黄芪对糖尿病大鼠肾组织血管生成素表达的影响

目的 探讨黄芪对糖尿病大鼠肾组织中血管生成素(Ang)及其受体Tie-2和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响. 方法 18只SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组和糖尿病黄芪治疗组.实时PCR和免疫组化法分别检测3组大鼠肾组织中Ang-1、Ang-2、Tie-2和VEGF的mRNA和蛋白表达. 结果 与正常对照组比较,糖尿病组大鼠肾组织VEGF mRNA以及VEGF、Ang-2和Tie-2蛋白表达明显升高(P＜0.01);与糖尿病组大鼠比较,糖尿病黄芪治疗组大鼠肾组织VEGF mRNA表达显著升高,而Tie-2蛋白表达显著下调(P＜0.01),两组间Ang-1和Ang-2的mRNA和蛋白表达未见统计学差异(P＞0.05). 结论 黄芪对糖尿病大鼠肾组织Ang表达的调节作用不明显,但可下调其受体Tie-2的表达.     

黄芪对糖尿病大鼠肾组织血管生成素受体Tie-2表达的作用

目的:探讨血管生成素受体Tie-2在糖尿病大鼠肾组织中的表达以及黄芪对其影响。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组和黄芪治疗组。8周后处死大鼠,采用实时定量聚合酶链反应和免疫组化法分别检测3组大鼠肾组织中Tie-2基因和蛋白表达水平。结果:与正常对照组相比,糖尿病组大鼠肾组织Tie-2蛋白表达显著升高(P<0.01);黄芪治疗组大鼠肾组织Tie-2蛋白表达较糖尿病组显著下调(P<0.01)。结论:黄芪通过下调糖尿病大鼠肾组织Tie-2的表达而发挥肾保护作用是其治疗糖尿病肾病的作用机制之一。     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾组织血管紧张素Ⅱ及其1型受体mRNA表达的影响

目的研究氯沙坦对实验性糖尿病大鼠肾组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体mRNA表达的影响。方法纯种雄性Wistar大鼠分为3组,A组(n=11)为正常对照组,B组(n=11)为糖尿病为干预组,C组(n=9)为糖尿病大鼠氯沙坦干预组。以链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型。饲养18周后取出肾脏检测AngⅡ水平、AngⅡ1型受体mRNA表达,收集24h尿测定尿白蛋白排泄及肌酐并心脏内取血检测血AngⅡ及肌酐。AngⅡ1型受体mRNA表达采用RT-PCR,以-actin作为内对照。尿白蛋白排泄采用大鼠白蛋白特异的酶免疫分析试剂盒。结果血、肾组织AngⅡ在A、B、C三组间无显著性差异。肾组织AngⅡ1型受体mRNA表达在B组大鼠(0.62±0.17)显著低于A组(1.13±0.82,P<0.01)及C组(1.13±0.62,P<0.01)。尿白蛋白排泄在B组大鼠(2.18±1.98mg/d)显著高于A组(0.41±0.47mg/d,P<0.01)及C组(0.65±0.89mg/d,P<0.01)。结论氯沙坦处理能升高糖尿病大鼠肾组织的AngⅡ1型受体mRNA表达,但不改变血液及肾组织AngⅡ水平。     

丹蛭降糖胶囊调控VEGF信号通路促糖尿病大鼠血管新生的作用机制

目的基于血管内皮生长因子(VEGF)介导的信号通路研究丹蛭降糖胶囊对糖尿病大鼠血管新生的影响及作用机制。方法以雄性SD大鼠10只为空白组,另以50只GK大鼠建立下肢缺血模型,并随机分为模型组、丹蛭降糖胶囊高剂量组、丹蛭降糖胶囊中剂量组、丹蛭降糖胶囊低剂量组、盐酸吡格列酮组。分别以高中低剂量丹蛭降糖胶囊及盐酸吡格列酮灌胃30 d后,取血及下肢血管组织,镜下检测血管密度,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清VEGF、血管紧张素1、2(Ang-1、Ang-2)、血管生成素受体2(Tie-2)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(eNOS)相关指标的含量;蛋白质印迹法(Western blot)检测腓肠肌组织中Ang-1、Ang-2、Tie-2蛋白表达。结果糖尿病下肢缺血模型大鼠VEGF/Akt/eNOS信号通路的表达被抑制,治疗后丹蛭降糖胶囊高、中、低剂量组、盐酸吡格列酮组大鼠血清VEGF、eNOS、NO水平明显升高(P<0.01或P<0.05);腓肠肌组织中蛋白的表达也有类似的结果,丹蛭降糖胶囊高剂量组、盐酸吡格列酮组磷酸化蛋白激酶(p-Akt)、磷酸化一氧化氮合酶(p-eNOS)蛋白表达升高最为明显(P<0.01);高、中、低3个剂量组间比较,丹蛭降糖胶囊高剂量组p-Akt、p-eNOS蛋白表达明显升高(P<0.05)。另外,与模型组比较,各治疗组糖尿病大鼠血清及组织Ang-2水平明显降低(P<0.05或P<0.01),丹蛭降糖胶囊高剂量组降低更显著(P<0.01)。治疗后丹蛭降糖胶囊高、中、低剂量组、盐酸吡格列酮组大鼠血清及腓肠肌组织Ang-1、Tie-2表达均升高(P<0.05或P<0.01),丹蛭降糖胶囊高剂量组升高更显著(P<0.01)。结论丹蛭降糖胶囊能够激活糖尿病血管病变状态下被抑制的VEGF/Akt/eNOS及Ang/Tie2信号通路,促进血管基底膜的解离,为血管新生的启动做准备,促进下肢血管新生。     

通络方药抑制糖尿病大鼠肾小球内皮细胞增殖

目的:研究通络方药(Tongluo recipe,TLR)对糖尿病(DM)大鼠肾小球内皮细胞增殖的作用。方法:大鼠随机分为正常对照(NC)组、糖尿病对照(DMC)组、糖尿病TLR干预(DM+TLR)组(n=7)。DMC和DM+TLR组大鼠采用链脲佐菌素(STZ,65 mg/kg)腹腔注射诱导糖尿病,1周后血糖≥16.7 mmol/L者为糖尿病模型制备成功;DM+TLR组按每天1 g/kg TLR灌胃,NC和DMC组给予等量的生理盐水。干预12周后,测肾功能和24 h尿白蛋白(UAE),比色法测血浆丙二醛(MDA)和超氧阴离子水平(O2-),ELISA法测糖基化终末产物(AGE),H-E染色及CD31免疫组化染色观察肾组织病理改变,蛋白质印迹法检测肾组织AGE受体(RAGE)、血管内皮生长因子(VEGF)、VEGF受体(Flk-1)、血管生成素(Ang)-1、Ang-2和Ang-2受体(Tie-2)蛋白表达。结果:与NC组相比,DMC组肾质量/体质量(KW/BW)、24 h尿白蛋白(UAE)、MDA、O2-、AGE、RAGE、VEGF、Flk-1、Ang-2、CD31水平和肾小球系膜面积增加,肌酐清除率(Ccr)、Tie-2水平降低(P<0.01或0.05)。与DMC组相比,DM+TLR组大鼠KW/BW、UAE、MDA、O2-、AGE、RAGE、VEGF、Flk-1、Ang-2、CD31水平和肾小球系膜面积降低,Ccr、Tie-2水平升高(P<0.01或0.05)。结论:TLR可能通过降低糖尿病大鼠肾小球氧化应激水平,抑制AGE-RAGE、VEGF表达,进一步抑制肾小球内皮细胞增殖,从而减少糖尿病时肾小球新生血管形成,减轻肾损伤。     

血管生成素-1,-2及酪氨酸激酶Tie-2受体mRNA在胶质瘤中的表达

目的:通过对胶质瘤的促血管生成素-1(Angiopoietin-1,Ang-1)和促血管生成素-2(Angiopoietin-2,Ang-2)及酪氨酸激酶受体(Tie-2)mRNA表达的检测,初步探讨它们与胶质瘤血管生成的关系及临床意义.方法:应用RT-PCR对43例胶质瘤和15例正常脑组织Ang-1、Ang-2及Tie-2 mRNA的表达量进行半定量检测,并对它们进行对照分析.结果:胶质瘤组织中Ang-2 mRNA的表达明显增强;Ang-2 mRNA的表达随着肿瘤级别的升高而增强(P＜0.001);胶质瘤组织中Ang-1 mRNA的表达较正常脑组织下调,Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤Ang-1 mRNA的表达量与Ⅰ、Ⅱ级相比,其降低程度也有着显著性差异(P＜0.05);Tie-2 mRNA的表达量在正常脑组织与胶质瘤、以及不同分级之间无显著性差异.结论:Ang-2 mRNA表达上调和Ang-1 mRNA表达下调可能共同诱发肿瘤血管生成.Ang-2与Ang-1平衡状态失衡可能与胶质瘤恶性程度有关.     

肾苏Ⅲ修复损伤足细胞改善血管通透性的机制研究

目的:通过观察中药复方肾苏Ⅲ调控血管生成素对损伤足细胞的修复作用,阐明其防治作用的关节调节点及可能的机制。方法:采用Real-time PCR、Western Blot检测方法,对肾苏Ⅲ干预前后足细胞中血管生成素(Angiopoietin,Ang)-1、Ang-2、Tie-2 mRNA进行检测。结果:48 h后肾苏Ⅲ治疗组与模型组比较,Ang-1、Ang-2 mRNA、蛋白表达量显著增加;Tie-2蛋白表达量明显减少。结论:肾苏Ⅲ通过调节Ang-1、Ang-2/Tie-2mRNA及蛋白表达量,对不成熟的血管网进行重塑,增强管状结构与附近组织及细胞的黏附,维持血管的完整性,促进和维持血管成熟稳定、降低血管通透性。     

灯盏花素对糖尿病大鼠肾组织VEGF表达的影响

目的:观察灯盏花素对链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠的肾组织VEGF表达的影响。方法:选择STZ诱导的糖尿病SD大鼠模型,将其分为正常对照组、糖尿病组、糖尿病灯盏花素治疗组,采用免疫组化法检测肾组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达变化。结果:糖尿病模型组较正常对照组肾组织VEGF蛋白表达明显升高(P<0.05),灯盏花素治疗组较模型组肾组织VEGF蛋白表达降低(P<0.05)。结论:灯盏花素通过调控VEGF表达,具有减缓糖尿病肾病的发生和发展作用。     

血管生成素及受体和VEGF在人肝细胞癌组织中的表达及作用

目的 研究血管生成素及受体Tie-2、血管内皮生长因子(VEGF)在肝细胞癌血管生成和进展中的作用。方法 用RT-PCR和免疫组织化学方法分析了28例肝细胞癌、10例肝硬化和10例正常肝标本。探讨血管生成素及受体、VEGF的表达和HCC肿瘤血管生成和临床病理的关系。结果 Ang-2／Tie2、VEGF在肝细胞癌中表达明显上调，免疫组织化学也显示Ang-2和VEGF蛋白在肝癌表达增强。Ang-2／Ang-1mRNA比值与肿瘤血管侵犯及CD34染色的微血管密度相关。结论 Ang／Tie-2、VEGF在HCC肿瘤血管生成和进展中起重要作用。     

骨肉瘤组织中Ang-2、VEGF的表达及MVD测定

目的:检测骨肉瘤组织中血管生成素-2( Ang-2)与血管内皮生长因子(VEGF)的表达及微血管密度(MVD).方法:采用RT-PCR技术和Western blot法检测69例骨肉瘤患者和12例正常对照骨组织中Ang-2的表达;采用免疫组化法检测69例骨肉瘤组织中VEGF与CD34的表达,计算MVD;分析Ang-2的表达与VEGF、MVD的关系.结果:骨肉瘤组Ang-2 mRNA的表达量、Ang-2蛋白阳性表达率、VEGF蛋白阳性表达率及MVD均高于对照组(t=8.2 53,x2校正 =11.960和11.470,P均＜0.01).高VEGF表达组Ang-2蛋白与mRNA的表达高于低VEGF表达组(P＜0.01);高MVD组Ang-2蛋白与mRNA的表达高于低MVD组(P＜0.01).结论:Ang-2参与了骨肉瘤的血管生成及调控,在骨肉瘤的发生中起着重要的作用.     

2型糖尿病大鼠肾脏血管内皮生长因子的表达和黄芪的调节作用

目的观察黄芪对2型糖尿病大鼠肾脏血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法将SD大鼠分为假手术组(Sham组)、糖尿病肾病组(DN组)、黄芪治疗组(DNH组).DN组和DNH组制成糖尿病模型,DNH组予黄芪注射液5 mL/kg灌胃.观察黄芪对糖尿病肾病大鼠肾组织VEGF、尿白蛋白的影响.结果黄芪可明显降低糖尿病大鼠尿白蛋白及肾组织VEGF表达(P＜0.05).结论 2型糖尿病所致糖尿病肾病VEGF表达升高,黄芪可能通过抑制VEGF表达而减少糖尿病肾病损害.     

Angiogenesis effect of Astragalus polysaccharide combined with endothelial progenitor cells therapy in diabetic male rat following experimental hind limb ischemia

Background Diabetes mellitus （DM） is a common disease accompanied with a high incidence of hind limb ischemia （HLI）.In recent years,numerous studies demonstrated that endothelial progenitor cells （EPCs） are involved in angiogenesis and maintenance of vascular integrity following HLI.On the other side,it has been proved that Astragalus polysaccharide （APS） could promote angiogenesis.In the present study,we aimed to evaluate the effect of APS and EPCs on enhancing angiogenesis after experimental HLI caused by femoral artery ligation in rats with streptozotocin （STZ）-induced diabetes.Methods Rats （n=110） were randomly assigned to the following groups：sham group,ischemia group,APS group,EPCs group and APS＋EPCs group.APS,EPCs or an equal volume of vehicle was administered intramuscularly after HLI induction,and 6 rats were assessed by angiography at 28 days after induction of HLI,6 rats were sacrificed at the same time point to take histological studies,biochemical tests were also performed at that point in the rest rats.Results APS or EPCs treatment induced an increase,respectively,in the protein expression of vascular endothelial growth factor （VEGF） （36.61%,61.59%）,VEGF receptor-1 （VEGFR-1） （35.50%,57.33%）,VEGFR-2 （31.75%,41.89%）,Angiopoietin-1 （Ang-1） （37.57%,64.66%） and Tie-2 （42.55%,76.94%） （P 〈0.05）,after HLI injury.And combined therapy of APS and EPCs enhanced the effort of angiogenesis after HLI induction in diabetic rats,through elevating protein expression of VEGF （99.67%）,VEGFR-1 （105.33%）,VEGFR2 （72.05%）,Ang-1 （114.30%） and Tie-2 （111.87%） （P〈0.05）.Similarly,mRNA expression of VEGF,VEGFR-1,VEGFR2,Ang-1,Tie-2 also show similar trends as well as protein expression （P〈0.05）.Conclusion APS or EPCs could enhance angiogenesis,and the combined treatment leads to better effort,at least,partially via VEGFNEGFR and Ang-1/Tie-2 signaling pathway.     

中药脑泰方对大鼠脑缺血后VEGF和Angiopoietins表达的实验研究

目的 探讨中药脑泰方对大鼠脑缺血后血内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和血管生成素(angiopoietins,Ang)的表达变化及其在血管生成中的作用.方法 选择40只雄性SD大鼠,采用随机区组法分为A正常对照组,B假手术组,C MCAO模型组,D脑泰方组;,观察各组大鼠神经功能缺失计分、脑梗死体积;RT-PCR、Western blot方法检测不同组大鼠脑组织中VEGF、Ang-1及Ang-2 mRNA和蛋白的表达变化.结果 神经功能缺失计分及TTC染色显示脑泰方组脑缺血情况缓解;大鼠脑缺血后VEGF、Ang-2 的表达水平增高,脑泰方组表达显著高于模型组(P<0.05);Ang-1的表达水平在大鼠脑缺血后呈下降趋势,脑泰方组表达显著低于模型组(P<0.05).结论 大鼠脑缺血后VEGF、Ang-1和Ang-2共同协调作用促进血管生成,中药脑泰方在脑缺血损伤后治疗血管新生样作用中发挥着促进作用.     

椎间盘脱出模型大鼠脊髓血管生成因子mRNA的表达变化及电针对其影响

摘要：目的 探讨椎间盘脱出症中与血管生成相关因子的变化及其电针作用,分析电针参与脊髓微血管生成的机理。方法 采用自制硅胶片在T13段脊髓的左腹侧位压迫建立椎间盘脱出模型,将大鼠随机分为三组,即电针治疗组（n=6）、模型组（n=6）、假手术组（n=6）,电针组每日电针治疗一次,模型组与假手术组不做任何治疗。术后七天后取压迫部位脊髓组织,RT-PCR法检测 Ang-1、Tie-1、Ang-2、Tie2、VEGF、Flt-1、Caspase-3、Tsp-1的mRNA表达量,组织切片法观察脊髓损伤情况。结果 模型组与假手术组相比Ang-1、Ang-2、Tie-1、Tie2、Caspase-3、Tsp-1极显著升高（P<0.01）,VEGF、Flt-1无显著差异（P>0.05）;模型组与电针组相比Ang-2、Tie-1、Tie2、Caspase-3、Tsp-1极显著升高（P<0.01）,Ang-1、VEGF、Flt-1无显著性变化（P>0.05）;电针组与假手术组各指标均无显著性差异（P>0.05）;结论 试验表明损伤后血管生成相关因子mRNA表达异常,电针能协调血管生成促进因子和抑制因子的相对平衡,维持脊髓微循环的相对稳定为损伤的修复提供有利条件。     

VEGF、TGF-β1在糖尿病肾小管表达的实验研究

目的:探讨糖尿病(DM)大鼠肾小管血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子β1(TGF-β1)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的表达与糖尿病肾病(DN)发生发展的关系。方法:尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病模型,分为DM 3 d、1周、2周、4周、8周组及相应正常对照组;免疫组织化学法检测VEGF、TGF-β1、AngⅡ、FN(纤维连接蛋白)在肾小管的表达;Western免疫印记法检测肾皮质VEGF蛋白质水平;PAS染色光镜观察肾组织形态改变。结果:肾皮质VEGF水平随病程发展表达逐渐增多,免疫组化示肾小管VEGF在DM 1周时显著高于对照组,且在4周时与24 h尿蛋白量呈正相关;DM大鼠肾小管AngⅡ、TGF-β1表达显著高于正常组,在DM 4周与VEGF呈正相关且三者均与FN呈正相关性。结论:DM大鼠肾小管VEGF表达上调,可能介导DN蛋白尿的产生;AngⅡ、TGF-β1可能同VEGF一起共同参与糖尿病肾脏纤维化过程。     

中药三七抑制二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌血管生成的研究

目的：研究中药三七抑制二乙基亚硝胺（ DEN ）诱发大鼠肝癌血管生成的作用。方法82只Wistar雄性大鼠,根据随机数字表法分为中药组、西药组、联合组、模型组,每组18只;空白组10只,以100 ppm DEN饮水法诱发大鼠肝癌模型。中药组用三七水煎剂灌胃,西药组静脉注射贝伐单抗,联合组给予三七灌胃、贝伐单抗静脉注射,模型组和空白组均给予等量的生理盐水灌胃。分别于12周末和18周末分批处死大鼠,分析中药组、西药组、联合组、模型组和空白组大鼠肝标本,检测大鼠肝细胞癌血管内皮生长因子（ VEGF ）、血管生成素-1（Ang-1）、血管生成素-2（Ang-2）、血管生成素-2受体（Tie-2）、缺氧诱导因子-1α（Hif-1α）表达水平及肝癌组织微血管密度（ MVD）。结果12周末及18周末时Ang-1 mRNA在中药组、西药组、联合组较模型组肝癌组织中表达均上调,而Ang-2、Tie-2、HIF-1α及VEGF mRNA表达均下调（ P＜0．05）。联合组、西药组、中药组的MVD也均较模型组明显减少（ P＜0．05）。结论三七在HCC肿瘤血管生成和进展中可能通过抑制Ang-2、Tie-2 HIF-1α及VEGF而发挥预防作用。     

黄芪多糖对糖尿病大鼠神经肽Y及其Y_2受体表达的影响

目的：探讨黄芪多糖（APS）对糖尿病大鼠肾脏神经肽Y（NPY）及其Y2受体（Y2R）表达的影响。方法：采用腹腔注射链脲佐菌素（STZ）制备糖尿病大鼠动物模型,随机分为对照组、糖尿病组和黄芪多糖干预组;采用放射免疫法检测血浆和肾皮质NPY水平,实时荧光定量PCR方法检测肾皮质NPYmRNA的表达,免疫组织化学方法检测肾皮质Y2R蛋白表达,同时检测大鼠的血糖、尿白蛋白排泄率（UAER）、肾重/体重。结果：①APS干预能显著削弱糖尿病大鼠血糖、UAER和肾重/体重的增加;②APS干预后显著降低糖尿病大鼠血浆和肾皮质NPY水平（P〈0.01）;③APS干预组大鼠肾皮质NPYmRNA和Y2R蛋白表达显著低于糖尿病组（P〈0.05）。结论：APS对糖尿病肾病的保护作用机制可能与下调肾脏NPY及其Y2R的表达有关。     

血管生成素2在大鼠内毒性急性肺损伤中的作用与机制研究

目的：探讨血管生成素-2(Ang-2)在脂多糖(LPS)致大鼠急性肺损伤(ALI)时的表达及其机制。方法48只清洁级SD大鼠随机分为正常对照组、1 mg/kg LPS组、5 mg/kg LPS组和10 mg/kg LPS组,每组12只。 LPS组尾静脉注射不同剂量LPS复制ALI模型,对照组注射同等体积生理盐水,留取肺组织标本,观察肺湿/干重( W/D)比值、HE染色光镜观察肺组织标本病理改变并进行肺损伤评分,各组ELISA法检测血浆中Ang-2与血管内皮生长因子( VEGF)的表达,Westernblot方法检测肺组织中Ang-2的蛋白表达情况。结果 LPS注射进入大鼠尾静脉6 h后,光镜下可见肺组织内的炎性细胞浸润,肺泡隔增宽,肺间质水肿和肺结构破坏等病理改变;LPS各组的肺损伤评分与W/D比值明显高于对照组(P<0．05);LPS不同剂量组血浆中Ang-2与VEGF的表达水平较对照组明显增高(P<0．05),血浆中Ang-2的表达与VEGF、肺损伤评分呈正相关(r=0．826,P<0．05;r=0．775,P<0．05);LPS不同剂量组与Ang-2蛋白的表达水平呈现剂量效应关系(P<0．05)。结论 Ang-2参与大鼠ALI的发病过程,且Ang-2水平增高与ALI严重程度有关。