三苯氧胺对卵巢癌细胞增殖及凋亡影响的实验研究

本研究采用多种检测手段 ,观察三苯氧胺对卵巢癌细胞系ＨＯ - 8910体外增殖及凋亡的影响 ,以期寻找卵巢癌治疗的有效方法。1　材料与方法1 1　材料卵巢癌细胞株ＨＯ - 8910来源于人卵巢浆液性囊腺癌。三苯氧胺 (ＴＡＭ )为Ｓｉｇｍａ公司产品 ,细胞凋亡检测试剂盒 (ＴＵＮＥＬ)为德国宝灵曼公司产品 ,鼠抗人Ｂｃｌ- 2单克隆抗体、ＦＩＴＣ -标记羊抗鼠ＩｇＧ购自北京中山生物技术公司。1 2　方法1 2 1　细胞培养　ＨＯ - 8910细胞按常规方法培养在10 %小牛血清ＲＰＭＩ 1640完全培养基中 ,培养条件为 :3 7℃ ,5 %ＣＯ2 ,相对湿度 90 %。待…     

泰素帝抑制体外卵巢癌细胞增殖的研究

泰素帝 (ｄｏｃｅｔａｘｅｌ)是紫杉醇的半合成衍生物 ,作为一种重要的新型抗肿瘤药物 ,对顽固性、复发性卵巢癌具有较好疗效。为了从细胞水平探讨泰素帝对卵巢癌细胞的作用机理 ,本研究用体外细胞增殖抑制实验———四甲基偶氮唑蓝(ＭＴＴ)比色法观察泰素帝对人卵巢上皮性癌细胞株ＨＯ8910增殖的抑制作用 ;电子显微镜 (电镜 )观察药物作用后细胞形态变化 ,流式细胞仪 (ＦＣＭ)观察细胞的凋亡率及细胞周期的变化。现报道如下。一、材料与方法1 材料 :泰素帝购于法国罗纳普朗克乐安公司 ,人卵巢上皮性癌细胞株ＨＯ8910由中国科学院上海细胞生…     

遗传性卵巢癌组织中BRCA1基因杂合性丢失的研究

目的：探讨乳腺癌基因（ＢＲＣＡ１）在遗传性卵巢癌发生、发展中的作用,并分析ＢＲＣＡ１ 基因杂合性丢失（ＬＯＨ）。方法：应用多聚合酶链反应技术（ＰＣＲＴ）,对１０份遗传性卵巢癌组织中ＢＲＣＡ１ 基因内部的Ｄ１７Ｓ８５５ 微卫星位点进行ＬＯＨ检测。结果：２份发生杂合性丢失,ＬＯＨ发现率为２０％ 。结论：ＢＲＣＡ１在遗传性卵巢癌中具有肿瘤抑制基因的作用,同时不能排除其他肿瘤抑制基因的作用。     

自泌性转化生长因子－β对人卵巢癌细胞生长的影响

目的：我们以往观察到，人卵巢癌细胞系ＣＯＣ１和ＣＯＣ２在无血清培养条件下，可以分泌转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）类似物，本研究进一步观察该ＴＧＦ－β类似物对自身细胞生长的作用。方法：分别制备ＣＯＣ１和ＣＯＣ２ＲＰＭＩ１６４０无血清培养条件的培养液ＳＦＣＭ１和ＳＦＣＭ２；观察ＳＦＣＭ１和ＳＦＣＭ２对体外培养和接种ＢＡＬＢ／ｃ裸鼠ＣＯＣ１和ＣＯＣ２细胞生长的影响，并与ＴＧＦ－β标准品相比较。结果：ＳＦＣＭ１和ＳＦＣＭ２对体外培养的自身细胞ＣＯＣ１和ＣＯＣ２均表现为剂量依赖性促进作用，ＳＦＣＭ２明显促进ＣＯＣ２细胞在裸鼠体内生长。放射性受体分析结果显示，ＣＯＣ１和ＣＯＣ２细胞均表达ＴＧＦ－β受体（结合部位）；上述ＳＦＣＭ１和ＳＦＣＭ２的促进作用均可以被抗ＴＧＦ－β中和抗体部分阻断。结论：在ＣＯＣ１和ＣＯＣ２细胞存在ＴＧＦ－β自分泌环调节机制，该机制可能与ＣＯＣ１和ＣＯＣ２细胞自主性无止境生长有关。     

促卵泡激素结合片段对卵巢癌细胞株的作用

目的 研究促卵泡激素９ＦＳＨ）结合片段对卵巢癌细胞株的作用了解ＦＳＨ结合片段作为卵巢靶向治疗的导向材料的应用价值。方法 应用不同类型的卵巢癌细胞株ＳＫＯＶ３、ＯＶＣＡＲ、ＡＯ、３ＡＯ作为实验对象,分别加入ＦＳＨ、ＦＳＨ结合片段、ＦＳＨ＝ＦＳＨ结合片段。培养５天后用四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）法检测卵巢癌细胞的生长状况。结果 ＦＳＨ对卵巢癌细胞的生长有明显的促进作用,细胞平均增殖率为２８．０％;ＦＳＨ结     

单纯疱疹病毒胞腺嘧啶核苷激酶基因羟甲基无环岛苷系对人卵 …

观察单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激素酶基因羟甲基无环鸟苷系统对人卵巢癌的体内治疗作用。方法先将人卵巢癌细胞ＡＯ及携有ＨＳＶ１－ｔｋ基因的ＡＯ注射于裸鼠皮下,形成肿瘤后再移植于裸鼠网膜,并以病毒生物细胞的培养液对ＡＯ网膜移植瘤进行体风转染,然后以ＧＣＶ对体外ＡＯ／ＨＳＶ１－ｔｋｃ转移的肿瘤及经体内转染的ＡＯ肿瘤进行治疗。     

单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因/羟甲基无环鸟苷系统对人卵巢癌裸鼠网膜移植瘤的作用

目的观察单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因（ＨＳＶ１ｔｋ）／羟甲基无环鸟苷（ＧＣＶ）系统对人卵巢癌的体内治疗作用。方法先将人卵巢癌细胞ＡＯ及携有ＨＳＶ１ｔｋ基因的ＡＯ细胞（ＡＯ／ＨＳＶ１ｔｋｃ）注射于裸鼠皮下,形成肿瘤后再移植于裸鼠网膜,并以病毒生产细胞（ＶＰＣ／ＨＳＶ１ｔｋｃ）的培养液对ＡＯ网膜移植瘤进行体内转染,然后以ＧＣＶ对体外ＡＯ／ＨＳＶ１ｔｋｃ转移的肿瘤及经体内转染的ＡＯ肿瘤进行治疗。结果ＨＳＶ１ｔｋ／ＧＣＶ基因治疗系统对ＡＯ裸鼠网膜移植瘤的抑制率为４６．８％,而ＡＯ／ＨＳＶ１ｔｋｃ裸鼠网膜移植瘤经ＧＣＶ治疗后,多数仅残留显微镜下可见的癌灶。结论ＧＣＶ在腹腔内对携有ＨＳＶ１ｔｋ基因的肿瘤具有更为显著的杀伤效应;ＨＳＶ１ｔｋ／ＧＣＶ基因治疗系统在卵巢癌的治疗上可能具有良好的应用前景。     

卵巢上皮性癌细胞转移相关蛋白的比较蛋白组学分析

目的筛选卵巢上皮性癌（卵巢癌）转移相关蛋白,进一步探讨卵巢癌的转移机制。方法以卵巢癌细胞系HO-8910和高转移卯巢癌细胞系HO-8910PM为研究对象,采用比较蛋白组学的研究技术（双向电泳、质谱分析）,筛选两个细胞系中差异表达的蛋白质。结果高转移细胞系HO-8910PM与卵巢癌细胞系HO-8910比较,共出现了21个差异表达蛋白质点,其中16个蛋白质点表达上调,5个蛋白质点表达下调。21个差异表达蛋白质点有17个被鉴定,并分为7大类,即锌指蛋白、钙结合蛋白、DNA修复及合成蛋白、细胞调节蛋白、细胞代谢相关蛋白、细胞信号和传导蛋白及细胞表面抗原。结论卵巢癌细胞系HO-8910和高转移卵巢癌细胞系HO-8910PM的蛋白质表达存在明显差异。     

人巨细胞病毒感染与宫颈癌

病毒感染与宫颈癌发病的关系日益引起人们关注，流行病学研究发现人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染与宫颈癌的发生可能有关。其可能的致机理如下：（１）ＨＣＭＶ、ＨＰＶ（人乳头瘤病毒）协同致宫颈癌；（２）ＨＣＭＶ感染诱导肿瘤免疫逃逸致癌；（２）ＨＣＭＶ７９－ａａＯＲＦ癌基因促细胞肿瘤转化，（４）ＨＣＭＶ感染激活原癌基因。ＨＣＭＶ的致癌作用可能是多途径的，有针对性地研究特异性ＨＣＭＶ基因片段的致癌机理和作用环节将     

脱氧氟尿苷用于提高人卵巢癌细胞株对顺铂敏感性的研究

肿瘤细胞减灭术及术后化学药物治疗 (化疗 )是目前治疗卵巢癌的主要手段 ,以铂类为基础的联合化疗明显改善了晚期卵巢癌患者的治疗效果 ,但耐药性的产生严重影响其化疗效果。本研究采用四甲基偶氮唑蓝 (ＭＴＴ)比色法、免疫细胞化学链霉菌抗生物素 过氧化物酶连接 (ＳＰ)法和流式细胞术等方法 ,分析了脱氧氟尿苷 (ＦＵＤＲ)作用后卵巢癌细胞株ＣＡＯＶ3对顺铂敏感性的变化 ,并初步探讨其机理 ,为临床制定有效的联合化疗方案提供理论依据。一、材料与方法1 材料 :( 1)卵巢癌细胞株 :ＣＡＯＶ3为顺铂耐药株[1] ,购自北京大学人民医院妇科肿瘤…     

应用AnnexinV—FITC／PI—FCM定量分析对5—FU诱导卵巢癌 …

目的 应用ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣ／ＰＩ－ＦＣＭ定量分析５－氟尿嘧啶（５－ＦＵ）诱导卵巢癌细胞系ＯＶＣＡＲ发生的凋亡。方法 将５－ＦＵ以０、２０ｍｇ／Ｌ、１００ｍｇ／Ｌ、２００ｍｇ／Ｌ的浓度，分别处理ＯＶＣＡＲ细胞１２、２４、４８小时，然后用形态学观察、ＤＮＡ琼脂糖电泳和ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣ／ＰＩ流式细胞技术（ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ，ＦＣＭ）检测其诱发调亡的情况。结果 Ａｎｎｅｘｉ     

卵巢癌顺铂耐药细胞系的建立及耐药机制的研究

顺铂 (ｃｉｓｐｌａｔｉｎ ,ＤＤＰ)是一种有效的抗肿瘤药物 ,耐药的产生极大地影响卵巢癌患者对化疗的敏感程度 ,限制了其临床疗效[1] 。本研究采用中等浓度、间歇作用[2 ] 的方法 ,于 1998年 12月到 1999年 5月建立了人卵巢癌细胞株ＳＫＯＶ3对顺铂耐药细胞系ＳＫＯＶ3/ＤＤＰ ,对耐药指数、细胞周期分布、细胞内谷胱甘肽 (ＧＳＨ )含量、拓扑异构酶Ⅱ(ＴＯＰⅡ )含量及活性进行检测 ,从细胞水平、分子生物学水平对其基本特征及耐药机制进行研究。1　材料与方法1 1　研究资料　人卵巢癌细胞株ＳＫＯＶ3购自北京医科大学妇科教研室 ,细胞株…     

糖皮质激素对人卵巢癌细胞系增殖的抑制作用

糖皮质激素对人卵巢癌细胞系增殖的抑制作用卢建张金山牟瀚舟许沈华卵巢含有性激素和糖皮质激素受体。但人们对甾体激素在卵巢癌发生、发展中的作用了解尚不多。ＨＯ－８９１０为一人卵巢癌细胞系，有研究发现，性激素对ＨＯ－８９１０细胞的增殖过程无明显作用［１］。本...     

C-erbB2及C-myc基因反义脱氧寡核苷酸对卵巢癌COC1细胞的作用

近年来 ,有关卵巢肿瘤的基因治疗研究方兴未艾 ,特别是反义基因治疗取得了一些明显的效果[1] 。但随着分子生物学和分子遗传学技术的深入发展 ,人们已逐渐认识到肿瘤的发生是一个涉及多基因、多步骤的复杂过程 ,单一癌基因的反义阻断不能完全抑制或逆转其恶性表型。本研究通过体外实验探讨联合反义基因治疗对ＣＯＣ1细胞Ｃ ｅｒｂＢ2 、Ｃ ｍｙｃ基因表达及细胞增殖的影响。一、材料与方法1 材料来源 :卵巢癌ＣＯＣ1细胞系由武汉大学中南医院肿瘤研究所提供。引物及Ｃ ｅｒｂＢ2 、Ｃ ｍｙｃ反义脱氧寡核苷酸(ＡＳ ＯＤＮｓ)的合成、修饰[2 …     

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因转染联合药物对卵巢癌细胞的杀伤效应

目的：探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶（ＨＳＶ－ＴＫ）基因转染联合抗病毒药物羟基无环鸟苷（ＧＣＶ）对人卵巢癌细胞系的杀伤效应。方法：采用基因工程技术，将ＨＳＶ－ＴＫ基因的ＤＮＡ序列插入逆转录病毒载体ｐＬＮＳＸ的ＨｉｎｄⅢ位点，构建重组体ｐＬＮＳ／ＨＳＶ－ＴＫ，并采用磷酸钙介导贴壁细胞基因转染法将重组体导入ＰＡ３１７包装细胞，建立重组逆转录病毒载体分泌细胞株ＰＡ３１７／ＴＫ。并采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测ＨＳＶ－ＴＫ／ＧＣＶ系统对人类卵巢癌ＡＯ细胞系的生长抑制率。结果：重组逆转录病毒载体ｐＬＮＳ／ＨＳＶ－ＴＫ能有效地将ＨＳＶ－ＴＫ基因导入ＡＯ细胞系内并使其获得对ＧＣＶ的敏感性。当培养液内ＧＣＶ达４０μｍｏｌ时，其对转ＨＳＶ－ＴＫ基因后ＡＯ细胞的生长抑制率为９８．０％。结论：ＡＯ细胞转染ＨＳＶ－ＴＫ基因后，能有效地被ＧＣＶ杀灭。     

逆转录病毒介导的p16基因对人卵巢癌细胞系生长抑制作用的研究

目的研究逆转录病毒介导的ｐ１６基因对人卵巢癌细胞系ＣＡＯＶ３生长与致瘤性的抑制作用。方法应用脂质体介导法,将外源性野生型ｐ１６基因转染不表达ｐ１６的人卵巢癌细胞系ＣＡＯＶ３,对转染后细胞ＤＮＡ、ＲＮＡ和蛋白进行分析并观察其生物学行为变化。结果外源性野生型ｐ１６基因已整合于细胞并获稳定表达,表达有外源ｐ１６基因的细胞生长速度、集落形成率及裸鼠致瘤性均有部分抑制。细胞周期分析可见Ｇ１期增加,Ｓ期下降。电镜下超微结构出现生长抑制特征。结论ｐ１６基因可明显抑制癌细胞生长,在卵巢癌发生、发展的过程中起重要作用。     

IL-2基因转移对卵巢癌细胞系SKOV3粘附性的影响

目的：研究ＩＬ－２基因转移对卵巢癌ＳＫＯＶ３细胞系粘附性的影响。方法：细胞对塑料基质、细胞基底膜成分的粘附实验,流式细胞术测定ＣＤ４４Ｈ的表达。结果：ＥＤＴＡ介导的细胞分离实验表明,ＳＫＯＶ３／ＩＬ－２细胞对塑料基质的粘附能力明显下降（Ｐ＜０．０１）;对基质及基底膜成分的粘附实验表明,ＳＫＯＶ３／ＩＬ－２细胞对Ⅳ型胶原和ｍａｔｒｉｇｅｌ的粘附能力下降,但对ＬＮ、ＦＮ的粘附能力无明显改变;粘附分子ＣＤ４４Ｈ的表达：ＳＫＯＶ３、ＳＫＯＶ３／Ｎｅｏ、ＳＫＯＶ３／ＩＬ－２组细胞粘附分子ＣＤ４４Ｈ阳性细胞百分率分别为７６．２％、６６．７％和３７．８％,ＳＫＯＶ３／ＩＬ－２组明显降低（Ｐ＜０．００１）。结论：ＩＬ－２基因修饰可使卵巢癌细胞系ＳＫＯＶ３粘附能力下降。     

卵巢癌抗独特型抗体诱导特异性迟发过敏反应的实验研究

本研究应用卵巢癌抗原内影像型单克隆抗独特型抗体６Ｂ１１和１Ｈ１２代替肿瘤抗原，诱导同系小鼠产生卵巢癌特异性细胞免疫反应－迟发性过敏反应（ＤＴＨ），从而证明了６Ｂ１１和１Ｈ１２具有抗原模拟作用。经过６Ｂ１１或１Ｈ１２免疫的小鼠，用卵巢癌细胞系ＳＫＯＶ３进行脚掌注射攻击。而后，测量脚掌水肿厚度作为ＤＴＨ反应强度。６Ｂ１１诱导的ＤＴＨ平均水肿厚度为０．９３ｍｍ，卵巢癌组织抗原ＯＣ１６６－９诱导的阳性对照     

不同浓度肿瘤坏死因子及化疗药物联合对卵巢癌细胞的毒性作用

目的测试不同浓度的重组人肿瘤坏死因子（ｒＨＴＮＦ）及五种化疗药物联合后,对人卵巢癌细胞的毒性作用。方法应用噻唑蓝法（ＭＴＴ）观察药物对体外培养的人卵巢癌细胞系ＳＫＯＶ３的毒性。结果ｒＨＴＮＦ低浓度与５－Ｆｕ、ＣＰ的各浓度及ＣＤＤＰ中、低浓度联合呈相加作用,与ＣＤＤＰ高浓度联合呈协同作用,与ＣＴＸ、ＴＳＰＡ各浓度联合呈拮抗作用。ｒＨＴＮＦ高浓度与５－Ｆｕ、ＣＤＤＰ、ＣＰ各浓度联合呈协同作用,与ＴＳＰＡ各浓度联合呈相加作用,与ＣＴＸ各浓度联合呈拮抗作用。结论ＴＮＦ与化疗药物联合后能否出现协同作用,不仅与药物性质有关,还与药物浓度有关,必须在一定浓度下,才有协同作用     

脂肪细胞因子抵抗素对卵巢癌细胞增殖影响及其机制研究

目的探讨脂肪细胞因子抵抗素(resistin)对卵巢癌细胞系HO-8910细胞增殖的影响及初步表达机制。方法 2011年5-10月于中国医科大学中心实验室分别采用噻唑蓝(MTT)比色法,检测不同浓度的抵抗素对卵巢癌HO-8910细胞增殖能力的影响;利用si RNA敲除脂肪细胞中的抵抗素,转移条件培养基培养卵巢癌细胞HO-8910,通过MTT法检测细胞增殖情况;利用免疫印迹法(western blot)检测抵抗素作用于HO-8910细胞后m TOR及其下游靶蛋白S6总蛋白的磷酸化蛋白量的变化。结果抵抗素可以呈时间、剂量依赖性地促进HO-8910细胞的增殖,30~100μg/L抵抗素作用24h即可以显著促进HO-8910细胞的增殖,48h的作用更为明显(P0.05);脂肪细胞条件培养基可显著促进HO-8910细胞的增殖,如果在脂肪细胞培养过程中给予特异性敲低抵抗素,则作用反之;抵抗素作用卵巢癌HO-8910细胞24h后m TOR及其下游靶蛋白S6的磷酸化水平显著增加。结论抵抗素对人卵巢癌细胞系HO-8910细胞的增殖能力有明显的促进作用,该作用机制可能与m TOR信号通路有关,可为诊治卵巢癌提供新的靶点。