自体CIK细胞治疗对恶性肿瘤患者免疫功能和生活质量的影响

目的：探讨自体细胞因子诱导的杀伤（cytokine-induced killer,CIK）细胞对恶性肿瘤患者免疫功能和生活质量的影响。 方法： 回顾性分析在我院经过CIK细胞治疗的58例恶性肿瘤患者临床资料,流式细胞仪检测患者治疗前后外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3-CD16+ CD 56+和CD3+CD16+ CD 56+细胞的表达水平;42例患者治疗前后采用世界卫生组织生活质量测定简表(WHOQOL-BREF)分别进行问卷调查;治疗过程中监测相关的不良反应。 结果： 患者CIK细胞培养液体取样标本中CD3+总T淋巴细胞、CD3+CD4+T辅助淋巴细胞以及CD3+CD8+T抑制淋巴细胞的亚群水平分别为（8279±11.98）%、（30.32±11.23）%和（49.10±11.65）%,CD4+/CD8+的比值为0.67±0.34,而CD3-CD16+CD56+NK细胞和CD3+CD16+CD56+CIK细胞亚群水平分别为（16.58±11.83）%和（13.74±8.66）%。与治疗前相比,治疗后的患者外周血中CD3+总T淋巴细胞亚群、CD3+CD4+T辅助淋巴细胞亚群、CD3+CD8+T抑制淋巴细胞亚群和CD3+CD16+ CD 56+CIK细胞亚群水平均明显升高(P<0.05),CD3-CD16+ CD 56+NK细胞亚群水平较治疗前下降(P<0.05)。经过CIK细胞治疗后,患者的生理、心理、社会关系和环境关系均得到很好的改善(P<0.05)。自体CIK细胞治疗过程中不良反应发生率低,均可控制。 结论： 自体CIK细胞治疗增强了患者的免疫功能,改善了患者的生活质量,且不良反应较轻。     

弥漫大B细胞淋巴瘤外周血CD13+CD4+CD25hi调节性T细胞的表达及其临床意义

目的 探讨CD13+CD4+CD25hi调节性T细胞(Treg细胞)在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者外周血中的表达水平及其临床意义.方法 采用流式细胞术检测58例初诊DLBCL患者及30名健康对照者外周血CD13+CD4+CD25hi Treg细胞亚群在Treg细胞中的表达水平,并分析其与各临床指标的关系.结果 初诊DLBCL患者外周血CD13+CD4+CD25hi Treg细胞的表达高于健康对照者,两者差异有统计学意义[(36.37±11.89)%比(9.03±2.10)%,t=7.168,P<0.001].国际预后指数(IPI)评分3~5分的初诊DLBCL患者外周血CD13+CD4+CD25hi Treg细胞表达水平高于0~2分的患者,两者差异有统计学意义[(44.28±10.10)%比(21.51±6.23)%,t=ˉ9.347,P=0.03].Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期DLBCL患者外周血CD13+CD4+CD25hi Treg细胞表达水平分别为(19.48±1.34)%、(33.98±8.03)%、(47.89±8.25)%,三者差异有统计学意义(F=38.363,P<0.001).而不同年龄、性别、乳酸脱氢酶(LDH)水平患者之间外周血CD13+CD4+CD25hi Treg细胞表达水平差异均无统计学意义(均P>0.05).结论 CD13+CD4+CD25hi Treg细胞亚群在DLBCL患者外周血中的表达水平明显升高,并与患者临床分期及预后相关.     

细胞因子诱导激活的杀伤细胞联合化疗治疗晚期结直肠癌的临床观察

 目的 评价细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）联合化疗治疗晚期大肠癌的临床疗效。方法 取外周血50 ml,分离单个核细胞,体外经IL-2、IFN-γ、抗CD3单抗、IL-1刺激培养8天后获得CIK细胞。CIK联合化疗组、行单纯化疗的同期配对晚期大肠癌组患者各50例,比较近期疗效及生存率,流式细胞术检测回输CIK前后患者免疫学指标,并观察其生活质量改善情况及不良反应。结果 CIK细胞治疗前患者外周血中CD3+、CD4+、CD8+和NK细胞比例分别为54.779±14.228%、30.821±11.554%、16.676±6.256%、18.705±9.347%,治疗后分别为65.236±14.901%、37.292±8.880%、25.229±6.711%、22.950±8.9323%,较治疗前均显著提高(P<0.05);CIK联合化疗组患者生活质量明显改善,不良反应轻微;CIK联合化疗组的疾病控制率(DCR)率为64%（32/50）高于单纯化疗组的40%（20/50）(P<0.05),CIK联合化疗组与单纯化疗组生存率差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 CIK联合化疗可增强晚期大肠癌患者免疫功能,提高患者生活质量,有较好的临床疗效。     

CIK细胞治疗晚期大肠癌的临床研究

目的观察细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)治疗晚期大肠癌的疗效。方法经确诊并采用标准治疗方案治疗的晚期大肠癌患者30例作为观察组,取外周血分离单个核细胞(PBMC),体外细胞因子诱导培养CIK细胞,流式细胞仪检测细胞表型,接受CIK细胞免疫治疗。以30例采用标准治疗方案治疗而未经CIK治疗的晚期大肠癌患者作为对照组。结果观察组经CIK细胞治疗后检测T淋巴细胞亚群,发现CD3+、CD3+CD4+、CD56+(NK)效应细胞的比例和CD4+/CD8+比值显著上升,CD3+CD56+效应细胞比例下降,无进展生存期为(50.9±10.8)个月,生存期为(62.5±13.8)个月;对照组无进展生存期为(26.2±8.3)个月,生存期为(35.6±10.2)个月,两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论经CIK细胞治疗后晚期大肠癌患者免疫功能增强,无进展生存期及生存期延长。     

癌症患者外周血T细胞亚群水平及临床意义

目的分析癌症患者外周血T细胞亚群测定值的特点、影响因素及临床意义.方法采用流式细胞术(FCM)检测112例实体瘤(包括肺癌30例、乳腺癌42例、NHL40例)患者外周血中T细胞亚群水平与40例正常对照比较研究.结果患者外用血CD+3、CD+4明显减少,而CD+3明显增加,CD+4/CD+8比值明显下降,与正常组比较差异具有高度显著性(P＜0.01);患者性别、年龄、临床分期及疾病种类不影响其表达,差异无显著性(P＞0.05).结论肿瘤患者存在细胞免疫功能紊乱,检测患者外周血T淋巴细胞亚群表达时评估患者的细胞免疫功能及疾病的诊断具有积极的临床意义.     

IL-12增强CIK细胞对食管癌EC9706细胞的杀伤活性

目的：探讨IL-12对细胞因子诱导的杀伤 (cytokine-induced killer,CIK) 细胞的表型和CIK细胞在体外对食管癌EC9706细胞杀伤活性的影响。 方法: 体外分离人外周血单个核细胞,分为两组：对照组以IFN-γ、IL-2和CD3单抗诱导培养CIK细胞;IL-12组在对照组基础上加用IL-12培养。培养至第14天,流式细胞仪检测两组CIK细胞的免疫表型;LDH释放法测定效靶比20 ∶1、30 ∶1时两组CIK细胞对EC9706细胞的杀伤活性;观察效靶比30 ∶1时,NKG2D单抗对两组CIK细胞杀伤活性的影响。 结果: IL-12组与对照组相比较,CIK细胞免疫表型的CD3+CD56+细胞比例\[(28.23±1.71)% vs (16.34±059) %, P<0.05\]、CD3+细胞及CD3+CD56+细胞中NKG2D的表达\[(77.45 ±2.15)% vs (66.87±0.73)%, (92.94±077)% vs (82.18±066)%;均P<0.05\]、CD3+细胞中穿孔素的表达\[(51.78±0.63)% vs (43.54±0.95)%,P<0.05\]都明显增强;CD3+细胞颗粒酶B表达无明显变化\[(26.90±0.67)% vs (26.76±0.33)%,P>0.05)\]。效靶比20 ∶1和30 ∶1时,IL-12组CIK细胞对EC9706细胞的杀伤活性均较对照组明显增强\[(43.92±1.67)% vs (35.34±1.22)%,(55.95±0.88)% vs (43.91±110)%;均P<005\];以NKG2D单抗阻断后,IL-12组、对照组CIK细胞杀伤活性均明显下降\[(19.72±0.56)% vs (55.95±0.88)%, (19.83 ±1.20)% vs (43.91±1.10)%;均P<0.05\]。 结论: IL-12能够上调CIK细胞NKG2D和穿孔素的表达,从而增强CIK细胞对EC9706细胞的杀伤活性。     

CIK治疗晚期肾癌患者免疫功能变化与血清胆固醇的相关性研究

摘 要：［目的］ 观察CIK细胞免疫治疗对晚期肾癌患者免疫功能的影响,分析淋巴细胞亚群与血清胆固醇的相关性。［方法］ 选取晚期肾癌患者36例,其中20例在常规治疗措施的基础上联合应用CIK细胞免疫方法进行治疗,16例为常规治疗,监测两组患者外周血中总T细胞（CD3+）、总B细胞（CD3-CD19+）、NK细胞（CD3-CD16+CD56+）辅助诱导T细胞（CD3+CD4+）、CD4/CD8比值等免疫功能指标,并进行统计学分析。［结果］ 联合CIK治疗的肾癌患者外周血中抑制/细胞毒性T细胞从24.41%±8.61%上升到44.41%±19.29%、辅助/诱导T细胞从41.09%±11.52%下降为30.15%±13.96%、CD4/CD8比值从1.95±0.95下降到0.93±0.67、CD3+HLA-DR+细胞从15.31%±10.40%上升为45.77%±31.94%、CD8+HLA-DR+细胞从10.07%±6.93%上升到36.12%±25.89%,与常规治疗组相比有统计学差异。NK细胞比率与血清总胆固醇、低密度脂蛋白和载脂蛋白B成负相关（r=-0.450,P=0.014;r=-0.469,P=0.010;r=-0.406,P=0.029）。［结论］ 采用CIK细胞免疫治疗能有效提高转移性肾癌患者的细胞免疫功能,血清胆固醇代谢可能参与调节肿瘤免疫。     

应用晚期乳腺癌患者外周血单个核细胞体外增殖诱导新型CIK细胞的实验研究

目的 应用晚期乳腺癌患者外周血来源的单个核细胞体外培养诱导产生新型(Cytokine induced killer cells,CIK)细胞的可能性,为乳腺癌患者应用自体免疫细胞治疗提供理论基础。方法 取8例晚期乳腺癌患者外周血提取单个核细胞,经体外培养诱导增殖,并应用细胞计数法和流式细胞仪检测增殖细胞表面特异性标志CD3、CD16和CD56,应用51Cr release assay及MTT方法测定其对MCF7及BT20乳腺癌细胞株的杀伤能力。应用ELISA试验方法对诱导得到的新型CIK细胞的培养上清液进行解析。结果 经过体外18天培养,平均得到8.2×10⁸个以上纯度为95.2%~98.1%的CD16⁺、CD56⁺和CD16⁺CD56⁺阳性高纯度NK细胞的新型CIK细胞,且对乳腺癌细胞株MCF7及BT20具有明显的抑制作用。结论 成功应用晚期乳腺癌外周血单个核细胞选择性扩增诱导高纯度NK细胞的新型CIK细胞,且证明其对MCF7及BT20乳腺癌细胞具有明显抑制作用,为应用自体高纯度NK细胞的新型CIK细胞为基础的过继性免疫细胞治疗乳腺癌提供理论研究基础。     

两种不同成分培养基制备CIK细胞的生物学特征

目的:采用细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cell,CIK cell)培养基(含低浓度IL-2、IFN-γ、IL-12和anti-CD3)和NK培养基(含高浓度IL-2和anti-CD3)体外刺激诱导CIK,分析CIK细胞的扩增、表型和细胞因子分泌情况。方法:健康自愿者来源的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),分别加入CIK培养基和NK培养基进行诱导培养,24 h后,换用含IL-2的1%自体血浆培养基继续诱导培养2周。在培养的第6天和第10天检测培养上清中IFN-γ的分泌情况,在培养的第10天以流式细胞术检测两组培养细胞表面CD3、CD4、CD8、CD16、CD56的表达情况。结果:CIK培养基和NK培养基均可使培养细胞在第7天时开始明显扩增,第10天时可扩增至200倍。其中,CIK培养基获得的细胞扩增倍数明显高于NK培养基,其IFN-γ分泌明显高于NK培养基组[(724.7±434.8)vs(108.9±60.6)pg/ml,P<0.01];而以NK培养基培养的细胞,CD3-CD16+CD56+细胞比例高于CIK培养基[(6.27±3.33)%vs(2.88±1.88)%,P<0.05]。结论:不同成分的CIK培养基和NK培养基均可促进CIK细胞的扩增和成熟,但呈现不同的生物学特征。     

自体DC-CIK细胞治疗晚期肾细胞癌的疗效

目的：探讨自体树突状细胞（dendritic cell,DC）激活的细胞因子诱导的杀伤（cytokine-induced killer,CIK）细胞在晚期肾细胞癌（renal cell carcinoma,RCC）治疗中的临床效果与安全性。方法：采集22例2011年7月至2012年6月期间南京医科大学附属苏州医院肿瘤内科收治的22例RCC Ⅳ期患者\[男性12例、女性10例,中位年龄60.8岁（21~79岁）\]外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,体外制备成DC-CIK细胞。流式细胞术分析DC-CIK细胞中CD3+T、CD8+T、CD4+T、NK（CD3-CD56+）和NKT（CD3+CD56+）细胞的比例,MTT法检测DC-CIK细胞对白血病K562细胞（对NK细胞敏感）和肾癌786-0细胞（对NK细胞不敏感）的杀伤活性。受试患者于常规治疗（手术+化疗+放疗/细胞因子治疗）结束后4周进行DC-CIK细胞治疗,每次静脉回输细胞数约（5.0±0.5）×108个,5次为1疗程,共3个疗程,分别于疗程开始前与结束后1周内监测患者外周免疫学指标（淋巴亚群、细胞因子谱）,严密观察并记录治疗过程中的不良反应。结果：DC-CIK细胞组成为CD3+细胞占（86.92±5.32）%、CD3+CD8+CD56+（NKT细胞）占（52.04±7.33）%、CD8-CD56+（NK细胞）占（785±315）%,DC-CIK细胞对786-0细胞和K562细胞的体外杀伤率相仿（效靶比为3∶1时,杀伤率分别为（16.5±1.7）%和（18.4±1.9）%,P=0.014）。患者接受DC-CIK细胞治疗后,外周血淋巴细胞亚群（CD3+T、CD4+T、CD8+T、CD3-CD56+NK细胞）比例无显著变化（P>0.05）;外周血中IL-2、IL-12和IFN-γ细胞因子水平较治疗前明显提升（均P＜0.05）,而TNF-α 和IL-10变化不明显（均P＞0.05）。2例患者发生一过性发热,持续4~6 h恢复,1例出现短期乏力。结论：DC-CIK细胞体外能有效杀伤786-0细胞和K562细胞。 输注后可提升部分RCC患者免疫水平,安全性良好,可作为晚期RCC患者辅助治疗之一。     

顺铂预处理化疗通过免疫调节增强CIK细胞对B16恶性黑色素瘤的抑制作用

目的 观察顺铂( Cisplatin,DDP)预处理化疗联合CIK细胞对B16恶性黑色素瘤的抑制作用,探讨DDP预处理化疗增强细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine - induced killer cells,CIK cells)抑瘤作用的潜在机制.方法 建立C57BL/6小鼠B16黑色素瘤模型,测量肿瘤体积,绘制...     

Cell of origin of lung cancer

Lung cancer is a devastating disease and a major therapeutic burden with poor survival rates. The discovery of rare cells with stem cell‐like properties in solid tumours is emerging as an important area of cancer research and may help explain the resistance of these tumours to current therapeutics. Despite rapid developments in cancer stem cell research in other solid tumours, progress in the lung has been hampered by an incomplete understanding of the epithelial stem cell hierarchy, the heterogeneity of disease and the lack of a suitable in vivo transplantation model to assess stem cell behaviour. In this review we critically discuss what is currently known about the role of normal stem cells and cancer‐initiating cells in lung tumour development, and briefly discuss strategies aimed at advancing the field of lung stem cell biology, with an emphasis on the design and manipulation of state‐of‐art mouse models.     

记忆性干细胞样T细胞在肿瘤治疗应用中的研究进展

记忆性干细胞样T细胞(stem memory T cells,TSCM)是最近几年发现的一个细胞亚群,约占外周血中总的CD4+T细胞和CD8+T细胞的2％～4％,是记忆性T细胞的早期分化阶段,具有记忆性细胞和干细胞的特点,基因谱介于初始T细胞和中央记忆T细胞之间.记忆性干细胞样T细胞具有自我更新和长期存活能力,这些特点使它们成为肿瘤领域关注的热点.本文将简述记忆性干细胞样T细胞的一些特点,以及它们在肿瘤治疗中的应用.     

细胞因子诱导的杀伤细胞在肿瘤治疗中的作用

细胞因子诱导的杀伤（CIK）细胞是用于肿瘤免疫治疗的主要免疫活性细胞。相关基础研究显示其对多种血液及实体肿瘤有显著杀伤活性,大量临床试验证实其对肿瘤患者有明确疗效且不良反应轻微。CIK细胞治疗肿瘤是一种前景广阔且安全的方法,因此建立规范的培养和应用标准十分重要。     

胎儿LAK细胞治疗中晚期肝癌的疗效观察

自1989年1月至1991年10月,我们应用6~7个月龄的胎儿脾脏细胞和白细胞介素-2(IL-2)共培养3天后制备成胎儿LAK细胞,静脉输注或肝动脉插管灌注治疗中晚期肝癌18例.结果疼痛减轻16例,占88.9%;食欲增加14例,占77%;临床完全缓解2例,占11%;部分缓解14例,占77%;总有效率占88.9%(16/18).而且LAK细胞治疗后患者周围血OKT_4比率升高,OKT_8比率下降,说明治疗后患者免疫功能有一定改善.结果提示:①胎儿脾脏含有丰富的LAK前身细胞;②胎儿LAK细胞治疗中晚期肝癌有明显疗效.     

苯乙酸钠处理的胃癌细胞对LAK细胞杀伤的敏感性

为了探讨分化诱导剂苯乙酸钠是否能够增强ＬＡＫ细胞的治疗效果，作者采用ＭＴＴ法分析了苯乙酸钠处理的胃癌细胞对ＬＡＫ细胞杀伤敏感性的变化。结果表明：苯乙酸钠处理的胃癌细胞ＭＫＮ－２８和ＭＫＮ－４５对ＬＡＫ细胞的杀伤敏感性均增强。另外，苯乙酸钠处理的胃癌细胞粘附ＬＡＫ细胞的活性亦增强。因此，苯乙酸钠处理的胃癌细胞对ＬＡＫ细胞杀伤敏感性的增强可能在于其增强了效靶细胞之间的识别和结合；苯乙酸钠与ＬＡＫ细胞相结合有可能增强ＬＡＫ细胞治疗肿瘤的效果。     

Formation of solid tumors by a single multinucleated cancer cell

BACKGROUND:

Large multinucleated cells (MNCs) commonly exist in tumorigenic cancer cell lines that are used widely in research. However, the contributions of MNCs to tumorigenesis are unknown.

METHODS:

In this study, MNCs were characterized in the murine fibrosarcoma cell line UV‐2237 in vitro and in vivo at the single‐cell level.

RESULTS:

The authors observed that MNCs originated from a rare subpopulation of mononuclear cells and were positive for a senescent marker, β‐galactosidase. In addition, MNCs were responsible for the majority of clonogenic activity when cultured in hard agar; they were more resistant to chemotherapeutic agents than mononuclear cells; they could undergo asymmetric division (producing mononuclear cells) and self‐renewal in vitro and in vivo; and, most important; a single MNC produced orthotopic, subcutaneous tumors (composed mainly of mononuclear cells) that gave rise to spontaneous lung metastases in nude mice.

CONCLUSIONS:

The current results indicated that the growth of MNCs may be arrested under stress and that MNCs are highly resistant to chemotherapy and can generate clonal, orthotopic, metastatic tumors. Cancer 2011. © 2011 American Cancer Society.     

干细胞niche与肿瘤干细胞产生和发展的关系

肿瘤干细胞学说认为大部分肿瘤来源于肿瘤干细胞。肿瘤干细胞与正常干细胞一样具有自我更新能力,能够产生肿瘤组织团块中的各种增殖和分化的细胞。肿瘤干细胞可能来源于正常干细胞或分化细胞。干细胞niche是干细胞生存的微环境,通过提供抑制细胞增殖和生长的信号来维持干细胞于静止状态。干细胞niche功能异常会导致niche的数量增加,以及干细胞功能异常和数量增加。肿瘤干细胞可能在异常的niche中存活,打破这种异常的niche就会削弱肿瘤干细胞的自我更新,从而抑制肿瘤的生长。靶向肿瘤干细胞异常微环境的治疗策略可能是癌症治疗的一个方向。     

实体瘤肿瘤干细胞的研究进展

干细胞与肿瘤细胞存在许多相似之处,可能是肿瘤细胞的起源细胞。在血液系统恶性肿瘤和实体瘤中均分离和鉴定出具有干细胞特征的细胞群,称之为肿瘤干细胞。它们在恶性肿瘤的发生和发展中发挥重要的作用。肿瘤可能是一种干细胞疾病,这对认识肿瘤的发病机理和有效的临床治疗具有重要的指导作用。     

自体CIK、DC-CIK与半合子DC-CIK抗肿瘤免疫反应的比较研究

Background and Objective:Cytokine-induced killer(CIK) cells and autologous dendritic cells-CIK(DCCIK) cells co-cultured with autologous dendritic cells(DCs) and CIK cells are commonly used for immunotherapy recently.We compared the anti-tumor immune response of CIK cells,autologous DC-CIK cells,and semi-allogeneic DC-CIK cells to explore a more effective anti-tumor adoptive immunotherapy approach.Met hods:Peripheral monocytes were isolated from patients with renal carcinoma,lung cancer,or maxillar...