夏枯草提取物体外诱导EL-4细胞凋亡的实验研究

目的:检测夏枯草提取物对EL-4细胞(小鼠T细胞性淋巴瘤白血病细胞株)体外抗肿瘤活性并探讨其诱导EL-4细胞凋亡的特点。方法:应用MTT法检测夏枯草提取物对EL-4细胞的体外抗肿瘤活性,并绘出其生长曲线;倒置显微镜和HE染色观察细胞用药前后形态学变化;琼脂糖凝胶电泳法及TUNEL法检测夏枯草提取物对EL-4细胞的诱导凋亡作用。结果:夏枯草提取物对EL-4细胞有显著的增殖抑制作用,IC50值为23.67μg/mL;琼脂糖凝胶电泳结果显示实验组出现明显的DNA梯形凋亡带而空白对照组没有出现;TUNEL结果显示夏枯草组EL-4细胞经染色后胞核中出现棕黄色颗粒或核周出现棕黄色半月形深染区,而空白对照组则仅有个别细胞出现胞核棕黄色深染。结论:夏枯草提取物对EL-4细胞有显著的体外抗肿瘤活性,诱导凋亡可能是其抗肿瘤的主要机制之一。     

夏枯草提取物作用Jurkat细胞的蛋白质组学研究

目的:研究夏枯草提取物作用于Jurkat细胞后蛋白质组的变化.方法:体外培养Jurkat细胞,用MTT法观察不同浓度夏枯草提取物对细胞的增殖抑制作用.加入20 μg/mL夏枯草提取物作用于细胞48 h,提取总蛋白,进行双向电泳测定,凝胶银染显色,用ImageMaster 2D Platium 5.0软件对获得的蛋白图谱加以分析,寻找差异表达的蛋白质.切取差异点,胶内酶切后进行MALDI-TOF-MS分析和数据库搜索,实现对蛋白点的定性鉴定.结果:夏枯草提取物可显著抑制Jurkat细胞的生长,且具有一定的量效关系.经双向电泳和质谱后,成功鉴定了11个蛋白质,包括glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase、coagulation factor VII、Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein L、heat shock 70 kDa protein 8 isoform 2、immunoglobulin heavy chain variable region、heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2/B1、heterogeneous nuclear ribonucleoprotein L(为heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2/B1不同亚型)、zinc finger protein 43、chaperonin containing TCP1、subunit 6A (zeta 1)、isoform CRA_b.结论:夏枯草提取物可显著抑制Jurkat细胞的生长,并引起Jurkat细胞蛋白质组的改变,这可能是夏枯草提取物抗肿瘤作用的机制之一.     

夏枯草注射液诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的探讨夏枯草注射液体外抗白血病作用,为临床应用夏枯草注射液治疗白血病提供实验依据。方法采用M TT法测定夏枯草注射液对K 562细胞的增殖抑制率,计算出IC50值;绘制夏枯草注射液(50、100 m g/mL)作用于K 562细胞的生长曲线。用倒置显微镜、姬姆萨染色法、M TT染色法光镜下观察细胞形态,台盼蓝拒染法、流式细胞仪P I染色观察夏枯草注射液对K 562细胞的促凋亡活性,用免疫细胞化学法检测夏枯草注射液对凋亡相关基因bcl-2和bax蛋白表达的影响,并用图文分析系统进行定量分析。结果夏枯草注射液对K 562细胞增殖具有明显的抑制作用,且在一定的剂量范围内抑制作用具有明显的剂量依赖性(r=0.985 0),IC50为0.113 m g/mL。夏枯草注射液(50 m g/mL)作用于K 562细胞后,倒置显微镜、姬姆萨染色、M TT染色光镜下观察,均可见典型的凋亡细胞的形态学特征。流式细胞仪检测结果显示,处理组细胞凋亡率[(37.15±1.46)%]明显高于对照组细胞凋亡率[(5.56±0.68)%](P<0.01)。夏枯草注射液(50 m g/mL)作用于K 562细胞48 h,bcl-2蛋白表达增强,而bax表达减弱,与对照组相比差异显著(P<0.01)。结论夏枯草注射液可明显抑制K 562细胞增殖,可望成为新的抗白血病药物,诱导K 562细胞凋亡可能是其发挥抗肿瘤作用的机制之一。     

夏枯草对Raji细胞生长和凋亡相关基因蛋白表达的影响

目的:探讨夏枯草体外抗淋巴瘤的作用,为临床应用夏枯草治疗淋巴瘤提供实验依据。方法:1.用MTT法测定夏枯草注射液对Raji细胞的生长抑制率,计算出IC50值。同时,用MTT法绘制两种浓度夏枯草注射液(50mg/m l,100 mg/m l)作用于Raji细胞的生长曲线。2.用倒置显微镜、姬姆萨染色法、MTT染色法光镜下观察细胞形态,用免疫细胞化学法检测夏枯草注射液对凋亡相关基因bc l-2、bax蛋白表达的影响,并用图文分析系统进行定量分析。结果:1.夏苦草注射液对Raji细胞生长具有明显的抑制作用,IC50(实际夏枯草浓度)为0.118 mg/m l,且在一定的剂量范围内夏枯草对Raji细胞的抑制作用具有明显的剂量依赖性,相关系数为0.97。2.夏枯草注射液(50mg/m l)作用于Raji细胞后,倒置显微镜,姬姆萨染色,MTT染色光镜下观察,均可见典型的凋亡细胞的形态学特征。免疫细胞化学结果显示,50 mg/m l夏枯草注射液作用于Raji细胞48 h后,bc l-2蛋白表达增强,而bax表示减弱,与对照组相比有显著性差异(P<0.01)。结论:夏枯草可明显抑制Raji细胞增殖,可望成为新的抗淋巴瘤药物,诱导Raji细胞凋亡可能是其发挥抗肿瘤作用的机制之一。     

附子提取物诱导B淋巴细胞凋亡的实验研究

恶性肿瘤是当前威胁人类健康和生命的严重疾病。化学药物治疗（化疗）作为目前治疗恶性肿瘤的重要手段之一，在延长患者生存期和提高疗效方面起着重要的作用，但化学药物非特异性杀灭肿瘤细胞的作用导致的对正常细胞及脏器功能损害，且有诱发继发性肿瘤的危险，仍无法避免。分化与凋亡是肿瘤化学防治中的新思路，     

青蒿琥酯对T细胞淋巴瘤细胞株凋亡诱导作用的实验研究

目的：探讨青蒿琥酯对T细胞淋巴瘤细胞株Jurkat细胞的凋亡诱导作用及其可能的作用机制。方法：采用Mrrll比色法检测青蒿琥酯对Jurkat细胞体外生长的抑制作用;细胞形态学、DNA琼脂糖凝胶电泳、DNA的PI染色等观察和检测Jurkat细胞的凋亡;Western-blot法检测Jurkat细胞凋亡过程中Bcl-2、Bax、Caspase-8和ICAD蛋白表达水平的变化。结果：青蒿琥酯对Jurkat细胞的生长有明显的抑制作用,且生长抑制率与药物作用浓度呈正相关（P〈0．01）,呈浓度依赖性;其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;随药物浓度的增高Bcl-2和ICAD蛋白表达量逐渐下降,而Bax蛋白表达上调,Caspase-8蛋白出现明显的剪切激活带。结论：青蒿琥酯具有诱导Jurkat细胞凋亡作用,既能通过线粒体途径又能通过外源性途径诱导Jurkat细胞凋亡。     

夏枯草提取物对T淋巴瘤模型小鼠免疫机制的调控效果

目的:探讨夏枯草提取物对T淋巴瘤细胞模型小鼠抑瘤作用及其对T淋巴瘤EL-4细胞生长的影响。方法:优选BALB/C小鼠30只为研究对象,通过腹腔注射EL-4瘤株建立T淋巴瘤细胞小鼠模型。随机将其分为健康对照组、低剂量夏枯草、中剂量夏枯草、高剂量夏枯草、环磷酸胺组以及T淋巴瘤模型组,每组小鼠各5只。分别应用TUNEL法、MTT法、DNA琼脂糖凝胶电泳法分析夏枯草提取物对模型小鼠抑瘤率、细胞凋亡情况及细胞凋亡率的影响。结果:(1)体重分析:夏枯草中、高剂量组用药后小鼠体重与正常对照组无统计学意义(P>0.05),环磷酸胺组小鼠与对照组相比体重显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)抑瘤率:夏枯草提取物中、高剂量组抑瘤率高于低剂量组及环磷酸胺组,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)TUNEL染色面积分析:夏枯草低剂量组及环磷酸胺组TUNEL染色中多见细胞核呈黄色浓染区,而中高剂量组及空白对照组仅出现个别棕黄色染色,且低剂量组及环磷酸胺组阳性区分光密度、阳性区面积、阳性平均灰度量化高于中高剂量组及空白对照组(P<0.05)。(4)Bax蛋白及BC2蛋白表达:夏枯草提取物中高剂量组与环磷酸胺组相比,Bax蛋白表达增加,而BC2蛋白表达上升,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:夏枯草提取物能有效抑制T淋巴瘤细胞生长,促进细胞肿瘤细胞凋亡,其作用机制可能与其调控Bax蛋白及BC2蛋白表达有关。     

夏枯草促人结肠癌细胞凋亡的实验观察

目的：观察夏枯草对人结肠癌细胞凋亡的影响。方法：以人结肠癌细胞（HT-29）为研究对象,观察不同浓度的夏枯草（0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml）对HT-29细胞的影响,采用MTT检测细胞增殖抑制率,分别应用RT-PCR、分光光度法检测Bcl-2、Bax基因表达和Caspase-3的活性。结果：与空白对照组（0mg/ml）比较,3个夏枯草药物组（0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml）对HT-29细胞均有抑制增殖和促进凋亡作用,且有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）,并呈现明显的时间、剂量依赖。结论：夏枯草对人结肠癌细胞（HT-29）有促进凋亡作用。     

维吾尔医成熟及清除剂诱导T淋巴瘤细胞凋亡的研究

本应用体外细胞培养、流式细胞仪及琼脂糖凝胶电泳的方法分析了维吾尔医三种异常体液的成熟剂及清除剂6种复方作用后T淋巴瘤细胞（Jurkat T clone）的细胞周期分布及核DNA降解，并以地塞米松为对照。结果表明，不同体液的成熟剂与清除剂作用特点各异。异常黑胆质的成熟剂与清除剂及异常粘液质的成熟剂通过阻止T淋巴瘤细胞进入S期而抑制其DNA合成，但诱导的凋亡细胞数非常少，不够用于琼脂糖DNA核酸电泳定性方法检测。故认为上述三种复方有诱导体内诱变细胞及增强机体免疫功能的作用。     

华蟾素注射液对Burkitt’s淋巴瘤细胞Raji体外增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的 探讨华蟾素注射液对Burkitt’s淋巴瘤细胞Raji体外增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法 将Raji细胞分为空白对照组、华蟾素注射液组,空白对照组加入10μL培养基,华蟾素注射液组分别加入培养基稀释液10μL(稀释配比分别为:注射液原浓度的1/10、1/20、1/40、1/50、1/100、1/200、1/400),应用细胞增殖检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)、流式细胞术及活细胞成像等方法检测三个时间点(12小时、24小时、48小时),不同浓度华蟾素注射液对Raji细胞生长的影响。结果 CCK-8结果显示,与空白对照组相比,华蟾素注射液组可明显抑制Raji细胞的增殖且呈浓度依赖性;流式检测显示,与空白对照组相比,华蟾素注射液组将Raji细胞阻滞于G0/G1期和S期,阻止细胞进入G2/M期,并促进Raji细胞的凋亡。结论 华蟾素注射液可明显抑制人Burkitt’s淋巴瘤细胞Raji的增殖,阻滞细胞于G1期和S期,并促进Raji细胞的凋亡,发挥其抗肿瘤作用。     

夏枯草的化学成分

目的：研究夏枯草地上部位（除去果穗）的化学成分。方法：运用各种色谱方法进行化学成分的分离纯化,用理化方法解析其化学结构。结果：从该植物地上部位中分得12个化合物,均为五环三萜和三萜皂苷类成分,经与文献理化常数和波谱数据对照,分别为：乌苏酸（1）,齐墩果酸（2）,白桦酯酸（3）,2α,3α-二羟基-乌苏-12-烯-28-酸（4）,2α,3α,19α-三羟基-乌苏-12-烯-28-酸（5）,2α,3β-二羟基-乌苏-12-烯-28-酸（6）,2α,3α,23-三羟基-乌苏-12-烯-28-酸（7）,2α,3β,24-三羟基-齐墩果-12-烯-28-酸（8）,2α,3α,19α,24-四羟基-乌苏-12-烯-28-酸-β-D-吡喃葡萄糖苷（9）,2α,3β,19α,23-四羟基坞苏-12-烯-28-酸-β-D-吡喃葡萄糖苷（10）,2α,3α,24-三羟基-齐墩果-12-烯-28-酸（11）,和2α,3α,24-三羟基-乌苏-12-烯-28-酸（12）。结论：其中化合物3、9和10为首次从该植物中分离得到,化合物5、7和8为首次从该属植物中分离得到。     

夏枯草膏治疗原发性开角型青光眼的临床观察

目的观察夏枯草膏治疗原发性开角型青光眼的临床疗效。方法选择符合纳入标准的原发性开角型青光眼患者共30例(60只眼),比较患者服用夏枯草膏前后的视力、眼压、视野及临床症状。结果服用夏枯草膏前后患者的视力差异没有显著性(P>0.05);眼压及视野平均光敏感度(MS)和平均缺损(MD)的改变差异有显著性(P<0.05);多数患者的临床症状有明显改善。结论夏枯草膏对于治疗原发性开角型青光眼有一定的临床疗效,作用机理有待进一步研究。     

不同产地夏枯草药材HPLC特征图谱

目的:建立夏枯草药材高效液相色谱(HPLC)特征图谱分析方法,为科学评价夏枯草药材质量提供参考。方法:采用Diamonsil C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),甲醇-0.1%的磷酸水溶液梯度洗脱,流速1.0mL/min,检测波长210nm,柱温:30℃。所得不同样品的特征图谱用相似度评价软件进行相似度分析,用SPSS进行聚类分析。结果:建立了夏枯草的特征图谱,分析了10个产地夏枯草药材的HPLC特征图谱,经相似度分析,确定了29个色谱峰为夏枯草药材特征峰,指认了其中的8个共有峰。结论:该方法简便、准确、重现性好,研究结果初步说明了不同产地夏枯草药材的差异与相似性,为夏枯草的质量评价和质量控制提供了参考。     

不同产地夏枯草中抗非小细胞肺癌成分科罗索酸的差异比较

目的:比较不同产地夏枯草中抗非小细胞肺癌活性成分科罗索酸的含量差异。方法:通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)和吖啶橙(AO)/溴化乙啶(EB),评价科罗索酸对非小细胞肺癌细胞的增殖抑制以及凋亡作用;建立高效液相色谱法,比较14个产地夏枯草中科罗索酸的含量差异。结果:科罗索酸抑制SPC-A-1人非小细胞肺癌的生长增殖(IC50=1.05×10-6mol/L),并且诱导SPC-A-1细胞凋亡。14个产地夏枯草中科罗索酸的含量差异较大,山西产地的含量最高,河南-2产地的含量最低。结论:科罗索酸为夏枯草中的抗非小细胞肺癌的活性成分,不同产地夏枯草的科罗索酸含量差异较大。     

正交实验优选夏枯草提取工艺的研究

目的优选夏枯草的最佳提取条件。方法以齐墩果酸含量为指标,采用L3(34)正交实验,对影响超声提取的因素(乙醇浓度、乙醇用量、提取时间)进行优选。结果最佳提取条件为乙醇浓度90%,用量20倍,时间40 min。结论优选夏枯草提取工艺稳定、可行。     

双波长薄层扫描法测定夏枯草中熊果酸的含量

目的测定夏枯草中熊果酸的含量。方法薄层扫描法。结果熊果酸在0.314~1.570μg范围内与峰面积积分值线性关系良好(r=0.9992),平均回收率为99.3%,精密度实验RSD=1.86%。结论该方法可用于夏枯草的质量控制。     

夏枯草多糖抗单纯性疱疹病毒及相关免疫活性初步研究

目的探讨夏枯草多糖抗单纯性疱疹病毒(HSV)及相关的免疫作用。方法通过96孔板病毒中和实验,观察细胞致病作用(CPE),体外研究夏枯草多糖的抗病毒作用,同时通过淋巴细胞转化增殖及细胞因子(IFN-γ)诱生实验研究夏枯草多糖的免疫活性。结果夏枯草多糖各部位(20mg/ml)分别在24,48h内可减轻CPE,直接杀灭病毒作用较弱;免疫学试验表明体外均能明显促进淋巴细胞转化增殖,且有明显的剂量依赖性,并均能明显诱生IFN-γ。结论夏枯草多糖用于单纯性疱疹的治疗作用,可能不是由对病毒的直接作用引起的,而是促进淋巴细胞转化增殖和诱生干扰素等免疫调节作用的结果。     

HPLC-ESI-MS／MS鉴定夏枯草的主要化学成分

目的通过高效液相色谱电喷雾串联质谱（HPLC-ESI-MS／MS）手段鉴定夏枯草的主要化学成分。方法夏枯草采用水加热提取,提取液采用HPLC-ESI-MS／MS鉴定其所含的主要化学成分。结果通过保留时间、一级质谱和二级质谱信息从夏枯草水提液中鉴定或推测了8个主要化学成分的结构,其中5个有机酸类化合物通过对照品得到了鉴定。结论通过HPLC-ES〉MS／MS分析研究,夏枯草水提液的主要活性成分为有机酸类化合物。     

夏枯草肺癌化学预防物质基础研究思路与方法

夏枯草对肺癌具有确切疗效,但其肺癌化学预防物质基础尚未明确.结合现代先进的分离、分析以及药效筛选技术,以中药"三个层次多维结构"组分结构理论,科学地揭示夏枯草肺癌化学预防物质基础,通过总结夏枯草化学成分和与肿瘤相关的研究成果,分析肺癌化学预防研究思路方法,为中药的物质基础研究和中药新药研发提供一定的参考.