己酮可可碱对慢性心力衰竭患者细胞因子的免疫调节及细胞凋亡抑制因子的影响

目的:探讨己酮可可碱(Pentoxifylline,PTX)对慢性心力衰竭(CHF)患者外周血辅助性T淋巴细胞(Th)免疫调节及血浆细胞凋亡抑制因子（Fas/Apo-1）水平的影响。方法: 采用流式细胞术，检测40例心力衰竭(HF)患者和10例正常对照者外周血CD4+Th1和Th2细胞及其分泌的细胞因子干扰素-γ( IFN-γ)和白介素-10(IL-10)的变化。采用ELISA法测定HF患者治疗前后外周血肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-10及Fas/Apo-1水平的变化。采用超声心动图检测HF患者射血分数(EF)的变化。结果: HF患者治疗1个月后，PTX治疗组与常规治疗组相比较，分泌IFN-γ的Th1型细胞所占百分比显著降低(P<0.01)；而分泌IL-10的Th2型细胞所占百分比明显升高(P<0.01)；外周血TNF-α及Fas/Apo-1的水平显著降低(分别为P<0.05和P<0.01)；EF显著提高(P<0.01)。结论: HF患者在常规治疗的基础上应用PTX治疗后，EF得到改善，可能与其对HF患者Th1/Th2细胞比例失衡产生的免疫调节作用，以及通过免疫调节影响炎性细胞因子和凋亡抑制因子的激活与分泌有关。     

外周血中Th17﹑Th1﹑IL-23及IFN-γ在老年系统性红斑狼疮患者中的表达及临床意义

目的分析老年系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中辅助性T细胞(Th)17、Th1、白细胞介素(IL)-23及干扰素(IFN)-γ的表达及临床意义。方法采用流式细胞术和酶联免疫吸附(ELISA)法分别检测该院2010年2月至2013年3月住院治疗的36例老年SLE患者与同时期的23例老年健康体检者的Th17细胞、Th1细胞百分比,IL-23及IFN-γ浓度,并对其检测结果进行对比分析,另外对SLE患者的相关检测指标与SLE活动指数(SLEDAI)评分进行相关性分析。结果 SLE组、活动组、非活动组的Th17细胞占所有CD4+T细胞的百分比、IL-23及IFN-γ浓度均高于健康组(P<0.05),Th1细胞占所有CD4+T细胞的百分比与健康组无统计学差异(P>0.05)。其中SLE活动组的Th17细胞占所有CD4+T细胞的百分比和IL-23浓度均高于非活动组(P<0.05)。SLE患者外周血中Th17细胞占所有CD4+T细胞的百分比、IL-23浓度均与SLEDAI评分呈正相关(r=0.78、0.56,P<0.05),而Th1细胞占所有CD4+T细胞的百分比、IFN-γ浓度均与SLEDAI评分无相关性(P>0.05)。结论老年SLE患者外周血中Th17、IL-23及IFN-γ的表达增高,Th1细胞表达无差异,Th17细胞与IL-23的表达与病情有关。     

男性免疫性不育患者外周血T细胞亚型分布

目的分析男性免疫性不育患者外周血T细胞及Th细胞亚型分布情况,揭示男性免疫性不育者的机体免疫状态。方法采用流式细胞术检测男性免疫性不育患者外周血T细胞亚型分布,采用实时荧光定量PCR检测Th1和Th2的效应因子γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)和白细胞介素-4(Interleukin-4,IL-4)在基因转录水平的表达。结果流式细胞术检测结果显示,与正常对照相比,免疫性不育患者CD3+T细胞占淋巴细胞百分比明显升高,CD8+T细胞占淋巴细胞百分比明显升高,CD4+T细胞占淋巴细胞百分比明显降低,免疫性不育者CD4/CD8比值下降并倒置,差异均具有统计学意义(P0.05)。RT-PCR检测结果显示,与正常对照相比,IFN-γ mRNA在免疫性不育组的表达量显著上调,IL-4 mRNA的表达量显著下调,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论男性免疫性不育患者免疫系统出现T淋巴细胞功能失调及Th细胞分化向Th1细胞方向极化偏移。     

哮喘患者树突状细胞分泌细胞因子的变化及其对Th1/Th2细胞因子的影响

目的观察过敏性哮喘(哮喘)患者外周血单个核细胞(PBMC)来源树突状细胞(DC)分泌IL-12和IL-10的情况,及其对Th1/Th2型细胞因子平衡的影响.方法分别取9例哮喘患者和14例正常人外周血PBMC来源的DC经LPS刺激使其发育为成熟DC(mDC).另取脐血初始T淋巴细胞(Th0).Th0和两组mDC共培养,通过ELISA法检测mDC分泌的IL-12和IL-10及辅助性T淋巴细胞(Th)分泌的IFN-γ和IL-4的含量.结果①哮喘组DC产生IL-12及其亚单位IL-12p40和IL-10较对照组显著降低(P＜0.01、P＜0.05).②哮喘组Th释放Th1型细胞因子IFN-γ较对照组减少(P＜0.05);Th2型细胞因子IL-4较对照组显著增多(P＜0.01).③两组IL-12和IFN-γ均呈正相关(r＝0.7581、P＜0.01,r＝0.6028、P＜0.05),IL-12和IL-4均呈负相关(r＝-0.7498、P＜0.01,r＝-0.7481、P＜0.01).④哮喘组IL-10与IFN-γ呈正相关(r＝0.6437,P＜0.05).⑤两组IL-12和IL-10均呈正相关(P均＜0.01).结论哮喘患者DC分泌IL-12和IL-10减少,导致Th0向Th2优势分化,细胞因子平衡向Th2型倾斜,合成IL-4增多和IFN-γ减少,后者是哮喘发生的重要机制之一.     

老年急性冠状动脉综合征患者辅助性T淋巴细胞的研究

目的 通过分析老年急性冠状动脉综合征(ACS)患者外周血中辅助性T淋巴细胞亚群1(Th1)和亚群2(Th2)频率的变化,探讨辅助性T淋巴细胞在ACS进程中的作用.方法 通过细胞内细胞染色对32例ACS患者(ACS组)、35例稳定性心绞痛(SAP)患者(SAP组)及20例健康体检者(对照组)的外周血单个核细胞进行Th1、Th2分型,ELISA法检测血浆Th1、Th2相关细胞因子水平:干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素4(IL-4)和白细胞介素10(IL-10).结果 ACS组患者Th1细胞较SAP组及对照组明显升高(P＜0.05);3组间Th2细胞变化无统计学差异(P＞0.05).ACS组患者Th1相关细胞因子IFN-γ和IL-2较SAP组和对照组明显升高(P＜0.05);ACS组患者Th2相关细胞因子IL-10较SAP组和对照组明显降低(P＜0.05),IL-4低于检测水平;IFN-γ和IL-2水平与Th1的升高密切相关(P＜0.05).结论 Th1和Th2的失衡与ACS的发生密切相关,其相关细胞因子IFN-γ和IL-2水平的升高,使系统炎性反应进一步恶化.     

CD4~+T细胞亚群Th1/Th2和Th17/Treg在卵巢癌中的分布及意义

目的探讨卵巢癌患者外周血中CD4~+T细胞亚群Th1/Th2和Th17/Treg及相关细胞因子的分泌及其意义。方法30例卵巢癌患者为研究组,20例健康体检者为对照组,采用流式细胞术、酶联免疫吸附法(ELISA)、RT-PCR检测两组外周血中Th1/Th2和Th17/Treg CD4~+T细胞亚群相关细胞因子、转录因子表达情况并对比。结果与对照组比较,研究组外周血中Th1细胞亚群降低,其分泌的相关细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-2及T盒子21转录因子(T-bet)表达均显著降低(P0. 05);Th2,Th17,Treg细胞亚群比例均升高,其各自分泌的相关细胞因子IL-4、IL-5、IL-13,IL-17α、IL-17f、IL-21、IL-22,IL-10、IL-35、转化生长因子(TGF)-β及转录因子GATA3,维甲酸孤儿核受体家族(ROR)γt,叉头样转录因子(FOXP) 3表达均显著提高(均P0. 05)。结论卵巢癌患者外周血中Th1细胞亚群受到了抑制,Th2、Th17、Treg细胞亚群都得到促进,提示这些CD4~+T细胞亚群可以作为判断卵巢癌疾病进展的重要指标。     

Th17细胞与自身免疫性疾病

CD4 T细胞按照分化和功能特征分为辅助性T细胞1(Th1)、Th2和调节性T细胞(Treg)。Th1细胞主要分泌γ干扰素(IFN-γ)、IL-2和肿瘤坏死因子α(TNF-α)等细胞因子,介导细胞免疫,在抗细胞内感染的细菌、病毒和寄生虫等方面发挥重要作用;Th2型细胞通过分泌IL-4、IL-5、IL-10和IL-13等     

HBsAg负载的慢性乙肝患者DCs诱导特异性Th1细胞分化的作用

目的:研究HBsAg负载的慢性乙肝患者外周血树突状细胞(dendritic cells,DCs)对自身Th1细胞分化的诱导作用.方法:Fico11密度梯度离心和贴壁法分离慢性乙肝患者外周血单核细胞,以含ThIL-4 rhGMCSF的完全培养基诱导DCs.流式细胞术检测各组DC表面CD80,CD86,CD40和HLA-DR分子的表达,CCK-8法检测各组DCs刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力,ELISA法检测各组DCs培养液上清中IL-12的水平.免疫磁珠分选慢性乙肝患者外周血CD4 T细胞,分别与患者自身的DCs共培养,细胞内细胞因子染色,流式细胞仪检测共培养后CD4 T细胞内特征性细胞因子IFN-γ和IL-4,ELISA法检测共培养上清中IFN-γ/IL-4的水平.结果:与对照组相比,HBsAg、IFN-γ和HBsAg IFN-γ组DCs表面表达CD80,CD86,CD40和HLA-DR分子水平较高;刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力较强;DCs分泌的上清液中、IL-12水平也较高.与对照组相比,HBsAg、IFN-γ和HBsAg IFN-γ组DCs与自身Th细胞共培养后,Th1细胞占CD4 T细胞的百分比升高(10.76%±3.98%,11.43%±4.32%,15.28%±4.73% vs 7.84%±3.10%,P＜0.01),Th2细胞占CD4 T细胞的百分比降低(1.43%±0.96%.1.68%±0.16%,0.92%±0.21% vs 2.61%±1.27%,P＜0.01),共培养上清中IFN-γ的水平增高(578±47 mg/L,496±92 mg/L,784±97 mg/L vs 342±34 meg/L,P＜0.05),IL-4的水平降低(187±52 mg/L,169±38 mg/L,89±37 mg/L vs 226±48 mg/L,P＜0.05),以HBsAg IFN-γ组最为明显.结论:经HBsAg负载的DCs可以改善患者体内因DCs功能低下而引起的Th1细胞分化不足的状态.     

乳腺癌患者Th1/Th2型细胞因子的表达及临床意义

采用ELISA法检测乳腺癌患者和健康对照者外周血中Th1型细胞因子IL-2、γ-干扰素(IFN-γ)和Th2型细胞因子IL-4、IL-10浓度.结果 乳腺癌患者外周血中IL-2、IFN-γ浓度显著低于对照组(P<0.05),IL-4、IL-10浓度显著高于对照组(P<0.05).认为乳腺癌患者外周血呈现Th2型细胞免疫反应优势状态,若能促进肿瘤细胞由Th1型向Th2型逆转,有利于恢复机体的抗肿瘤免疫能力,对配合手术、放化疗及防止乳腺癌复发、转移,提高长期生存率等有重要意义.     

慢病毒载体介导Runx3基因过表达对慢性乙型肝炎患者Th细胞分化的影响

目的探讨Runx3基因过表达对慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者Th细胞分化的影响。方法重组慢病毒载体p GC-FU-Runx3与阴性对照慢病毒载体p GC-FU分别转染29例CHB患者外周血CD4+T细胞,分离培养5 d的细胞培养液上清,应用ELISA检测Th1型细胞因子IFN-γ和Th2型细胞因子IL-4的表达水平;收集培养5 d的CD4+T细胞,应用实时定量PCR检测转录因子T-bet、GATA3m RNA的表达水平。结果 1与p GC-FU转染组比较,p GC-FU-Runx3转染组Th1型细胞因子IFN-γ的表达水平明显升高(P=0.003)。2与p GC-FU转染组比较,p GC-FU-Runx3转染组Th2型细胞因子IL-4的表达水平明显降低(P=0.007)。3与p GC-FU转染组比较,p GC-FU-Runx3转染组IFN-γ/IL-4比值明显增大(P=0.001)。4与p GC-FU转染组比较,p GC-FU-Runx3转染组T-bet、GATA3 m RNA的表达水平无显著性差异(P均0.05),但p GC-FU-Runx3转染组T-bet/GATA3比值较p GC-FU转染组明显增大(P=0.005)。结论 Runx3过表达可促进CHB患者Th1型细胞因子的分泌,抑制Th2型细胞因子分泌,促使CHB患者外周血Th细胞向Th1细胞分化,使其Th1/Th2失平衡得到改善。     

调节性B细胞与多发性硬化的研究进展

调节性B细胞(Bregs)主要来源于边缘区B细胞和B1细胞,炎症微环境是其分化/激活所必需的。Bregs通过产生白介素10(IL-10)、转化生长因子β1(TGF-β1)等抑制性细胞因子和通过与T细胞等其他免疫细胞的相互作用来介导免疫耐受。在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)/多发性硬化(MS)中,Bregs通过产生IL-10及抑制病理性Th1/Th17细胞的应答,增强Th2细胞的负性调节作用来控制疾病的启动和减轻疾病的严重性。     

大肠杆菌LTKA63突变体的构建及重组LTKA63免疫佐剂活性机理的研究

目的构建大肠杆菌不耐热肠毒素A亚单位(heat-labile enterotoxin subunit A,LTA)基因减毒突变体LTKA63及其原核表达系统,探讨重组LTKA63(rLTKA63)粘膜免疫佐剂活性的机制。方法采用高保真PCR从大肠杆菌44815株基因组DNA中扩增LTA基因,利用定位突变技术构建LTKA63突变体,T-A克隆后测序。采用无His-tag的原核表达载体pET-15b,构建LTKA63原核表达系统,通过SDS-PAGE鉴定表达产物。采用三色流式细胞术确定rLTKA63激活T细胞途径。结果从大肠杆菌44815株DNA模板中扩增获得预期大小的LTA基因条带。与报道的LTA序列比较,所克隆的LTA基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.03%~99.61%和98.33%~99.22%。LTA基因定位突变后获得序列正确的LT-KA63突变体。rLTKA63表达量占细菌总蛋白的15%左右。rLTKA63作用后Th1和Th2细胞较阴性对照组分别增加21.9%和36.2%。结论本文成功地构建了LTKA63原核表达系统,所表达的rLTKA能同时激活Th1和Th2细胞。     

CD4^＋CD25^＋T调节细胞参与感染弓形虫小鼠免疫应答调节的研究

目的观察弓形虫Prugniaud成囊株感染ICR小鼠后脾脏单个核细胞中不同T细胞亚群的比例在感染后不同时期的动态变化。方法用10个Prugniaud株弓形虫包囊以腹腔接种方式感染ICR小鼠，在小鼠感染前及感染后的1W，2W，3W，5W随机取6只小鼠，采用流式细胞仪对小鼠脾脏单个核细胞中Th1型和Th2型细胞及CD4^＋CD25^＋调节性T细胞比例变化进行动态检测。结果小鼠感染弓形虫后，Th1型细胞比例在感染后第1W一过性降低，后急剧升高，进入慢性感染期后又有所下降。Th2型细胞整个试验过程中呈现和Th1型细胞大致相反的变化趋势。CD4^＋CD25^＋T细胞在急性感染期，呈现和Th1型细胞相反的比例变化。结论CD4^＋CD25^＋调节性T细胞可能参与了弓形虫急性感染期的免疫抑制。     

慢性日本血吸虫感染对小鼠实验性1型糖尿病的影响

目的 探讨慢性日本血吸虫感染对小鼠实验性自身免疫性1型糖尿病发病的影响及其机制。方法 19只雄性BALB／c小鼠随机分为3组：日本血吸虫感染＋糖尿病造模组（A组，7只），糖尿病模型组（B组，6只）和正常对照组（C组，6只）。A组每只小鼠感染25条日本血吸虫尾蚴后9周，与B组小鼠同时腹腔注射链脲佐菌素诱导1型糖尿病，动态观察血糖变化。至12周末剖杀小鼠，留取血清，取胰腺组织切片HE染色，进行胰岛炎评分，用ELISA测定血清干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-4（IL-4）水平。结果 给药后，小鼠血糖逐渐升高，在第21d、28d两个时间点B组显著高于A组（P〈O．05）；A组〈40％的胰岛可见淋巴细胞浸润，B组有80％的胰岛可见淋巴细胞浸润，两者比较差异有显著性（P〈O．01）；至感染12周末，A组小鼠血清IL一4水平显著高于B组（P〈O．01）；B组小鼠血清IFN-γ水平显著高于A组（P〈O．05）和C组（P〈O．01）。结论 慢性日本血吸虫感染对小鼠实验性1型糖尿病具有拮抗作用，其机制与Thl／Th2免疫偏移有关。     

成人急性HBV感染后免疫指标的变化及不同转归的比较

目的 观察成人急性HBV感染后免疫指标的变化并进行不同转归比较。方法 选择29例急性乙肝患者和20例正常对照者，采用双抗体酶联分析法检测外周血细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12的水平；通过流式细胞仪观察外周血T淋巴细胞亚群变化；采用抗人T淋巴细胞单克隆抗体间接免疫荧光法观察外周血T淋巴细胞膜IFN-γ和IL-4的表达。结果29例HBeAg全部转阴，8例HBsAg未转阴。在HBsAg转阴组，病程早期和中期血清IL-2、IFN-γ、IL4及IL-12水平增高与正常组比P〈0．05，中期IL-4下降与早期比P〈0．05，晚期IL-2、IFN-γ、IL-4及IL-12下降与中期比P〈0．05；未转阴组各期IL-4水平增高与正常组比P〈0．05。转阴组早期Th1／Th2降低与对照组比P〈0．05，未转阴组各期，Th1／Th2降低与对照组比P〈0．05。未转阴组中5例入院时HBV-DNA〈10^3且IFN-γ水平明显低。两组CD4^＋／CD8^＋变化趋势不同。转阴组早期和中期IL-4膜表达高于正常对照组，中期IL-4表达低于早期，晚期IL-4表达低于中期，P值均〈0．05。未转阴组各期IL-4表达高于正常对照组，P〈0．05，各期之间IL-4表达无统计学差异。结论 IFN-γ升高与疾病恢复相关。持续高水平的IL-4表达易致慢性化。恢复Th1／Th2细胞的平衡可能是控制乙型肝炎慢性化的一条途径。CD4^＋／CD8^＋失调可能影响机体清除病毒的能力，导致感染的持续。     

白藜芦醇对JurcatT细胞分化为Th1/Th2细胞作用的影响及机制

目的探讨白藜芦醇调节Jurkat T细胞分泌为Th1/Th2型细胞作用的影响。方法将不同浓度的白藜芦醇作用于受植物血凝素（PHA）刺激的Jurkat T细胞,于不同时间点分别用ELISA法检测Th1型细胞因子IFN-γ和Th2型细胞因子IL-10;RT-PCR法检测T-bet和GATA-3 mRNA表达。结果白藜芦醇作用后IFN-γ、IL-10及T-bet mRNA、GATA-3 mRNA的表达均明显降低,具有浓度和时间依赖性。结论白藜芦醇对受PHA刺激的JurcatT细胞由Th0向Th1、Th2细胞分化起抑制作用。     

慢性特发性血小板减少性紫癜CD_4~+T细胞亚群变化的特点

目的 测定慢性特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者CD_4~+T细胞亚群[Th1、Th2、Th17和调节性T细胞(Treg)]和相应血浆细胞因子水平,探索其在ITP发病机制中的作用.方法 将35例成人慢性ITP患者分为疾病活动组、未缓解组、缓解组,18例体检正常者设为对照组.应用流式细胞仪检测表达细胞内因子干扰素(IFN)γ~+、白细胞介素(IL)-4~+、IL-17~+细胞及表达CD_(25)~+Foxp3~+细胞分别占CD_4~+细胞的百分率.应用ELISA检测血浆中IFNγ、IL-4、IL-17和IL-10的水平,分析活动组患者血浆细胞因子水平与血小板、骨髓巨核细胞计数间的相关性.结果 Th1、Th17细胞百分率及Th1/Th17比例在各组间比较差异均无统计学意义;Th2细胞百分率:活动组[(1.01±0.88)%]、未缓解组[(1.22±1.04)%]与对照组[(1.86±0.59)%]比较明显下降(P<0.05);Th1/Th2比例:活动组(15.04±9.67)、未缓解组(11.65±9.32)与对照组(7.02±3.01)比较明显增高(P<0.05); Treg细胞百分率:活动组[(0.89±0.58)%]、未缓解组[(1.46±1.27)%]与对照组[(5.73±0.71)%]比较明显下降(P<0.01).IFNγ、IL-17水平在各组间比较差异无统计学意义;IL-4水平:活动组[(2.25±2.05)ng/L]、未缓解组[(2.33±2.14)ng/L]与对照组[(5.54±4.00)ng/L]比较明显下降(P<0.05);IL-10水平:活动组[(5.07±4.10)ng/L]、未缓解组[(5.66±4.35)ng/L]与对照组[(14.21 ±7.31)ng/L]比较明显下降(P<0.01).上述各参数(Th2、Treg细胞百分率、IL-4、IL-10水平)在缓解组与对照组间比较差异无统计学意义.活动组患者血浆IL-10水平与血小板计数呈正相关(r=0.16,P=0.03),与骨髓巨核细胞数间无相关性(r=0.41,P=0.06).结论 慢性ITP患者疾病活动组Th1/Th2比值升高,这是由Th2细胞的百分率下降所致.Treg细胞百分率下降可能与慢性ITP发病机制有关,但Th17细胞百分率可能与慢性ITP疾病状态无关.     

狼疮肾炎患者血清白细胞介素-18的升高与Th1/Th2型细胞的失衡

目的测定狼疮肾炎（LN）患者血清白细胞介素-18（IL-18）的水平以及外周血单个核细胞（PBMC）内干扰素（IFN）-γ／IL-4的表达情况，探讨LN患者体内Th1/Th2型细胞的平衡情况以及IL-18与Th1/Th2型免疫反应的相关性。方法酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测血清IL-18的表达：佛波酯（PMA）和离子霉素联合刺激培养，流式细胞术从单个核细胞水平检测细胞内IFN-γ/IL-4的表达情况。结果LN患者血清IL-18的水平显著高于对照组（P=0．000）；Th1型（IFN—γ^＋）细胞百分率明显高于对照组（P=0．009），Th1/Th2型细胞的比率（IFN-γ／IL-4^＋）明显增高（P=0．005）；Th1/Th2型细胞比率与尿蛋白定量（24h）呈明显正相关；Th1型细胞百分率与血清IL-18的水平呈明显的正相关。结论LN患者血清IL-18水平升高，并与Th1/Th2型免疫反应失衡有关，IL-18可以促进LN患者体内Th1型免疫反应增强。从而加重蛋白尿的发展。削弱Th1型免疫反应重建Th1/Th2型免疫反应的平衡，理论上可能会阻止狼疮肾炎的发病。