慢性低氧高二氧化碳大鼠支气管前列环素合酶基因表达

目的 研究前列环素合酶(PGl2S)在慢性低氧高二氧化碳大鼠的支气管表达及分布。方法 采用原位杂交等技术对支气管前列环素合酶基因表达进行定位研究。结果 前列环素合酶基因在低氧高二氧化碳组大鼠各级支气管上皮细胞及平滑肌细胞中广泛表达。结论 慢性低氧高二氧化碳诱导了大鼠支气管前列环素合酶基因的表达。     

过量氟对大鼠肾组织骨桥蛋白表达的影响

目的检测骨桥蛋白(OPN)mRNA和蛋白在氟处理大鼠肾组织中的表达差异和蛋白定位,并探讨OPN与氟中毒肾损害的关系。方法经饮水投氟喂养Wistar大鼠48只,用免疫组织化学法进行骨桥蛋白的组织学检测。提取各组大鼠肾组织mRNA,采用RT-PCR法检测骨桥蛋白mRNA的表达变化。结果免疫组织化学结果表明,骨桥蛋白主要定位于肾组织的肾小管上皮细胞质中,常食和偏食对照组大鼠肾组织OPN蛋白只是散在表达,而常食和偏食加氟组的OPN蛋白表达较相应对照组明显增强(与常食对照组比较,q=18．4,P< 0．05;与偏食对照组比较,q=12．0,P<0．01)。2个投氟组的OPN mRNA表达水平均较相对应的对照组增加,但差异无统计学意义。结论过量氟可促进大鼠。肾组织OPN表达,且随着投氟量的增加,OPN伴随着肾损伤加重而表达增强,提示OPN与氟中毒肾损伤程度密切相关,很可能作为一种氟中毒肾损害的预测标志。     

酒精性脂肪肝大鼠肝组织骨桥蛋白表达的变化

目的探讨乙醇联合高脂饮食诱导脂肪肝大鼠肝组织骨桥蛋白（OPN）表达的变化。方法采用高脂饮食联合乙醇灌胃制备大鼠脂肪肝模型。在第6周末分别取血和肝组织,常规检测血生化指标和采用Westernblot法检测大鼠肝组织骨桥蛋白表达的改变。结果乙醇联合高脂饮食条件下大鼠血清ALT、AST、TG、TC水平升高（P〈0．05）,HDL-C降低（P〈0．05）;油红O染色结果显示乙醇联合高脂饮食组大鼠肝脏脂肪变明显;模型组大鼠肝组织OPN蛋白表达明显增强（P〈0．05）。结论骨桥蛋白表达增强在大鼠乙醇性脂肪肝的发病过程中起一定的作用。     

骨桥蛋白对大鼠发生草酸钙肾脏结石的影响

目的探讨骨桥蛋白(OPN)对大鼠发生草酸钙肾脏结石的影响。方法 30只雄性SD大鼠随机分为对照组、OPN siRNA组和空载组,每组10只。通过腺病毒表达载体构建重组RNA干扰腺病毒表达载体(pA deno-X-siOPN),并导入大鼠肾脏。RT-PCR和Western印迹法分别检测大鼠肾脏OPN mRNA及蛋白表达水平。HE染色观察肾皮质和髓质草酸钙晶体情况,并定量分析。结果 OPN siRNA组OPN mRNA及蛋白表达水平显著低于空载组(P<0.05),显著高于对照组(P<0.05)。OPN siRNA组肾皮质和肾髓质草酸钙结石均显著低于空载组(P<0.05),显著高于对照组(P<0.05)。结论 OPN具有促进草酸钙肾结石形成的作用。     

缬沙坦对2 型糖尿病大鼠肾脏骨桥蛋白和骨形态发生蛋白-7 表达的影响

目的探讨缬沙坦对2型糖尿病大鼠（T2DM）肾脏骨桥蛋白（OPN）和骨形态发生蛋白-7（BMP-7）表达的影响。方法 Wistar大鼠随机分为3组:对照组、DM模型组和缬沙坦治疗组[25mg/（kg·d）]。高脂、高糖喂养联合小剂量链脲佐菌素建立T2DM模型。缬沙坦治疗12周末,测定血压、血糖、尿白蛋白（UAL）排泄量;应用光镜观察肾脏病理变化;采用免疫组化、实时定量PCR技术测定肾组织BMP-7、OPN、转化生长因子-β₁（TGF-β₁）蛋白及mRNA的表达。结果与对照组比较,DM组大鼠UAL及肾组织ED-1阳性细胞数明显升高（P<0.01）;肾组织BMP-7mRNA及蛋白的表达下调（P<0.01）,而OPN、纤连蛋白及TGF-β-1的表达显著上调（P<0.01）。缬沙坦干预后明显减少UAL的排泄（P<0.01）,并显著抑制肾组织巨噬细胞浸润及TGF-β₁、OPN和纤连蛋白过度表达（P<0.05）,同时上调BMP-7的表达（P<0.01）。结论缬沙坦减少肾组织巨噬细胞浸润及细胞外基质,对糖尿病性肾病有保护作用,其机制可能与下调TGF-β₁和OPN及恢复BMP-7的表达有关。     

糖皮质激素对哮喘气道重塑大鼠骨桥蛋白水平及骨桥蛋白mRNA表达的影响

目的探讨糖皮质激素对哮喘气道重塑大鼠骨桥蛋白(OPN)水平及OPN mRNA表达的影响。方法2014年12月—2016年1月,选取30只雄性Wistar大鼠并采用随机数字表法分为正常对照组、哮喘模型组、糖皮质激素组,各10只。建立哮喘动物模型,哮喘模型组大鼠于造模第15天予以卵清蛋白(OVA)雾化吸入激发致敏;正常对照组大鼠于造模第15天予以等量0.9%氯化钠溶液腹腔注射及雾化吸入;糖皮质激素组大鼠处理同哮喘模型组,并于OVA雾化吸入激发致敏前1 h雾化吸入布地奈德混悬液(BUD)。比较3组大鼠气道壁厚度,支气管壁平滑肌厚度及胰岛素样生长因子-I(IGF-I)、神经生长因子(NGF)、核因子-κB(NF-κB)水平,OPN水平及OPN mRNA表达情况,并进行相关性分析。结果哮喘模型组大鼠气道壁厚度、支气管壁平滑肌厚度大于糖皮质激素组和正常组对照组(P0.05);糖皮质激素组大鼠气道壁厚度、支气管壁平滑肌厚度大于正常组对照组(P0.05)。哮喘模型组大鼠IGF-I、NGF、NF-κB水平高于糖皮质激素组和正常组对照组(P0.05);糖皮质激素组大鼠IGF-I、NGF、NF-κB水平高于正常组对照组(P0.05)。哮喘模型组大鼠OPN水平和OPN mRNA相对表达量高于糖皮质激素组和正常组对照组(P0.05);糖皮质激素组大鼠OPN水平和OPN mRNA相对表达量高于正常组对照组(P0.05)。哮喘气道重塑大鼠气道壁厚度、支气管壁平滑肌厚度及IGF-I、NGF、NF-κB水平分别与OPN水平(r值分别为0.91、0.84、0.80、0.79、0.83)、OPN mRNA相对表达量(r值分别为0.83、0.87、0.79、0.76、0.81)呈正相关(P0.05)。结论糖皮质激素可抑制哮喘大鼠气道重塑的发生,延缓气道壁及支气管壁平滑肌增厚,降低IGF-I、NGF、NF-κB、OPN水平及OPN mRNA的表达。     

骨桥蛋白在不同营养条件下氟中毒大鼠肝组织中的表达及意义

目的探讨骨桥蛋白（OPN）在氟中毒大鼠肝组织中的表达及其意义。方法通过给予48只Wistar大鼠不同钙营养状况、不同蛋白营养状况和投氟剂量的固体饲料,复制氟中毒大鼠模型,6个月后提取各组大鼠肝组织,应用免疫组化技术及RT-PCR技术检测OPN的表达水平。结果大鼠肝脏OPNmRNA表达及蛋白平均表达水随着大鼠骨氟含量的增加而依次增强。结论氟可促进大鼠肝组织OPN表达,并且过量氟和低钙、低蛋白对促进大鼠肝组织OPN表达具有协同作用,而且OPN的表达与氟中毒机体损伤的程度密切相关。     

骨桥蛋白在低钙和燃煤污染型氟中毒大鼠肾组织中的表达

目的 观察骨桥蛋白(OPN)在低钙和氟中毒大鼠肾组织中的表达,探讨OPN与氟中毒肾损害的关系.方法 1月龄Wistar大鼠48只,雌雄各半,体质量80～100 g.按2×2析因设计将大鼠按质量随机分为4组:对照组、高氟组、低钙组、低钙高氟组,每组12只,雌雄各半.采用合成饲料喂养,高氟组和低钙高氟组饲料中的玉米来自燃煤污染型氟中毒病区,含氟量为100 mg/kg,对照组和低钙组饲料中的玉米来自于非病区,含氟量为5 mg/kg.喂养16周后处死大鼠,观察各组大鼠牙齿变化,计算大鼠氟斑牙检出率.取大鼠肾脏,采用RT-PCR技术及免疫组化技术检测大鼠肾脏OPN蛋白和OPN mRNA表达.结果 对照组和低钙组牙齿生长良好,高氟组、低钙高氟组大鼠均出现明显的氟斑牙,氟斑牙检出率为100%.免疫组化结果表明,OPN主要定位于肾组织的肾小管上皮细胞中.对照组和低钙组肾组织OPN阳性细胞淡染、散在分布,高氟组与低钙高氟组OPN阳性细胞着色较深,广泛分布在肾小管上皮细胞中.OPN蛋白表达显示,高氟组(168.64±13.21)和低钙高氟组(169.26±8.92)高于对照组(145.78±10.26,P均<0.01)和低钙组(149.60±16.84,P均<0.01);OPN mRNA表达显示,高氟组(1.89±0.37)和低钙高氟组(1.94±0.22)高于对照组(1.32±0.26,P均<0.05)和低钙组(1.30±0.18,P均<0.05).高氟影响OPN蛋白和OPN mRNA表达(F=13.821、4.24,P均<0.05),低钙不影响OPN蛋白和OPN mRNA表达(F=2.164、0.58,P均>0.05),但高氟和低钙联合作用时,二者对OPN蛋白和OPN mRNA表达有交互作用(F=6.257、4.32,P均<0.05).结论 过量氟可促使大鼠肾组织的OPN表达增加,提示OPN与氟中毒肾损害程度密切相关,可考虑作为一种氟中毒肾损害的标志,并且,高氟与低钙同时存在时,大鼠肾损害会进一步加重,提示低钙是氟化物损害肾脏的重要环节.     

胰高血糖素样肽-1类似物对高糖诱导下肾小管上皮细胞Toll样受体4、骨桥蛋白表达的影响

目的 研究胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物对高糖诱导下的肾小管上皮细胞中Toll样受体4(TLR4)、骨桥蛋白(OPN)表达的影响.方法 体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,将其分为低糖组、高糖组、高渗透压组、低剂量干预组、中剂量干预组、高剂量干预组.干预48 h后采用细胞免疫化学法、RT-PCR法分别检测各组细胞中TLR4、OPN蛋白和mRNA的表达情况.结果 低糖组和高渗透压组TLR4、OPN蛋白和mRNA呈低表达,且表达无明显差异;高糖组TLR4、OPN蛋白及mRNA表达较低糖组明显增高;Exendin-4干预后TLR4、OPN的蛋白及mRNA的表达明显降低,且呈剂量依赖性,明显低于高糖组,但仍高于低糖组.结论 GLP-1类似物可通过抑制TLR4、OPN的表达来抑制免疫炎症反应对肾脏的损害,且GLP-1类似物的这种保护作用呈剂量依赖性.     

肺动脉高压大鼠心肌骨桥蛋白及其整合素β3受体表达的变化

目的探讨肺动脉高压大鼠右心室心肌骨桥蛋白(OPN)及其整合素β3受体基因表达变化其与右心室重塑的关系。方法选取60只SD大鼠随机等分为1个对照组和4个肺动脉高压实验组(PAH组),每组12只,分别于注射MCT后第1,2,3,4周获取组织。测定平均肺动脉压(mPAP)和右心室肥厚指数;采用免疫组化、Western印迹和RT-PCR法测定不同时间点各组大鼠右心室心肌骨桥蛋白(OPN)及其整合素β3受体mRNA的表达水平。结果对照组大鼠右心室心肌OPN及其整合素β3受体mRNA表达水平低于肺动脉高压各组(PHA1-4组)(P<0.O5);肺高压各组左、右心室心肌OPN和整合素β3受体蛋白表达水平高于对照组,且随着产生的时间而逐渐增高(P<0.05);右心室心肌OPN mRNA及整合素β3 mRNA表达水平均与右心室肥厚指数呈正相关(P<0.05)。结论右心室心肌OPN及其受体整合素β3基因表达随着大鼠肺动脉高压及右室肥大形成逐渐增加,可能在右心室心肌重塑中起重要的作用。     

低氧高二氧化碳环境下肺动脉内皮结构变化与肺动脉高压的关系

探讨肺动脉内皮结构变化与低O2 高CO2 肺动脉高压的关系。SD大鼠分为对照组 (A组 ) ,4周低O2 高CO2 组 (B组 ) ,4周低O2 高CO2 +川芎嗪组 (C组 )。 1 电镜下B组肺细小动脉内皮细胞 (EC)向管腔内突起 ,呈立方或柱状上皮 ,部分细胞膜突起似绒毛 ,可见严重EC胞内水肿、变性 ,形成空泡 ,并可见EC下水肿 ,中膜平滑肌细胞增生 ,外膜胶原纤维高度密集 ,呈束状 ,C组肺细小动脉内皮细胞基本恢复正常 ,平滑肌细胞、胶原纤维增生明显减轻。 2 B组肺动脉平均压 (mPAP)明显高于A组 (P <0 .0 1) ,C组mPAP明显低于B组 (P <0 .0 1) ;3 光镜下 ,肺细小动脉管壁面积 /管总面积比值 (WA/TA)、肺细小动脉中膜平滑肌细胞核密度(SMC)B组较A组明显增高 (P均 <0 .0 1) ,C组较B组明显降低 (P均 <0 .0 1)。肺动脉内皮细胞严重水肿、变性 ,空泡形成与慢性低O2 高CO2 性肺动脉高压的形成密切相关 ,川芎嗪可抑制上述内皮细胞损害     

低氧高二氧化碳对肺动脉内皮素1基因表达的影响

目的 探讨内皮素１（ＥＴ－１）基因表达变化在慢性低氧（Ｏ２）高二氧化碳（ＣＯ２）性肺动脉高压形成中的作用及川芎嗪的影响。方法 将ＳＤ大鼠分为正常对照组（Ａ组）,４周低Ｏ２高ＣＯ２组（Ｂ组）,４周低Ｏ２高ＣＯ２＋川芎嗪组（Ｃ组）。采用透射电镜、图像分析、原位杂交等方法,研究４周 Ｏ２高Ｃ烽川芎嗪对大鼠肺动脉平均压（ｍＰＡＰ）、颈动脉平均压（ｍＣＡＰ）、肺细小动脉显微和超微结构ｍＰＡＰ与Ｂ组比较,差异     

Renal compensation of hypercapnia in prolonged hypoxia

We previously showed that rats made hypoxic for three weeks were able to regulate their plasma pH better than normoxic rats during acute hypercapnia. This improved pH regulation was abolished by nephrectomy, suggesting that it was due, at least in part, to a more effective renal compensation of hypercapnia in hypoxic rats. To test this possibility renal acid excretion was measured in conscious rats that had been kept at PB 370-380 Torr for three weeks. The rats were studied in a chamber where PIO2 was kept at 68-70 Torr at ambient PB (740-750 Torr). Controls were pair-fed normoxic rats. After a 2 h control period, inspired PCO2 was increased for 4 h. The apparent non-bicarbonate buffer value of arterial blood plasma was twice as high in the hypoxic than in the normoxic rats. Renal excretion of ammonium increased to a similar extent during hypercapnia in both normoxic and hypoxic rats. Titratable acid excretion of normoxic rats did not change significantly during hypercapnia. In the hypoxic rats, on the other hand, total excretion of titratable acid in the 2 h control period was 90.9 +/- 16.4 mumol/rat; and increased to 150.0 +/- 13.4 mumol/rat in the first 2 h and to 232.9 +/- 26.0 mumol/rat in the last 2 h of hypercapnia. In spite of this large increase in acid excretion, urine pH of hypoxic rats did not change significantly, indicating a higher buffer value of the urine of hypoxic rats. These results confirm our previous observations and support the idea that the improved pH regulation of hypoxic rats is due in part to a more effective renal compensation of hypercapnia.     

一氧化碳体系对慢性肺心病大鼠肺血管结构重建的抑制作用

目的　研究内源性一氧化碳体系对慢性肺心病肺血管结构重建的调控作用。方法　将36只SD大鼠随机分为正常对照组 (A组 )、4周低O2 高CO2 组 (B组 ) ,4周低O2 高CO+ 2 血晶素组 (C组 ) ,每组 12只。测定各组大鼠肺动脉平均压 (mPAP)、右心室 / (左心室 +室间隔 )重量比 [RV/ (LV +S) ]、肺细小动脉显微和超微结构、血CO浓度、血清及肺组织匀浆上清液血红素氧合酶 1(HO 1)活性和肺细小动脉HO 1及其基因表达的变化。结果　 (1)B组mPAP为 (2 0 1± 0 8)mmHg(1mmHg =0 .133kPa)、RV/ (LV +S)为 (35 5± 1 7) %、与A组 [(15 3± 1 4 )mmHg、(2 6 7± 1 7) % ]及C组[(16 5± 3 7)mmHg、(30 2± 1 6 ) % ]比较差异有显著性 (P均 <0 0 1)。 (2 )B组肺细小动脉血管结构重建的显微形态测定指标与A、C组比较差异也有显著性 (P <0 0 1)。 (3)B组全血CO含量、血清及肺组织匀浆HO 1活性、肺细小动脉HO 1及其mRNA分别为 (2 1± 0 9) %、(73± 18)nmol·L-1·h-1、(175 1± 311)pmol·mg-1·h-1、0 191± 0 0 12和 0 30 1± 0 0 17,与A组 [(0 5± 0 3) %、(2 5± 8)nmol·L-1·h-1、(385± 4 6 )pmol·mg-1·h-1、0 0 5 9± 0 0 0 5、0 131± 0 0 11]和C组 [(4 9± 2 1) %、(132±39)nmol·L-1·h-1     

慢性缺氧改变肺内动脉平滑肌细胞环氧合酶基因的表达

目的研究慢性缺氧对肺动脉平滑肌细胞环氧合酶基因表达的影响.方法根据常氧(PaO2152mmHg)及慢性缺氧(PaO240±5nmHg)的不同培养条件,将平滑肌细胞分为常氧组和慢性缺氧组,采用半定量RT-PCR技术检测大鼠肺内动脉平滑肌细胞环氧合酶(COX)基因的表达及其对急性缺氧刺激的反应.结果COX-1mRNA的表达不受缺氧及传代的影响,而COX-2mRNA的表达随慢性缺氧时间延长而增加,在4、6代慢性缺氧培养组均高于同代常氧组水平(P＜0.05).急性缺氧后COX-2mRNA增加的幅度在慢性缺氧组均大于同代常氧组,以第四代最为显著.结论慢性缺氧可增强急性缺氧时肺内动脉平滑肌细胞COX-2基因的表达,在慢性缺氧所致肺血管对缺氧的反应性降低中可能起作用.     

安立生坦对低氧性肺动脉高压大鼠右心室心肌骨桥蛋白表达的影响

目的 研究安立生坦（ambrisentan）对低氧性肺动脉高压（hypoxic pulmonary hypertension,HPH）大鼠右心室心肌骨桥蛋白（Osteopontin，OPN）表达的影响。方法 将40只SD大鼠随机分成正常组、模型组、安慰剂组、安立生坦组，每组各10只。正常组于自然环境中饲养4周，其他3组置于低压低氧舱内（8 h/d），共饲养4周。从低氧第3周起进舱前，每天给予安慰剂组生理盐水（2 ml）灌胃，给予安立生坦组安立生坦（5 mg/kg）灌胃，共2周。4周后以RT-PCR及Western blot法检测右心室心肌OPN的表达水平。结果 与正常组相比，模型组大鼠的mPAP、RVSP、RV/(LV+S)、RW/BW、和右心室CVF均显著升高，OPN表达水平显著升高（P<0.05）；与模型组和安慰剂组比较，安立生坦组的上述指标和OPN的表达水平显著降低（P<0.05）；与正常组相比，安立生坦组各项指标及OPN表达水平无明显统计学差异。结论 安立生坦在降低肺动脉压力的同时可显著降低右心室心肌O PN的表达。     

慢性低氧对肺动脉高压大鼠肺血管ERK 1/2、p38MAPK表达的影响

目的：通过建立慢性低氧性肺动脉高压大鼠模型,研究慢性低氧对大鼠肺血管细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)、p38MAPK蛋白表达的影响。方法建立慢性常压低氧肺动脉高压大鼠模型,将雄性SD大鼠随机分为正常对照组、低氧1d、3d、7d、14d和21d组,应用免疫组织化学技术检测肺动脉高压形成过程中大鼠肺血管 ERK1/2、p38MAPK 蛋白表达水平。结果①RVSP 和 RV/(LV+S)比值较正常对照组明显增加(P<0.05),低氧后3 d、7 d、14 d和21 d后大鼠肺血管明显增厚;②ERK1/2、p38MAPK蛋白广泛分布于肺血管内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞中,且随着低氧时间的延长,ERK1/2、p38MAPK蛋白表达量增加。结论 ERK1/2、p38MAPK 蛋白表达量的上调可能参与了慢性低氧诱导的大鼠肺动脉高压肺血管重塑的发生、发展过程。