血清谷氨酸脱羧酶抗体在临床孤立综合征中的应用

目的了解临床孤立综合征（CIS）患者血清谷氨酸脱羧酶抗体（GAD-Ab）水平,探讨GAD-Ab在中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病中的作用。方法选择CIS患者74例（CIS组）,人选病例均排除合并1型糖尿病及其他自身免疫性疾病者。采用酶联免疫吸附法检测其血清GAD-Ab水平,并与健康对照组（30例）进行比较;随访CIS患者中GAD-Ab阳性及阴性患者5年后转化为临床确诊的多发性硬化（MS）的发生率。结果74例CIS患者中21例血清GAD-Ab阳性,阳性率为28．4％,而健康对照组无一例阳性;随访5年,未失访的67例CIS患者中,血清GAD-Ab阳性者和阴性者转化为临床确诊MS的发生率分别为84．2％（16／19）和52．1％（25,48）,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论GAD—Ab与中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病的发病机制有关。通过测定CIS患者血清GAD-Ab水平,有助于早期发现表现为CIS的MS患者。     

Lactococcus lactis谷氨酸脱羧酶的分离纯化及部分酶学性质

采用溶菌酶处理、超声破碎、硫酸铵分级、3次DEAE SepharoseCL 6B层析、SephacrylS 200凝胶过滤等手段,从乳酸菌细胞中分离纯化得到谷氨酸脱羧酶(GAD;EC4.1.1.15).纯化酶的比活力为14.4U/mg,纯化倍数31,回收率3.8%,SDS PAGE得到亚基的相对分子质量为65000.L 谷氨酸是测试的18种氨基酸中的惟一作用底物,表明乳酸菌GAD具有高度的底物专一性.酶在pH值3.6～5.4时具有活性,pH值4.7时活性最高,pH值6.0以上时没有活力.耐热性实验表明,pH值4.7条件下处理5h后,60℃时该酶仍能保持80%以上的活性,80℃以上迅速失活,由Lineweaver Burk作图得到的GAD的Km值为1.9mmol/L.     

活性乳酸菌乳饮料高活菌数发酵工艺的优化

探索了获取高活菌数的发酵乳饮料的发酵条件.以温度、营养、接种量为试验因素,通过单因素试验和正交试验方法,考察以上3因素在乳酸菌乳饮料发酵过程中对试验指标乳酸菌数影响的显著性.结果表明,发酵温度对试验结果影响极显著(P<0.01),营养浓度影响显著(P<0.05),接种量影响不显著(P>0.05).进一步的正交试验结果表明,高活菌数的乳饮料的最优化发酵工艺组合为发酵温度29 ℃,奶粉加入量(营养浓度)10 g/dL,接种体积分数5%.     

利用代谢网络模型和线性规划法在线预测谷氨酸发酵中产物浓度

在好氧型的谷氨酸发酵实验中发现，溶解氧（DO）对发酵性能有很大的影响，谷氨酸的生成方式也因此有很大不同：较低的DO水平能够延长产酸期、提高谷氨酸的最终浓度，但是代谢副产物——乳酸也有较大程度的积蓄；而DO水平过高，虽然代谢副产物不会生成积蓄，但菌体消亡过快导致产酸期缩短、谷氨酸的最终浓度降低．同时，谷氨酸的生成方式与发酵过程中摄氧率（OUR）和CO2的释放率（CER）有着非常紧密的关联．作者利用代谢网络模型并结合使用线性规划优化法，通过在线测定OUR和CER，比较准确地在线推定出发酵过程中谷氨酸的质量浓度变化。与传统的非构造式动力学模型相比，上述预测方法具有建模简单、模型物理意义明确、通用性能好等优点，为后续过程的在线控制和优化提供一种全新和有效的途径。     

聚γ-谷氨酸高产突变株的选育及摇瓶发酵条件

对地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)进行亚硝基胍和60Co诱变,获得一株γ PGA的高产菌株C9.γ PGA质量浓度由9.44g/L提高到19.76g/L,提高了109%.突变株传代10次,质量浓度保持基本稳定.通过正交试验和单因素试验对发酵培养基及发酵条件进行了优化.当发酵培养基中含柠檬酸12g/L、甘油80g/L、L 谷氨酸23g/L、氯化铵7g/L,pH7.0,装液量为50mL/250mL三角瓶,接种体积分数为5%时,37℃摇瓶发酵72h,γ PGA达到23.32g/L.     

姬松茸深层发酵培养基的优化

通过姬松茸碳氮源筛选的单因素实验 ,确定玉米粉、蔗糖为碳源 ,豆粕粉、麸皮汁为氮源 ;在此基础上 ,进行了碳氮源质量浓度及比例实验、摇瓶发酵正交实验 ,优化培养基配方 ,确定姬松茸摇瓶发酵培养基的最佳配方为 :玉米粉 1 .5g/dL ,蔗糖 0 .5 g/dL ,麸皮汁 0 .5 g/dL ,豆饼粉 2 .0 g/dL .     

鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义腺病毒对肺癌增殖和侵袭抑制作用的研究

目的探讨重组鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义腺病毒载体（Ad-ODC-AdoMetDCas）介导的鸟氨酸脱羧酶（ODC）和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶（AdoMetDC）反义RNA对肺癌细胞多胺合成、增殖和侵袭的抑制作用。方法采用活细胞计数法观察Ad-ODC-AdoMetDCas对肺癌A-549细胞生长增殖的影响,采用Western印迹法和高效液相色谱分别检测腺病毒对肺癌A-549细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达以及细胞内多胺含量,采用活细胞计数法和流式细胞仪分别检测腺病毒介导的鸟氨酸脱羧酶反义RNA和Ad-ODC-AdoMetDCas对A-549细胞增殖和细胞周期分布的影响,应用Matrigel侵袭实验分析腺病毒对肺癌细胞侵袭活性的改变。结果当感染效率为50时,腺病毒对A-549细胞的感染率约75％。Ad-ODC-AdoMetDCas可明显抑制A-549细胞ODC和AdoMetDC的表达。A-549细胞感染Ad-ODC-AdoMetDCas后,细胞内多胺含量明显降低。感染Ad-ODC-AdoMetDCas的A-549细胞停滞在G1期。Ad-ODC-AdoMetDCas可显著降低A-549细胞的体外侵袭能力。结论ODC和AdoMetDC双反义腺病毒能够显著抑制肺癌A-549细胞的增殖和侵袭。     

多菌种混合发酵生脉饮药渣生产蛋白饲料工艺条件优化

以生脉饮药渣为原料,利用康宁木霉(Tk)、产黄纤维单胞茵(Cf)、产朊假丝酵母(Cu)和黑曲霉(An)多菌种混合发酵生产蛋白饲料.通过单因素和正交试验对发酵条件进行优化,试验结果表明:先接种20%的Tk Cf(比例2:1),发酵2 d后再接种20%的Cu An(比例1:1),在(NH4)2SO4添加量为5 g/dL、初始PH值为6、料水比为1:2、温度为30℃的条件下发酵5 d,其发酵产物中真蛋白质量分数增加86.96%,粗纤维质量分数降低20.09%.     

酵母流加发酵过程中模糊神经网络的优化

利用模糊神经网络构建了酵母流加发酵过程的网络模型.通过建立优化子网络,探讨了不同时刻的最佳底物浓度.在模拟网络的基础上,利用遗传算法对流加策略进行了优化研究.     

鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义腺病毒对大肠癌细胞生长的抑制作用

目的：研究鸟氨酸脱羧酶（ODC）和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶（AdoMetDC）双反义腺病毒（Ad—ODC—AdoMetDCas）对大肠癌细胞生长的抑制作用，并初步探讨其参与细胞周期调节的分子机制。方法：将Ad—ODC—AdoMetDCas感染大肠癌细胞株HT-29，通过MTS法观察其对HT-29细胞增殖的影响，流式细胞术检测其对细胞周期的影响，采用Western blot检测Ad—ODC—AdoMetDCas对细胞中ODC、AdoMetDC及细胞周期调节蛋白（Cyclin D1 and CDK4）的表达的影响，利用EBRT—PCR检测Ad—ODC—AdoMetDCas对细胞周期蛋白Cyclin D1的mRNA水平的影响。结果：Ad—ODC—AdoMetDCas可抑制HT-29细胞中ODC和AdoMetDC蛋白的表达，并可明显抑制细胞的增殖，引起细胞周期GI期阻滞，抑制G，期主要的细胞周期蛋白Cyclin D1的转录和翻译。结论：Ad—ODC—AdoMetDCas可有效下调ODC和AdoMetDC的表达，并通过抑制Cyclin D1的表达使其细胞周期停滞于G1期，从而抑制大肠癌细胞HT-29的增殖，为进一步研究大肠癌的基因治疗打下基     

谷氨酸菌体中核酸类物质的提取

研究了谷氨酸菌体中核酸提取的工艺条件 ,获得了较好效果 .在 12 0℃ ,pH 9,菌体质量浓度 10 g/dL的条件下 ,提取 2h ,蛋白质的分离率为 90 % ,核酸的提取率高达 90 %以上 .     

谷氨酸溶液结晶介稳区的性质

测定了谷氨酸在水中的溶解度和超溶解度曲线,并用数学表达式进行拟合,同时还测定了不同降温速率、搅拌转速下的结晶介稳区宽度.结果表明:谷氨酸溶液的溶解度随温度升高而增加,溶液的介稳区随降温速率增加而变宽,随搅拌转速增加而变窄,实验结果与经典成核理论导出的公式基本符合.     

发酵液中透明质酸提取的新方法

以氯仿为除菌介质 ,在温度为 2 8℃ ,pH值为 7.5及搅拌直径比为 2 / 3条件下 ,从发酵液中提取透明质酸 (HA) ,其提取率大于 97.5% ,纯度大于 97.3% .     

红曲霉发酵产胞外多糖工艺的优化

研究了碳源、氮源和无机盐对红曲霉Y 7产多糖的影响 ,优化并确定了产胞外多糖的培养基组成 :麦芽糖 6 0 g/L ,蛋白胨 2 .5g/L ,磷酸二氢钾 4 g/L ,硫酸镁 0 .5 g/L ,氯化钙 0 .6 g/L .研究了油脂对胞外多糖的影响 ,并确定棕榈油的添加量为 0 .2 g/dL .在 5 0 0mL的三角瓶装培养基 75mL ,接种量 15 % ,种子液种龄 2 4h ,培养温度 33℃ ,摇床转速 2 2 0r/min ,培养 96h .在上述条件下生物量干重为 1.4 2 g/dL ,发酵液胞外多糖产量可达 3.2 4 g/L ,比初始条件高出 2 .5倍 .     

鸟嘌呤核苷补料发酵条件研究

采用新菌株Bacillus subtilis JSIM-518，在22L自控发酵罐上进行不同补料方式和所补原料的发酵研究，酵母粉连续补料，对鸟苷积累不甚明显，应用指数函数补料方式，匀速补入RNA和腺嘌呤物质，添加速率K值显得非常关键，当K=0．16时积累鸟苷最高，积累质量浓度为34．14g／L，高于和低于此值时，鸟苷的积累量都呈递减的趋势。     

红曲霉菌产Monacolin K固体发酵条件的优化

对Monacusspp.3的固体发酵生产MonacolinK的培养条件和培养基进行了优化.考察了物料厚度、起始含水量、发酵时间、起始pH值等发酵条件,以及大米培养基中添加附加碳源、氮源、磷酸盐等的影响.结果表明,固体发酵的培养条件为:物料(大米)厚度在4cm以下,起始pH值自然,培养温度32℃,相对湿度60%～70%,发酵时间为12d;经单因素和正交试验得适宜的发酵培养基为:大米100g,甘油0.2g,玉米浆0.15g,起始含水量50%.且以此优化条件固体发酵培养,MonacolinK产量稳定在1.4mg/g左右,最高产量为1.6mg/g.     

提纯异麦芽低聚糖的酵母菌株筛选及发酵条件

酵母菌同化单糖的能力和速度高于低聚糖,因而可以消除异麦芽低聚糖产品中多余的葡萄糖.通过筛选驯化,得到较快发酵葡萄糖和麦芽糖的D酵母,并对该酵母的最适发酵条件和最佳培养基组成进行了研究,在优化培养基条件下,得到94.13%的高纯度异麦芽低聚糖.     

聚唾液酸的摇瓶工艺

研究了突变株JYL 11(Escherichiacoli)的摇瓶发酵工艺条件:在山梨醇40g/L,K2HPO420g/L,NH4Cl4g/L,MgSO40.9g/L,蛋白胨1.5g/L,起始pH值7.8,装液量35mL(250mL的三角瓶中),转速250r/min,培养温度37℃,接种量为4%(体积分数)的条件下,聚唾液酸产量达到3.5mg/mL,比优化前提高了1.0mg/mL,提高幅度为40%.     

基于神经网络和遗传算法培养基优化的发酵经济学

利用目前较为先进的神经网络(ANN)和遗传算法结合(GA)的优化方法,通过以6种培养基组成为输入,亚硝酸盐氧化菌的活性与培养基成本之比的"性价比"为输出,构建结构为6-8-1 BP神经网络的非线性的非结构模型,并以该模型为遗传算法的目标函数,进行遗传算法的全局寻优,优化得到具有最高"性价比"的培养基组成.结果表明,基于神经网络和遗传算法能较好地对培养基进行优化,并实现对发酵经济学的初步研究.通过优化,得到亚硝酸盐氧化菌的最佳培养基组成为:NaNO2 2.390 g/L, KH2PO4 1.355 g/L, MgSO4 0.019 g/L, NaCl 0.031 g/L, NaHCO3 4.373 g/L, FeSO4 0.005 g/L,其最优"性价比"为8.705,比初始的6.835提高了27.36%.