大鼠重型颅脑损伤后早期下丘脑CRH表达增加及其意义

目的探讨在大鼠重度颅脑损伤后下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）的表达和分泌。方法应用多功能小型生物撞击机致大鼠重度颅脑损伤,采用免疫组化和PCR等技术进行检测下丘脑CRH表达的变化和规律。结果重度颅脑损伤后1h CRH表达明显增加,主要分布于室旁核和视上核,且表达呈逐渐增加的趋势,在伤后2-6h表达增高显著。结论重度颅脑损伤后早期炎症、应激反应中,下丘脑产生的CRH存在明显的增加,可能参与全身免疫炎症反应。     

CRH刺激大鼠下丘脑脑片CRH及CRH1R的表达研究

目的　通过CRH刺激大鼠下丘脑脑片 ,探讨下丘脑CRH和CRH1R在下丘脑中的分布和表达规律。方法　采用大鼠下丘脑脑片实验模型 ,运用免疫组织化学技术 ,观察CRH刺激大鼠下丘脑脑片后CRH和CRH1R在下丘脑中的分布和表达规律。结果　CRH刺激下丘脑脑片后下丘脑CRH和CRHlR含量明显增多 ,而CP 15 45 2 6、H89可显著抑制CRH和CRHlR的增加。结论　CRH刺激下丘脑脑片后增多的CRH与CRHlR结合后进一步引起下丘脑神经元CRH和CRHlR表达增加。提示在严重创伤应激反应中 ,CRH通过PKA途径实现对下丘脑神经元CRH的表达的超短正反馈调节。     

CRH通过PKA途径调节大鼠下丘脑CRH表达的研究

目的探讨促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin-releasing hormone,CRH)刺激下丘脑神经元表达CRH的信号调控机制.方法通过大鼠下丘脑脑片实验模型,运用免疫组织化学、Western blot技术,观察CRH激活下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素Ⅰ型受体(corticotropin-releasing hormonetype 1 receptor,CRH1R)后蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)信号通路的活性变化,及其与CRH表达的关系.结果CRH可引起下丘脑脑片磷酸化PKA、磷酸化CREB及CRH含量明显增加,而CP-154526、H89可显著抑制磷酸化PKA、磷酸化CREB及CRH含量的增加.结论在严重创伤应激反应中,CRH通过PKA途径实现对下丘脑神经元CRH的表达的超短正反馈调节.     

大鼠严重创伤后早期下丘脑c-fos和CRH mRNA的表达

目的 探讨严重创伤后下丘脑c-fos蛋白和CRH mRNA表达变化的关系。方法 以大鼠右肺中部重度撞击伤加右股骨中段骨折为模型，采用Western印迹和RT-PCR方法观察大鼠下丘脑组织内c-fos蛋白和CRH mRNA表达变化。结果 伤后下丘脑c-fos含量30min达高峰，以后迅速下降；CRH mRNA表达的变化明显迟于c-fos的变化，创伤后下丘脑CRH mRNA含量于2h增加最为明显，然后持续增加，12h达最高。结论 严重创伤后早期下丘脑迅速增加的c-fos对CRH mRNA的上调可能起关键的作用。     

松果体褪黑素对大鼠下丘脑CRH神经元的影响

目的 研究松果体和褪黑素对大鼠下丘脑室旁核促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)神经元形态和功能的影响以及补充褪黑素的作用.方法雄性清洁级SD大鼠100只,随机分为对照组、假手术对照组、松果体摘除组、松果体摘除+褪黑素腹腔注射7.5 mg/kg组和松果体摘除+褪黑素腹腔注射15 mg/kg组,采用原位杂交和免疫组织化学方法来检测松果体摘除及补充褪黑素后下丘脑CRH神经元的变化.结果松果体摘除后大鼠下丘脑室旁核CRH表达增强.松果体摘除大鼠补充褪黑素后,CRH神经元表达增强呈剂量依赖性恢复,但不能恢复至正常.结论松果体摘除导致大鼠下丘脑室旁核CRH神经元合成CRH增加,补充外源性褪黑素后能在一定程度上逆转上述异常.松果体可能是神经-内分泌-免疫网络的结构和功能的重要稳定因素之一. 术对照组、松果体摘除组、松果体摘除+褪黑素腹腔注射7.5 mg/kg组和松果体摘除+褪黑素腹腔注射15 mg/kg组,采用原位杂交和免疫组织化学方法来检测松果体摘除及补充褪黑素后下丘脑CRH神经元的变化.结果松果体摘除后大鼠下丘脑室旁核CRH表达增强.松果体摘除大鼠补充褪黑素后,CRH神经元表达增强呈剂量依赖性恢复.但不能恢复至正常.结论 果体摘除导致大鼠下丘脑室旁核CRH神经元合成CRH增加,补充外源性褪黑素后能在一定程度上逆转上述异常.松果体可能是神经-内分泌-免疫网络的结构和功能的重要稳定因素之一.     

局部脑缺血再灌注大鼠下丘脑CRH和NGF的动态表达

［摘 要］ 目的：探讨局部脑缺血对大鼠下丘脑的促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)和神经生长因子(NGF)以及下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)的影响。方法：选用正常老龄Wistar大鼠32只,雌雄各半,随机分组,每组4只大鼠。分假手术组和实验组,实验组分为缺血15 min组、缺血15 min再灌注1 h、6 h、1 d、2 d、4 d、9 d组。采用免疫组化方法对老龄大鼠局部脑缺血下丘脑的CRH和NGF表达进行动态观察。结果：假手术组下丘脑有少量CRH和NGF表达,实验组在缺血再灌注1 h内下丘脑CRH和NGF表达均无变化,此后缺血再灌注6 h下丘脑CRH和NGF均有短暂一过性消失,随后缺血再灌注2 d二者在下丘脑的表达相继明显增加。结论：脑缺血后下丘脑CRH分泌细胞并非立刻进入活动增强状态;脑缺血后下丘脑后续阶段存在CRH分泌细胞的活动增强效应;NGF对维系HPA的活动可能具有重要作用。     

损毁下丘脑不同脑区对折断腿骨所致血浆皮质酮变化的影响

清醒sprague-Dawley雄性大鼠64只,以折断胫腓骨造成应激。观察非内侧基底下丘脑脑区损毁对应激前(Bo)、后(Bs)血浆皮质酮变化的影响。以Bs/Bo及Bs-Bo的值衡量应激反应的大小。根据所损毁脑区的部位及范围将动物分为6组:假手术组、室旁核损毁组、室旁核部分损毁组、室旁核少量损毁组、下丘脑前部—视前区损毁组、下丘脑后部损毁组。用统计学方法比较了6组动物的Bs/Bo及Bs-B0值,以及根据4例室旁核完全损毁动物仍保持有应激反应的事实,我们得出结论:(1)在清醒大鼠的损伤性应激反应中,下丘脑室旁核较其他非基底内侧下丘脑区具有较重要的作用。(2)室旁核以外的促肾上腺皮质激素释放因子神经元可能也参与应激反应。     

高湿热刺激对大鼠下丘脑内神经元和星形胶质细胞可塑性变化的影响

目的 探讨高湿热环境下大鼠下丘脑的室旁核和视上核内神经元和星形胶质细胞的可塑性变化及其相互关系.方法 将大鼠置于仿真模拟气候舱[干球温度(40.0±0.5)℃,相对湿度(60±5%)]内,120 min后取出.采用免疫组织化学方法,观察Fos和GFAP在下丘脑室旁核和视上核中的表达并计录各组动物的行为学反应.结果 在高湿热环境下行为学上动物表现为躁动不安、呼吸加快、前爪抓挠面部;120min组中有2只动物死亡.免疫组织化学观察发现湿热刺激组下丘脑室旁核和视上核中的Fos和GFAP表达比对照组明显上调,两组之间差异有统计学意义.结论 机体下丘脑的室旁核和视上核中的神经元和星形胶质细胞共同参与了对高湿热刺激的反应及其调节过程.     

急性应激诱导即时反应基因c—fos和c—jun的表达：I：c—fos和c—j …

目的 研究下丘脑和海马内ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ蛋白的表达与应激反应之间的时效关系。方法 采用特异性抗体的原位免疫细胞化学方法，对游泳应激后不同时间点的大鼠下丘脑和海马内ｆｏｓ和ｊｕｎ蛋白阳性神经元的分布进行观察，用图像分析技术对大鼠下丘脑室旁核（ＰＶＮ），视上核（ＳＯＮ）和海马齿状回（ＤＧ）内的ｆｏｓ和ｊｕｎ阳性细胞的相对切面面积比和平均目标灰度进行分析。结果 游泳应激结束后３ｈ，室旁核和视上核及     

促肾上腺皮质激素释放激素对下丘脑神经元CREB的调控

目的:研究促肾上腺皮质激素释放激素(Corticotropin-releasing hormone,CRH)对下丘脑神经元内CREB(CAMP-responsive element-binding protein)含量变化的调节作用.方法:取孕17d胎鼠下丘脑分散培养下丘脑神经元,采用PTI(Photon technology international,PTI)荧光成像系统测量下丘脑神经元胞浆内游离钙浓度([Ca2 ]i)变化;测量和分析外源性CRH对培养下丘脑神经元内钙信号变化的影响,用Western blot方法测定神经元内P-CREB的含量变化,分别与用细胞膜L-型钙通道拈抗剂尼莫地平或CRHl受体(CRH1R)特异性拈抗剂CP-154526处理下丘脑神经元后[Ca2 ]i和P-CREB的变化作比较.结果:正常对照组的下丘脑神经元[Ca2 ]i含量较低,外源性CRH刺激后,[Ca2 ]i立即升高;预先应用尼莫地平或CP-154526处理再用CRH刺激的神经元[Ca2 ]i含量的增加明显被抑制,同时也可明显抑制神经元内P-CREB含量的增加.结论:在急性应激反应中,CRH可直接与下丘脑神经元CRH1R结合,开放膜L-型钙离子通道促使钙离子内流使[Ca2 ]i明显增加,从而进一步激活神经元内P-CREB信号通路.说明在调节下丘脑神经元激活过程中CRH可能起了重要的作用.     

去松果体对大鼠下丘脑-神经垂体系激素分泌影响免疫细胞化学研究

探讨松果体摘除对下丘脑－神经垂体系血管升压素（ＶＰ）、催产素（ＯＸＴ）合成和分泌影响。方法选用成年雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，自然光照，分成正常对照组、假手术对照组和松果体摘除组。用改良的手术方法摘除松果体，术后１，２，４，８周取下丘脑，Ｂｏｕｉｎｓ液固定，石蜡包埋连续切片，用免疫细胞化学Ｓ－Ｐ法染抗ＶＰ、抗ＯＸＴ和抗垂体后叶激素运载蛋白（ＮＰ），再用计算机图像分析仪测定下丘脑视上核、室旁核中各阳性细胞数及染色程度。结果松果体摘除后１周室旁核中ＶＰ阳性神经元数量及视上核、室旁核两核之和的ＶＰ、ＮＰ阳性细胞增多（Ｐ＜０．０５），术后４周时视上核及室旁核之和的各阳性细胞数量均较对照组明显升高并延续至术后第８周，而同期染色强度则从术后２周起下降。结论松果体摘除解除了对下丘脑－神经垂体系的抑制作用，因而促进血管升压素、催产素合成、转运和分泌，该作用从术后１周起开始出现。     

缺血性脑损伤大鼠下丘脑c—fos基因表达及药物调控

目的：从分子水平探讨缺血性脑损伤的病理生理改变和渗麦注射液的保护作用,方法：将15只雄性wistar大鼠随机分为对照组,缺血组和治疗组,采用免疫组织化学方法观察了缺血性脑损伤时大鼠下丘脑视上核和室旁核内神经元c-fos基因的表达及参麦注射液的保护作用。结果：缺血性脑损伤时大鼠视上核和室旁核内神经元 - 基因的表达明显明显增多（P＜0．05）,而用参麦注射液后明显减少,但未减少至正常水平（P＜05）,结论：缺血性脑损伤时下丘脑中c-fos基因表达增多,而参麦注射液对缺血性脑损伤可能有一定治疗作用。     

脊髓半切损伤后脊髓与大脑部分核团c-fos蛋白表达的实验研究

目的 :探索脊髓半切损伤后 ,脊髓、下丘脑室旁核 (PVN)和视上核 (SON)的c -fos蛋白表达的规律。方法 :将 5 6只大鼠随机分为脊髓损伤组 2 4只、假手术组 2 4只和正常组 6只 ,损伤组行左侧半脊髓横断术 ,损伤后 1,6,12 ,2 4h取脊髓、PVN和SON行冰冻切片 ,免疫组化法标记c -fos阳性细胞。结果 :脊髓半切损伤后 ,各时间点损伤侧脊髓灰质中有明显的c -fos阳性表达。PVN和SON在损伤后各时间点均有c -fos表达阳性细胞的增加 ,与假手术组、正常组比较 ,差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。结论 :脊髓损伤后脊髓、PVN和SON可产生明显反应 ,PVN和SON以不同的反应特点影响着神经递质的改变。     

脊髓横断后下丘脑室旁核和视上核Fos表达的观察

目的:观察不同节段脊髓横断后引起下丘脑室旁核(PVN)、视上核(SON)Fos表达,以初步探讨急性脊髓损伤引起脑内心血管调节核团反应的机制。方法:脊髓C4、T4、T12横断术后3h,用免疫组织化学方法观察PVN、SON内Fos表达。结果:PVN内Fos阳性神经元数目在C4组最高,T4组次之,T12组最低;SON内,各组间Fos阳性神经元数目差异无显著性。结论:急性脊髓损伤可引起PVN、SON神经元产生特异性反应,但两者发生反应的机制不同。     

迷走神经切断术后过敏性哮喘大鼠延髓内脏带、下丘脑室旁核和视上核的Fos蛋白表达

目的：研究支气管哮喘状态下迷走神经向脑传递免疫信息的作用。方法：建立大鼠哮喘模型，在致敏状态下切断或假切断颈部双侧迷走神经，术后2周用卵蛋白经呼吸道激发大鼠哮喘发作，2h后处死动物，用免疫组织化学ABC法观察延髓内脏带、下丘脑室旁核和视上核Fos蛋白的表达。结果：假手术组大鼠激发后，延髓内脏带、下丘脑室旁核和视上核内可发现大量Fos蛋白表达；手术组大鼠上述核团内的Fos蛋白表达量则明显减少。结论：迷走神经在支气管哮喘免疫应答中，可能是传递呼吸道免疫信息的重要途径之一。     

脑室注射高渗氯化钠诱导脑内c-fos与egr-1表达以及与AVP神经元的关系

目的　观察脑室注射高渗氯化钠诱导的脑内ｃ－ｆｏｓ 与ｅｇｒ－１ 的表达特征,并用双重细胞染色方法观察脑内ｃ－ｆｏｓ 表达与下丘脑视上核（ＳＯＮ）中加压素（ＡＶＰ） 能神经元之间的关系。方法　用ＳＤ 种系清醒大鼠,侧脑室微量注射高渗氯化钠,１ｈ 后作ｃ－ｆｏｓ 与ｅｇｒ－ １ 的免疫细胞化学染色和细胞双重染色。结果　（１） 脑室注射高渗氯化钠可在终末血管器官（ＯＶＬＴ）、正中视前核（ ＭＰＮ） 、ＳＯＮ、下丘脑室旁核（ＰＶＮ） 以及后脑的最后区（ＡＰ） 、孤束核（ＳＴＮ） 和臂旁外侧核（ＬＰＢＮ） 中同时诱导ｃ－ｆｏｓ 和ｅｇｒ－ １ 表达,在同一区域内ｅｇｒ－ １ 的表达略低于ｃ－ｆｏｓ,但无统计学差异;（２） 穹窿下器官（ＳＦＯ）中均无ｃ－ｆｏｓ 和ｅｇｒ－１ 表达;（３）ＳＯＮ 中可见部分ＡＶＰ免疫反应阳性与ｃ－ ｆｏｓ表达共存于同一神经元。结论　ｃ－ｆｏｓ 和ｅｇｒ－１ 对脑内高渗刺激诱导的表达部位基本一致,进一步证实了以往的研究结果。另外,脑内注射高渗氯化钠诱导的下丘脑细胞活动至少部分是通过ＡＶＰ能神经元的。