枸杞糖缀合物及糖链的化学结构与免疫活性

为研究枸杞多糖的化学结构 ,免疫活性并探讨其构效关系 ,应用色谱法 ,凝胶过滤法和十二烷基磺酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)技术从枸杞粗多糖 (LBP)中分离纯化了 5个组分 (LBP1 LBP5) ,并进一步从LBP1,LBP3,LBP4中纯化得到组分均一的糖缀合物LbGp1,LbGp3和LbGp4及其糖链LbGp1 OL ,LbGp3 OL和LbGp4 OL ,用甲基化 ,部分酸水解和核磁共振 (NMR)技术基本阐明了其化学性质 ,糖组成 ,氨基酸组成及主要结构特征 ,并用小鼠脾细胞增殖反应研究免疫活性表明 ,6个样品均具有直接增强小鼠脾细胞增殖反应的作用 .结果提示 ,枸杞子中具有免疫活性的有效成分是一类结构复杂的糖缀合物 ,其糖链部分可能是其发挥免疫活性的主要活性结构 .     

枸杞粗多糖的免疫活性

为进一步分离纯化枸杞多糖并进行深入的免疫药理学研究 ,应用淋巴细胞增殖 ,溶血空斑 ,杀伤性T淋巴细胞 (CTL)杀伤活性测定 ,酶联免疫测定法和噻唑蓝等方法研究了枸杞粗多糖 (LBP)的免疫活性特点 .结果发现 :口服给予LBP对LACA小鼠脾细胞增殖反应和抗体生成反应均具有明显的促进作用 ,但对CTL细胞特异性杀伤P815瘤细胞的杀伤活性无明显影响 ;明显增加快速老化模型小鼠(SAMP8)脾抗体生成细胞的数目 ,升高脾细胞产生抗体IgG水平 .结果提示 ,LBP是枸杞子中主要免疫活性成分 ,促进或改善体液免疫功能可能是其对免疫系统的主要作用之一 .     

不同产地宁夏枸杞果实品质比较研究

目的检测不同产地枸杞子药材的主要品质指标,比较各产地药材的异同。方法在对不同产地的枸杞子进行外观品质指标测量的基础上,采用分光光度法进行枸杞多糖和甜菜碱含量测定,应用滴定法进行枸杞总糖含量测定。结果青海产枸杞果实百粒质量最高,河北最低,总体呈现青海>甘肃>新疆>宁夏>内蒙古>河北的变化趋势。枸杞果实主要药用成分多糖以宁夏、甘肃和新疆栽培的枸杞果实含量相对最高,且三者间差异不显著,其次为内蒙古产枸杞,河北和青海产枸杞果实多糖含量最低;总糖含量以宁夏和青海最高,其次为内蒙古、甘肃和新疆,且三者差异不显著,河北产枸杞总糖含量最低。甜菜碱含量以河北产枸杞最高,其次为青海、甘肃、内蒙古和新疆,而以宁夏产枸杞最低。结论不同产地枸杞质量存在差异,且不同产地枸杞果实百粒质量大小与主要有效成分含量间无准确的对应关系,提示现行枸杞商品等级划分标准尚需进一步完善。     

枸杞糖缀合物和糖链对小鼠巨噬细胞功能的影响

目的确定巨噬细胞是枸杞糖缀合物和糖链免疫作用的靶细胞之一。方法应用中性红吞噬实验和鸡红细胞吞噬实验测定了枸杞糖缀合物LbGp4和糖链LbGp4-OL对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响;用硝酸根还原法、酶联免疫吸附实验(ELISA)和生物活性测定法测定了巨噬细胞产生一氧化氮(NO)、IL-1β和TNF-α含量和生物活性的变化。结果LbGp4和LbGp4-OL在(10~100)mg.L-1剂量范围内均可剂量依赖性地促进静息巨噬细胞吞噬中性红的能力,增加活化的巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数;增加巨噬细胞培养上清NO、IL-1β和TNF-α的浓度,并增强对L929细胞的杀伤活性,促进胸腺细胞的增殖反应。结论LbGp4和LbGp4-OL对静息和活化的腹腔巨噬细胞的吞噬功能具有明显的促进作用,对巨噬细胞产生NO、分泌IL-1β和TNF-α的含量和生物活性亦具有明显的促进作用,表明巨噬细胞是LbGp4和LbGp4-OL免疫作用的靶细胞之一。     

不同产地枸杞药材中多糖的含量测定

目的建立枸杞多糖的含量测定方法,并测定不同产地枸杞药材中多糖的含量。方法采用水提醇沉法制备枸杞多糖,将枸杞多糖脱蛋白后制得精制枸杞多糖,以精制枸杞多糖测得枸杞多糖对葡萄糖的换算因子后,用苯酚-硫酸法测定不同产地枸杞药材中多糖的含量。结果平均回收率为98.8%,测得不同产地枸杞药材中多糖含量分别为4.03%、7.55%、2.92%、4.99%、3.54%和4.67%。结论该法操作简单,结果较接近真实值;不同产地枸杞中多糖含量的差异较大,该结果为枸杞多糖质量控制和药效评价的进一步研究奠定了基础。     

RP-HPLC法测定不同产地枸杞中绿原酸含量

目的建立反相高效液相色谱法测定宁夏枸杞中绿原酸含量的方法。方法色谱分析条件Shim-pack VP-ODS色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）,以乙腈∶水∶冰乙酸（5∶94.5∶0.5）为流动相A,乙腈∶水∶冰乙酸（70∶29.5∶0.5）为流动相B,采用梯度洗脱,流速0.5ml/min,检测波长342nm,柱温30℃。结果绿原酸线性范围为10～100μg/ml（相关系数为r=0.9995）,平均回收率为98.6%（n=5）;不同产地、不同年份宁夏枸杞样品中绿原酸含量存在差异,随保存时间的延长,绿原酸含量减少,但减少程度不明显。结论本方法重现性好,适用于测定枸杞中绿原酸的含量。     

吡虫啉在枸杞中的残留动态研究

目的:研究20%吡虫啉可溶性液剂在枸杞中的消解动态。方法:采用高效液相色谱法,样品经甲醇提取,二氯甲烷萃取,层析柱净化,采用十八烷基键合硅胶柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为0.1%磷酸-乙腈,梯度洗脱;检测波长270nm。结果:样品的添加回收率为87.6%～96.0%,RSD 为1.5%～3.1%。吡虫啉在枸杞中的半衰期为1.63 d,施药10 d 后残留量降至0.0126 mg·kg~(-1),最终残留量在0.002 mg·kg~(-1)以下。结论:在正常喷药浓度的加倍剂量2000倍条件下,安全采收间隔期为5 d 以上。     

枸杞中重金属及有害元素形态分布及其安全性评价

目的对枸杞Lycium barbarum L.中重金属(Cu、Cd、Pb和Hg)及有害元素As的形态进行分析,了解枸杞样品中重金属及有害元素的形态分布,并对其安全性进行评价。方法采用Tessier连续提取法提取枸杞样品中不同形态的重金属及有害元素,利用原子吸收分光光度法对所测重金属及有害元素的含量进行测定;参照2015年版《中国药典》枸杞项下的重金属限量标准对其进行安全性评价。结果所测枸杞样品不同形态的4种重金属元素Cu、Cd、Pb和Hg的总量分别为44.351 7,0,2.614 1和0.056 9mg·kg-1,有害元素As的总量为0.359 5mg·kg-1;其中Cu元素以残渣态为主,占总量的24%;Pb元素几乎全以铁-锰氧化物结合态存在;Hg元素以水溶态为主,占其总量的18%;As元素残渣态含量最高,占其总量的29%。所测4种重金属及有害元素的单一形态含量均符合2015年版《中国药典》的规定。结论研究结果对枸杞的临床应用及其重金属和有害元素的控制有一定的指导意义。     

薄层色谱法鉴别枸杞子的实验研究

归纳枸杞子的薄层色谱展开条件,经系列实验确立最佳展开系统为:甲苯-乙酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.2)。     

Two new sesquiterpenoid glycosides from the leaves of Lycium barbarum

Two new sesquiterpenoid glycosides, lyciumionosides A–B (1–2), together with four known compounds (3–6), were isolated from the leaves of Lycium barbarum. Their structures were mainly established on the basis of MS, 1D and 2D NMR spectroscopic techniques. The antiproliferative activities of compounds 1–5 were evaluated. Compound 1 showed highest inhibitory activity against A549 cells with IC₅₀ value of 32.6 ± 2.6 μM, compound 3 showed highest inhibitory activity against PC-3 cells with IC₅₀ value of 36.0 ± 2.9 μM, and compound 5 exhibited highest inhibitory activity against HeLa cells with IC₅₀ value of 32.3 ± 4.2 μM.     

枸杞糖缀合物LbGp2的理化性质和活性研究

目的　分离纯化枸杞糖缀合物(LbGp2 )并研究其理化性质及活性。方法　采用柱色谱法得到LbGp2 ,经HPLC ,CE ,GC ,SEC及糖含量分析、元素分析和氨基酸分析等研究其理化性质,并用半体内法、形态学计数法和比色法等研究了Lbp2对腹腔巨噬细胞吞噬功能、淋巴细胞的转化以及对小鼠血清半数溶血等的影响。结果　LbGp2是均一组份,其分子量为6.8×10⁴,糖含量为90.7% ,糖组成为Ara Gal 3∶4(摩尔比) ,并含有18种天然氨基酸。免疫活性试验表明Lbp2具有显著的免疫增强作用。同时还具有很好的抗氧化作用。结论　LbGp2是均一的糖缀合物,有免疫活性和抗氧化活性     

枸杞多酚提取物中总多酚的测定

目的建立紫外分光光度法测定枸杞多酚提取物中的总多酚。方法采用紫外分光光度法测定枸杞多酚提取物中总多酚,用水稀释样品,加入显色剂Filin-Ciocalteu试剂,在760 nm处测定吸光度,用同样方法测定并绘制标准曲线。结果紫外分光光度法测定枸杞多酚提取物中总多酚的量分别为24.03%、26.38%、25.45%、28.27%、29.08%,线性范围1～8μg/mL,R2=0.999 5。平均回收率为103.5%,RSD<5%。结论该方法操作简单,准确可靠,适于枸杞多酚提取物中总多酚的测定。     

枸杞多糖免疫调节作用机制研究进展

枸杞子是传统的名贵补益中药,具有"滋阴补血、益精明目"之功效.枸杞多糖是其中的主要生物活性成分,具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老等多种生物学作用.近年来,随着植物化学分离纯化技术的不断改进,枸杞多糖得到了进一步的分离和纯化,因此其免疫作用的分子机制如其作用的靶细胞、信号转导途径等研究取得了较明显进展.     

宁夏枸杞总黄酮对恶性胶质瘤细胞株U87-MG表型的影响

目的：研究宁夏枸杞总黄酮对人恶性胶质瘤U87-MG细胞增殖、迁移以及侵袭的影响。方法：采用贴壁法培养人恶性胶质瘤细胞。实验分为空白对照组（不加任何处理）和黄酮处理组（20,40,80,160 mg·L^-1）。用CCK-8法测定不同浓度宁夏枸杞总黄酮作用U87-MG细胞不同时间后,细胞的增殖变化情况;RT-PCR和real-time PCR法检测肿瘤细胞内增殖细胞核抗原（PCNA）mRNA水平的表达;免疫细胞化学（immunocytochemistry,ICC）检测PCNA蛋白表达;Transwell和细胞划痕实验检测细胞的迁移能力;Transwell法检测细胞侵袭能力。结果：与对照组相比,处理组的U87-MG细胞增殖被抑制,且呈一定的时间-剂量依赖关系;处理组的PCNA mRNA和蛋白水平含量均降低,迁移以及侵袭能力减弱;且上述指标的变化随枸杞总黄酮浓度的增加而趋于明显。结论：宁夏枸杞总黄酮能够抑制恶性胶质瘤细胞的增殖、迁移以及侵袭。     

枸杞总黄酮提取物对2型糖尿病大鼠血糖、血脂的影响

目的：研究枸杞总黄酮提取物（TFLB）对链脲佐菌素（STZ）诱导建立的糖尿病（DM）大鼠损伤模型的保护作用及其可能的分子机制。方法：采用STZ诱导建立DM大鼠损伤模型,实验分为正常对照组、DM模型组和TFLB干预组（60,90,120 mg·mL^-1）。正常对照组及DM模型组大鼠每天每只予以等量生理盐水灌胃,干预组大鼠以不同浓度TFLB灌胃4周。灌胃满4周后,以尾静脉采血测空腹血糖,胸腔采血测定血脂,摘取胰腺组织做HE染色和免疫组化。结果：与正常对照组相比较,DM模型组大鼠血糖、血脂显著升高（P<0.05,P<0.01）;胰岛形态皱缩,体积变小,状态不规则,胰岛数量及岛内分泌细胞明显减少,且细胞稀疏不均排列紊乱。与DM模型组相比,TFLB的干预可以延缓、延迟血糖升高的进程,对血脂有明显降低趋势,具有显著性差异（P<0.05,P<0.01）,随TFLB剂量的升高,大鼠胰岛数量及岛内分泌细胞数有所增多,细胞排列相对均匀规整,胰岛结构、形态基本趋于正常,细胞空泡变性相对较少。结论：TFLB可以延缓血糖升高速度,调节血脂代谢的紊乱,进而推迟DM病程的进展,能明显保护DM大鼠的胰岛功能,改善大鼠的胰岛素抵抗。     

Warfarin overdose due to the possible effects of Lycium barbarum L.

We reported an 80-year-old Chinese woman on chronic stable dose of warfarin who experienced two episodes of an elevated international normalized ratio (INR) after drinking herbal tea containing Lycium barbarum L. Our case illustrated the potential herbal-drug interaction between warfarin and L. barbarum L. in keeping with a previous case report. Enquiry about herbal intake may be a crucial part in the management of anticoagulation in this locality.     

枸杞提取液对球形红细菌生长的影响

目的考察枸杞提取液对球形红细菌生长的影响。方法在不同质量浓度的常规培养基中添加不同质量浓度的枸杞提取液,培养球形红细菌,比较球形红细菌的活菌数、生长曲线和脱氢酶活性,考察枸杞提取液对球形红细菌生长的影响。结果在培养基中添加枸杞提取液可缩短球形红细菌生长延迟期,使其提前进入指数期和稳定期;当质量浓度为12.5 g/L时,球形红细菌活菌数增加到之前的1.5倍,使球形红细菌脱氢酶活性提高到之前的3.3倍。结论培养基中添加一定量的枸杞提取液可以促进球形红细菌的生长,使球形红细菌生长周期缩短、活力提高。     

枸杞多糖对小鼠海马神经元细胞系缺糖缺氧损伤保护作用及机制研究

目的探讨枸杞多糖(LBP)对小鼠海马神经元细胞系HT22细胞缺糖缺氧损伤保护作用的机制。方法采用含1 mmol/L连二亚硫酸钠的无糖DMEM培养基建立HT22细胞缺糖缺氧损伤模型,设对照组、模型组和LBP高、中、低剂量(100、50、25 mg/L)组,以CCK8法检测细胞活性,流式细胞术检测检测细胞凋亡情况;Western blotting检测Bcl-2、Bax蛋白表达情况;利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测TNF-α、NF-κB、I-κBα、Caspase-9基因转录活性。结果与对照组比较,模型组HT22细胞存活率显著降低、凋亡率显著增加(P<0.05);TNF-α、NF-κB、Caspase-9基因转录活性显著上调,I-κBα基因转录活性显著下调(P<0.05);Bax蛋白表达水平显著升高,Bcl-2的蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与模型组比较,LBP各剂量组细胞存活率显著上升、凋亡率显著下降(P<0.05);TNF-α、NF-κB、Caspase-9基因转录活性显著下调,I-κBα基因转录活性显著上调(P<0.05);Bax蛋白表达水平显著降低,Bcl-2的蛋白表达水平显著增高(P<0.05)。结论 LBP可能是通过下调TNF-α、NF-κB、Caspase-9基因转录活性以及Bax蛋白表达,增强I-κBα基因转录活性及Bcl-2的蛋白表达,抑制缺糖缺氧损伤诱导神经细胞凋亡的发生。     

枸杞多糖对Caco-2细胞P-糖蛋白作用的影响

目的 研究枸杞多糖(LBP)对Caco-2细胞P-糖蛋白(P-gp)功能和表达的影响.方法 采用MTT法确定药物实验剂量;采用Rh-123摄取法评价P-gp的功能;利用流式细胞术与免疫荧光抗体检测P-gp的表达;采用经典的Caco-2细胞单层模型,研究P-gp外向转运这一动态过程受枸杞多糖作用后的变化.结果 由MTT法得到枸杞多糖＜100μg·mL-1时,细胞的存活率＞90％;枸杞多糖使细胞内Rh-123累积增加,对功能表现为抑制作用;高浓度组(100μg·mL-1)枸杞多糖对P-gp表达有诱导作用;高浓度组(100μg ·mL-1)枸杞多糖使Caco-2细胞单层模型外排率(ER)降低,对P-gp有抑制作用.结论 枸杞多糖对P-gp功能表现为抑制作用,而对P-gp表达表现为诱导作用.     

枸杞子糖缀合物对荷瘤小鼠的抑瘤作用

目的:研究枸杞子糖缀合物对S180荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用.方法:选择Balb/c小鼠50只,体重(20～25)g,随机分为5组.利用接种肉瘤S180诱导的小鼠肿瘤模型,检测对S180肉瘤的抑制率.结果:枸杞子糖缀合物可抑制小鼠S180肉瘤的生长.结论:枸杞子糖缀合物具有肿瘤抑制活性.