Roscovitine促进增殖期PC12细胞凋亡

目的探讨细胞周期蛋白依赖激酶（CDK）抑制剂Roscovitine导致增殖期PC12细胞死亡的性质和CDK调控的细胞周期与细胞凋亡的关系。方法利用培养的增殖期PC12细胞模型，进行MTT细胞活性检测、Hoechst 33342胞核荧光染色和倒置显微镜观察。结果分别用5、10、20、50和100μmol／L浓度的Roscovitine溶液处理细胞12h，细胞存活率呈剂量依赖性下降；另外，50μmol／L浓度的Roscovitine分别处理细胞4、12、24和48h，细胞死亡也呈现时间依赖性。细胞死亡的形态学表现是细胞皱缩、核染色体固缩和核碎片形成。结论Roscotivine导致的增殖期PC12细胞凋亡与CDK调控的细胞周期蛋白有关。     

哺乳动物细胞中周期蛋白依赖激酶抑制物的研究进展

癌症的发生发展与一些癌基因的抑癌基因的作用有关。其中某些癌基因和抑癌基因通过参与细胞周期的调节而发挥其作用。而周期蛋白依赖激酶的调控在细胞周期调节中起关键作用。本文综述了近年来的有关哺乳动物细胞周期蛋白依赖激酶的一些主要抑制物（ｐ１５，ｐ１６，ｐ１８，ｐ１９，ｐ２１，ｐ２７等）的研究进展，并简述它们与肿瘤的关系。     

细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂——p27kip1研究进展

ｐ２７ｋｉｐ１是一个广谱的周期蛋白依赖激酶抑制剂，在细胞周期的调控中起重要的作用，本综述ｐ２７ｋｉｐ１的发现，ｐ２７ｋｉｐ１的功能、作用机制以及ｐ２７ｋｉｐ１与肿瘤的关系。     

CIP-KIP细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子家族

细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子(CKI)是细胞周期调控网络的主要成员之一,在周期调控中具有重要的地位,CIP-KIP是CKI两个家族之一,与细胞生长分化和肿瘤发生方面有极其重要的关系。本文对CIP-KIP家族的细胞周期调控、基因敲除以及促CDK/CychnD装配功能的最新进展进行综述。     

阿司匹林促进宫颈癌HeLa细胞凋亡

阿司匹林(acetysalicylicacid,ASA)是非类固醇抗炎药(nonsteroidal antiinflammatory drugs,NSAIDs)的代表药物.最近研究证实,阿司匹林具有高效降低直肠结肠肿瘤发病率的作用~([1]);文献报道普通阿司匹林应用在半年以上,可有效降低宫颈癌的发病率~([2]).本研究对阿司匹林抑制宫颈癌HeLa细胞增殖作用及相关机制进行研究,为宫颈癌的预防与治疗提供有益的探索.     

Pim-1激酶抑制剂SMI-4a抑制U937细胞增殖并诱导凋亡

目的:研究丝/苏氨酸蛋白激酶Pim-1抑制剂SMI-4a对人类急性髓系白血病细胞株U937的生长抑制、促凋亡作用及其可能机制。方法:CCK-8法检测不同浓度SMI-4a作用不同时间对U937细胞的生长抑制率;Annexin V-PI及Hoechst 33342染色法检测SMI-4a作用前后细胞凋亡情况,集落形成实验检测SMI-4a对U937细胞集落形成能力的影响;Western blot法检测SMI-4a对U937细胞核及细胞浆内β-catenin表达变化及细胞内凋亡相关蛋白的表达变化;免疫荧光法检测β-catenin在细胞内的表达变化。结果:CCK-8结果显示SMI-4a可以抑制U937细胞的活力,并呈时间和剂量依赖性;Annexin V-PI及Hoechst 33342染色结果显示SMI-4a可以促进U937细胞凋亡;集落形成实验证实SMI-4a可以抑制U937细胞的集落形成能力;Western blot实验结果显示SMI-4a作用于U937细胞48 h后细胞浆内的β-catenin表达增加,细胞核内的β-catenin表达减少,细胞内促凋亡蛋白Bax和PARP表达增强,抑凋亡蛋白Bcl-2表达明显减弱;免疫荧光进一步验证了SMI-4a作用后的U937细胞核内的β-catenin表达量明显减少。结论:SMI-4a诱导U937细胞凋亡是通过上调促凋亡基因的表达、下调凋亡抑制基因的表达来实现的。     

细胞周期蛋白D1和细胞周期蛋白质依赖激激酶4在去甲二氢愈创木酸抑制恶性胶质瘤细胞增殖中的作用

近年来发现去甲二氢愈创木酸 (ｎｏｒｄｉｈｙｄｒｏｇｕａｉａｒｅｔｉｃａｃｉｄ ,ＮＤＧＡ)能阻止多种肿瘤的发生和抑制其细胞的增殖[1 3 ] ,但机制不清。我们检测了ＮＤＧＡ对ＳＨＧ 4 4细胞细胞周期蛋白Ｄ1(ｃｙｃｌｉｎＤ1)基因的蛋白表达及细胞周期蛋白质依赖激酶 4(ｃｙｃｌｉｎ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅ 4 ,ＣＤＫ4 )活性的影响 ,旨在探讨ＮＤＧＡ抑制ＳＨＧ 4 4细胞增殖的分子机制。一、材料和方法1.细胞培养 :人脑恶性胶质瘤细胞系ＳＨＧ 4 4 (第 110代 )引自苏州医学院附属第二医院脑肿瘤研究室。按我室常规进行培养。2 …     

miR-449a过表达抑制人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y增殖并促进其凋亡

目的探讨miR-449a对人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y的增殖和凋亡的影响。方法用Lipofectamine TM2000将miR-449a模似物或miR-449a对照转染至SH-SY5Y细胞,分为空白、miR-449a模似物和miR-449a对照SHSY5Y细胞组;实时荧光定量PCR(q-PCR)检测各组细胞中miR-449a表达;CCK8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡和周期,Western blot检测c-Myc蛋白和Bax/Bcl-2蛋白表达。结果 miR-449a模似物瞬时转染SH-SY5Y细胞后,miR-449a的表达水平明显高于正常对照组(P0.05);SH-SY5Y细胞增殖能力受到明显抑制(P0.05);凋亡率明显增加(P0.05);c-Myc蛋白表达显著降低(P0.05);细胞促凋亡蛋白Bax表达升高;抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低(P0.05)。结论 miR-449a可通过c-Myc影响SH-SY5Y细胞的增殖和周期,通过调节Bax/Bcl-2影响其凋亡。     

miR-16促进Neuro2a细胞的凋亡

目的 检测过表达miR-16对小鼠Neuro2a细胞周期和凋亡的影响,探讨miR-16在肿瘤发病过程中的可能机制.方法 构建能够在细胞中过表达miR-16的真核表达载体pcDNA3.1-miR-16,利用Real-time PCR验证了表达载体的过表达效应.应用pcDNA3.1-miR-16载体转染Neuro2a细胞,...     

神经再生素对PC12细胞凋亡的影响

目的 研究神经再生素(NRF)对PC12细胞凋亡的影响并初步探讨其机制。方法 通过观察细胞形态的变化、MTT微量比色法、流式细胞仪AnnexinV和caspase-3活力检测等方法，了解NRF对低浓度血清培养下PC12细胞凋亡的影响。NGF、和RPMI1640作对照。结果 培养细胞的突起生长数量和长度、M1TT微量比色的A值、AnnexinV—PE／7AAD显示的凋亡细胞比例、caspase-3活力的检测等指标，在NRF组和NGF组问无明显差异；而与窄白对照组间差异有显著性意义。结论 神经再生素对低血清培养下PCI2细朐的凋亡有抑制作用。     

胶质瘤miR-218与细胞周期蛋白依赖性激酶6表达的相互关系及其对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨胶质瘤细胞中miR-218及细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)表达变化的相互关系及其对肿瘤细胞增殖及凋亡的影响.方法 采用组织微阵列、锁定寡核苷酸探针原位杂交及免疫组织化学(ABC法)方法,检测60例不同级别胶质瘤组织标本及10例对照脑组织中miR-218、CDK6及Ki-67抗原的表达状况,并分析三者之间的相互关系;胶质母细胞瘤细胞系(U87MG)分别被转染阴性对照序列(对照组)及miR-218 mimics(mimics组),采用即时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及免疫细胞化学方法 分别检测两组细胞中的miR-218水平及CDK6和Ki-67表达变化,用单细胞凝胶电泳检测凋亡细胞.结果 对照组、Ⅰ～Ⅱ级、Ⅲ级和Ⅳ级胶质瘤组miR-218阳性标记指数(LI,%)分别为22.45±0.59、4.00±1.07、1.87±1.06、0.94±0.78,四组间差异均有统计学意义(P<0.05);各组CDK6 LI分别为7.25±1.20、16.71±0.80、24.43±0.62、32.05±0.43,对照组与各胶质瘤组间及Ⅳ级组与Ⅰ～Ⅱ级组间差异有统计学意义(P<0.01);各组Ki-67阳性细胞密度分别为0.00±0.00、9.30±3.48、31.15±9.44、60.15±13.60[(±s)/0.05 mm2],各组间差异均有统计学意义(P<0.01);miR-218 LI与CDK6 LI及Ki-67阳性细胞密度间均呈显著性负相关(r=-0.480,-0.534,P<0.01),后两者间呈显著性正相关(r=0.530,P<0.01).mimics组的miR-218水平明显高于对照组,其CDK6及Ki-67 LI(14.74±1.19、30.88±3.31)均明显低于对照组(79.06±2.07、64.94±3.96,P<0.01),而凋亡指数(68.44±7.05)明显高于对照组(13.04±0.97),以上各指标两组间差异均有统计学意义(P<0.01).结论 miR-218表达水平是评价胶质瘤良恶性程度的重要参考指标;其表达异常减少可导致胶质瘤细胞CDK6表达及增殖活性增强;补充外源性miR-218可有效下调恶性胶质瘤细胞CDK6表达、抑制其增殖和促进其凋亡,故在恶性胶质瘤基因治疗中具有重要的潜在应用价值.

Abstract：

Objectives To investigate the relationship between the expression of miR-218 and CDK6 in glioma cells, and their biological impacts on the tumor cell proliferation and apoptosis. MethodsExpression levels of miR-218 as well as CDK6 and Ki-67 proteins were analyzed in 60 cases of gliomas with various grades and 10 control brain tissue samples by tissue microarray, locked oligonucleotide probe in situ hybridization and immunohistochemistry. Glioblastoma multiform cell line (U87MG) was transfected with miR-218 mimics (mimics group) and a control sequence (control group), followed by qRT-PCR detection of miR-218 and immunocytochemical stain of CDK6 and Ki-67, respectively. Single cell gel electrophoresis was used to detect the presence of apoptotic cell. Results The miR-218 labeling indexes (LI) were statistically different (P<0.05) among all groups including control (22.45±0.59) and various glioma groups (grades Ⅰ-Ⅱ 4.00±1.07, grade Ⅲ 1.87±1.06 and grade Ⅳ 0.94±0.78, respectively). The CDK6 LI of the four groups was 7.25±1.20, 16.71±0.80, 24.43±0.62 and 32.05±0.43, respectively. Significant differences existed between the control group and the glioma groups, and between grade Ⅳ and grades Ⅰ-Ⅱ glioma groups (P<0.01). Ki-67 positive cell densities of the above four groups (0.00±0.00, 9.30±3.48, 31.15±9.44 and 60.15±13.60) were significantly different from one and another (P<0.01). The expression of miR-218 negatively correlated with CDK-6 LI (r=-0.480, P<0.01) and Ki-67 positive cell density (r=-0.534, P<0.01), while the latter two positively correlated with each other (r=0.530, P<0.01). U87MG transfection experiment showed that the miR-218 level of the mimics group was significantly higher than that of the control group (P<0.01). CDK6 and Ki-67 LI of the mimics group (14.74±1.19 and 30.88±3.31) were significantly lower than those of the control group (79.06±2.07 and 64.94±3.96, P<0.01), whilst its apoptotic index (AI) (68.44±7.05) was significantly higher than that of the control group (13.04±0.97, P<0.01). Conclusions The expression level of miR-218 is an important reference indicator for the assessment of the grade of gliomas. An aberrant decrease of its expression may lead to an increase of the CDK6 expression and proliferative activity of giloma cells. Introducing exogenous miR-218 may effectively down-regulate the CDK6 expression, inhibit cell proliferation and induce apoptosis of malignant giloma cells. These findings imply that miR-218 may serve as a therapeutic agent against malignant glioma.     

FAK反义寡核苷酸促进人肺动脉平滑肌细胞凋亡

目的： 了解黏着斑激酶(focal adhesion kinase FAK)是否参与人肺动脉平滑肌细胞(HPASMCs)凋亡。 方法： 纤黏连蛋白(FN 40 mg/L)刺激下培养的HPASMCs被用来进行反义寡核苷酸（antisense oligonucleotides， ASODNs）转染以做进一步实验。采用免疫印迹方法测定FAK蛋白质及凋亡蛋白半光氨酸蛋白酶－3（caspase-3）的表达, TUNEL法检测细胞凋亡。 结果： 免疫印迹方法测定结果表明,应用FAKASODNs转染后HPASMCs中FAK的表达明显低于转染前(P<0.01); caspase-3在应用FAKASODNs转染后高于转染前(P<0.05), TUNEL法检测结果表明FAKASODNs转染后细胞凋亡增加。 结论： 本实验结果表明FAKASODNs抑制细胞增生,促进细胞凋亡。其机制很可能是经caspase-3信号通路促进细胞凋亡。     

G1期细胞周期调节因子与细胞癌变

目前研究结果表明，细胞周期中的多种调整因子参与细胞癌变，特别是Ｇ１期的Ｄ型细胞周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎＤ）的过表达，细胞周期蛋白依赖性抑制因子（ＣＤＩ）的ｐ１６，ｐ１５，ｐ２１，ｎ２７及参与Ｇ１期负向调节的抑癌基因产物ｐ５３，Ｒｂ的低表达或基因突变皆可导致恶性肿瘤的发生。     

基因沉默ILK对胰腺癌细胞Panc-1细胞增殖、凋亡与侵袭的影响

目的探讨基因沉默整合素连接激酶(ILK)对胰腺癌细胞(Panc-1)细胞增殖、凋亡与侵袭的影响。方法培养胰腺癌Panc-1细胞,构建ILK-specific shRNA慢病毒载体后对Panc-1细胞进行转染,qPCR与Western Blot方法验证干扰基因片段的有效性,MTT实验检测转染后胰腺癌细胞增殖能力的变化,流式细胞仪检测转染后胰腺癌细胞周期的变化,Transwell实验检测转染后胰腺癌细胞侵袭能力的改变。结果成功构建siRNA-ILK慢病毒载体,转染组细胞的ILK mRNA及蛋白表达明显低于空病毒组及阴性对照组。基因沉默ILK的胰腺癌Panc-1细胞增殖能力显著降低,停滞在G0/G1的细胞数显著增多,G2/M期细胞数明显减少,侵袭能力显著降低(P0.01)。结论基因沉默ILK能抑制胰腺癌细胞Panc-增殖与侵袭能力,并促进凋亡。     

AIF及AIF依赖的细胞凋亡

AIF是一种线粒体蛋白 ,具有氧化还原酶和诱导细胞凋亡两种活性。AIF从线粒体到细胞核的转位足以介导体外细胞凋亡的发生 ,而且是以非caspases依赖的方式进行的。AIF的诱导凋亡活性是小鼠胚胎形态发生过程中类胚体成腔所必需的 ,也参与了神经细胞的细胞凋亡。真菌、线虫等的细胞凋亡也有AIF同源分子的参与。因此 ,AIF介导的细胞凋亡代表了独立于caspase信号通路之外的另一条更原始、更保守、更普遍的凋亡途径     

肿瘤特异性凋亡基因诱导人淋巴瘤细胞凋亡的机制

目的:研究肿瘤特异性凋亡基因(apoptingene)在诱导人淋巴瘤细胞U937凋亡时,cJun氨基末端激酶(JNK)信号通路的作用。方法:用含有apoptin基因的真核表达载体,瞬时转染体外培养的人淋巴瘤细胞U937。采用流式细胞仪、Westernblot、台盼蓝染色及RTPCR等研究其在不同时间条件下诱导U937细胞凋亡的作用。结果:Apopin基因瞬时转染U937细胞48h,可出现明显的凋亡;而且凋亡细胞的数量与apoptin基因的转染时间有关。诱导后24h,U937细胞中出现磷酸化的JNK蛋白的表达,诱导后48h达高峰;而非磷酸化的JNK蛋白表达无明显变化。结论:Apoptin基因具有诱导U937细胞凋亡的作用。JNK信号通路的激活,可能在apoptin基因诱导肿瘤细胞凋亡过程中发挥着重要作用。     

RNAi沉默HMGA1基因对肝癌细胞凋亡和细胞周期的影响

目的:筛选HMGA1基因沉默稳定转染肝癌细胞株,检测沉默后肿瘤细胞凋亡、周期和增殖的变化。方法:靶向HMGA1的RNAi载体转染肝癌细胞,G418筛选得到稳定转染细胞株并鉴定;MTT法和FACS检测细胞增殖、凋亡及细胞周期。结果:成功建立基因沉默HMGA1稳定细胞株;HMGA1基因沉默后,细胞凋亡百分率(29.46±3.04%)明显高于质粒对照组和空白对照组(1.96±0.76%和2.04±0.70%,P<0.01);G0-G1期细胞百分率(75.21±2.35%)明显高于质粒对照组和空白对照组(37.98±3.02%和39.23±3.63%,P<0.01),G2-S期(24.79±2.35%)显著低于质粒对照组和空白对照组(62.03±3.01%和60.77±3.63%,P<0.01);MTT检测显示,HMGA1沉默细胞增殖与质粒对照组和空白对照组相比显著降低(P<0.01或0.05)。结论:基因沉默HMGA1可促进肿瘤细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体抑制卵巢癌3AO细胞增殖并促进细胞凋亡

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导卵巢癌3AO细胞凋亡的分子机制。方法用(12.5、25.0、50.0)ng/mL的重组人TRAIL蛋白与卵巢癌3AO细胞共孵育72 h,观察细胞的形态变化,在不同时间段收集细胞,MTT法检测细胞生长增殖,计算细胞的生长抑制率,annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,原位末端标记法(TUNEL)观察凋亡形态特征,Western blot法检测凋亡相关蛋白caspase-3蛋白表达。结果各浓度组的TRAIL都可以引起3AO细胞形态学改变,对细胞增殖均有抑制作用(P0.05),25 ng/mL和50 ng/mL TRAIL处理的3AO细胞出现明显的细胞凋亡和周期阻滞,随着药物作用时间的延长,G1期细胞比例逐渐增多,而S期和G2/M期细胞比例减少,caspase-3蛋白呈高表达,但两组之间的凋亡率和凋亡蛋白的表达无显著性差异(P0.05)。结论 TRAIL是通过抑制细胞周期、阻滞DNA合成、活化caspase-3诱导卵巢癌3AO细胞凋亡。     

肿瘤特异性凋亡基因诱导人黑色素瘤细胞凋亡机制的研究

目的研究肿瘤特异性凋亡基因(Apoptin gene)在诱导人黑色素瘤细胞A375发生凋亡时,c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在细胞发生凋亡中的作用。方法用含有肿瘤特异性凋亡(Apoptin)基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人黑色素瘤细胞A375;采用流式细胞仪、免疫印迹法(W estern b lot)、台盼蓝染色法及RT-PCR等方法研究其在不同时间条件下对人黑色素瘤细胞A375诱导凋亡的作用。结果Apoptin基因瞬间转染的人黑色素瘤A375细胞出现明显的细胞凋亡,凋亡细胞的数量随Apoptin转染时间延长而增多,磷酸化型JNK蛋白在转染Apoptin 24 h开始表达,48h和72h过表达,而非磷酸化型JNK蛋白表达无明显变化。结论Apoptin基因具有诱导人黑色素瘤细胞A375凋亡的作用,JNK信号通路的激活可能在Apoptin诱导肿瘤细胞凋亡过程中发挥作用。     

杂色曲霉素对小鼠肾脏细胞凋亡与增殖的影响

目的：探讨杂色曲霉素（ST）对小鼠肾脏细胞凋亡与增殖的影响。方法：采用动物实验和流式细胞光度方法定量检测灌喂不同剂量的ST对小鼠肾脏细胞凋亡与增殖的影响。结果：经口灌喂不同剂量的ST（3 μg/kg、30 μg/kg、300 μg/kg、3 000 μg/kg）后12 h，ST处理组小鼠肾脏细胞的凋亡率均明显高于对照组（P<0.01）。在3-3 000 μg/kg剂量范围内，ST剂量与凋亡率之间呈明显的量效正相关（r=0.573, P<0.01）。同时,灌喂剂量为3 000 μg/kg的ST后6-48 h，随着ST处理时间的延长，,肾脏细胞的凋亡率也明显增高，ST处理时间与凋亡率之间呈明显的时效正相关（r=0.830, P<0.01）。但不同剂量的ST和ST处理后不同时间对小鼠肾脏细胞的增殖指数均无明显影响。结论：经口给予ST可诱导、促进小鼠肾脏细胞的凋亡而对其增殖指数无明显影响。