降低S100A6基因表达对胃癌细胞生物学特性影响的研究

目的:初步探讨S100A6基因对于胃癌细胞生长、增殖状态,细胞周期,凋亡状态等生物学特性及成瘤、浸润转移能力等恶性表型的影响.方法:S100A6基因的RNAi载体通过脂质体介导法转染S100A6基因高表达SGC7901细胞,后经G418压力筛选法获得稳定转染的细胞系,经过RT-PCR法、免疫细胞化学法及Western-bloting法证实.对稳定表达株进行鉴定,而后使用流式细胞仪、生长曲线法、平板克隆形成实验法、细胞迁徙实验等方法分析稳定表达株相关生物学特性与恶性表型的变化,每种检测实验均设立RNAi载体稳定转染细胞组、IMG800空载体稳定转染细胞组和空白SGC7901细胞组.结果:稳定的S100A6基因RNAi细胞系经过RT-PCR法、免疫细胞化学法及Western-bloting法证实,mRNA抑制率可达75%左右,蛋白产物的抑制率达85%左右.与转染IMG800空载体及空白SGC7901胃癌细胞相比转染S100A6 RNAi载体的稳定表达细胞株生长减慢,各时间点细胞计数显著低于对照组(P<0.05);后两组之间亦无显著差异,细胞周期检测显示S100A6 RNA干扰组G0-G1期比例显著高于对照组,而G2-M及S期比例显著低于对照组(P<0.05),其它各期细胞比例均无显著差异.平板克隆形成实验结果显示S100A6 RNA干扰组克隆形成率显著低于对照组(P<0.05);,细胞迁徙实验结果提示S100A6 RNA干扰组穿膜率显著低于对照组(P<0.05).结论:S100A6基因可能具有促进细胞生长增殖作用,同时可影响细胞周期,增加处于分裂期细胞的比例可能具有促进细胞分裂作用,并可促进胃癌细胞侵袭转移.降低S100A6基因表达可能抑制胃癌细胞的恶性生物学行为.     

NDRG2对A549肺癌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨NDRG2(N-myc downstream regulated gene 2)对于肺癌细胞系增殖的抑制作用。方法:将NDRG2基因转染进肺癌细胞系A549,采用G418筛选出稳定高表达NDRG2的亚克隆细胞系A549/NDRG2-flag并将仅转染载体的A549/pcDNA3.1(+)作为阴性对照。Western blot检测NDRG2在转染细胞中的表达水平。MTT、平板克隆形成试验检测转染前后细胞增殖作用的差异,流式细胞仪检测转染后细胞的周期分布状态。结果:成功构建高表达NDRG2的亚克隆细胞系A549/NDRG2-flag。证实了NDRG2的高表达能够抑制肺癌细胞系的增殖(P<0.01),使肺癌细胞的细胞周期阻滞在G0/G1期。结论:NDRG2高表达后能够有效抑制肺癌细胞系A549增殖并阻滞细胞周期滞留在G0/G1期。     

磷脂酰肌醇-3激酶p55γ-N末端24个氨基酸抑制结肠癌细胞增殖的作用

背景与目的:p55γ是磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinase,P13K)的调节亚单位之一,在调节P13K活性上具有重要的作用.本研究旨在观察P13K的一个调节亚基p55γ-N末端24个氨基酸抑制结肠癌细胞增殖的作用.方法:构建含有P13K-p55γ-N末端24个氨基酸的腺病毒载体Ad-N24p55-GFP及对照病毒Ad-GFP,以其感染结肠癌HT29细胞.流式细胞仪检测细胞周期进程,应用BrdU掺入法检测其对细胞DNA合成的影响,通过建立体内肿瘤裸鼠移植瘤模型进一步证实Ad-N24p55-GFP的抗肿瘤作用.结果:对照腺病毒Ad-GFP感染的细胞中Go/G1期细胞为65.11%,S期和G2/M期细胞数分别为17.37%和17.51%;而带有插入目的基因的腺病毒Ad-N24p55-GFP感染后的细胞Co/G1期细胞增至73.39%,S期和C2/M期细胞减少至15.08%和11.13%.BrdU掺入法结果显示BrdU阳性的细胞数由24.82%降至9.27%(P＜0.05).HT29细胞裸鼠移植瘤模型局部应用Ad-N24p55-GFP后肿瘤生长显著减慢,其瘤重明显低于空白对照组和腺病毒对照组[(0.32±0.08)g vs.(0.67±0.30)g,(0.72±0.28)g,P＜0.05].结论:过表达P13K-p553γ-N末端24个氨基酸可有效阻滞HT29细胞周期进程,抑制细胞DNA合成;并可有效抑制结肠癌裸鼠移植瘤模型的肿瘤生长.     

Rb94对人肺腺癌细胞系A549放射增敏作用的实验研究

目的 构建人视网膜母细胞瘤基因(Rb94)真核表达载体,观察其对人肺腺癌细胞系A549的放射增敏作用并探讨其机制.方法 构建重组表达质粒pIPES-Rb94,经脂质体转染A549细胞、G418筛选获得稳定转染的细胞系.细胞计数法绘制生长曲线、计算细胞倍增时间;实时RT-PCR检测hTERT、Bcl-2mRNA的表达;成克隆实验检测pIRES-Rb94对A549细胞放射敏感性影响,计算放射增敏比(SER);流式细胞仪分析细胞周期.结果 成功构建pIRES-Rb94质粒,转染A549细胞后获得稳定转染细胞系pIRES-Rb94-A549.与A549细胞相比,pIRES-Rb94-A549细胞倍增时间延长(31.5h:39.5 h;t=5.15,P<0.01);hTERT、Bcl-2 mRNA表达下降(0.02:1.00;t=18.99,P<0.01;0.01:1.00;t=13.73,P<0.01);G2+M期细胞增加(35.91%:4.53%;t=36.78,P=0.00),G0+G1期和S期细胞减少(47.02%:74.07%;t=11.71,P=0.00和17.07%:22.32%;t=2.30,P<0.05);由D0值计算的SER为1.30.结论 Rb94对A549细胞具有明显放射增敏作用,其机制可能是G2+M期阻滞作用以及下调hTERT、Bcl-2 mRNA表达,并可能通过调节细胞周期来影响细胞增殖.     

外源性RGS16基因稳定转染对胶质瘤C6细胞生长的影响

背景与目的:有研究表明野生型p53可以诱导RGS16表达,而RGS16可能与胶质瘤的发生有关。本研究旨在探讨RGS16基因转染对大鼠胶质瘤C6细胞生长的影响。方法:构建真核表达载体pIRES2-EGFP-RGS16,脂质体法转染C6细胞,经G418筛选后荧光显微镜观察细胞中增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorscentprotein,EGFP)的表达,RT-PCR证实RGS16的mRNA表达,免疫细胞化学方法检测细胞中RGS16蛋白表达。最后利用流式细胞仪、生长曲线、平板克隆形成等方法研究RGS16基因对胶质瘤细胞周期、生长及增殖的影响。结果:成功构建了稳定表达RGS16和表达空载体的细胞系C6-RGS16、C6-GFP。C6-RGS16、C6-GFP和C6经流式细胞仪检测S期的细胞比例分别为28.5%、18.9%和14.3%(P<0.05);生长曲线表明C6-RGS16生长的速度明显快于C6-GFP及C6,但其平板克隆形成率分别为12%、25%和25%(P<0.05)。结论:RGS16促进C6细胞周期从G1期向S期过渡,加快细胞生长速度,但是并不促进细胞克隆形成。     

PTEN基因转染对卵巢癌A2780细胞周期和增殖能力影响的研究

目的:研究外源性PTEN基因稳定转染对人卵巢癌A2780细胞周期和增殖能力的影响。方法:构建PTEN基因的野生型真核表达质粒pEGFP-C1-WT-PTEN和突变型表达质粒pEG-FP-C1-C124A-PTEN,以脂质体介导法转染体外培养的人卵巢癌细胞株A2780,同时转染空载体pEGFP-C1质粒,以未转染细胞为对照(转染成功后分别命名为WT-PTEN/A2780组、C124A-PTEN/A2780组、pEGFP-C1/A2-780组和A2780组。应用RT-PCR、Western blot方法分析目的基因及其蛋白表达,并采用MTT法和流式细胞术检测细胞增殖和细胞周期。结果:与对照细胞相比,WT-PTEN/A2780组和C124A-PTEN/A2780组PTEN mRNA及PTEN蛋白出现明显的高表达,与对照组细胞相比差异有统计学意义(t=5.300,P=0.034;t=11.963,P=0.007;t=7.869,P=0.016;t=22.421,P=0.002);WT-PTEN/A2780组细胞生长速度明显慢于未转染A2780细胞,然而C124A-PTEN/A2780组和pEGFP-C1/A2780组细胞生长速度无明显变化。流式细胞术显示WT-PTEN/A2780细胞G1期细胞数增加到(71.18±4.34)%,S期细胞数变为(17.48±1.96)%,与对照组相比差异有统计学意义(t=19.508,P=0.003;t=25.354,P=0.002),提示从G1期到S期发生抑制。结论:野生型PTEN可依赖其磷酸酶活性使A2780细胞在G1/S期发生细胞周期阻滞,并抑制A2780细胞增殖。     

蛋白激酶A活性升高对人肺腺癌A549细胞株增殖的影响

目的 探讨蛋白激酶A(PKA)活性升高对人肺腺癌A549细胞株增殖的影响.方法 用20、40、80μmol/L PKA活性激动剂Forskolin诱导A549细胞后,用噻唑蓝(MTT)比色法检测Forskolin作用下A549细胞增殖的变化;用流式细胞仪检测Forskolin作用下细胞周期分布的变化.结果 在Forskolin作用下,PKA活性升高使A549细胞的增殖显著下降(P<0.05);在40μmoL/L Forsko-lin作用A549细胞24 h后,流式细胞仪检测实验组G0/G1期细胞(82.14±1.18)%,S期细胞(5.45±0.22)%,G2/M期细胞(12.33±1.21)%;对照组G0/G1期细胞(64.50±2.18)%,S期细胞(8.54±0.45)%,G2/M期细胞(26.31±1.08)%,两组间比较差异有统计学意义(G1期P<0.05,S期P<0.05,G2期P<0.05).结论 PKA活性升高能够显著降低人肺腺癌A549细胞株的活力,使其处于G1期阻滞,细胞增殖受到明显抑制.     

Survivin短发夹状RNA对宫颈癌细胞系HeLa增殖和凋亡的影响

目的:观察survivin基因短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)对宫颈癌细胞系HeLa增殖和凋亡的影响。方法:通过脂质体介导的细胞转染技术将含人survivin基因shRNA的重组真核表达质粒pSilenc-er2.1-s2转染宫颈癌细胞系HeLa,G418筛选阳性克隆,半定量PCR、Western blot分别检测survivin mRNA和蛋白表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期变化,流式细胞仪、Hoechst染色观察细胞凋亡情况。结果:G418筛选34天后出现阳性克隆,与转染阴性对照质粒(HeLa-NC)、空载质粒(HeLa-U6 neo)及未转染(HeLa)细胞比较,转染pSilencer2.1-s2质粒者survivin mRNA和蛋白表达明显下降,表达抑制率分别为:62.8%和60.1%;细胞增殖受到抑制,最高细胞生长抑制率为:(57.8±2.1)%(P<0.05);细胞周期发生显著变化,细胞被阻滞于G0/G1期,占(72.7±3.1)%(P<0.05),G2/M期明显减少,占(5.1±2.9)%(P<0.05);细胞凋亡率为:(29.2±1.4)%,明显升高(P<0.05)。结论:Survivin基因shRNA可通过下调HeLa细胞中survivin的表达,抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

livin基因沉默对人恶性黑素瘤A375细胞周期和凋亡的影响

目的:探讨小干扰RNA(small interfening RNA, siRNA)沉默livin基因对人恶性黑素瘤A375细胞周期和凋亡的影响.方法:构建2个针对人源livin基因的siRNA表达质粒,并通过脂质体介导转染人恶性黑素瘤A375细胞株,利用荧光定量PCR检测livin mRNA的表达情况,Annexin Ⅴ-PE FCM法检测A375细胞凋亡情况,PI单染FCM法检测细胞周期情况.结果:成功构建livin siRNA表达质粒,转染siRNA-1和siRNA-2后48 h 的A375细胞中 livin mRNA表达量较空白对照组分别下降17%和42%,72 h分别下降71%和61%.转染siRNA-1和siRNA-2后48 h 的A375细胞凋亡率(29.45%和33.25%)及72 h细胞凋亡率(33.52%和38.18%)均高于空白组(7.95%和9.70%)(P<0.05).siRNA-2可引起G0/G1期升高,S期下降(P<0.05),siRNA-1作用不明显(P>0.05).结论:siRNA-1、2体外均能有效抑制livin mRNA的转录,促进人恶性黑素瘤A375细胞凋亡.siRNA-2表达质粒能使人恶性黑素瘤A375细胞周期出现G0/G1期阻滞,细胞增殖受到抑制.     

鼻咽癌相关基因NAG7对鼻咽癌细胞周期及凋亡的影响

背景与目的NAG7基因是我室克隆的鼻咽癌相关的肿瘤抑制候选基因,其功能与作用机制目前尚不清楚.研究鼻咽癌相关的潜在抑瘤基因NAG7对鼻咽癌细胞系(HNE1)细胞周期和细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法采用脂质体转染技术将NAG7基因导入HNE1细胞,建立稳定表达NAG7的细胞株,Northernblot分析转染细胞NAG7基因的表达,并采用流式细胞技术检测细胞周期、细胞周期素及细胞凋亡的改变,并用westernblot验证.结果NAG7基因重表达的HNE1细胞与空载体转染的HNE1和HNE1细胞相比G0/G1期细胞数增加(P<0.05),S期细胞数减少;细胞凋亡数目增加(P<0.05);细胞周期素A、D1、E表达明显降低(P<0.05),细胞周期素B1表达降低,Westernblot检测亦证实cyclinD1和cyclinE表达明显下调.结论NAG7的重表达导致细胞周期素表达下调,从而延缓细胞经G1期进入S周期及诱导细胞凋亡增加进而抑制NPC细胞的过度增殖.     

蛋白激酶C抑制剂Staurosporine对人胃癌细胞周期的影响

背景与目的:蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)已成为一个潜在的有价值的抗肿瘤治疗靶点。本研究旨在探讨PKC抑制剂Staurosporine(ST)对人胃癌细胞株MGC-803和SGC-7901的增殖抑制、凋亡诱导及对其细胞周期的影响。方法:在用台盼蓝拒染法检测细胞增殖抑制率的基础上,通过细胞形态学观察凋亡小体,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期变化。结果:ST抑制MGC-803细胞生长,24h的IC50为54ng/ml,48h的IC50为23ng/ml;ST抑制SGC-7901细胞的生长,24h的IC50为61ng/ml,48h的IC50为37ng/ml。40、60、100ng/mlST分别作用MGC-803细胞24h后,发现G0/G1期细胞分别为(23.6±1.8)%、(11.6±0.7)%、(3.3±0.2)%,而对照组为(54.3±3.1)%;G2/M期细胞分别为(22.6±4.0)%、(35.5±0.4)%、(36.8±5.5)%,而对照组为(13.5±0.2)%。40、60、100ng/mlST分别作用于SGC-7901细胞24h后,G0/G1期细胞分别为(27.1±1.4)%、(17.0±3.4)%,(13.7±0.7)%,而对照组为(52.5±4.4)%;G2/M期细胞分别为(21.9±2.6)%、(39.5±4.9)%、(38.4±3.1)%,而对照组为(13.5±2.2)%。实验组细胞与对照组比较,ST使两种细胞G0/G1期明显减少及G2/M期明显增加(P<0.01)。200ng/mlST作用24h后两种细胞的G1期前均出现明显的凋亡峰,可诱导细胞出现典型凋亡小体。结论:ST显著降     

Proliferating status of peripheral blood progenitor cells from patients with BCR/ABL-positive chronic myelogenous leukemia.

To investigate the mechanisms behind the leukemic expansion of BCR/ABL-positive chronic myelogenous leukemia (CML), we examined the cell cycle status of hematopoietic progenitor cells from peripheral blood (PB) and bone marrow (BM) of 37 patients with newly diagnosed BCR/ABL-positive CML. We found a high proportion of 12.51 +/- 1.19% of CD34+ peripheral blood progenitor cells (PBPC) in S/G2M phase. Comparison of PB and BM from 19 cases revealed similar proliferation rates (10.74 +/- 1.41% vs 15.97 +/- 1.95%). Furthermore, even primitive CD34+/CD38- PBPC displayed high proliferation rates (17.45 +/- 2.98%) in 10 cases examined. In contrast, PBPC from 11 patients with BCR/ABL-negative myeloproliferative disorders were almost noncycling (S/G2M 1.46 +/- 0.47%). When matched pairs of PB and BM from six patients with BCR/ABL-negative myeloproliferative disorders were examined, only 0.89 +/- 0.41% of the CD34+ PBPC, but 8.29 +/- 3.13% CD34+ cells from BM were in S/G2M phase. Consistently, as compared to 19 patients with newly diagnosed BCR/ABL-positive CML, a significantly lower PB/BM ratio of CD34+ cells in S/G2M phase was found in these six patients with BCR/ABL-negative myeloprolifrative disorders. Administration of the tyrosine kinase inhibitor STI571 to 13 patients with CML in chronic phase, accelerated phase, or blast crisis lead to an inhibition of PBPC proliferation within a few days. Interestingly, CD34+ hematopoietic progenitor cells from BM remained proliferating in five cases examined, indicating that CML PBPC are more easily inhibited by STI571 as compared to CD34+ CML hematopoietic progenitor cells from BM. These data suggest that BCR/ABL leads to an enhanced cell cycle activation of CD34+ cells, which seems to be, at least in part, independent of additional factors provided by the bone marrow microenvironment.     

二烯丙基二硫对裸鼠体内人结肠癌细胞增殖的影响

背景与目的:二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)在体外可抑制多种肿瘤细胞增殖,但在体内抗肿瘤作用的研究报道较少.本实验旨在研究DADS对裸鼠体内人结肠癌SW480细胞增殖的影响.方法:建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型,实验动物分为DADS组及对照组.观察DADS作用后移植瘤体积和重量的变化,通过光镜和电镜观察移植瘤细胞形态学变化,通过免疫组织化学和形态定量图像分析系统检测瘤组织内增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白表达变化,用流式细胞术检测移植瘤细胞周期分布.结果:DADS在体内能明显抑制移植瘤的生长,相对肿瘤增殖率为49.85%;组织学分析显示DADS组瘤细胞异型性降低,核质比下降,胞浆内细胞器丰富,部分胞核呈退行性变,可见凋亡小体;免疫组化示两组移植瘤组织PCNA蛋白均有阳性表达,DADS组(149.02±4.26)与对照组(178.86±7.69)比较,裸鼠移植瘤组织内PCNA蛋白表达明显减弱(P＜0.05);流式细胞术分析显示,对照组移植瘤细胞中G2/M期细胞为18.8%,与对照组比较,DADS组G2/M期细胞(38.6%)显著增多.结论:DADS可体内抑制人结肠癌SW480细胞增殖,使癌细胞阻滞于G2/M期.     

靶向激活蛋白激酶PKR对白血病K562细胞增殖的影响及机制

背景与目的:由t(9;22)(q34;q11)导致的bcr-abl融合基因在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)发病中起着重要的作用.本研究运用CML特异的bcr/abl融合基因的mRNA与外源重组反义RNA形成双链RNA (double strand RNA,dsRNA)能激活双链RNA依赖性蛋白激酶(double-stranded RNA-dependent protein kinase,PKR)的策略,研究其对白血病K562细胞增殖的影响及可能的机制.方法:将dsRNA类似物聚肌苷酸-聚胞啶酸(Polyriboinosinic Polyribocytidylic Acid,polyIC)、含ber/abl融合基因序列40bp的逆转录病毒载体RV-40AS、RV-40AS 2-氨基嘌呤(2-aminopurine,2AP)和含绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的逆转录病毒载体RV-GFP作用于K562细胞,并以ECV304细胞作对照细胞株.通过细胞计数、MTT法和半固体集落形成实验检测其对细胞生长增殖的影响,用流式细胞仪检测处理前后细胞周期的变化,用Western blot法检测细胞内PKR、磷酸化PKR(phosphated PKR,p-PKR)、真核翻译启始因子2α(eukaryotic initiation factor-2α,eIF2α)、磷酸化eIF2α(phosphated eIF2α,p-eIF2α)蛋白表达的变化,用3H-亮氨酸掺入实验检测细胞总蛋白合成水平的变化.结果:polyIC对K562细胞和ECV304细胞生长和增殖均具有非特异性抑制作用.而RV-40AS仅对K562细胞具有特异性的抑制效应.PKR抑制剂能阻断RV-40AS对K562 细胞的抑制效应.polyIC和RV-40AS作用K562细胞24 h 后,S期细胞减少[polyIC组(37.26±2.35)%,未处理组(58.53±5.42)%,P＜0.05;RV-40AS组(31.48±3.65)%,未处理组(58.53±5.42)%,P＜0.05],G0/G1期细胞增多[pdylC组(50.97±2.18)%,未处理组(36.44±4.20)%,P＜0.05;RV-40AS组(57.47±3.61)%, 未处理组(36.44±4.20)%,P＜0.05].polyIC处理K562细胞组、ECV304细胞组以及RV-40AS处理K562细胞组的p-PKR和p-eIF2α蛋白表达显著上调,且总蛋白合成水平下降[RV-40AS处理的K562细胞组(3.5±1.9)cpm/ng,未处理组(26.8±2.6)cpm/ng,P＜0.05].结论:外源重组反义RNA与bcr/abl融合基因的mRNA形成的dsRNA可通过激活PKR而抑制K562细胞的生长增殖,其机制是通过活化的PKR使蛋白合成启始因子eIF2a磷酸化,从而阻断细胞内蛋白合成的启动,及阻止细胞周期进程来实现.     

重组人TNF-α诱导乳腺癌细胞ZR75-1凋亡及其机制的初步研究

背景与目的:肿瘤坏死因子α(TNF-α)是抗肿瘤活性较强的细胞因子,是重要的抗肿瘤生物治疗制剂之一,但由于其对人体有较严重的副作用,临床应用受到了限制。为了降低其毒副作用,同时保留其抗肿瘤能力,TNF-α的突变体——突变型471TNF-α应运而生。本研究对重组人突变型471rhTNF-α与野生型rhTNF-α蛋白的抗肿瘤能力进行了比较,并对突变型471rhTNF-α诱导ZR75-1细胞发生凋亡的作用机制进行初步研究。方法:以乳腺癌细胞系ZR75-1为靶细胞,以基因组DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞技术分析100"g/L突变体471rhTNF-α与100"g/L野生型rhTNF-α作用ZR75-1细胞12h,肿瘤细胞发生凋亡的情况;利用以ELISA为基础的TransAMTMNF-κBp65试剂盒检测10μg/L、50μg/L和100μg/L突变体471rhTNF-α或野生型rhTNF-α作用ZR75-1细胞4h后核因子NF-κB的活化情况。结果:2%琼脂糖凝胶电泳显示,突变体471rhTNF-α处理组的ZR75-1细胞基因组DNA呈现明显的“ladder”状分布,野生型rhTNF-α处理组的“ladder”条带明显减弱;流式细胞仪分析显示,突变型471rhTNF-α诱导的凋亡峰面积为(44.6±3.6)%,野生型rhTNF-α诱导凋亡峰面积占(24.7±2.7)%,两组差异具有显著性(P<0.05);从细胞周期结果来看,突变型471rhTNF-α处理组G1期细胞占(66.6±4.2)%,比例明显高于对照组[(34.8±3.1)%]与野生型hTNF-α[(46.2±3.8)%],S期细胞占(33.2±2.9)%,比例明显低于对照组[(50.1±3.8)%]与野生型hTNF-α处理组[(45.7±2.9)%],G2期细胞比例为(0.2±0.1)%,明显低于对照组[(15.1±2.2)%]和野生型hTNF-α处理组[(8.1±3.1)%],而野生型hTNF-α处理组与对照组相比均无明显变化(P>0.05)。NF-κB活化检测结果显示,50"g/L野生型rhTNF-α处理ZR75-1细胞4h后NF-κB的活化量(A值为3.27±0.1)明显高于突变型471rhTNF-α处理组(A值为1.51±0.2)。结论:突变型471rhTNF-α比野生型rhTNF-α具有更强的诱导ZR75-1细胞凋亡的能力;ZR75-1细胞内NF-κB活化明显受限是突变型471rhTNF-α诱导凋亡能力增强的主要原因之一。     

金雀异黄素对肾癌细胞GRC-1增殖及p27表达的影响

背景及目的:肾癌发病率在东西方国家间有较大差异,而东方国家人群中豆制品的消耗量较高可能是其肾癌发生率较低的原因之一。本实验拟研究大豆来源的酪氨酸蛋白激酶抑制剂金雀异黄素(genistein)对肾癌细胞系GRC-1细胞的增殖的影响,并初步探讨此种影响与抑癌基因p27的关系。方法:使用倒置显微镜、MTT法、流式细胞仪观察肾癌细胞系GRC-1细胞在受到金雀异黄素作用后其细胞增殖情况的变化;并用Westernblot法测量GRC-1细胞中P27蛋白表达水平的变化。结果:(1)经20μmol/L金雀异黄素处理的细胞变为梭形,伪足减少,核分裂相减少,细胞间连接减少;而经过40μmol/L金雀异黄素处理出现大量细胞碎片,细胞形态极度不规则,有丝分裂相少见,细胞间少有连接。(2)经20μmol/L金雀异黄素处理72h的细胞与对照组相比,其存活率为45.72%,其中有73.8%的细胞处在G1期,26.2%的细胞处在G2期;对照组为G1期31.6%,G2期3.8%。(3)经20μmol/L金雀异黄素处理72h的细胞裂解液中P27蛋白条带的灰度值为65.4±4.7,对照组为52.3±6.3。结论:金雀异黄素可显著抑制肾肿瘤细胞的增殖,使细胞周期阻滞于G1/M、G2/S期,其机理可能是通过提高肿瘤细胞中P27蛋白的表达水平实现的。     

表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂ZD1839对鼻咽癌细胞系的作用

ZDl839是一种喹唑啉类化合物,它是一种口服的选择性的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂,已被美国食品药品管理局批准用于治疗晚期非小细胞肺癌。鼻咽癌是一种存在表皮生长因子受体表达的上皮源性的恶性肿瘤,ZDl839对其作用如何还未见有报道。本实验通过体外研究初步探讨ZDl839在鼻咽癌治疗中的可能价值。     

抗CXCR4单克隆抗体12G5对HL-60细胞粘附及增殖的影响

背景与目的:近年研究发现,骨髓基质细胞分泌的趋化因子SDF-1通过其分布于白血病细胞膜表面的生理性受体CXCR4可能参与了白血病细胞的髓内屏障,然而,SDF-1/CXCR4系统与白血病细胞之间的相互关系尚不清楚,因此,本研究采用抗CXCR4单克隆抗体12G5阻抑SDF-1活性,观察与白血病骨髓基质细胞共培养的HL-60细胞粘附性及细胞增殖的变化,以探讨从阻抑SDF-1活性入手治疗残留白血病的可能性。方法:培养并共培养HL-60细胞,采用12G5(10μg/ml)阻断SDF-1生物作用,观察HL-60细胞在骨髓基质层上的粘附情况并测定细胞粘附率,通过流式细胞仪检测凋亡率,并观察其增殖周期的变化;应用台盼蓝拒染法检测细胞存活情况,绘制细胞生长曲线。结果:(1)12G5孵育后24h,骨髓基质对HL-60的粘附率为(39.4±7.9)%,对照组为(51.4±5.9)%,二者具有显著差异(P<0.05)。(2)比较细胞增殖周期及凋亡率,实验组中G0/G1期细胞比例为(55.2±4.9)%,S期为(30.4±4.1)%,G2/M期为(14.4±5.2)%,细胞凋亡比例为(9.0±1.7)%;对照组中G0/G1期细胞比例为(44.7±2.2)%,S期为(45.3±3.7)%,G2/M期为(10.0±2.6)%,细胞凋亡比例为(4.0±2.4)%。(3)12G5孵育48h后,HL-60细胞生存率明显下降,增殖减缓。结论:12G5能在一定程度上抑制HL-60细胞的粘附性及增殖活性,因此,通过1