当归中藁本内酯的提取、分离与结构鉴定

运用超临界流体萃取法、水蒸气蒸馏法和有机溶剂提取法提取当归挥发油,运用硅胶柱分离纯化其主要成分藁本内酯并通过核磁共振进行结构鉴定.结果表明,超临界萃取法可以更好地提取当归挥发油,通过硅胶柱分离最终可得到纯度大于97%的藁本内酯,且为Z ligustilide.     

自首乌提取物体外抗肝癌Bel7402活性物质的筛选

以Bel7402,L02两株细胞为筛选模型,研究了滨海白首乌抗癌活性.用乙醇做溶媒,通过对不同提取条件下提取的产物进行体外细胞毒活性试验及优化,确定了滨海白首乌抗癌活性物质的最佳提取条件为:温度37℃,时间2 h,料液比为1:10,提取1次.醇提物经过大孔吸附树脂、硅胶柱进一步分离,得到活性成分最佳的组分Ⅱ,经过定性研究,确定此组分是由甾体、三萜、酚类、生物碱为主及少量的糖类组成.     

南瓜活性多糖的降糖作用及其组成分析

为研究南瓜多糖对正常及糖尿病模型小鼠血糖的影响 ,本实验采用新的分离工艺从南瓜粉中提取得到南瓜粗多糖 (PP) ,用DEAE分级获得 3个组分 ,收集的主导组分过SephadexG 10 0柱 ,获得 2个组分 .收集有活性的组分 (AP) ,经SephadexG 2 0 0柱 ,证实为单一峰 .以葡萄糖为标准 ,苯酚 硫酸法测得总糖质量分数为 80 .6 % ;气相色谱分析其单糖组成为葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖及鼠李糖     

鸡蛋清中卵转铁蛋白的分离提取

采用固定化金属螯合亲和色谱法(IMAC),从蛋清中分离和提取卵转铁蛋白(OVT).结果表明,采用均质处理蛋清液并结合硅藻土过滤澄清的预处理方法,去除了蛋清中的粘蛋白等一些影响柱分离的杂质蛋白,减轻了色谱柱的污染,延长了柱的使用寿命,从而降低了生产成本.SDS-PAGE电泳分析显示,分离提取的OVT纯度达到96%,远高于商品OVT;电喷雾质谱分析显示,OVT的相对分子质量为76 500.     

DNT细胞分离鉴定及其在正常人外周血中含量的检测

目的 建立人DNT细胞的免疫磁性分离(megnetic activated cell sorting,MACS)方法,并检测其在正常人外周血中含量.方法 运用MACS法分离止常人外周血中DNT细胞,用台盼蓝染色流式细胞法检测选出细胞的活性和纯度,运用流式细胞法检测其在正常人外周血中含量.结果 MACS分选法分选出的DNT细胞活性＞97%,纯度为82.77%;DNT细胞占TCRαβ+T细胞的比例(6.25±2.61)%(n=45).结论 MACS法可简单迅速分选出高纯度DNT细胞,且不影响细胞活力.DNT细胞占TCRCD3+T细胞的比例为(6.25±2.61)%.     

家兔胰岛分离纯化方法的改进

目的介绍一种新的家兔胰岛分离纯化方法并进行纯化后胰岛的外观、活性和胰岛细胞团表面结构等质量分析。方法雄性日本大耳白,采用2 mg/m L胶原酶V逆行胰管灌注和消化,并用Hanks液洗涤,用Histopaque-1119、Histopaque-1077密度梯度离心进行胰岛纯化,DTZ、FD-PI染色鉴定胰岛纯度和活性,扫描电镜观察纯化后胰岛表面结构。结果家兔胰管开口于小肠,纯化得到家兔胰岛外形圆整,纯度90%,活性(87.4±5.9)%,纯化前胰岛当量为(1 874.8±464.5)IEQ,纯化后胰岛当量为(1 254.8±235.8)IEQ;扫描电镜结果显示胰岛细胞团表面有被膜,但部分胰岛被膜被消化。结论采用此方法可快速得到纯度高、活性好且结构完整的家兔胰岛,为进一步进行家兔胰岛体外质量及体内移植研究奠定了基础。     

免疫磁珠分选两步法纯化原代小胶质细胞

目的 神经系统感染研究需获得纯度高、细胞生物学状态接近体内的小胶质细胞.既往分离纯化方法 不能满足研究需要,需建立新的高效纯化方法.方法 获得小鼠全脑单细胞悬液后,应用磁珠分选阳选法,经过两步分选获得小胶质细胞.用流式细胞仪检测小胶质细胞的纯度,瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态,采用7-AAD染色鉴定分选后细胞的活性.结果 应用免疫磁珠分选一步法可以获得纯度达(59.98 ± 13.61)%的小胶质细胞;两步法进一步将细胞纯度提高至(97.62 ± 1.35)%.该方法 所获得的小胶质细胞活性良好,形态正常.结论 免疫磁珠分选两步法能够稳定地获得高纯度的小胶质细胞,对小胶质细胞的活性和形态无显著影响,可用于后续中枢神经系统急性感染的体外研究.     

个青皮中辛弗林两种提取分离方法的比较研究

建立了一种从个青皮中提取纯化半弗林的优化方法.对同一批个青皮细粉,分别采用乙醇回流提取,D101型大孔吸附树脂柱吸附,不同体积分数的乙醇溶液洗脱;以及应用稀盐酸提取,001x8型强酸性阳离子树脂柱分离,不同质量分数的氨水溶液洗脱.然后对各洗脱液进行TLC显色和HPLC检测,计算得辛弗林的纯度.结果表明,质量分数4%的氨水洗脱和001x8型强酸性阳离子树脂柱效果最好,辛弗林纯度达到45.34%.     

自然成熟型树突状细胞对 CD4+CD25+调节性 T细胞扩增的影响

目的：探讨自然成熟型树突状细胞对CD4^＋CD25^＋调节性T细胞扩增机制。方法：提取DAB／2小鼠脾脏及肝脏细胞,流式细胞仪分离树突状细胞,测定其纯度及表型,加入C3H／HeJ小鼠提取的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞混合培养,测定其增殖活性。利用CD4^＋CD25-T细胞测定扩增后的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的免疫抑制活性。结果：成熟型树突状细胞表达高水平的共刺激分子CD40、CD80及CD86,对CD4^＋CD25^＋调节性T细胞扩增效果明显。与新鲜分离的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞一样,扩增的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞高表达Foxp3,而且均保持了其抑制活性。结论：自然成熟型树突状细胞能扩增CD4^＋CD25^＋调节性T细胞,且扩增后的调节性T细胞保持了其表达活性和抑制活性。     

实验大鼠胰岛分离移植技术方法的比较分析

目的 探索高效的大鼠胰岛分离移植技术方法.方法 应用Wistai-Furth大鼠,于体内或体外胶原酶经胰管灌注膨化胰腺,联合不同密度Ficoll液或Histopaque液纯化胰岛细胞,评估胰岛的数量、纯度、胰岛当量以及肾被膜下胰岛移植的有效性.结果 体外经胰管灌注膨化胰腺结合Histopaque液纯化提取胰岛的数量、纯度和胰岛当量值均显著高于体内灌注组各数值(P＜0.01),其提取时间无显著差别.1000个胰岛细胞移植进入左肾被膜下,有效的逆转了糖尿病大鼠高血糖,其远期糖耐受结果优于500和800个胰岛细胞移植组.结论 体外灌注膨化消化胰腺结合Histopaque液纯化胰岛的分离方法是一种满意的分离技术.1000个胰岛细胞是保证肾被膜下胰岛移植成功的最低有效数量.