大肠杆菌生产重组极耐热木聚糖酶的诱导条件及其酶学性质

构建重组菌(JM109/pTrc 99A xylIV)作为极耐热木聚糖酶的生产菌株,研究了IPTG诱导时间、IPTG浓度、重组菌生长的不同阶段加IPTG和温度对重组菌生产极耐热木聚糖酶的影响以及它的酶学性质.结果表明,IPTG诱导8h后极耐热木聚糖酶的表达量基本维持不变,0.5～5mmol/L浓度的IPTG诱导重组菌表达极耐热木聚糖酶的效果基本相同;当重组菌生长到OD600为1.2左右时加IPTG诱导最好,诱导温度对极耐热木聚糖酶表达水平的影响不大.重组耐热木聚糖酶的最适反应pH值为5.4～5.8,重组极耐热木聚糖酶的最适反应温度大于100℃,重组极耐热木聚糖酶在pH值4.2～7.5都比较稳定,重组极耐热木聚糖酶的温度稳定性好,在90℃下保温2h后残存酶活还有90%.     

豚鼠哮喘模型单个核细胞及嗜酸细胞与肺微血管内皮细胞粘附性的研究

目的观察哮喘豚鼠模型嗜酸细胞和淋巴细胞与肺微血管内皮细胞的粘附率,探讨肺微血管内皮细胞在哮喘模型发病中的功能变化及炎症细胞与其粘附的分子基础.方法复制豚鼠哮喘模型;分离、培养和鉴定肺微血管内皮细胞;转染核因子(NF)-κB反义寡核苷酸;分别用对照组血清和模型组血清孵育;分离外周血淋巴细胞和嗜酸细胞;采用RT-PCR法测定内皮细胞和血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)及嗜酸细胞趋化因子(eotaxin)mRNA的表达强度,EMSA法测定内皮细胞NF-κB、活化蛋白(AP-1)的DNA结合活性.结果(1)肺微血管内皮细胞在模型组血清刺激下,与两组外周血淋巴细胞及仅与模型组嗜酸细胞的粘附率显著升高,内皮细胞与嗜酸细胞两者的激活,在嗜酸细胞粘附中起明显的协同作用;(2)肺微血管内皮细胞经模型组血清刺激后,VCAM-1和eotaxin mRNA表达量显著增多,NF-κB、AP-1的DNA结合活性也显著升高.结论肺微血管内皮细胞可被哮喘模型血清激活,使粘附分子、趋化因子及核转录因子的合成和分泌增多,从而显著提高其与炎症细胞的粘附率,核转录因子NF-κB和AP-1对内皮细胞合成炎症因子可能起调控作用.淋巴细胞与嗜酸细胞的粘附机制不尽相同.     

稳定表达荧光素酶的产酸克雷伯菌在评估不同灭菌方法中的应用

目的构建稳定表达荧光素酶基因（lux）的产酸克雷伯菌,旨在更直观地观察产酸克雷伯菌（K. oxytoca）在宿主体内的分布以及评估不同杀菌方法的效果。 方法扩增pBAV1k-T5-Lux质粒的荧光素酶基因簇（Lux A/B/C/D/E）,构建含有Lux A/B/C/D/E基因簇的pBBR1质粒（pBBR1-lux）,并获得能够表达荧光素基因基团的大肠埃希菌（E. coli-pBBR1-lux）。将pBBR1-lux质粒电转化至产酸克雷伯菌感受态细胞,经荧光强度鉴定及菌株的3次传代,筛选能够稳定表达lux基因的产酸克雷伯菌（K. oxytoca-pBBR1-lux）。 结果连接成功的环状质粒产物命名为pBBR1-lux。与大肠埃希菌对照株相比,含E. coli-pBBR1-lux的Luminesence荧光信号值显著升高[15 345（14 676,18 654） vs. 63（60,82）],差异具有统计学意义（t = 21.14、P = 0.035）。K. oxytoca-pBBR1-lux的Luminesence荧光信号值[399 303（265 245,617 192）]显著高于产酸克雷伯菌对照菌株[83（63.5,86.75）],差异具有统计学意义（t = 7.07、P = 0.014）。E. coli-pBBR1-lux和K. oxytoca-pBBR1-lux均能够在Veritas微孔板光度计和小动物成像仪上检测到Luminesence荧光信号。将所得菌株按照1︰10稀释6个梯度,荧光值检测结果显示,Luminesence值随菌落浓度降低而下降。多次传代后pBBR1-lux能够在产酸克雷伯菌中稳定表达荧光素酶,不同理化杀菌方法对产酸克雷伯菌杀菌效果不同,紫外线和84消毒液（10%）是最有效的杀灭产酸克雷伯菌方法。 结论本研究获得了可被微孔板光度计和小动物成像仪检测到的稳定表达荧光素酶的K. oxytoca-pBBR1-lux。     

脂多糖诱导外周血嗜酸粒细胞释放炎性细胞因子的探讨

目的：探讨脂多糖（LPS）对嗜酸粒细胞释放炎性细胞因子白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、干扰素-γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响。方法：嗜酸粒细胞用CD16抗体磁珠方法从人新鲜外周血中分离;分别进行5×10^5／ml嗜酸粒细胞的单独培养和与LPS（1ug／ml）共培养18h;应用流式细胞小球微阵列（cytometric bead array,CBA）方法定量测定细胞培养上清液中细胞因子含量。结果：从外周血中新分离的嗜酸粒细胞单独培养过程中没有或仅有极少量上述炎性细胞因子释放,但新分离的嗜酸性粒细胞与LPS共培养18h后,其培养上清液中IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α大量增加（P均〈0．001）,而IL-2、IL-4、IL,12和IFN-γ的含量无明显变化。结论：LPS对嗜酸粒细胞释放炎性细胞因子具有很强的选择性诱导作用。     

肾嗜酸细胞瘤的诊治(附三例报告及文献复习)

目的　提高肾嗜酸细胞瘤的诊治水平。　方法　回顾分析 3例肾嗜酸细胞瘤患者的临床资料。临床无特异表现 ,肿瘤大小分别为 7.6cm× 8.5cm× 6 .8cm、10 .0cm× 11.5cm× 9.8cm、10 .0cm× 8.0cm× 6 .8cm ,分别位于左肾下极、右肾上极、右肾下极。CT扫描肿瘤密度均匀一致 ,瘤体中央有星状结构。术前均诊为肾癌而行肾癌根治术。　结果　肉眼观察瘤体边界清楚 ,切面呈棕色或棕褐色 ,均质状 ,无出血及坏死灶。光镜下瘤细胞排列成腺泡状或管状 ,胞质含丰富的嗜酸性颗粒 ,细胞无明显异型性和核分裂相。电镜下胞质内见大量线粒体。免疫组化染色 :Cytokeratin( ) ,EMA( ) ,Vimentin(- )。 3例患者随访 16～ 30个月 ,未见肿瘤复发或转移。　结论　肾嗜酸细胞瘤是一种良性实质性上皮肿瘤 ,临床无特异性 ,诊断需依据病理组织学、免疫组化及电镜特点综合判断。     

肾上腺皮质嗜酸细胞肿瘤7例临床分析

目的 探讨肾上腺皮质嗜酸细胞肿瘤的临床和病理学特点.方法 回顾性分析7例肾上腺嗜酸细胞肿瘤的临床资料.结果 7例患者中,1例表现为女性男性化,2例表现为皮质醇增多症,4例无特异表现,肿瘤大小1.5 cm×1.5 cm×2 cm～8 cm× 8cm×9 cm,包膜完整,与周围没有粘连.切面为灰黄色,光镜下胞质内含丰富的嗜酸颗粒,细胞无明显异型性和核分裂相.3例免疫组化NSE（＋）、VIM（＋）.7例均诊断为良性肿瘤,手术切除后未见肿瘤复发和转移.结论 肾上腺嗜酸细胞肿瘤有其自身的特点,大多是没有功能的,发现时一般肿瘤体积比较大,应该根据肿瘤的病理学特征进行良恶性鉴别,术后需要随访.     

耐热过氧化氢酶基因工程菌的构建及其发酵条件

利用PCR扩增技术以嗜热脂肪芽孢杆菌IAM11001染色体DNA为模板,扩增得到嗜热脂肪芽孢杆菌过氧化氢酶编码基因perA。再与经EcoRⅠ酶切的温控表达载体pBV220连接,构建重组质粒,并转化宿主大肠杆菌JM109,得到耐热过氧化氢酶基因工程菌,然后对该工程菌在LB培养基和半合成培养基中的发酵条件进行了优化。结果表明：在LB培养基中,诱导时期和酶合成最佳诱导时间均为5h,最大产酶量达到72．9U／mL;在半合成培养基中,于30℃培养4h,再于42℃诱导培养6h,产酶量最高达到131U／mL。     

骨元肽分子量分布及大鼠在体结肠吸收的实验研究

目的 研究骨元肽分子量分布及大鼠在体结肠吸收率.方法 采用高压凝胶色谱法测定骨元肽均重分子量(Mw).大鼠在体结肠吸收实验分为3组,分别用14.0、28.0和84.0 mg/L骨元肽结肠灌流4 h,紫外可见分光光度计测定骨元肽含量,观察骨元肽的大鼠结肠吸收率.结果 骨元肽Mw为189～1000 D,其中189～512 D组分占68.5%以上;结肠吸收率为45.69%、50.64%和52.50%(P＜0.05).结论 低分子量骨元肽对大鼠结肠吸收有剂量依赖作用.     

某院2014年度嗜麦芽窄食假单胞菌的耐药性及分布

目的探讨院内分离的嗜麦芽窄食假单胞菌的耐药性及分布,为临床经验用药提供理论依据。 方法应用WHONET 5.6软件对2014年1月至12月本院临床分离的163株嗜麦芽窄食假单胞菌的耐药性及分布进行分析。 结果163株嗜麦芽窄食假单胞菌对头孢他啶、替卡西林/克拉维酸、左旋氧氟沙星和复方新诺明的耐药率依次为65.0%（106/163）、39.9%（65/163）、3.7%（6/163）和1.2%（2/163）。其中78.5%（128/163）的标本来源于痰液,16.0%（26/163）的标本来源于血液;41.7%（68/163）的标本来自ICU重症监护病房;21.5%（35/163）的标本来自儿内科病房。 结论嗜麦芽窄食假单胞菌主要引起呼吸道感染,其次是血流感染。临床治疗嗜麦芽窄食假单胞菌引起的感染,经验用药可选用左旋氧氟沙星或复方新诺明。     

肾嗜酸细胞腺瘤

肾嗜酸细胞腺瘤(renaloncocytoma)是一种临床较少见的良性肾脏肿瘤,随着病理诊断水平以及影像学技术的提高,使其和其他肾脏肿瘤得以区分开。本文拟对肾嗜酸细胞腺瘤的病理、诊断以及治疗作一个综述。