舌鳞癌细胞系Tca8113 Fas表达水平与凋亡的关系

目的研究舌鳞癌Tca8113细胞Fas表达水平与细胞凋亡的关系,了解细胞凋亡的相关机制。方法采用脂质体法将含Fas基因片段的真核表达重组质粒pBK-Fas导入舌鳞癌Tca8113细胞,检测转染前后FasmRNA表达水平、Fas蛋白阳性表达率和阳性表达强度。以及细胞凋亡指数,分析细胞凋亡的相关因素。结果Fas转染不提高舌鳞癌Tca8113细胞Fas蛋白阳性表达率(P>0.05),但能提高FasmRNA表达水平、Fas蛋白表达强度,以及细胞凋亡指数。各项指标分别由转染前的0.201±0.015,31.02±4.63,0.88%±0.16%上升到0.399±0.073,54.32±6.38和10.21%±1.46%,统计分析均有显著性差异(P<0.01)。结论Fas介导Tca8113凋亡与Fas蛋白阳性率可能无关,而与Fas蛋白阳性强度有关。Fas蛋白激活细胞凋亡可能存在阈值。只有Fas表达达到一定强度,细胞凋亡才被激活。     

X连锁凋亡抑制蛋白在口腔鳞癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在口腔鳞癌中的表达及其与患者预后之间的关系。方法:运用免疫组化技术检测52例口腔鳞癌组织标本中XIAP蛋白的表达情况,评价其表达水平和患者各临床病理参数及患者预后之间的关系。结果:纳入研究的52例临床标本中XIAP阳性表达14例(27%)。XIAP表达水平与病理分级相关,并且和患者预后显著相关。结论:XIAP蛋白可能参与了口腔鳞癌的发生发展,并且与患者预后密切相关。     

术前诱导化疗对口腔鳞癌细胞凋亡和增殖的影响

细胞过度增殖是恶性肿瘤的重要特征之一,长期以来,抗癌药物的研究多集中在抑制肿瘤细胞增殖活性方面.近年发现,细胞凋亡(apoptosis, APO)与肿瘤的发生、发展、治疗及预后关系密切,APO在肿瘤化疗中的作用成为研究热点[1,2].本文比较24例口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)患者经VM(vincristine methotrexate)方案化疗前后APO和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的变化,以探讨VM方案的抗癌机理.     

口腔鳞癌细胞系KB和Tca8113中的SP细胞含量分析

目的探讨两种口腔鳞状细胞癌细胞系KB和Tca8113中的侧群细胞的含量,寻找口腔鳞癌肿瘤干细胞存在的依据。方法采用有限稀释法对口腔鳞癌细胞系KB和Tca8113细胞株经Hoechst 33342/碘化丙啶（propidium iodide,PI）双染色后,采用流式细胞仪测定,分析两细胞株中侧群细胞的含量。结果口腔鳞癌细胞系KB和Tca8113中具有不同的表型,即侧群细胞和非侧群细胞。在体外培养中,KB和Tca8113细胞株中侧群细胞含量分别为0.6%和2.3%。经维拉帕米阻断后,侧群细胞含量均明显降低,分别降为0和0.1%。结论 KB和Tca8113细胞株中均存在侧群细胞,但含量较少。     

Fas基因转染对舌鳞癌细胞系Tca8113凋亡的影响

目的探讨外源性Fas基因介导舌鳞癌细胞凋亡的可行性及其可能的分子机制。方法脂质体法将重组人Fas真核表达载体转染人舌鳞癌细胞系Tca8113，抗Fas单克隆抗体诱导其凋亡，Western blotting检测转染前后Tca8113细胞Fas蛋白表达水平，TUNEL法检测转染前后细胞凋亡水平。结果转染后Tca8113细胞Fas蛋白表达上调；抗Fas单克隆抗体可诱导Tca8113细胞凋亡，凋亡指数升高。结论上调Fas基因表达及应用抗Fas单克隆抗体可诱导肿瘤细胞凋亡，有可能作为肿瘤基因治疗的新途径。     

信号转导蛋白P65与放疗诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡的关系

目的 探讨不同剂量的X射线对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞中信号转导蛋白P65表达的影响以及P65与放疗诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡的关系.方法 人舌鳞癌Tca8113细胞复苏后,在37℃,5%CO2的孵箱中培养.共分对照组、2、4、6、8、10 Gy剂量组,待细胞长至对数生长期后,对细胞分别应用上述照射剂量一次性照射....     

口腔鳞癌细胞FAS蛋白的表达及其与癌细胞凋亡的关系

目的探讨不同分化程度口腔鳞癌细胞FAS蛋白的表达及其同鳞癌细胞凋亡的关系。方法采用免疫组织化学方法检测38例不同分化程度口腔鳞癌组织FAS蛋白的表达,脱氧核糖核酸末端转移酶介导的原位末端标记(TUNEL)技术,检测鳞癌细胞的凋亡。结果FAS蛋白表达及癌细胞的凋亡与口腔鳞癌的分化程度有关,低分化鳞癌的FAS蛋白阳性表达率显著低于高、中分化鳞癌(P<0.05),癌组织分化程度越低,癌细胞凋亡指数(AI)也越低(P<0.01);口腔鳞癌细胞FAS蛋白表达阴性组癌细胞AI明显低于FAS蛋白表达阳性组(P<0.01),FAS蛋白表达阳性组中,随FAS蛋白表达的下降,癌细胞AI逐步降低,凋亡指数与FAS蛋白的阳性表达呈正相关,各组间AI差异有统计学意义(r=0.68,P<0.01)。结论口腔鳞癌细胞FAS蛋白表达与癌组织分化程度及癌细胞凋亡有密切关系,FAS蛋白诱导的凋亡异常在口腔鳞癌的发生发展中起重要作用,FAS蛋白检测可能作为临床判断口腔鳞癌恶性度的有用标记物。     

顺铂化疗对口腔颌面部鳞癌细胞基因表达谱的影响

目的 探讨口腔颌面部鳞癌对顺铂的应答规律，以阐明肿瘤耐药的作用机制，指导临床化疗。方法 收集(8例)4对临床标本，根据其是否接受过顺铂化疗，分为2组，采用Affymetrix HG—U95Av2寡核苷酸芯片对其基因表达谱进行聚类分析。结果 应用Genespring软件同时对标本和基因进行聚类，发现根据标本是否接受过顺铂化疗及化疗效果可正确聚类，而且利用基因聚类的结果，筛选出关系最密切的50条基因，其表达情况能够正确预测标本是否接受过顺铂化疗。结论 顺铂化疗可改变一组基因在口腔鳞癌的表达，可以通过该组基因的表达谱对标本进行正确聚类．而且这种改变可能与口腔鳞癌顺铂化疗效果相关。     

MMP－2 siRNA促进口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡作用的研究

目的：研究基质金属蛋白酶－2（MMP－2）siRNA对口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡的作用。方法：采用MMP－2 siRNA慢病毒感染Tca8113,qPCR检测MMP－2表达,MTT检测细胞活性,Annexin－V单染检测细胞凋亡。结果：MMP－2 siRNA慢病毒成功抑制Tca8113中MMP－2 mRNA表达。MMP－2干扰组细胞活性显著低于阴性病毒组（P＜0．01）,且细胞凋亡率高于阴性对照组（P＜0．01）。结论：MMP－2干扰能促进Tca8113凋亡,起到抗肿瘤效应。     

紫草素对口腔鳞癌Tca8113细胞增殖与凋亡的作用

目的：研究紫草素对体外培养的口腔鳞癌Tca8113细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察紫草素对Tca8113细胞的体外增殖抑制作用;采用光镜、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳技术及流式细胞术观察紫草素对Tca8113细胞凋亡的影响。采用SPSS12．0软件包对数据进行单因素方差分析及t检验。结果：MTr检测显示．紫草素在0-50μmol／L浓度范围内。对Tca8113细胞的增殖抑制作用呈现时间依赖性和浓度依赖性（P〈0．01）．电镜下可见典型的细胞核皱缩及凋亡小体,DNA琼脂糖凝胶电泳观察到典型梯状条带,流式细胞仪结果显示亚G1期细胞明显增加,各组细胞凋亡率均显著高于对照组（P〈0．01）。结论：紫草素对口腔鳞癌Tca8113细胞具有明显的增殖抑制及诱导凋亡作用．可用于口腔鳞癌化学防治的新尝试。     

蛋白激酶C-δ在热诱导舌鳞癌Tca8113细胞凋亡中的作用研究

目的探讨热诱导舌鳞癌Tca8113细胞凋亡过程中蛋白激酶C-δ（PKC-δ）的作用。方法应用PKC-δ活化抑制剂Rottlerin和等体积的Rottlerin溶剂二甲基亚砜（DMSO）分别预处理Tca8113细胞30 min后,43 ℃水浴法热诱导Tca8113细胞0、40、80、120 min,流式细胞仪检测细胞凋亡率、线粒体膜电位强度变化,酶标仪比色法检测Caspase-3活性,Western杂交分析PKC-δ的活化。结果Rottlerin抑制热诱导的PKC-δ裂解活化;抑制热诱导Tca8113细胞凋亡、降低线粒体膜电位及Caspase-3活性。相同40、80、120 min加热时间,经Rottlerin与未经Rottlerin预处理的Tca8113细胞相比,两者凋亡率、线粒体膜电位及Caspase-3活性在统计学上有显著性差异（P<0.01）。结论活化的PKC-δ可促进热诱导Tca8113细胞凋亡,PKC-δ裂解活化是热诱导Tca8113细胞凋亡的机制之一。     

Transfection of truncated bone morphogenetic protein receptor‐II into oral squamous cell carcinoma cell line Tca8113 and inhibitory effect on proliferation and inductive effect on apoptosis

J Oral Pathol Med (2010) 40 : 490–496 Bone morphogenetic proteins (BMPs), one of the crucial regulators in embryonic development and bone formation, have been implicated in epithelium‐derived tumors. Previous results showed the involvement of overexpression of BMP 2, 4, 5 in the carcinogenesis of oral epithelia. The ability of BMP receptor‐II mutant to modify the malignant phenotype of oral squamous cell carcinoma cell line Tca8113 by blocking the BMP signal transduction pathway has been proposed. In this study, a negative truncated mutant of the BMP receptor‐II (tBMPR‐II) was transfected into Tca8113 cells. The effects were evaluated though RT‐PCR, 3‐[4,5‐dimethylthiazol‐2‐yl]‐2,5‐diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay, BrdU staining, cell cyclin assay, TdT‐mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) staining, and cell cycle protein detection. Overexpression of tBMPR‐II gene transfection truncates the expression of BMPR‐II mRNA expression, but not BMP 2, 4, 5. tBMPR‐II resulted in a remarkable inhibition of cell proliferation and viability compared with control Tca8113. The inhibitory effects were partly attributed to the induction of apoptosis and cell cycle arrest in G₀/G₁ accompanied by downregulation of the intracellular cell cycle proteins of cyclin D1 and cyclin‐dependent kinases 4, as well as the upregulation of p27 and p57. Loss of BMP signals correlates tightly with suppression of cell proliferation, induction of apoptosis, and benign transformation of Tca8113 cells phenotype.     

塞来昔布对Tca8113细胞环氧化酶-2表达及诱导凋亡的作用

目的观察选择性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对人舌鳞癌Tca8113细胞的生长抑制、COX-2表达调节及诱导凋亡的作用。方法在Tca8113细胞中分别加入含有不同浓度塞来昔布的培养液,培养24、48、72 h后,采用MTT方法测定细胞生长抑制率,采用免疫组化方法观察COX-2蛋白在Tca8113细胞中的表达,应用荧光显微镜观察凋亡细胞的形态学特征,应用Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞的早期凋亡率,相对定量荧光定量PCR检测Tca8113细胞中COX-2 mRNA的表达。结果COX-2蛋白在Tca8113细胞中呈强阳性表达,塞来昔布在抑制细胞生长的同时,抑制Tca8113细胞COX-2蛋白的表达;Tca8113细胞经塞来昔布处理后凋亡细胞多见,与对照组相比,塞来昔布处理组早期凋亡细胞增多有统计学意义;塞来昔布调节COX-2 mRNA表达的作用与对照组相比无统计学意义。结论塞来昔布主要以剂量依赖的方式抑制Tca8113细胞生长,诱导细胞凋亡,其作用与抑制COX-2蛋白表达有关,而对COX-2基因作用较弱,其作用机制有待进一步研究。     

转染骨形成蛋白(BMPs)Ⅱ型突变受体前后Tca8113细胞周期相关因子表达及凋亡的研究

目的 :明确转染BMP -II型突变受体对Tca8113舌癌细胞的作用 ,以进一步探讨、认识BMPs对口腔上皮恶变的作用机理。方法 :检测转染BMP -II型突变受体的Tca8113舌癌细胞 (Tca8113ZR细胞 )和Tca8113细胞的细胞周期相关因子 (CyclinD1,CDK -4 ,p2 7和p5 7)的表达及凋亡 ,以明确突变受体对细胞周期及生长的影响。结果 :转染了BMPⅡ型突变受体后 ,肿瘤细胞的增殖能力显著减弱。结论 :BMPs信号在口腔舌癌细胞的恶性变化中起着重要的调控作用 ,BMPs信号的改变可能导致细胞恶性程度的改变。     

Cx31.1蛋白在舌癌细胞中的表达及其对细胞通讯功能的影响

目的：探讨细胞缝隙连接蛋白（connexin)Cx31.1在人舌鳞癌细胞系Tca8113中的表达及其对细胞间隙连接通讯的影响。方法：应用流式细胞仪及其Lucifer Yellow划痕荧光传输技术,研究六亚甲基二乙酰胺（HMBA）作用对Tca8113细胞Cx31.1蛋白表达,以及细胞生长状态和间隙连接通讯功能的调节作用,结果：Tca8113细胞经HMBA处理后,流式细胞仪分析,C 31.1蛋白表达的阳性细胞计数率由1．7％上升至30．3％,Tca8113细胞生长明显受到抑制,推测细胞间隙连接通讯功能得到部分恢复,结论：HMBA可上调Cx31.1蛋白在Tca8113细胞中的表达,可能命名细胞间隙连接通讯功能得到恢复,并实现对舌癌恶性表型的逆转作用。     

MageD1在口腔鳞癌中的表达及其促进凋亡作用的研究

目的：检测口腔鳞癌组织和口腔鳞癌细胞系中黑色素瘤相关抗原D1（ MageD1）的表达,并在口腔鳞癌细胞系HN6中通过转染慢病毒的方法过表达MageD1,探讨其对细胞凋亡的影响。方法：收集临床标本,通过Western blot和RT?PCR的方法检测口腔鳞癌以及HN6细胞系中MageD1的表达量,用载有MageD1的慢病毒转染HN6细胞,检测转染效果和Bax、Cleaved?Casepase3等凋亡相关蛋白的表达,并采用裸鼠荷瘤实验研究肿瘤体内生长的情况。结果：MageD1在口腔鳞癌组织及HN6细胞株中较正常组织呈低表达,Western blot及RT?PCR结果表明,MageD1成功转染并得到稳定过表达MageD1的Lv?Maged1细胞,并且过表达MageD1的HN6细胞中Cleaved?Casepase3和Bax的表达量高于HN6细胞,荷瘤实验证明MageD1具有抑制肿瘤生长作用（ P＜0．05）。结论：MageD1在口腔鳞癌组织及细胞系中表达降低,过表达MageD1能促进肿瘤细胞凋亡。     

Skp2蛋白在口腔鳞癌中的表达及其与c-myc、p27蛋白表达的关系

目的:研究Skp2、c-myc及p27蛋白在口腔鳞癌组织中的表达.方法:免疫组化检测Skp2、c-myc及p27蛋白在54例口腔鳞癌和15例正常口腔黏膜组织中的表达.结果:口腔鳞癌组织中Skp2、c-myc阳性表达率分别为35.19%(19/54)和38.89%(21/54),显著高于正常口腔黏膜组织6.67%(1/15)、6.67%(1/15)(P＜0.05);p27阳性表达率为55.56%(30/54)显著低于正常口腔黏膜组织86.67%(13/15)(P＜0.05);Skp2的表达与口腔鳞癌的临床分期、病理分级、淋巴结转移显著相关(P＜0.05),与年龄、性别、肿瘤部位等因素无关(P＞0.05);口腔鳞癌中Skp2与c-myc表达呈正相关(r=0.562,P＜0.01);与p27蛋白的表达呈负相关(r=-0.532,P＜0.01).结论:Skp2蛋白过表达在口腔鳞癌的发生及发展中起重要作用;并可能与c-myc蛋白有协同作用,Skp2蛋白过表达与靶蛋白p27蛋白降解有关,联合检测Skp2、c-myc及p27蛋白的表达有助于综合评估口腔鳞癌的生物学行为.     

Tca8113舌癌细胞转染骨形成蛋白-Ⅱ型突变受体前后细胞周期相关因子表达的定量分析

目的明确转染骨形成蛋白(BMP)-Ⅱ型突变受体对Tca8113舌癌细胞的作用,以进一步探讨BMPs对口腔上皮恶变的作用机制。方法检测转染BMP-Ⅱ型突变受体的Tca8113舌癌细胞(Tca8113ZR细胞)和Tca8113细胞的细胞周期相关因子Cyclind1、CDK-4、p27和p57的表达。结果转染了BMP-Ⅱ型突变受体后,肿瘤细胞的增殖能力显著减弱。结论BMPs信号在口腔舌癌细胞的恶性变化中起着重要的调控作用,BMPs信号的改变可能导致细胞恶性程度的改变。     

Fas基因转染对舌鳞癌Tca8113细胞生物学特性的影响

目的:研究脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,Fas)基因转染对舌鳞癌Tca8113细胞生物学特性的影响,探讨分子机制.方法:脂质体法将含Fas基因的真核表达重组质粒pBK-Fas导入Tca8113细胞,流式细胞术(FCM)检测Fas蛋白表达,MTT法检测细胞化疗敏感性,TUNEL法检测细胞凋亡敏感性,H33342释放法检测外周血单核细胞(PBMC)的癌细胞杀伤活性.结果:Fas转染细胞蛋白表达强度由35.01±5.26提高到55.40±7.31,二者差异有显著性(P＜0.01).相同浓度条件下,5-Fu对Fas转染细胞杀伤率提高.Fas转染细胞对抗Fas单克隆抗体诱导的细胞凋亡敏感性增强,凋亡指数由16.88%±1.46%提高到27.12%±2.35%.与未转染细胞相比,两项指标差异均有显著性(P＜0.01).PBMC对转染细胞的杀伤活性为51.22%±4.61%,对未转染细胞为23.92%±2.38%,差异也有显著性(P＜0.01).结论:Fas基因转染提高化疗药物和机体免疫细胞对舌鳞癌细胞的杀伤活性.