聚乙二醇修饰磁性5-氟尿嘧啶白蛋白微球的制备与表征

目的 制备聚乙二醇(PEG)修饰的磁性5-氟尿嘧啶白蛋白微球(PEG-5-Fu-MAMS),对其表征和体外释放规律进行初步研究.方法 采用乳化-加热固化法,制备PEG修饰的磁性5-氟尿嘧啶白蛋白微球;用扫描电镜和Malvem粒度仪对其形貌和粒径进行表征;碱消化后在265 nm波长下测定吸光度计算载药量;溶解后于0、5、10、20、30、40、60、90 min测定其吸光度,研究其稳定性和磁响应性;药物体外释放实验研究微球的缓释性.结果 微球平均粒径为1.32μm,呈球形,表面光滑;载药量为(5.31±0.13)%;具有良好的磁响应性;0.5 h释放度为(28.50±0.66)%,24 h释放度为(46.93±2.83)%.结论 PEG-5-Fu-MAMS具有良好的外形、粒径、载药量、磁响应性和药物缓释作用.     

H3K4m3和H3K9m3修饰对胰岛组织特异性基因表达的影响

目的 通过比较不同细胞类型之间胰腺十二指肠同源盒1(Pdx-1)、配对盒基因4(Pax4)、MafA(mast cell function associated antigen)和Nkx6.1等胰岛组织特异性基因其转录起始区的H3K4m3和H3K9m3修饰的差异,探讨H3K4m3和H3K9m3修饰对胰岛组织特异性基因表达的作用.方法 采用染色质免疫共沉淀一实时定量聚合酶链反应(PCR)法检测小鼠胚胎干细胞(mES,1×10~7)、小鼠成纤维细胞株NIH3T3细胞(1×10~7)和小鼠β细胞株NIT-1细胞(1×10~7)三者中的胰岛组织特异性基因、Oct4基因和MLH1基因转录起始区H3K4m3和H3K9m3修饰的状况.同时采用实时定量逆转录(RT)-PCR检测上述3种细胞各基因mRNA表达水平.分析H3K4m3和H3K9m3修饰改变与基因表达之间的关系.结果 NIT-1细胞中Pdx-1、Pax4、MafA、Nkx6.1等胰岛组织特异性基因转录起始区的H3K4m的修饰水平分别为:(4.84±0.05)%、(9.91±1.33)%、(10.64±0.87)%、(0.23±0.03)%,与mES细胞比较明显增高(P<0.05),基因表达;NIH3T3细胞中Pdx-1、Pax4、MafA、Nkx6.1等胰岛组织特异性基因转录起始区的H3K9m3的修饰水平分别为:(0.64±0.21)%、(7.04±1.29)%、(0.39±0.10)%、(2.35±0.81)%,与mES细胞比较明显增高(P<0.05),基因不表达.结论 H3K4m3与H3K9m3修饰能相互协调,共同调控胰岛组织特异性基因的表达.     

偶联多种单链抗体免疫纳米微粒的制备方法及鉴定

目的建立一种多单链抗体修饰氧化铁纳米微粒的方法。方法利用聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)及羧基(COOH group)修饰的氧化铁纳米微粒(Iron OxideNanoparticles,IONPs),以及抗MUC4、抗CEACAM6及抗CD44v6单链抗体(Single chain antibodies,scAbs),通过EDC/Sulfo-NHS交联剂将IONPs-PEG与3种scAbs进行交联,构建IONPs-PEG-multiscAbs复合物,再利用zeta粒度仪、透射电子显微镜(TEM)对IONPs-multi scAbs复合物进行表征,同时,在IONPs-PEG表面偶联荧光抗体,通过荧光强度测定其偶联效率;再鉴定复合物的抗原识别特异性及在放置1个月、6个月后评估复合物水溶液稳定性。结果偶联3种scAbs后,IONPs-PEG-multi scAbs复合物的平均粒径为(23.6±0.5)nm,粒径分布集中,zeta电位约(-17.3±06)m V;TEM显示粒径约10 nm,荧光强度测定结果提示抗体偶联效率约为75%,细胞免疫荧光实验结果提示IONPs-PEG-multi scAbs复合物对高表达MUC4、CEACAM6及CD44v6分子的胰腺癌细胞BxPC-3具有特异性识别能力,证实该复合物具有良好的抗原识别特异性;在放置1个月、6个月后,偶联复合物的溶液分散性良好,放置6个月后平均粒径约(23.9±0.8)nm,zeta电位约(-17.6±0.4)mV,TEM拍照提示粒径约10 nm,细胞免疫荧光提示复合物抗原识别特异性良好。结论本研究利用EDC/Sulfo-NHS交联剂组合,将3种单链抗体交联到PEG和羧基修饰的IONPs表面,构建IONPs-PEG-multi scAbs复合物,该方法偶联效率高,且复合物具有粒径小、分散性好、抗原识别特异性及水溶液稳定性好的特性。     

复合淀粉微球的合成与表征

以玉米淀粉β-环糊精为原料合成复合淀粉微球.通过IR、SEM分析及粒度分析仪(LAP)对微球进行表征.结果表明:制备的微球产率高达88.36%,且颗粒分散性好、表面较光滑、粒径分布较窄,其中14～142μm占80%,7～37 μm占50%以上.     

ProtEx~(TM)外源蛋白修饰技术在移植免疫研究中的作用

目的 采用ProtEx~(TM)外源蛋白修饰技术将外源蛋白FasL修饰于靶细胞,观察其在移植免疫中的作用.方法 1.将嵌合蛋白FasL(SA-FasL)修饰于大鼠脾细胞,检测蛋白的表达效率及其对脾细胞表面免疫分子的影响;分别以近交系WF大鼠和ACI大鼠作为供者和受者,进行异位心脏移植,按围手术期注射供者细胞的不同将受者分为3组:(1)SA-FasL组(n=23):注射经SA-FasL修饰的供者脾细胞;(2)SA组(n=20):注经链霉亲和素蛋白(SA)修饰的供者脾细胞;(3)Control组(n=10):未注射任何细胞,作为空白对照.术后观察移植心的跳动情况,停止跳动为发生排斥反应,持续有力的跳动超过100d为移植心长期存活.2.以链脲佐菌素(STZ)静脉注射诱导C57BL/6小鼠产生糖尿病;将SA-FasL蛋白修饰于小鼠胰岛;以近交系BALB/c小鼠作为供者,糖尿病C57BL/6小鼠作为受者,进行胰岛移植,根据移植不同的供者胰岛将受者分为组:(1)islet-FasL组(n=21):移植经SA-FasL修饰的胰岛,(2)islet-SA组(n=21):移植经SA修饰的胰岛;(3)islet组(n=14):移植未经修饰的胰岛,作为空白对照.若受者尿糖阳性,并连续2d血糖≥250 mg/ml为移植排斥反应.尿糖阴性超过100d为移植物长期存活.结果 流式细胞术检测FasL蛋白在脾细胞的平均表达率为(94.49±4.27)%,免疫荧光染色显示FasL蛋白呈红色,表达于脾细胞表面;FasL蛋白的表达干扰脾细胞表面分子CD3、CD4、CD8、CD80以及主要组织相容性复合物I类抗原的表达.SA-FasL组70%的受者移植心获得长期存活,SA组仅为25%,两组间的差异有统计学意义(P<0.05).胰岛移植术后30d,islet-FasL组67%的受者移植胰岛功能良好,29%的受者移植胰岛获得长期存活,与其他两组(均为0)比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 ProtEx~(TM)是简便、快速、安全和高效的外源蛋白修饰技术,过该技术将嵌合蛋白FasL直接表达于靶细胞,将对移植免疫应答发挥重要的调节作用.     

反义IDO-AFP基因融合修饰树突状细胞抗肝癌免疫作用

目的探讨反义IDO-AFP基因融合修饰树突状细胞(DC)后,DC通过调控色氨酸代谢达到高效、特异性抗肝癌作用。方法采用细胞培养方法,从小鼠骨髓中获得DC,用反义IDO核酸和AFP基因融合的载体,转染入DC内,检测转染入融合基因DC的对T细胞增殖的影响和体外对肝细胞癌的免疫应答的改变。以~(51)Cr释放法测定细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性。制作小鼠肝癌模型,分别予以反义IDO-AFP修饰的DC、单纯DC、空白对照组进行治疗,检测血清中自细胞介素(IL)-10、干扰素(IFN)-7水平；CD4、CD8和IFN-7和IL-10双阳性细胞比例,观察其抑制肿瘤的效果。结果反义IDO-AFP修饰的DC可激活小鼠脾淋巴细胞；能对肝癌细胞株H22细胞进行特异性杀伤,杀伤率为89．3%,显著高于单纯DC、生理盐水(空白对照组)组的34．7%和8．9% (P均＜0．01)而对艾氏腹水瘤细胞无效；反义IDO-AFP修饰DC组色氨酸含量为(17．8±1．2)μm,而单纯DC组和空白对照组的色氨酸为(6．2±0．6),um和(5．2±1．2)μm,表明反义IDO-AFP修饰DC可明显增加培养液中的色氨酸。使Thl细胞比例上升,抑制体内肿瘤的生长。结论反义IDO-AFP基因融合修饰树突状细胞后,DC通过调控色氨酸代谢达到高效、特异性抗肝癌的目的,可成为一种有效的瘤苗。     

重组腺病毒介导的KDR-CDglyTK基因诱导人胃癌细胞凋亡的研究

目的探讨KDR启动子驱动双自杀基因体系对人胃癌细胞靶向治疗的作用。方法用重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染SCG7901细胞和HepG2细胞,观察该体系对SCG7901细胞的杀伤效应。应用透射电镜、Hoechest 33258/PI染色、流式细胞仪观察细胞超微结构、细胞凋亡率和细胞周期的变化。建立小鼠SCG7901细胞动物模型,计算抑瘤率。用TUNEL法检测细胞凋亡率。结果受感染SCG7901细胞和HepG2细胞中均有绿色荧光蛋白的表达。已转染腺病毒的SCG7901细胞和HepG2细胞的存活率分别为(21.5±3.2)%和(89.1±3.4)%,两种细胞表现出对前药不同的敏感性(t=25.23,P=0.00)。流式细胞术检测表明该体系抑制SCG7901细胞的DNA合成,亚二倍峰数值之间差异有统计学意义(t=8012,P=0.00)。Hoechest 33258/PI染色和电镜下可见SCG7901细胞有凋亡改变。裸鼠移植瘤的肿瘤体积明显缩小。实验组肿瘤细胞凋亡指数为(36±6)%,较对照组显著增加(P=0.00)。结论KDR启动子可以调控融合基因体系在体外选择性地杀伤人胃癌SCG7901细胞,并且诱导体内外人胃癌细胞的凋亡。     

可降解淀粉微球的性能研究

以可溶性淀粉为原料,反相乳液聚合法合成可降解淀粉微球,并测定了它的粒度分布、红外光谱、降解性、载药性等.结果表明：可降解淀粉微球的平均粒径为15.423μm,94%分布在1～50 μm,8 h后被淀粉酶降解11.72%～24.58%,淀粉微球具有很好的可降解性.     

不同粒径透明质酸注射导致皮肤坏死的动物实验研究

目的分析不同粒径透明质酸注射对皮肤坏死的影响。方法随机将新西兰白兔分为3组,通过兔耳U形组织切除方法构建皮瓣后,分别注射生理盐水(对照组)、450μm粒径透明质酸(观察A组)和900μm粒径透明质酸(观察B组),术后1、3、5 d,分别观察皮瓣颜色、温度及坏死面积,并对不同组数据进行统计分析。结果采用450μm粒径和900μm粒径透明质酸注射,均可导致皮肤坏死,其中采用900μm粒径透明质酸注射而导致的坏死面积更大,皮肤温度更低。结论兔耳U形组织切除方法可以成功构建透明质酸导致皮肤坏死模型;采用900μm粒径透明质酸注射更容易诱发皮肤的坏死。     

m6A甲基化修饰在呼吸道病毒复制及宿主免疫应答中的研究进展

N6-甲基腺苷修饰(N6-methyladenosine, m6A)是真核细胞mRNA最普遍的内部修饰, 受多种m6A修饰酶的动态调控, 包括甲基转移酶、去甲基化酶和特异性结合蛋白。近年来呼吸道病毒感染受到广泛关注, 病毒在宿主细胞中的复制代谢过程受到m6A调节。本文就m6A调控酶的作用机制, m6A修饰在呼吸道病毒复制中的作用, 包括腺病毒、甲型流感病毒、新型冠状病毒、呼吸道合胞病毒和人偏肺病毒, 以及病毒m6A修饰对宿主免疫应答的影响进行综述, 为探究病毒表观转录组修饰的调控作用和抗病毒靶点研究或抗病毒疫苗研发提供参考。     

胸腰椎骨折椎弓根内固定断裂与植骨融合方式的相关性分析

[目的]探讨胸腰椎骨折椎弓根螺钉内固定系统内固定术后,椎弓根螺钉断裂与植骨融合方式之间的关系,以探讨胸腰椎骨折植骨融合的最佳方式。[方法]回顾性研究1995年5月~2005年12月本院脊柱外科收治的胸腰椎骨折病人197例,其中A组单纯内固定(不植骨)患者14例,B组“H”形椎板植骨21例,C组横突间植骨67例,D组椎间、椎内联合横突间植骨95例。[结果]术后随访6~32个月,内固定断裂12例,其中A组4例,B组3例,C组5例,D组0例,4组中D组内固定断裂率显著低于其他3组(P<0.05)。[结论]椎间、椎体内联合横突间植骨重建脊柱三柱的稳定性,符合人体生物力学原理,能有效降低内固定断裂的发生。     

Study of the correlations between the volumes of the hypophysis, the epiphysis and the subfornical organ to the somatic weight and the volume of the hypothalamus in rodents]

The correlations between volume of the hypophysis, of the epiphysis and of the subfornical organ to body weight and volume of the hypothalamus were studied on 193 rodents belonging to 41 species. Concerning the volume of the hypophyseal lobes the regression slopes of Rodentia occupy an intermediate position between those of Isectivora and Prosimians studied by BAUCHOT. The volume of the epiphysis increases more rapidly with the weight of the body than that of the hypophyseal lobes, the volume of the subfornical organ increases on the contrary more slowly.     

Characteristics of the receptors in the isolated capsule of the hip in the cat

Summary The properties of the afferent fibres from the capsule of the hip joint have been studied in the cat in situ, in relation to joint rotation, and in an isolated capsule preparation which was opened and stretched directly with an actuator.In situ two types of afferent fibres were found, those having a full range of sensitivity and others having only a limited range in response to the joint rotation. When studied in isolated tissue the afferent fibres of the capsule were uniform in threshold and sensitivities, and no full range receptors were found. We conclude that the full range receptors which enter the articular nerve of the hip are spindle afferents and not capsule receptors. On the basis of these and previous results in animals and man the role of joint receptors in kinaesthesia and position sense is discussed.

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Résumé Les auteurs ont étudié les propriétés des nerfs afférents à la capsule de la hanche, chez le chat en imprimant à l'articulation des mouvements de rotation et sur des préparations de capsule isolée et ouverte en l'étirant directement grâce à un dispositif mécanique.In situ, on a trouvé deux types de nerfs afférents, les uns ayant en réponse à la rotation articulaire une étendue complète de sensibilité et les autres seulement une sensibilité limitée. Sur la capsule isolée les nerfs afférents sont indentiques en ce qui concerne le seuil et la sensibilité et on ne trouve aucun récepteur complet. On en conclut que les récepteurs de toute l'étendue de la sensibilité qui pénètrent les nerfs articulaires de la hanche sont des fibres en fuseau d'origine musculaire et non des récepteurs capsulaires. Sur ces bases et sur les résultats précédemment obtenus chez l'animal et chez l'homme, les auteurs discutent le rôle des récepteurs articulaires dans la cénesthésie et le sens des positions.