Experimental study on co-cultured rat Schwann cells and osteoblasts

目的 观察大鼠雪旺细胞与成骨细胞体外联合培养条件下,成骨细胞的生长和增殖情况.方法 日龄3 d的SD大鼠,采用混合酶消化法体外分散培养雪旺细胞和成骨细胞,并用Millicell 小室实现雪旺细胞与成骨细胞的联合培养.待细胞生长稳定后,用倒置相差显微镜观察细胞的形态学特征,MTT法检测成骨细胞的增殖情况.结果 对照组成骨细胞于10 d左右可以铺满培养板底,此时细胞体积增大、数量增多,形态以多角形为主,细胞之间出现重叠生长,联系密切.共培养组成骨细胞生长速度增快,7 d左右即可铺满培养板底,逐渐形成铺路石状,其中心部位的细胞较密集,可以出现散在的钙化结节.MTT结果显示共培养组成骨细胞增殖明显.结论 雪旺细胞对成骨细胞的生长、增殖具有一定的促进作用.但是,关于该作用是否是通过FGFs实现的还有待于进一步的研究.     

细菌纤维素与雪旺细胞体外生物相容性研究

目的 探讨雪旺细胞与细菌纤维素体外共培养时的生物相容性,为细菌纤维素制备成组织工程化神经提供实验依据.方法 将背根神经节与细菌纤维素膜体外共培养,分别在培养的第1、2、5天通过扫描电镜和光镜观察雪旺细胞的形态及增殖、迁移情况,免疫细胞化学染色检测S-100蛋白表达情况;将坐骨神经来源的纯化雪旺细胞在细菌纤维素浸出液中培养,分别在24、48、72 h采用倒置显微镜和免疫细胞化学染色观察雪旺细胞形态及S-100蛋白的表达情况,并通过MTT检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞周期来综合评价雪旺细胞与细菌纤维素的生物相容性.结果 雪旺细胞能在细菌纤维素膜表面正常生长、迁移;与普通培养基相比,细菌纤维素浸出液对雪旺细胞的生长、增殖及S-100蛋白的表达无明显影响.结论 雪旺细胞能够在细菌纤维素膜表面及细菌纤维素浸出液中良好生长,体外与细菌纤维素具有较好的生物相容性.     

兔骨髓基质干细胞的培养及成骨诱导研究

目的观察体外培养条件下兔骨髓基质干细胞的主要生物学特性及向成骨细胞分化的能力。方法取兔股骨,冲洗骨髓腔,进行细胞的贴壁体外培养,培养至第四代加入含成骨诱导剂的DMEM培养基与空白组为对照组;噻唑蓝（MTT）检测两组骨髓基质干细胞的增殖能力,进行成骨细胞的钙结节茜素红染色与I型胶原的免疫组化染色。结果骨髓基质干细胞7-14 d可见少量的集落形成,24 d时观察见细胞基本铺满瓶底。在矿化液条件下培养1周左右,细胞间出现了致密圆形团,同时细胞的增殖能力较常规培养有所降低;茜素红染色结果显示矿化细胞间出现的致密的、圆形不透光团块呈现片状的棕染,着色区域,I型胶原的免疫组化染色强阳性。结论贴壁筛选法培养骨髓基质干细胞,操作简单,细胞易于成活,不失为一种良好的方法;虽然矿化液可使其向成骨细胞转化,但增殖速度变慢。     

C6胶质瘤细胞对体外共培养大鼠神经干细胞增殖影响的初步研究

目的探索与C6胶质瘤细胞体外共培养后大鼠神经干细胞（Neural Stem Cells NSCs）的增殖变化。方法分别培养神经干细胞、星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞。利用共培养池（cell culturetranswell inserts）建立两种细胞的体外共培养模型。应用相差显微镜及电镜观察各组共培养后NSCs的形态变化;共培养后NSCs MTT法作生长曲线。结果原代培养后获得神经干细胞及星形胶质细胞;与C6胶质瘤细胞共培养7天后的NSCs增殖较对照组快,电镜观察可见核质比增高,细胞器较发达。结论 C6胶质瘤细胞对体外共培养的大鼠NSCs的增殖有一定促进作用。     

辛伐他汀对成骨细胞增殖和矿化功能影响的实验研究

目的：研究辛伐他汀对原代培养大鼠颅骨成骨细胞增殖和矿化功能的影响。方法:酶消化法分离培养大鼠颅骨成骨细胞,分别用空白培养基、不同浓度辛伐他汀及不同浓度的rhBMP-2作用24h后,MTT法测量药物对细胞增殖活性的影响,细胞接种到培养板连续培养7d,von Kossa染色观察成骨细胞矿化结节,采集图像并转换处理后计算矿化结节面积的百分比。结果:辛伐他汀对成骨细胞增殖活力的增加呈剂量依赖方式,而且可使成骨细胞矿化面积百分比显著增加,与rhBMP-2的作用相当。结论:辛伐他汀可促进体外培养大鼠颅骨成骨细胞的增殖和矿化,从而发挥促进骨形成的作用。     

淫羊藿总黄酮对体外培养成骨细胞的影响

目的：观察淫羊藿总黄酮对体外培养成骨细胞的作用。方法：取新生1－3d SD大鼠头盖骨用酶消化法分离成骨细胞。第3代细胞经MTT法、茜素红染色法观察淫羊藿总黄酮对体外培养成骨细胞增殖、矿化结节形成的影响。结果：淫羊藿总黄酮1－10μg/ml浓度具有显著的促进成骨细胞增殖及提高矿化结节形成数量的作用。结论：淫羊藿总黄酮具有促进体外成骨细胞增殖及分化成熟的作用。     

壮骨止痛胶囊含药血清对大鼠成骨样细胞增殖分化影响的实验研究

[目的]观察壮骨止痛胶囊含药血清对成骨细胞增殖、分化的影响,为明确壮骨止痛胶囊防治骨质疏松症的作用机制提供实验依据。[方法]取2代培养的大鼠成骨细胞,在壮骨止痛胶囊含药血清为40%的浓度中培养。观察细胞的生长及钙结节的形成,碱性磷酸酶(ALP)测定成骨细胞增殖和分化,噻唑蓝(MTT)法测成骨细胞生长曲线。[结果]成骨细胞在6d可铺满瓶壁,30d可形成钙结节,壮骨止痛胶囊含药血清可促进成骨细胞的增殖、ALP的分泌。[结论]壮骨止痛胶囊含药血清可促进大鼠成骨细胞的增殖、分化。壮骨止痛胶囊含药血清可能通过直接促进成骨细胞增殖、分化,从而防治骨质疏松症。     

不同条件对胎鼠海马神经干细胞增殖分化的影响

目的:探讨不同条件对胎鼠海马神经干细胞的增殖与分化的影响.方法:从胎鼠海马获取神经干细胞;新生鼠坐骨神经获取雪旺细胞.培养成功后对细胞进行鉴定.将提取的神经干细胞放在不同的培养条件下:雪旺细胞与神经干细胞共培养、DMEM/F12 bFGF EGF及DMEM/F12进行比较,观察其增殖和分化的情况.结果:含雪旺细胞的共培养组神经干细胞生长分化得最好,bFGF EGF组次之,DMEM/F12组生长的最差;共培养组细胞团之间建立了良好的突触联系,尤其是远距离的细胞间更为明显.此现象在bFGF EGF组及DMEM/F12组则没有出现,且该两组生长速度也较共培养组差.结论:雪旺细胞能更好的促进神经干细胞的生长、增殖和分化,它为神经干细胞提供了与活体内相似的环境 .     

成年大鼠周围神经损伤后远侧端雪旺细胞变化的体外研究

目的:体外观察大鼠坐骨神经损伤不同时间段远侧端雪旺细胞的变化。方法:切断成年SD大鼠坐骨神经,以远侧端为研究对象,术后1、2周和1个月取材,进行雪旺细胞体外培养,倒置相差显微镜,S-100免疫荧光染色及激光扫描共聚焦显微镜观察雪旺细胞的形态,MTT检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞周期。结果:神经被切断后,雪旺细胞形态发生改变,1月组最明显;细胞活力和增殖能力也发生变化,切断1周组活力和增殖能力最强,随后逐渐变弱。结论:周围神经损伤后雪旺细胞形态发生变化,细胞的活力和增殖能力随着时间的推移逐渐下降但仍未停止增殖。     

雪旺细胞与脊髓前角运动神经元共培养对其功能的影响

目的 探讨脊髓前角运动神经元在间接共培养情况下是否可以对雪旺细胞(Schwann cells,SCs)的功能产生影响.方法 从孕15 d的SD胎鼠的脊髓内分离培养脊髓前角运动神经元;从新生1 d的SD大鼠的坐骨神经内分离培养SCs.将上述两种细胞分别种植于Transwell培养板的上、下室内,通过细胞计数、3H-TdR掺入观察SCs的存活与增殖情况,Western blot检测SCs表达脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)情况.然后将经共培养处理和未经共培养处理的SCs分别与经1%低氧预处理4 h的脊髓前角运动神经元共培养72 h,通过细胞计数、MTT法检测脊髓前角运动神经元存活情况.结果共培养组SCs增殖指数为(24 197.6±739.8),明显优于直接培养组的(17 451.2±512.7)(P＜0.05),共培养组SCs表达BDNF的水平明显高于直接培养组(P＜0.05).缺氧后处理组脊髓前角运动神经元存活数量及MTT分别为(89.6±2.3)、(0.238 4±0.006 7),分别优于对照组的(66.4±4.8)、(0.196 2±0.005 9)(P＜0.05).结论 在间接共培养情况下,脊髓前角运动神经元可以促进SCs的增殖及分泌BDNF等功能;SCs对缺氧后的脊髓前角运动神经元具有更明显的保护作用.利用Transwell进行间接共培养,可以获得活化状态的SCs.     

碱性成纤维细胞生长因子缓释微球对雪旺细胞作用的实验研究

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）缓释微球对雪旺细胞的作用。方法 培养雪旺细胞，将bFGF、bFGF-聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球（PLGA微球）和bFGF-聚乳酸-聚乙二醇共聚物微球（PELA微球）分别加入三个组的雪旺细胞培养液中。用细胞计数法测定雪旺细胞的数量，四甲基偶氮唑盐微量反应比色法（MTT法）测定雪旺细胞的活力，流式细胞仪测定雪旺细胞的细胞周期。结果 培养1、2d时，bFGF组的雪旺细胞计数、活力明显高于PLGA微球组和PELA微球组；培养3、4d时，bFGF组和PLGA微球组的雪旺细胞计数、活力明显高于PELA微球组；培养6、8d时．PLGA微球组的雪旺细胞计数、活力明显高于bFGF组和PELA微球组。流式细胞仪检测结果显示，培养2d后，bFGF组的Gz／M＋S期百分数最高；培养4、8d后，PLGA微球组的G2／M＋S期百分数最高，差异具有统计学意义。结论 游离bFGF对雪旺细胞促分裂增殖作用效应期短，而PLGA微球能在较长时期内促进雪旺细胞的分裂增殖，PELA微球虽然达到了缓释的性能要求，但释放出的bFGF的生物活性受到了破坏。     

低氧对鼠雪旺氏细胞增殖的影响

目的观察低氧对鼠雪旺氏细胞体外增殖的影响,为雪旺氏细胞扩增培养探索新方法。方法原代分离培养雪旺氏细胞并鉴定,将培养至第三代的细胞分为3组,分别为对照组,10%02组和3%O2组。对各组细胞记数;测定培养液中氧含量和乳酸浓度及各组细胞的增殖指数。结果随着环境氧浓度的下降,细胞培养液中的氧含量也逐渐下降（P〈0.05）,而乳酸浓度逐渐升高（P〈0.05）。低氧组雪旺氏细胞数目比常氧组明显增加,尤以10%O2组更为明显（P〈0.05）,3%O2组在低氧1d和2d时增殖指数低于常氧组,低氧4时,增殖指数增加;而10%O2组增殖指数一直高于常氧组（P〈0.05）。结论轻中度低氧有利于鼠雪旺氏细胞的体外增殖。     

蛋白激酶C激动剂及抑制剂对雪旺氏细胞增殖及表达NGF的影响

目的 :研究蛋白激酶C激动剂PMA及抑制剂H 7对大鼠坐骨神经雪旺氏细胞增殖及表达NGF的影响。方法 :采用双酶法 ,培养大鼠坐骨神经雪旺氏细胞 ,消化传代的雪旺氏细胞加入 10 -11mol/L、10 -10 mol/L、10 -9mol/L、10 -8mol/L、10 -7mol/LPMA及 10 0microMH 7共孵育 3～ 6天后 ,一部分台盼蓝染色计细胞数 ,一部分加入3 H TdR测摄取率 ,一部分固定后采用核酸原位杂交技术 (ISH)测雪旺氏细胞中NGFmRNA表达变化。结果 :不同浓度的PMA使雪旺氏细胞数及3 H TdR摄取率增加与对照组相比差异有显著意义 ,其中 10 -9mol/LPMA使细胞数增加及3 H TdR摄取率达到高峰为最适深度 ,而H 7显著抑制细胞数及3 H TdR摄取率 ,差异有显著意义 ,10 -10 mol/L、10 -9mol/L、10 -8mol/LPMA使雪旺氏细胞NGFmRNA光密度显著增加差异有显著意义 ,而H 7则抑制雪旺氏细胞NGFmRNA表达差异有显著意义。结论 :PKC可能参与了雪旺氏细胞增殖及表达NGFmRNA ,PMA起促进作用而H 7起抑制作用。     

Effect of Rat Schwann Cell Secretion on Proliferation and Differentiation of Human Neural Stem Cells

Objective:To investigate the effect of rat Schwann cell secretion on the proliferation and differentiation of human embryonic neural stem cells(NSCs).Methods:The samples were divided into three groups.In Group One,NSCs were cultured in DMED/F 12 in which Schwann cells had grown for one day.In Group Two,NSCs and Schwann cells were co-cultured.In Group Three,NSCs were cultured in DMEM/F12.The morphology of NSCs was checked and β-tubulin,GalC,hoechst 33343 and GFAP labellings were detected.Results:In Group One,all neural spheres were attached to the bottom and differentiated.The majority of them were β-tubulin positive while a few of cells were GFAP or GalC positive.In Group Two,neural Spheres remained undifferentiatied and their proliferation was inhibited in places where Schwann cells were robust.In places where there were few Schwann cells,NSCs performed in a similar manner as in Group One.In group Three,the cell growth state deteriorated day after day,On the 7th day,most NSCs died.Conclusion:The secretion of rat Schwann cells has a growth supportive and differentiation-inducing effect on human NSCs.     

碱性成纤维细胞生长因子缓释微球对许旺细胞在小肠粘膜下层细胞粘附活性的影响

目的观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）缓释微球对许旺细胞（SC）在小肠粘膜下层（SIS）上的粘附影响。方法运用双酶两步消化法对SC进行体外分离、培养、纯化,将bFGF-PLGA缓释微球（bFGF-PLGA-MS）与SC及SIS进行体外复合培养,并以游离bFGF组及单纯培养液组进行对比,观察bFGF-PLGA缓释微球对SC在SIS上粘附影响。结果运用双酶两步消化的体外原代培养方法获取的雪旺细胞数量较多,细胞纯度可达90%以上。细胞的体外增殖活性良好,细胞增殖周期约为6～7天,培养后2～7天为对数生长期,第7天后进入生长平台期;bFGF缓释微球能持续地促进雪旺细胞在SIS上的粘附、增殖及迁移;细胞增殖周期缩短,细胞能较稳定地保持着良好的活性;提高了细胞增殖指数,并使SIS上的SC持续保持较高的增殖活性;细胞数量与bFGF含量的相关系数为0.988（P=0.02）,表明两者间有明显正相关关系。结论 bFGF-PLGA微球的药物缓释促进了SC在SIS上持续而稳定的粘附,为以SC复合SIS构建人工神经提供了有利条件。     

碱性成纤维细胞生长因子缓释微球对许旺细胞在小肠粘膜下层增殖活性的影响

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）缓释微球对许旺细胞（SC）在小肠粘膜下层（SIS）上增殖影响。方法运用双酶两步消化法对 SC 进行体外分离、培养、纯化,将 bFGF-PLGA 缓释微球（bFGF-PLGA-MS）与 SC 及 SIS进行体外复合培养,并以游离 bFGF 组及单纯培养液组进行对比,观察 bFGF-PLGA 缓释微球对 SC 在 SIS 上增殖影响。结果运用双酶两步消化的体外原代培养方法获取的许旺细胞数量较多,细胞纯度可达90%以上。细胞的体外增殖活性良好,细胞增殖周期约为6～7d,培养后2～7d 为对数生长期,第7d 后进入生长平台期; bFGF 缓释微球能持续地促进许旺细胞在 SIS 上的增殖;细胞增殖周期缩短,细胞能较稳定地保持着良好的活性;提高了细胞增殖指数,并使 SIS 上的 SC持续保持较高的增殖活性;细胞数量与 bFGF 含量的相关系数为0.988（P =0.02）,表明两者间有明显正相关关系。结论bFGF-PLGA 微球的药物缓释促进了SC 在SIS 上持续而稳定的增殖,为以SC 复合SIS 构建人工神经提供了有利条件。     

猫角膜内皮细胞与人脉络膜色素瘤细胞共培养后增殖能力的变化

目的观察猫角膜内皮细胞(CEC)与人脉络膜黑色素瘤细胞(OCM-1)共培养后增殖能力及细胞周期的变化。方法将角膜内皮细胞分别与肿瘤细胞OCM-1、兔角膜基质细胞在Transwell体系中共培养,通过流式细胞术观察内皮细胞增殖能力及细胞周期的变化。结果与空白对照组角膜内皮细胞周期比较,肿瘤细胞组与基质细胞组角膜内皮细胞S期细胞比例增加,G1期细胞比例下降,肿瘤组增加幅度高于基质细胞组的。肿瘤细胞组角膜内皮细胞S期细胞比例比空白对照组的平均增加近19%,增殖能力显著提高。结论与肿瘤细胞OCM-1共培养能促进角膜内皮细胞增殖。     

冲击波对体外培养的鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的：探讨冲击波对体外培养的鼠成骨细胞的增殖及分化能力的影响。方法：将原代培养的成骨细胞随机分成冲击波组和对照组,用不同能量（5、10、15、20 kV）冲击波处理后接种于96孔培养板,根据细胞存活率和增殖情况确定最佳的冲击波能量值。将传4代成骨细胞用冲击波处理后,用CCK-8法、细胞分泌碱性磷酸酶试剂盒、茜素红染色对两组细胞增殖及分化进行测定。结果：冲击波处理体外原代培养成骨细胞的最佳能量值为10 kV（500次）,CCK-8法检测显示,冲击波组细胞增殖速度快于对照组（P〈0.001）,细胞分泌碱性磷酸酶高于对照组（P〈0.001）,茜素红染色显示,冲击波组矿化结节面积明显大于对照组（P〈0.001）。结论：最佳能量冲击波可促进成骨细胞的增殖与分化。     

小鼠胸腺上皮细胞的培养、鉴定及对淋巴细胞促增殖作用的初步研究

目的 研究小鼠胸腺上皮细胞的分离培养方法、鉴定及其对胸腺淋巴细胞的促增殖作用。方法 无菌取4~5周龄BALB/c小鼠的胸腺, 组织块培养30天, 观察不同时间细胞形态的变化;0.1%胰蛋白酶消化细胞传代;用波形蛋白和角蛋白进行免疫组化鉴定;新型细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒比色法检测地塞米松对胸腺、脾脏淋巴细胞单独培养及胸腺淋巴细胞与胸腺上皮细胞共培养的抑制作用。结果 培养至第3~4天可见贴壁的组织块周围出现少量胸腺上皮细胞, 从内到外细胞形状为圆形、多边形、树突状、梭形等;培养至10天左右时, 细胞生长较快, 出现大量的贴壁细胞;培养21天左右细胞大量融合并呈典型的鹅卵石样排列;细胞免疫组化显示广谱角蛋白呈阳性反应, 波形蛋白呈阴性反应;随着药物浓度的增加, 胸腺、脾脏淋巴细胞存活率均降低, 共培养后胸腺淋巴细胞的存活率升高。结论 组织块法体外培养小鼠胸腺上皮细胞简单可行;胸腺上皮细胞具有促胸腺淋巴细胞增殖的作用。