蛇毒解离素的结构特征及其与生物学活性的关系

目前已从蛇毒中分离出 80余种解离素多肽,根据其结构及来源可分为五大类,即短链、中链、长链解离素、金属蛋白酶P Ⅲ的类解离素区释放的解离素以及二聚体解离素。不同解离素的分子结构共同点包括RGD活性中心、半胱氨酸残基配对形成的二硫键、RGD三肽的C 端和N 端的氨基酸序列以及解离素多肽分子的C 末端。这些结构决定了解离素的抑制血小板聚集、抑制细胞粘附以及血管形成等生物学活性。     

神经肽Y概述

神经肽 Y(NPY)是 YY 肽(PYY)和胰多肽的同系物,由36个氨基酸构成,N-端为酪氨酸,C-端为酪氨酰胺,各物种间氨基酸组成极少变化。NPY 最显著分布于交感神经系统、肠和脑,它在脾和骨髓中的分布证明一些非神经和非内分泌细胞能合成 NPY。NPY和 NE 共存于交感神经元和肾上腺髓质。在副交感神经系统内有 NPY 阳性神经元,经常与肠血管活性肽(VIP)并存。在视皮质区,60％～80％含 NPY 的神经元分布在白质,对与脉管系统联络可能有特殊作用。     

白介素—12的结构和生物活性

白介素-12(IL-12)的分子量约为75kDa,由二个异型多肽p40(40 kDa)和p35(35 kDa)以分子内二硫键结合而成。两个多肽都具有细胞因子所共有的ATTTA序列。IL-12的p40是细胞因子受体家族,具有共同的N端免疫球蛋白区、4个半胱氨酸残基和C端的WSXWS序列,特别是和IL-6受体     

HPLC-ESI-ITMS在药品质量控制中确证胰岛素和胰岛素B链C端氨基酸序列的应用研究

在药品质量控制中应用HPLC-ESI-IT (Ion Trap) MS分别确证胰岛素和胰岛素B链的C端氨基酸序列。取胰岛素标准品溶液或者胰岛素B链溶液适量，加入羧肽酶P及羧肽酶Y溶液适量降解胰岛素或者胰岛素B链C端，在预定的时间点取出酶降解反应液适量，加入等体积1%甲酸停止反应，混旋均匀后制成供试液，供HPLC-ESI-IT MS分析测定。采用Zorbax Prosphere C₁₈柱(2.1 mm×150 mm，300A，5 μm)分离，以流动相进行梯度洗脱［A相：水-乙腈-三氟乙酸(98∶2∶0.02)，B相：乙腈-水-三氟乙酸(98∶2∶0.02)］。柱后修饰“TFAfix”溶液为丙酸-异丙醇(2∶8)的混合溶液。ESI-ITMS测定供试液中梯度多肽系列(彼此相差1个C端氨基酸残基)的分子质量，计算出分子质量最相近的相邻两肽段的系列分子质量差值，即可得到待测样品C端系列氨基酸残基质量的实验值。胰岛素的B链C端的第1个氨基酸残基丙氨酸残基可以被准确地确证；同样还原修饰的胰岛素B链C端的第1个氨基酸残基丙氨酸残基也能被准确地确证。本研究在nmol样品水平准确地确证胰岛素和胰岛素B链各一个C端氨基酸，符合重组DNA制品中试产品的质量控制要求。本实验方法不必将胰岛素经还原修饰将A链从B链裂解，直接确证胰岛素的C端氨基酸残基，避免还原修饰和纯化的烦琐操作，方法简便。     

HPTH(1-34)及hPTHrP(1-34)的结构与功能的关系

对各种结构研究及检测方法所得hPTH（1-34)及hPTHrP(1-34)的空间结构进行综合整理，探讨其结构与功能的关系及其应用意义。分别以N端，C端，连接区为着眼点，对hPTH(1-34)及hPTHrP(1-34)在溶液中的构象及其晶体结构进行综述，讨论了特定氨基酸对该多肽的激动剂活性以及受体结合活性的影响，并对这些影响在该多肽结构改造上的意义进行了展望。hPTH(1-34)及hPTHrP(1-34)是由负责生理活性的N端和负责受体结合的C端以及结构随环境而改变的连接区组成的。对hPTH(1-34)及hPTHrP(1-34)结构知识的深入了解必将对理论研究及临床实践产生重要意义。     

内皮素及其受体与类风湿关节炎的相关性

近年来的研究表明,内皮素(endothelin,ET)通过与其受体(endothelin receptor,ETR)结合发挥其作用,参与了类风湿关节炎(rheum atoid arthritis,RA)的生理病理过程。本文就ET及其受体与RA发生、发展方面的研究进行综述。1关于ET1.1ET的结构ET是一种由21个氨基酸残基构成具有强烈收缩血管作用的内皮衍生血管活性因子,分子量为2492,其N端为胱氨酸,C端为色氨酸。ET家族成员有三种异构体:ET-1、ET-2、ET-3,均由单一的基因产生,并均有两个链内双硫键、一个极性环、一个尾链及疏水性的C段。在结构上ET-1和ET-2只相差2个氨基酸,ET-3和E…     

瘦素的研究现状

肥胖是能量摄取超过能量消耗所引起的体脂沉积过多。1994年Zhang等采用克隆技术对小鼠的ob(obese)基因和人类的同源序列进行了分子克隆序列测定,开始了人类肥胖病的分子遗传学研究。ob基因产物是一种脂肪组织源激素,具有降低脂肪沉积的作用,被命名为Leptin——瘦素。 1 瘦素的结构 小鼠、大鼠和人的瘦素基因均已克隆定位,小鼠瘦素基因定位于第6号染色体,人瘦素基因位于第7号染色体长臂3区1带3亚带(7q31,3),二者均为单拷贝基因。人瘦素基因与小鼠基因相似,是一条含有167个氨基酸密码的DNA序列,长约20kb,由3个外显子和2个内含子组成。瘦     

6,8-二氟喹诺酮类抗菌药物的构效关系研究

研究了10个6，8－二氟喹诺酮类抗菌药在N1和C7位取代基的结构与抗菌活性的关系。结果表明，N1取代基除了必须符合适当的STERIMOL长度外，还要有一定的脂溶性；C7位取代基主要是脂溶性因素影响化合物的抗菌活性。     

高血压与神经肽Y

神经肽Y（neuropeptide Y,NPY）是一种含有36个氨基酸的多肽,于1982年由Tatemoto和Mutt首先从猪脑中分离出来[1]。由于它以脯氨酸残基作为氨基端,以酪氨酰胺作为羧基端,每个分子多肽又含有五个酪氨酸残基,所以,将其命名为神经肽Y。近年来发现NPY广泛分布于中枢神经系统和外周多种组织器官,在中枢可以抑制呼吸,调节血压,调节下丘脑激素的合成和释放;在外周器官,参与对心血管、胃肠道、呼吸道、泌尿生殖道等组织器官的功能调节。     

人的基因工程氨酰基脯氨酸二肽酶的多效酶活性(英文)

目的　研究人氨酰基脯氨酸二肽酶除催化水解C端为脯氨酸残基的二肽外 ,是否还有G类有机磷化合物水解酶 (G酶)活性。方法　用基因工程技术克隆及表达人的重组氨酰基脯氨酸二肽酶。氨酰基脯氨酸二肽酶及G酶活性用常规方法测定。结果　COS 7细胞表达的人氨酰基脯氨酸二肽酶催化有机磷化合物梭曼的水解 ,也水解二肽化合物Gly Pro。两种活性比未转染的COS 7细胞高 2倍。比较转染了带有氨酰基脯氨酸二肽酶基因的重组载体的COS 7细胞和对照组细胞中的两种酶活性 ,可以看到有平行的升高趋势及恒定的酶活性比值。结论G酶和氨酰基脯氨酸二肽酶为同一个酶 ,或至少属于同工酶     

κ阿片受体三维结构的模建及其与强啡肽A(1-8)作用机制的研究(英文)

目的:模建人Kappa阿片受体(HKOR)三维结构,并研究它与强啡肽A(1-8)(Dyn8)的相互作用机制。方法:以牛视紫红质(OPSD)为模板,运用比较分子模拟模建HKOR七段跨膜区的三维结构。运用分子动力学优化HKOR模型并根据强啡肽A(1-14)核磁共振结果构建其三维结构,通过自建数据库搜寻建立HKOR的膜外环区。应用DOCK4.0将强啡肽A(1-8)与HKOR进行对接。结果:(1)得到HKOR三维模型,并用理论及实验参数进行了校正。(2)合理解释了Dyn8-HKOR相互作用机制:Asp138通过与Dyn8的N端残基形成氢键及静电作用,在配体受体结合过程中起着重要的作用。(3)HKOR膜外第二环区(EL2)中带负电荷的氨基酸Asp223和Glu209与Dyn8的C端带正电荷的残基相互作用,而Glu209可能是决定肽类配体特异性的一个重要因素。结论:EL2,TM3,TM4,TM5上的一些关键氨基酸残基决定Kappa阿片受体与肽类配体的选择性结合。     

plk1分子病理学的研究进展

人类Polo样激酶1（polo-like kinase-1，Plk1）是一种高度保守丝／苏氨酸激酶，1994年由Golsteyn等最先克隆报道，定位于16p12，mRNA长约2．3kb，编码的蛋白质分子量约为67ku，其N端有一个高度保守的催化区域，C端常有3个被称作Polo盒的保守区域，Plk1对细胞周期的正常进行、中心体成熟、细胞质分离等方面有重要作用。近年来，Plk1与肿瘤的关系也受到人们的关注。现就plk1目前的研究进展综述如下。     

汉坦病毒M和S片段基因的克隆及在成纤维细胞中的瞬时表达

目的构建汉城病毒M片段和汉滩病毒部分S片段的重组基因pEGFP-M-S，并在成纤维细胞L929中进行瞬时表达。方法用PCR方法克隆分别装在两个模板载体中的部分M片段，连接人pcDNA3．1载体，利用简并密码子得到完整的M片段。将汉城病毒M片段开放阅读框全长3．4kb的基因与装有汉滩病毒S片段5’末端0．7kb基因的载体pEGFP-HTNV-S0．7用酶切位点连接，构成4．1kb的重组基因，并转染成纤维细胞，进行48h、72h表达。结果成功得到预期大小的4．1kb的重组基因，并在成纤维细胞中进行了瞬时表达。结论汉城病毒M片段和汉滩病毒部分S片段基因的重组基因在成纤维细胞中瞬时表达，产生了M片段的约70kD和55kD的两个糖蛋白，并在与S片段拼接处经蛋白酶切割产生了约26kD的核蛋白，免疫印迹分析产生的约26kD的蛋白具有抗汉坦病毒的抗原活性。     

核仁素转录激活子功能研究

目的：研究核仁素的转录激活子作用,探讨CD34^＋分子的基因转录调节机制。方法：分别构建核仁素的表达质粒,以及野生型和含有缺失突变的CD34^＋基因调控区质粒,启动子区下游含有荧光素酶报告基因。这些报告质粒的调控区分别是：①0．8kb野生型CD34^＋基因上游5’端序列;②缺失了127个核苷酸的CD34^＋基因上游5’端序列。应用瞬时转染试验,研究人CD34^＋基因上游5’端的转录特征,分析核仁素对CD34^＋基因的转录调节功能。结果：①含野生型CD34^＋基因上游5’端序列的报告质粒的相对荧光素酶活性约为空质粒pGL3-Basic的3倍;CD34^＋基因上游调控区的活性可被核仁素激活,其相对荧光素酶活性是空质粒的8倍。②CD34^＋基因上游5’端有127nt．缺失的报告质粒的相对荧光素酶活性与空质粒pGL3-Basic的活性相同,且与核仁素表达质粒共转染细胞时,其相对荧光素酶活性没有变化。结论：核仁素对CD34^＋基因起转录激活作用。CD34^＋基因上游5’端自-470nt．至-344nt．的区域对CD34^＋基因的表达具有重要意义。     

抑肽酶基因的克隆和表达

抑肽酶作为天然非特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂，用途广泛。目前抑肽酶制品主要从牛肺中提取。用基因重组技术，将抑肽酶结构基因导入表达载体pGrxA，并在抑肽酶基因上游引入FXa识别位点。将重组质粒转化至Origami^TM中，用异丙基硫代β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白，产物以可溶性形式存在于胞内。将菌体超声破壁和离心，融合蛋白经分子筛层析和离子交换层析纯化后，用FXa切割该融合蛋白可得到N端不含多余氨基酸残基且与天然构像一致的活性抑肽酶。     

在心脏组织表达的一个人类新基因

KRAB/C2H2型锌指蛋白是一类具有重要功能的转录调节因子。初步克隆了一个新的人类KRAB/C2H2型锌指蛋白基因,经国际基因命名委员会批准命名为ZNF569。此基因在基因组DNA上长约56.28 kb。定位于19q13.12.ORF全长2061个碱基,含6个外显子,5个内含子,编码一个长686个氨基酸残基的蛋白质。该蛋白包含一个KRAB结构域和18个锌指结构域。Northern杂交结果表明,ZNF382 mRNA在早期胚胎时期就开始表达,在不同时期人类胚胎组织中广泛表达,包括脑,心脏,肝和骨骼肌。在成人组织中重点表达在心脏,在肝,胰和骨骼肌中也有表达,其结构和表达特征预示着ZNF569在心脏发育和功能的发挥起着潜在的作用。     

2例1型糖尿病患者外周血TCR Vβ7分子结构模拟与分析

目的模拟和分析2例1型糖尿病(T1D)患者外周血TCR Vβ7的结构。方法以荧光定量PCR熔解曲线分析技术检测T1D患者外周血TCR Vβ7的谱系漂移,利用IMGT数据库和生物信息学软件(CPH Models 2.0 Server和Ras Mol 2 Software)模拟分析其分子结构。结果 2例T1D患者外周血的TCR Vβ7拥有极为相似的氨基酸序列"CASRTAGQYEQYFGPGTR"和"CASRTAGQYEQFFGPGTR",唯一不同的是第十二个氨基酸残基,前者为酪氨酸(Y),后者为苯丙氨酸(F)。分子模拟显示,两者TCR Vβ7基因结构明显不同。结论不同T1D患者来源的TCR Vβ7即使具有相似或相同的氨基酸序列,分子结构未必相同;其可能来自于不同的T细胞克隆。     

酿酒酵母丙酮酸脱羧酶基因的克隆及表达

目的酿酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)丙酮酸脱羧酶 (PDC)基因的克隆和表达。方法利用PCR技术从酿酒酵母的总cDNA中钓取出PDCsc基因 ,构建其高效表达质粒 ,利用Ion和ompT蛋白酶缺陷株EscherichiacoliBL2 1 (DE3)进行表达。结果扩增出长约 1 7kb的PDCsc基因 ,成功构建其表达质粒pSC -2 2b ,对转化菌株的SDS -PAGE分析结果显示 :该基因获得高效表达 ,表达蛋白占细胞总蛋白的 1 8 6 %。结论成功构建高效表达PDCsc基因的工程菌株 ,为实现利用PDCsc进行的生物转化奠定基础     

人甲状旁腺素(1-34)的合成与聚乙二醇化修饰

目的合成人甲状旁腺素(1 34) [hPTH(1-34) ]并进行聚乙二醇化修饰。方法应用固相多肽合成方法合成并经高效液相色谱纯化得hPTH(1-34) ,Cys-hPTH(1- 34)和hPTH(1-34)-Cys-NH2 。Cys hPTH(1-34)和hPTH(1-34)-Cys-NH2 在水溶液(pH 7～8)中分别与平均相对分子质量为5 0 0 0的单甲氧基马来酰亚胺基聚乙二醇(mPEG50 0 0 MAL)反应,经高效液相色谱纯化得Cys(mPEG50 0 0 MAL)- hPTH(1-34)和hPTH(1-34)-Cys(mPEG50 0 0- MAL) -NH2 。结果hPTH(1-34) ,Cys(mPEG50 0 0 MAL) hPTH(1 34)和hPTH(1 34) Cys(mPEG50 0 0 MAL) NH2 的质谱和氨基酸组成分析结果均与理论值一致。hPTH(1-34) -Cys(mPEG50 0 0-MAL) NH2 保持了较好的体外活性,Cys(mPEG50 0 0- MAL) hPTH(1-34)保持了较好的体内活性。结论采用一种简便的方法成功实现了对hPTH(1-34)的N端或C端的聚乙二醇化修饰     

N端为含氮杂环的新型羟乙基胺类BACE1抑制剂的设计、合成与活性评价

目的开发一类N端含氮杂环结构的新型羟乙基胺（hydroxyethylamine,HEA）类BACE1抑制剂,筛选对抑制活性有贡献的新型N端结构。方法设计并合成了8个N端为含氮杂环的HEA类化合物并鉴定其结构,同时,以儿茶酚类化合物（-）-表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）作为阳性对照,分别测定它们对BACE1的抑制活性。结果所有化合物均通过核磁共振氢谱和质谱确证其结构。BACE1抑制活性评价结果表明,其中N端为吲哚结构的化合物Ⅰ6表现出明显的抑制活性。结论含取代基的吲哚结构与BACE1的S2口袋具有一定的相互作用,有利于提高这类化合物对BACE1的抑制活性,可作为进一步研究的先导结构。