降血压肽VaI-Leu-Pro-VaI-Pro在Caco-2细胞模型中的吸收机制

目的研究降血压肽Val—Leu—Pro—Val—Pro（VLPVP）在Caco-2细胞模型中的吸收机制。方法用体外培养的Caco-2细胞单层模型，考察时间、pH值、药物浓度、吸收抑制剂及促进剂对VLPVP吸收的影响。用HPLC法检测VLPVP的浓度。结果VLPVP在pH7．4时转运量最大，且与浓度和时间呈正相关。肽转运载体竞争性抑制剂Gly—Pro、arphamenineA和细胞内吞抑制剂氧化苯胂对VLPVP的转运没有显著的抑制作用，而旁路转运促进剂去氧胆酸钠、多药耐药蛋白抑制剂MK-571和能量抑制剂叠氮化钠对VLPVP从AP侧至BL侧的转运有非常显著的促进作用，而叠氮化钠和MK-571对VLPVP从BL侧至AP侧的转运无显著影响。结论VLPVP以旁路转运为主要方式被小肠上皮细胞吸收，并受到多药耐药蛋白MRP2强烈的外排作用。     

姜黄素抑制Caco-2细胞胆固醇吸收的作用及机制研究

目的探讨姜黄素对Caco-2细胞胆固醇吸收的影响以及可能机制。方法建立Caco-2细胞单层模型,分别用25、50、100μmol/L姜黄素或胆固醇吸收转运蛋白尼曼-匹克C1型类似蛋白1(NPC1L1)的抑制剂依折麦布孵育细胞24h或2h后,再用[14C]-胆固醇微胶溶液孵育细胞2h。用液闪计数仪检测细胞胆固醇吸收量,荧光定量PCR和Western blot检测NPC1L1的基因和蛋白表达量。结果 Caco-2细胞[14C]-胆固醇吸收可被依折麦布呈浓度依赖性地抑制,表明本研究建立的单层Caco-2细胞模型的胆固醇吸收是由NPC1L1所介导的。姜黄素能有效的下调NPC1L1的基因及蛋白表达水平,降低Caco-2细胞胆固醇吸收,100μmol/L姜黄素可引起40%胆固醇吸收下降。结论姜黄素能够降低Caco-2细胞胆固醇吸收,这可能与其抑制NPC1L1表达有关。     

碱性鞘磷脂酶对Caco-2细胞胆固醇吸收的影响及机制研究

目的探讨碱性鞘磷脂酶(Alk-SMase)对Caco-2细胞胆固醇吸收的影响以及可能机制。方法建立Caco-2细胞单层模型,用100 units/L Alk-SMase孵育细胞24 h后,再用[14C]-胆固醇微胶溶液孵育细胞2 h。用液闪计数仪(LSC)检测细胞胆固醇吸收量,薄层层析法分离膜磷脂、LSC检测细胞膜[14C]-鞘磷脂含量。结果 [14C]-胆固醇在Caco-2细胞中的吸收呈时间依赖性增加。Alk-SMase能够明显降低Caco-2细胞胆固醇吸收,并减少Caco-2细胞膜鞘磷脂含量,100 mu/ml Alk-SMase能够引起80%[14C]-标记的膜鞘磷脂水解。结论 Alk-SMase能够抑制Caco-2细胞胆固醇吸收,这可能与其水解膜鞘磷脂有关。     

Caco-2细胞模型的建立及其在真菌毒素吸收率研究中的应用

目的构建Caco-2单层细胞转运5种毒素的吸收率模型并验证。方法以Caco-2细胞系为工具,以脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)、黄曲霉毒素B1(AFB1)、AFB2、黄曲霉毒素G1(AFG1)和AFG2为研究对象,通过对转运介质溶液中毒素的初始浓度、温度、p H值、抑制剂存在与否等实验条件的优化,构建Caco-2细胞转运DON和4种黄曲霉毒素的生理模型并进行验证。结果 DON、AFB1、AFB2、AFG1及AFG2透过Caco-2单层细胞的量和表观渗透系数(Papp)随着体系溶液中p H的升高有下降趋势。AFB1在p H 7.4~7.5溶液中的Papp值最高,AFB2、AFG1、AFG2及DON在p H 7.0~7.1溶液中的Papp值最高。随着体系温度的升高,DON、AFB1、AFB2、AFG1及AFG2的透膜能力均有所增加。无论体系中AFB1、AFG1及AFG2浓度低或高,均在60 min时透过率达到平台期并维持稳定;而AFB2及DON从高浓度到低浓度均在120 min时透过率达到平台期并维持稳定。结论所建5种毒素Caco-2单层细胞模型灵敏、稳定、可靠、有效。     

铜对Caco-2细胞单层屏障功能的影响

目的研究铜对Caco2细胞单层细胞间通透性、P糖蛋白(Pgp)活性的影响。方法应用Caco2细胞单层模型,通过测定铜暴露后细胞单层的跨上皮细胞电阻(TEER)来反映通透性的改变;通过免疫荧光和荧光染色观察铜对紧密连接蛋白ZO1和F微丝的影响;通过测定细胞单层对罗丹明123的跨膜转运和细胞内罗丹明123的蓄积来反映P糖蛋白活性的改变。结果细胞单层顶面铜暴露(30～100μmol/L,Hanks缓冲溶液,0～3h)可导致TEER值呈浓度和时间依赖性降低,同时伴随着F微丝的解聚,但对紧密连接蛋白ZO1无显著影响;在不影响细胞活性和细胞单层通透性的剂量下,顶面铜暴露(300μmol/L,完全培养基,24h)后细胞单层对罗丹明123的表观通透系数(Papp)BL→AP从对照组的(737±020)10-6cm/s降低为(643±027)×10-6cm/s,PappAP→BL从对照组(123±005)×10-7cm/s增加为(341±008)×10-7cm/s,同时细胞内罗丹明-123的蓄积量从对照组的每膜(031±001)nmol增加为每膜(050±003)nmol。结论铜可显著增加Caco2细胞单层的通透性和抑制Pgp的活性,从而推测可能影响肠道上皮细胞的正常屏障功能。     

高浓度锌对Caco-2细胞生长的影响

本实验利用MTT比色法测定不同锌浓度处理下Caco-2细胞生长状况,并通过对细胞存活率比较,分析该细胞株对高锌的耐受程度。     

铜对人类肠道上皮Caco-2细胞的毒性研究

目的　了解铜对人类肠道上皮Caco 2细胞的毒性影响。方法　应用噻唑蓝 (MTT)实验、P 糖蛋白(P gp)活性检测实验、活性氧检测及克隆形成实验研究铜对肠道上皮Caco 2细胞的毒性及可能作用机制 ,同时利用Caco 2细胞和肠炎沙门氏菌为模型 ,研究铜对Caco 2细胞对细菌侵入和存活易感性的影响。结果　在一定的暴露场景下 ,铜可明显地降低细胞的活力 ,抑制细胞膜表面P gp的活性 ,促进细胞内活性氧自由基的产生 ,降低细胞的克隆形成能力。此外 ,细胞经铜暴露后 ,肠炎沙门氏菌侵入细胞的数量增加 ,但细胞内存活的细菌数量却下降。结论　过量的铜可导致Caco 2细胞氧化损伤 ,从而引起更广泛的细胞毒性效应 ,但其对细胞对细菌侵入和存活易感性的影响有待进一步研究。     

用Caco-2细胞模型评价母乳和婴儿配方食品铁摄入量

营养学家和食品科学家对母乳和婴儿配方食品中铁的营养质量的认识是非常感兴趣的。在探讨母乳中的铁比婴儿配方食品中的铁有更大比例(但不是完全)吸收的原因,介绍用生物体外消化模型,即Caco-2细胞模型系统来比较通过不同婴儿配方食品和母乳的细胞铁吸收的结果。     

Caco-2细胞单层模型及其在毒理学中的应用

Caco 2细胞来源于人类结肠腺癌细胞 ,当其在生长达到融合后细胞可自发形成极性 ,表达出成熟肠道上皮细胞的某些形态和功能特征 ,其细胞单层模型是目前最为成熟的体外模拟肠道上皮细胞摄取和转运营养物质和外来化学物的模型 ,被广泛地应用于药理学和毒理学研究。本文介绍了Caco 2细胞单层模型的培养条件、细胞特性及常用功能指标 ,以及其在对外源化学物代谢、摄取、转运和消化道毒理学方面的应用。     

体外消化/Caco-2细胞模型评价铁生物强化玉米铁生物利用率

目的采用体外消化/Caco-2细胞模型评价3种生物强化玉米铁生物利用率,筛选出铁生物利用率高的玉米品种。方法将高铁玉米品种(中铁2号、中铁3号、中铁4号)和低铁玉米品种(正大818、正大619)磨粉,测定玉米粉中铁含量,经体外消化后进行Caco-2细胞吸收实验,以细胞单位质量蛋白质中铁蛋白含量作为铁生物利用率的指标,并计算单位质量玉米粉铁生物利用率。同时测定玉米粉总磷含量,以此反映玉米中植酸水平。结果中铁2号玉米粉中铁含量(33.25mg/kg)、铁生物利用率和单位质量玉米粉铁生物利用率最高,而总磷含量较低;铁生物利用率其次为中铁3号和正大818,正大619玉米粉最低。结论中铁2号玉米品种的铁含量与生物的利用率最高,可推荐为后续人群试验试用品种。     

矢车菊素-3-葡萄糖苷在Caco-2细胞模型的吸收机制研究

目的研究花色苷矢车菊素-3-葡萄糖苷(Cy-3-G)在Caco-2细胞模型的吸收机制。方法建立Caco-2单层细胞模型,观察Cy-3-G的转运情况。加入不同浓度的维拉帕米(P-gp抑制剂)、MK571(MRP2抑制剂)、根皮苷(SGLT1抑制剂)及根皮素(GLUT2抑制剂),观察P-gp、MRP2、SGLT1及GLUT2等转运蛋白在Cy-3-G肠道吸收中的作用。结果 Cy-3-G在Caco-2细胞模型的吸收率随着时间延长逐渐升高,2 h时吸收率在0.76%~2.41%之间,但随着花色苷浓度的升高而降低。维拉帕米和MK571对Cy-3-G在Caco-2细胞模型的吸收无影响(P>0.05),根皮苷和根皮素可显著抑制Cy-3-G的吸收(P<0.05)。结论 P-gp和MRP2对Cy-3-G在肠道的吸收无影响,SGLT1和GLUT2均参与了Cy-3-G在小肠的吸收。[营养学报,2013,35(2):191-194,198]     

槲皮素及其糖苷衍生物在Caco-2单层细胞上的吸收特征

目的探讨槲皮素及其糖苷衍生物在人小肠吸收模型Caco-2细胞单层上的吸收特征。方法采用Caco-2单层细胞模型,研究槲皮素、槲皮苷、异槲皮苷的肠道吸收特征,以LC-MS法测定槲皮素、槲皮苷、异槲皮苷、异鼠李亭。结果槲皮素及其糖苷衍生物孵育30～150min后,均能在透过侧检测到槲皮素、槲皮苷和异槲皮苷以及槲皮素的甲基化代谢产物之一异鼠李亭;透过的槲皮素及其代谢产物异鼠李亭含量在150min孵育时间内呈先升后降的趋势特征;而槲皮苷和异槲皮苷的透过量则随孵育时间呈持续升高的趋势,在孵育后期可检测到微量异鼠李亭。结论槲皮素、槲皮苷和异槲皮苷可以完整的分子形式被Caco-2细胞单层吸收,其吸收特征有显著差异,并在吸收过程中伴有广泛的代谢转化。[营养学报,2012,34(4):358-361,367]     

十二指肠上皮细胞基底侧存在主动铁吸收的机制

用放血法制备大鼠失血性贫血模型；向腹腔内注射铁－氨三乙酸络合物制备铁过剩模型；以元处置大鼠作为对照。向隔离十二指肠段注射￣（５９）ＦｅＣｌ＿３，ｌｈ后测定单位重量十二指肠、肝、脾每分钟脉冲数，同时用放射自显影法显示十二指肠上皮细胞￣（５９）Ｆｅ分布。结果表明：与对照组相比，贫血组大鼠十二指肠吸收铁增加，向肝、脾的铁转运也明显增加。而铁过剩组大鼠进入十二指肠上皮细胞的铁明显减少。免疫组织化学显示肠上皮细胞基底侧有转铁蛋白受体分布。作者认为：十二指肠上皮细胞基底侧存在转铁蛋白及其受体介导的主动非血红素铁运转机制。铁缺乏时这一机制被激活，铁从小肠上皮细胞进入体内增加，上皮细胞内铁减少，促进铁从肠腔进入上皮细胞；铁过剩时，从肠上皮细胞进入体内的铁减少，肠上皮细胞内铁含量增加，减少铁吸收，由此维持体内铁水平的相对稳定     

MECHANISM OF FAT ABSORPTION IN THE INTESTINAL MUCOSA

In vitro experiments with rat, guinea pig, rabbit, and human biopsy mucosa and in vivo experiments in mice and rats indicate that a certain amount of the glycerol derived from the intestinal digestion of triglyceride is resynthesized into triglyceride.     

GLUT2在小肠糖吸收中的作用

近年来的研究发现小肠葡萄糖的吸收包括两大部分;当小肠肠腔葡萄糖浓度低于血糖浓度时,由钠-葡萄糖协同转运蛋白1(SGLT1)介导的经典的主动吸收途径完成转运,当肠腔葡萄糖浓度高于SGLT1的糖转运饱和度时,葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)在小肠一过性插入顶膜导致的易化扩散中起到了主导作用.由于具有低亲和力,高容量的特点,GLUT2确保了细胞内外葡萄糖的双向扩散.此外,GLUT2还参与了果糖和半乳糖的转运.生理状态下,小肠GLUT2主要存在于基底膜,饮食、激素、能量代谢等因素的影响可使其一过性易位至顶膜参与糖转运.病理状态下顶膜GLUT2永久性的插入,引起糖吸收增加,最终导致肥胖、胰岛素抵抗及糖尿病.     

玉米活性多肽降血压作用及其机制的研究

目的研究玉米多肽的降血压作用,并探讨其作用机制。方法选择18w龄雄性SHR,随机分为阴性对照、0.5、1.0、2.0mg/kgbw多肽组和阳性对照组。观察单次灌胃4、24h内以及每天灌胃每周各组血压变化,12w后,测定体内各器官血管紧张素转化酶(ACE)活性及血浆AngⅡ浓度和左心室肥厚指数(LVHI)。结果单次灌胃后4h血压降至最低,并持续12h。每日灌胃12w后,各剂量玉米多肽组血压水平均显著低于阴性对照。血清、主动脉、肺中ACE活性和血桨AngⅡ显著低于阴性对照。结论玉米活性多肽通过抑制体内ACE活性、降低AngⅡ浓度明显降低SHR血压水平,并能部分逆转心肌肥厚作用。