LPA具有促进卵巢癌细胞在腹腔内增生和浸润转移的作用.     

辛二酰苯胺异羟肟酸对裸鼠人宫颈癌移植瘤的作用及其机制

目的观察辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对裸鼠人宫颈癌移植瘤生长的抑制作用,并对药物作用机制进行探讨。方法培养人宫颈癌SiHa细胞接种至20只裸鼠右下肢背侧根部皮下,15 d后将成瘤的18只裸鼠随机分3组:空白对照组、SAHA1组(25 mg/kg)、SAHA2组(50mg/kg),每组6只。连续4 d腹腔注射药物,间歇7 d,再连续给药4 d,1次/d。观察各组裸鼠宫颈癌移植瘤的生长情况,计算抑瘤率。免疫组化分析及Western blot方法检测各组移植瘤中的Bax及Bcl-2蛋白的表达。结果空白对照组抑廇率为0,SAHA1组为22.44%,SAHA2组为35.52%,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。用药后,SAHA2组裸鼠体质量低于空白对照组及SAHA1组(P<0.05)。SAHA1组与SAHA2组肿瘤体积均小于空白对照组,且SAHA2组小于SAHA1组(P均<0.05)。与空白对照组相比,SAHA1组与SAHA2组裸鼠肿瘤质量低,且SAHA2组低于SAHA1组,差异均有统计学意义(P均<0.05);免疫组化及蛋白印迹法检测结果显示,与空白对照组比较,SAHA1组、SAHA2组Bax蛋白均明显升高,Bcl-2蛋白均明显降低(P均<0.05)。而SAHA2组较SAHA1组变化更明显,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论SAHA可以有效抑制人宫颈癌SiHa细胞裸鼠移植瘤的生长,Bax/Bcl-2相关的细胞凋亡是其抑癌机制之一。     

人胃癌裸鼠体内原位移植生长过程的动态观察

目的 :建立与临床胃癌的生长过程和特点相似实验动物模型。　 方法 :以 SGC- 790 1人胃癌细胞株裸鼠皮下移植瘤为材料 ,将瘤组织块种植到裸鼠胃壁 ,动态观察生长过程。　 结果 :原位移植模型潜伏期 2～ 4周 ,第 4周以后原位肿瘤明显长出 ,第 12周以后出现肝转移 ,第 16周以后部分荷瘤鼠发生腹水 ,幽门梗阻 ,动物逐渐衰竭 ,出现恶病质等征象。　 结论 :原位肿瘤模型与临床胃癌的生长过程和生物学特性非常相似 ,可作为胃癌实验研究的理想动物模型     

丙戊酸对前列腺癌PC3细胞自噬的影响

目的 观察丙戊酸(VPA)诱导前列腺癌PC3细胞发生自噬性死亡的现象,初步探讨其发生的可能机制。方法 VPA作用前列腺癌PC3细胞后, 应用CCK-8试剂盒检测细胞生存率,透射电子显微镜及细胞免疫荧光测定仪观察细胞超微结构及自噬水平, Western-blotting检测PC3细胞内自噬特异性蛋白-Ⅱ(LC3-Ⅱ)及p-Akt蛋白的表达水平。结果 经VPA处理后,前列腺癌PC3细胞活性短期内(≤4d)未受到明显抑制。透射电子显微镜观察可见,前列腺癌PC3细胞质内有大量自噬体和自噬溶酶体,其自噬水平随VPA作用时间的延长逐渐增强。Western-blotting检测表明,前列腺癌PC3细胞LC3-Ⅱ表达水平随VPA作用时间的延长明显升高,而p-Akt表达水平则明显降低。结论 VPA可诱导前列腺癌PC3细胞发生自噬,其诱导前列腺癌PC3细胞发生自噬的机制可能与阻断Akt/mTOR信号转导通路有关。     

裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型的建立

目的：建立裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型。方法：BLBA/c裸鼠颈背部皮下注射人肝癌SMMC-7721细胞悬液5×10^6个/（0.2ml·只）,观察肿瘤生长情况,10周处死。瘤组织作病理及电镜检查;取种植裸鼠周围血作甲胎蛋白（AFP）的检测,随机抽出10只未行处理的BLBA/c雄性裸鼠作对照;用免疫组化法检测肿瘤微血管密度（MVD）,取正常非瘤组织作对照。结果：种植裸鼠周围血甲胎蛋白（AFP）为（528.35±12.48）ng/ml,对照组为（135.37±9.27）ng/ml,两组比较,有显著性差异（P〈0.05）;种植裸鼠平均每中倍视野中的微血管数为（32.45±2.38）个。对照组为（9.16±1.21）个,两组比较,有显著性差异（P〈0.05）。该模型具有类似人原发性肝癌的形态学特征。结论：成功建立了人肝癌裸鼠皮下种植瘤模型。