小鼠抗兔IgG单克隆抗体的制备与应用

制备小鼠抗兔IgG的mAb,经标记HRP和FITC后,应用于ELISA、Western blot、免疫组织化学染色试验以及FCM.以正常兔IgG为抗原,免疫BALB/c小鼠,通过常规B淋巴细胞融合技术,获得两株分泌抗兔IgG mAb的杂交瘤细胞株,间接ELISA腹水效价均达1 ×10-7,且亚类均为IgG1(κ).抗体经鉴定、纯化后,以改良的过碘酸钠法标记HRP,本室常规方法标记FITC.FITC标记的2A1 mAb的F/P值为4.1,2F11的F/P值为2.7.HRP标记抗体的效价和工作浓度分别:2A1为1:25600和1:3200,2F11为1:102400和1:25600.在相同工作浓度条件下,ELISA、Western blot的实验结果,HRP标记的2F11 mAb明显优于商品化抗兔pAb,而且,2A1和2F11mAb经标记后还可用于免疫组化和FCM,显示出很好的应用前景.     

抗人IgG单克隆抗体在IgG抗-HBc检测中的初步应用

本文对分泌高滴度抗人IgG的杂交瘤进行克隆化培养,获得了单克隆抗人IgG抗体。其中一株(HE_(15)D_3)经免疫扩散等试验证实为抗人IgGγ链特异性抗体。但抗人IgG的亚类特异性尚待鉴定。 用此株单克隆抗体包被聚苯乙烯板(ELIA抗体捕获法)检测了236例肝炎患者及40例健     

抗层粘蛋白α链与β链单克隆抗体的制备及其在临床上的应用

作者制备了1株产生抗层粘蛋白单克隆抗体Mo-611杂交瘤,利用ELISA方法鉴定Mo-611与来自于EHS肉瘤小鼠的层粘蛋白反应,抗体效价随着稀释度增加而逐渐下降,经1μg/ml层粘蛋白吸收后其效价明显降低。Mo-611亚类为IgG1,利用Westernblot方法证实Mo-611与层粘蛋白的α链400 000和β链200 000处相结合。通过间接免     

抗人IgG单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备高效价的抗人IgG单克隆抗体(mAb),并用于肾脏免疫性疾病的免疫荧光诊断。方法:以人IgG全长分子免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合,经筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗IgGmAb的杂交瘤细胞株。用ELISA及Westernblot鉴定mAb的特性(效价、Ig亚类、特异性及相对亲和力)。以纯化的mAb建立免疫荧光染色法,并用于肾小球肾炎的诊断。结果:筛选到1株可稳定分泌抗人IgGmAb的细胞株,腹水效价为1×10-6,Ig亚类为IgG2a(κ),相对亲和力达到1×10-5,Westernblot显示在相对分子质量(Mr)为53×103处出现特异性的条带,说明mAb能与IgG的γ链特异性结合。免疫荧光染色的结果显示,IgG分子在肾小球肾炎的活检组织中表达。结论:获得1株能特异性识别人IgG的mAb,可用于肾脏免疫性疾病的病理诊断。     

SCID小鼠在制备人单克隆抗体中的应用

由CB-17纯系小鼠突变而来的重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠的突出特点为T-B淋巴细胞功能联合缺陷.此特点决定了它可接受人器官组织移植物,形成人-鼠嵌合体:SCID-hu小鼠,为以往不能在人体上进行的人类生物医学实验开辟了一条新的途径,同时也为人单克隆抗体的深入研究头来了新的希望.本文讨论了在SCID小鼠中进行异种移植的条件以及利用SCID-hu小鼠进行人单抗研究的一些进展.     

抗生物素单克隆抗体的制备及其在核酸检测中的应用

生物素与亲和素有相当强的亲和力 (Ｋｄ10 15Ｍ ) ,已被广泛用于细胞化学、免疫组织化学、免疫测定以及核酸原位分子杂交。但是生物素 亲和素系统中 ,亲和素是一种高碱性 (ｐＨ0 5 )糖蛋白 ,易引起较强的非特异性结合。最近Ｂａｇｅｒ报道抗生物素抗体有模拟亲和素功能作用 ,并显示较好的特异性[1] 。本文报道建立二株抗生物素单克隆抗体 ,并初步用于乙型肝炎ＤＮＡ的检测。1　材料和方法1 1　材料　生物素、Ｎ 羟基琥珀酰亚胺、二环已基碳二亚胺、ＢＳＡ、ＰＥＧ、ＨＡＴ、ＤＡＢ (3,3 ｄｉａｍｉｎｏｂｅｎｚｉｄｉｎｅ )、羊抗小鼠Ｈ…     

脾内免疫后制备抗人IgG单克隆抗体

为了得到抗人IgG特异性IgM类单克隆抗体(McAb),给BALB/c小鼠一次脾内注射20μl/(1mm/ml)纯化的,人IgG进行免疫。四天后,将脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合。该免疫方案与长程免疫方案比融合杂交瘤细胞少,但分泌特异性McAb的阳性杂交细胞比例高。使用纯化的人IgG_1、IgG_2、IgG_3、IgG_4、IgA、IgM、IgE及K和λ轻链进行固相酶免疫法分     

抗猴IgM和IgG免疫血清的制备研究

本文用Sephadex G200柱层析及DEAE-Sephadex A50离子交换层析法,从正常猴血清中提取猴IgM及IgG,经SDS-PAGE证实为电泳纯。2Kg左右的家兔,腹股沟皮下注射BCG后2周,在肿大的淋巴结内及基周围注射与福氏完全佐剂(FCA)混合的猴IgM或IgG;并在间隔40天及20天再用与福氏不完全佐剂(FIA)混合的猴IgM或IgG加强免疫。用琼脂糖双扩散法、免疫电泳、2ME还原及SPA吸收后的抗体捕捉ELISA等方法证实,所得兔抗猴免疫血清效价高,特异性强,为研究恒河猴的体液免疫应答提供了必不可少的材料。     

抗人胰岛素单克隆抗体的制备及其应用

抗人胰岛素单克隆抗体的制备及其应用刘彩云孙素莲（北京市肿瘤防治研究所免疫室，北京１０００３４）人血中胰岛素的测定主要用于评估糖尿病患者胰岛细胞的分泌功能，对于选用药物和判定某些药物的疗效，以及对胰岛瘤的诊断也具有一定的意义。目前，一般应用ＲＩＡ测定人...     

抗土霉素单克隆抗体的制备及其特性分析

目的:制备抗土霉素(OTC)的单克隆抗体(mAb),对其特异性和竞争ELISA的实用性进行分析。方法:通过碳二亚胺法和羰基二咪唑法分别将OTC与载体蛋白(BSA、OVA)偶联制备免疫原和检测抗原,用杂交瘤技术制备mAb,鉴定mAb的特异性并用于竞争ELISA效果分析。结果:获得1株能稳定分泌抗OTC的mAb杂交瘤细胞株,mAb腹水的ELISA效价为3×104,土霉素竞争ELISA检测下限为1mg/L。结论:抗OTC的mAb具有抗原结合特异性,可用于OTC竞争ELISA免疫学检测。     

抗鸡IgG单克隆抗体的研究

本研究利用小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞系与鸡IgG免疫的BALB/c小鼠脾细胞融合,建立了5个能持续分泌抗鸡IgG单克隆抗体(鸡IgG-McAbs)的杂交瘤细胞株(C_(41)、C_(42)、C_(43)、C_(44)C_(45));染色体数分别平均为99、99、101、102和99。用琼脂双扩散试验(ID)、间接ELISA和ELISA双抗体夹心法等试验证明:杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体只与鸡IgG发生特异性反     

抗A和抗B单克隆抗体的制备及其在血型检定中的初步应用

本试验用A和B型人红细胞混合悬液免疫BALB/c小鼠,取免疫脾细胞与同系鼠Sp 2/0骨髓瘤细胞融合,建立了5株分泌盐水凝集抗体的杂交瘤细胞株。3次克隆化后,细胞株稳定分泌单克隆抗体已10个月。经A、B、O各型红细胞鉴定及凝集抑制试验、吸收释放试验证明:H_2、H_5、B_7株是特异性抗A,D_5株是特异性抗B。本试验制备的单克隆抗体亲和力高于人抗血清,用保护剂稀释后稳定性良好。用单克隆抗体和人抗血清对献血员血液标本1782份,脐带血58份进行血型检定,所得结果完全一致。     

抗重组GST单克隆抗体的制备及其在融合蛋白纯化中的应用

目的 制备抗重组GST的单克隆抗体（mAb),并用来纯化重组GST融合蛋白,方法 用含重组GST融合蛋白基因的pGEX4T-1质粒转化E.coliBL21,IPTG诱导GST融合蛋白表达,亲和层析和凝胶过滤法分离表达的重组GST融合蛋白,以此蛋白作为抗原,免疫Balb/c小鼠,按传统的杂交瘤技术制备mAb。将抗GSTmAb经ProteinA纯化后,与Sepharose4B偶联。结果 经3次亚克隆后,获得两株分泌抗GST载体特异性mAb的杂交瘤,采用该mAb对两种不同的GST融合蛋白进行亲和层析纯化后,经SDS-PAGE鉴定达到了商品化Glutathione-Resin的亲和层析纯化效果。结论 用抗GST蛋白特异性mAb亲和层析纯化融合蛋白是一种经济、实用的方法,且可用于Glutathione-Resin亲和层析纯化后的二次纯化。     

抗HBeAg单克隆抗体的制备、特性及其在临床诊断中的应用

诊断、监测和尽可能根治乙型肝炎要有快速、敏感、特异的检测方法。乙型肝炎最重要的感染标志是人血清中含有HBsAg、抗-HBc抗体、HBeAg和HBV DNA。单克隆抗体(McAb)能够识别确切的抗原决定簇。用McAb于这些试验比常规的多克隆抗体更敏感、特异。     

小鼠抗人CD160分子单克隆抗体制备及其生物学功能初步分析

CD160分子是糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白,是免疫超家族新成员,与其特异性配体HVEM分子结合所提供的共刺激信号在T细胞的增殖,活化,细胞因子产生和B细胞增殖,活化,分泌抗体产生等方面发挥着重要的调节作用。目前,市面上效果较好的IgG亚型的CD160抗体并不多,通过常规的基因克隆技术,基因重组技术,小鼠免疫技术以及经典的B淋巴细胞杂交瘤技术,获得能持续稳定分泌特异性鼠抗人CD160分子的IgG亚型单克隆抗体的杂交瘤细胞株;采用westen blot和竞争结合抑制实验,对获得的杂交瘤细胞进行生物特性方面的鉴定;采用间接免疫荧光法和流式细胞术分析CD160在健康人PBMC中T细胞表面的表达;T细胞增殖实验表明,此株单抗对于T细胞的体外增殖具有抑制作用。为进一步研究CD160分子的生物学效应提供了新的工具。     

抗CMG2单克隆抗体的制备及其初步应用

目的制备鼠抗人毛细血管形态发生基因2(CMG2)单克隆抗体,并将其初步应用于胃癌组织和细胞系中CMG2表达的检测。方法重组表达CMG2胞外区肽段,免疫Balb/c小鼠,常规制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA方法筛选目标克隆,制备小鼠腹水并经蛋白A亲和纯化获得相应抗体。间接ELISA法鉴定抗体的亚类类型及亲和力;抗原竞争性抑制实验鉴定抗体的特异性。用候选抗体建立流式细胞术、免疫荧光、免疫印迹及免疫组织化学方法,初步应用于胃癌组织和细胞系中CMG2表达的检测。结果共获得3株针对CMG2胞外区的杂交瘤细胞株,其中以8F3单克隆抗体的亲和力和特异性最好,亚型为Ig G1。8F3单抗能用于胃癌细胞株CMG2表达的流式细胞术和免疫荧光检测以及胃癌组织的免疫组织化学检测。结论成功制备出高效价高特异性的鼠抗人CMG2单克隆抗体,为CMG2的基础和临床应用研究提供了有用工具。     

抗人PD-L1 单克隆抗体的制备及其应用

目的:获得能应用于临床诊断以及阻断PD-L1 与PD-1 结合的抗人PD-L1 单克隆抗体。方法:采用重组表达的人PD-L1 蛋白免疫BALB/ c 小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术获得稳定分泌抗人PD-L1 单抗的阳性细胞株,ELISA 方法鉴定抗体的特异性、亲和力、亚型等方面特性;免疫印迹、间接免疫荧光方法对肿瘤细胞进行检测;肿瘤杀伤实验验证抗体阻断活性。结果:共获得2 株抗人PD-L1 单抗,抗体效价分别为1 2.56 106 和1 3 105 ,亲和力分别为1.5 109 L/ mol 和2.5 108 L/ mol,均与PD-L2 蛋白无交叉反应。免疫印迹、间接免疫荧光证实抗体有诊断作用。杀伤实验显示抗体有阻断作用。结论:共获得两株稳定分泌高效价、高特异性的抗人PD-L1 单抗的杂交瘤细胞株,能作为诊断抗体应用于肿瘤表型检测和预后有效性的评估。抗体的阻断功能可应用于联合CIK 细胞免疫治疗。