抗角蛋白单克隆抗体5 G 5对角质形成细胞增殖影响的实验研究

 目的 研究抗角蛋白单克隆抗体5G5治疗银屑病的作用机制。方法 腹腔注射乙烯雌酚有引起小鼠阴道上皮细胞增殖的作用,小鼠尾部表皮天然缺乏颗粒层,这两种特征与银屑病病理类似。不同组别的小鼠,以单抗5G5注射,观察其对角质形成细胞增殖的调节作用。结果 单抗5G5有较好的降低嗜银蛋白含量和小鼠阴道上皮细胞有丝分裂,以及促使角质形成细胞分化的作用。结论 抗角蛋白单克隆抗体5G5治疗银屑病的作用机制与调节角质形成细胞增殖有关。     

抗角蛋白自身抗体对培养角质形成细胞产生IL-6和IL-8的影响

目的 :研究抗角蛋白自身抗体 (AKautoAb)对培养角质形成细胞 (KC)产生细胞因子的影响。方法 :以IL - 1 β刺激无血清培养的KC及AKautoAb处理后的培养KC ,用MH6 0细胞活性法检测培养上清中IL - 6的产生 ,用ELISA检测培养上清中IL -8的产生。结果 :IL - 1 β可刺激KC产生IL - 6和IL - 8(P <0 .0 1 ) ,并有IL - 1 β浓度依赖性 ;AKautoAb对培养的KC产生IL -6和IL - 8有明显抑制作用 (P <0 .0 1 )。结论 :AKautoAb对培养KC产生细胞因子有明显抑制作用 ,这可能是AKautoAb有益于炎性皮肤病恢复的机制之一     

基因工程抗角蛋白人抗体的制备与鉴定

目的　制备亲和力高、性能良好的人源性抗角蛋白抗体。方法　以人表皮角蛋白为抗原从噬菌体抗体库中克隆特异性抗角蛋白抗体 ,采用链替换 (chain shuffling)技术对所获抗体进行亲和力成熟 ,并对其生物学性能进行一系列鉴定。结果　经过筛选半合成噬菌体抗体库 ,成功获得了能与角蛋白特异性结合的人源性抗角蛋白抗体 ;选择其中活性最好的一株抗体 ,通过轻链替换和重链替换使抗体亲和力得到了有效提高 ,达到8× 10 1 0 mol的理想水平。结论　用基因工程的方法可以制备高质量的人源性抗角蛋白抗体 ,为其功能和临床应用的进一步研究打下了基础     

从半合成噬菌体抗体库筛选抗角蛋白人抗体

目的;从半合成噬菌体抗体库中筛选人源性抗角蛋白抗体并进行鉴定。方法：经表皮角蛋白为抗原,通过吸附－洗脱－扩增过程从半合成噬菌体抗体库中筛选特异性抗角蛋白抗体。用ＥＬＩＳＡ和ＤＮＡ指纹分析对所获抗体进行鉴定。结果：经过４轮筛选,获得２０个能与角蛋白结合的阳性克隆,其中可产生特异性抗蛋白抗体的克隆１８个。经ＤＮＡ指纹分析,判定所获克隆分别包含４个不同的Ｆａｂ段基因。     

血卟啉单甲醚光动力学疗法对体外培养的人角质形成细胞增殖的影响

目的：观察人角质形成细胞株Hacat对血卟啉单甲醚（hematoporphyrin monomethyl ether，HMME）的吸收特性及HMME-PDT对角质形成细胞增殖的影响，为HMME-PDT用于临床银屑病的治疗提供初步的实验依据。     

银屑病患者血清抗角蛋白自身抗体对角朊细胞的作用

用人表皮吸附、消耗的方法观察了银屑病患者含有与不含抗角蛋白自身抗体的ＩｇＧ对培养角朊细胞代谢活性的影响，发现抗角蛋白自身抗体的存在对角朊细胞的增生代谢具有明显的抑制作用，与抗角蛋白单克隆抗体的作用相似，提示银屑病时抗角蛋白自身抗体在表皮的沉积可能量种继发性的保护反应，以限制病情的进展。     

角质形成细胞凋亡的分子机制

细胞程序性死亡称为凋亡,很多学者认为角质形成细胞的分化是一种特殊形式的细胞凋亡。许多皮肤病如银屑病、扁平苔藓、湿疹等与角质形成细胞的凋亡异常密切相关,本文综述了角质形成细胞凋亡中起重要作用的基因及其调控的具体分子机制等有关方面的问题。     

人源性角质细胞生长因子(KGF)的克隆及其表达分析

目的：克隆出正确的人源性角质细胞生长因子（KGF）并探讨影响其表达的因素。方法：应用RT－PCR技术克隆出KGF基因，并用pBV220表达质粒对其进行表达，然后用RNAdraw对其RNA进行分析。结果：带有信号肽的KGF基因在pBV220中表达量为10％左右，而去掉信号肽的KGF基因在pBV220中表达量估计只有1％－2％；利用RNAdraw分析的结果表明前者RNA前端没有形成茎环结构，而后者则形成了茎环结构，结论：KGF基因在细菌中表达量较低，信号肽是影响其表达量的重要因素。     

血卟啉单甲醚光动力学疗法对体外培养的人角质形成细胞增生的影响

目的观察人角质形成细胞株Hacat对血卟啉单甲醚(hematoporphyrinmonomethylether,HMME)的吸收特性及HMME-PDT对角质形成细胞增生的影响。方法对数生长期的Hacat细胞分别与浓度为0、10、20和40μg/ml的HMME孵育1h;同时将另一实验组的Hacat细胞与10μg/ml的HMME分别孵育0和30min、1和2h,分别以流式细胞仪检测孵育时间和孵育浓度对Hacat细胞吸收HMME的影响;在此基础上,将Hacat细胞分别与0、2·5、5、10、20和40μg/ml的HMME孵育2h,用532nm的倍频Nd∶YAG激光以20mW/cm2的功率密度分别照射0、2·5、5、10、20min,同时设立完全空白对照组和单纯光敏剂组,24h后以MTT法检测Hacat细胞的存活率。结果Hacat细胞对HMME吸收量随着孵育浓度的增高和孵育时间的增加而增多。单独照光或以高达40μg/ml的HMME孵育对Hacat无明显杀伤(P>0·05)。在激光功率密度相同的情况下,HMME-PDT对Hacat细胞的杀伤呈孵育浓度和激光能量密度相关性。结论Hacat细胞对HMME吸收呈孵育浓度和孵育时间相关性,孵育浓度及激光能量密度是影响HMME-PDT杀伤效应非常重要的影响因素,在实验范围内的HMME-PDT能对Hacat细胞产生明显的杀伤作用。     

人源抗HBsAg噬菌体抗体的筛选、鉴定及基因序列分析

目的筛选与鉴定人源抗乙肝表面抗原(HBsAg)噬菌体抗体,并对其进行基因序列分析。方法利用噬菌体表面递呈技术,从人的外周淋巴细胞中分离和扩增抗体基因,构建抗体组合文库,经亲和淘洗从该文库中筛选人源抗HBsAg噬菌体抗体,通过ELISA及竞争抑制实验鉴定其活性和特异性,并分析获得的抗HBsAg人源抗体重链和轻链基因序列。结果从第3轮淘洗洗脱下来的噬菌体感染细菌长出的菌落中挑出30个,进行ELISA检测,取A490值最高(1.47±0.08)的一株进行竞争抑制试验,结果A490为0.35±0.10,抑制率为76%,所筛出的噬菌体抗体为HBsAg的特异性抗体,酶切分析显示其包含重链和轻链基因,序列分析表明重链可变区(VH)属人免疫球蛋白VHⅠ亚群,轻链可变区(VL)属于VκⅠ和VκⅢ亚群。结论从所构建的抗体库中,筛选出能特异结合HBsAg的抗HBsAg噬菌体抗体,说明通过噬菌体抗体库筛选人源抗HBsAg噬菌体抗体在技术上是可行的,这为抗HBsAg基因工程抗体的应用以及设计针对乙型肝炎的新型靶向治疗策略奠定了基础。     

表达hEGF导入基因的角朊细胞促进体外培养的正常角朊细胞增殖

目的 观察含外源性人表皮细胞生长因子（ｈＥＧＦ）基因改造的角朊细胞（ｈＥＧＦ－ＭＨＫ），对正常培养的角朊细胞（ＮＨＫ）增殖的影响；探讨转ｈＦＧＦ对创面愈合的生物学效应及作用机理。方法 收集含真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ｈＥＧＦ的Ｈｅｇｆ－ＭＨＫ细胞培养上清，采用放射免疫分析法检测收集的上清液中ｈＥＧＦ含量；以１０％的浓度加入由正常人皮肤组织分离培养的ＮＨＫ细胞培养基内；ＭＴＴ法测定ＮＨＫ细胞增减１５     

抗角蛋白自身抗体对培养人舌鳞癌细胞表达表皮生长因子受体的免疫组化研究

 目的 探讨抗角蛋白自身抗体(AK auto Ab)对培养人舌鳞癌细胞表达表皮生长因子受体(FGFR)的作用.方法 用不同浓度AK aut Ab作用于培养人舌鳞癌细胞后,用免疫组化方法,测鳞癌细胞表达ECFR的变化,并做图像分析.结果 研究发现AK auto Ab对鳞癌细胞EGFR的表达有抑制作用,并呈浓度依赖性,经统计学检验显示有极显著意义(P<0.01).结论 AK auto Ab对鳞癌细胞EGFR的表达有抑制作用.     

KGF对离体子宫内膜上皮细胞生长与分泌的影响

目的:观察KGF对离体培养的EEC生长和分泌CA125的影响。方法:体外培养增殖期EEC,加入不同浓度KGF作用后,MTT法检测OD值了解细胞生长情况,磁酶免法测定CA125分泌。结果:①不同浓度KGF对EEC的生长、分泌均有刺激作用,以50ng/ml作用最明显;②MTT法所测OD值与CA125浓度有显著的相关性。结论:KGF可促进体外培养的增殖期EEC生长和分泌,EEC分泌CA125的量与细胞生长有关。     

体外培养半月板纤维软骨细胞增殖和胶原表达特性的研究

目的　研究体外单层培养条件下猪半月板纤维软骨细胞增殖和胶原的表达,为构建自体组织工程化半月板奠定基础。　方法　采用改良的Klagsbrun法,从8只45d龄长枫杂交仔猪的半月板消化获取细胞进行体外单层培养。形态学观察、群体倍增时间(populationdoubletime,PDT)、增殖速度趋势图、原位杂交及免疫细胞化学染色法作为评定指标。　结果　半月板组织的平均细胞获得率为(2.31±0.66)×10     

The effect of circulating antigen on the biodistribution of the engineered human antibody hCTM01 in a nude mice model

Clinical studies are currently underway to assess the biodistribution and therapeutic potential of the genetically engineered human antibody hCTM01 directed against polymorphic epithelial mucin (PEM) in patients with ovarian carcinoma. The present study was undertaken to assess the effect of circulating PEM antigen on the biodistribution of the anti-PEM antibody in mice bearing MUC-1 transfected adenocarcinoma cell lines. Tumour xenografts were established from three cell lines: 413-BCR, which expressed antigen on the cell surface and also shed antigen into the circulation, E3P23, which expressed the antigen but dit not shed into the ciruclation, and a negative control (410.4 MUCI). Groups of five mice were injected with 1.0 mg/kg antibody, imaged after 72 h and then sacrificed, followed by assay of tissue uptake. The results showed a clear difference in the tumour and liver uptake, with the non-secreting cell line showing almost twice the tumour uptake and approximately 20% of the liver uptake of the secreting cell line.     

木醋杆菌纤维素对人皮肤成纤维细胞增殖及胶原含量的影响

目的研究木醋杆菌纤维素对人皮肤成纤维细胞（HSFb）的增殖及胶原蛋白合成的影响．探讨其促进创面愈合的可能机制。方法体外培养的HSFb随机分为2组,1组为实验组与木醋杆菌纤维素敷料共同培养．1组设为空白对照组。应用流式细胞仪检测细胞周期变化,应用碱水解法检测培养液中羟脯氨酸的含量变化,检测2组HSFb培养72h后的培养上清液中I型与Ⅲ型胶原含量及其比值的变化。结果细胞周期时项分析结果显示实验组细胞周期S＋G州期细胞百分率及增殖指数PI值较空白组增高（P〈0．05）。实验组在不同时间段时其成纤维细胞培养液中羟脯氨酸含量均明显高于空白组（P〈0．05）。实验组与空白组比较,培养上清液中I型与Ⅲ型胶原含量增高,I型与Ⅲ型胶原比值下降（P〈O．05）。结论木醋杆菌纤维素能有效促进人皮肤成纤维细胞的增殖和胶原的合成,可能与其促进创面愈合的机制有关。     

Effect of blood on the morphological,biochemical and biomechanical properties of engineered cartilage

The use of autologous chondrocytes seeded onto a biological scaffold represents a current valid tool for cartilage repair. However, the effect of the contact of blood to the engineered construct is unknown. The aim of this work was to investigate in vitro the effect of blood on the morphological, biochemical and biomechanical properties of engineered cartilage. Articular chondrocytes were enzymatically isolated from swine joints, expanded in monolayer culture and seeded onto collagen membranes for 2 weeks. Then, the seeded membranes were placed for 3 days in contact with peripheral blood, which was obtained from animals of the same species and diluted with a standard medium. As controls, some samples were left in the standard medium. After the 3 days’ contact, some samples were retrieved for analysis; others were returned to standard culture conditions for 21 additional days, in order to investigate the “long-term effect” of the blood contact. Upon retrieval, all seeded samples showed increasing sizes and weights over time. However, the samples exposed to blood presented lower values with respect to the controls. Biochemical evaluation demonstrated a reduction in the mitochondrial activity due to blood contact at the early culture time (3 days post blood contact), followed by a partial recovery at the longer culture time (21 days post blood contact). Histological evaluation demonstrated evident cartilage-like matrix production for both groups. Biomechanical data showed a reduction of the values, followed by stabilization, regardless of the presence of blood. Based on the data obtained in this study, we can conclude that blood contact affects the chondrocyte activity and determines a delay in the dimensional growth of the engineered cartilage; however, at the experimental times utilized in this study, this delay did not affect the histological pattern and the biomechanical properties of the construct.