流行性出血热病毒在细胞培养中的传代适应

作者以非疫区黑线姬鼠为实验动物,自疫区黑线姬鼠肺组织分离出三株流行性出血热(EHF)病毒,并使之在绿猴肾传代细胞(Vero,E6纯化系)及人肺癌细胞(A549) 中进行传代,均于第2～3代开始查见对EHF恢复期患者血清的免疫荧光反应,至第5代基本稳定适应。实验结果表明,E6细胞及 A549细胞对 EHF病毒的传代适应均比较敏感。E6适应株的病毒滴度均在10~5(TCID_(50)/ml)以上。用感染E6细胞及A549细胞病毒抗原检查EHF     

从病人血清中分离的一株流行性出血热病毒的鉴定

<正> 从流行性出血热(EHF)患者急性期血清中,分离出一株能传代的相关病原因子.可通过除菌滤膜,在A—549细胞中不产生病变,以感染细胞作抗原,用朝鲜出血热(KHF)抗原检查为阳性的EHF患者血清,以间接免疫荧光法作效价滴定,两种抗原测定的结果基本一致.12例EHF患者双份血清测定的结果,11例     

流行性出血热病毒激活人血清补体系统体外试验取得新进展

流行性出血热(EHF)是一种免疫复合物型变态反应性疾病,有关其发病机理至今尚未完全阐明。为了探索EHF病毒在激活人血清补体(C)系统中所起的作用,上海第一医学院华山医院传染病教研室和安徽省医学科学研究所微生物研究室进行了体外激活试验,最近取得了一些进展。他们比较了不同毒株、保温时间等对补体系统的激活作用,并用正常抗原和盐水作为对照。实验用正常人血清经间接荧光试验证实其抗EHF病毒为阴性;按血清中G_(1p)、C_4、C_3组分消耗和C_(3c)出现作为补体系统激活指标。实验结果表明:一、不同来源的毒株,其激活强度有所不同。例如,自患者分离的、接种于乳鼠脑的F_1(M)4株和A_(549)细胞的F_1-13株的激活强度,比自野鼠分离的、接种于A_(549)细胞的F_1-13株为大。二、将     

流行性出血热病毒Vero-E6细胞病变株的分离和鉴定

从EHF患者血清中分离到8株EHF病毒,在E 6细胞中传代适应过程中,发现有5株EHF病毒分别在第4～10代出现规律的细胞病变(CPE),对其中两个CPE株(HFN-04和-19)进行了一系列特异性鉴定试验。实验结果表明:(1)病毒的CPE发展与病毒增殖动态完全一致;(2)CPE株的主要生物学和理化性状均符合EHF病毒;(3)用CPE株病毒感染细胞抗原片检测EHF患者双份血清,其恢复期血清抗体均呈4倍以上增高反应;(4)病毒的CPE可被患者血清及EHF、KHF免疫血清所中和,不能被正常兔血清和Reo病毒1—3型多价血清所中和;(5)CPE株病毒感染的E_6细胞几乎能完全吸收EHF患者血清及EHF、KHF抗血清中的特异性抗体;(6)CPE株病毒感染鼠脑悬液与EHF病毒A9株McAb25-1致敏血球呈阳性血凝反应。据此,首次证实了EHF病毒至少有部分毒株能引起E_6细胞规律性CPE。EHF病毒CPE株的发现为EHF的诊断和防治工作提供了有利条件。     

用大白鼠乳鼠原代肺细胞直接从病人血清中分离流行性出血热病毒

我国用A-549和VeroE6细胞从啮齿类动物和病人血清中分离流行性出血热(EHF)病毒,相继获得成功。但上述分离到的毒株均已通过传代细胞不同代次的传代,不宜作为EHF疫苗的筛选毒株。1983年EHF流行季节,我们在流行区采集了急性期(发病2～5天以內)病人血清用大白鼠乳鼠原代肺细胞(RL)同样分离到EHF病毒。典型EHF病人急性期血液按常规方法     

用大白鼠乳鼠原代肺细胞直接从病人血清中分离流行性出血热病毒

<正> 1983年流行性出血热(简称 EHF)流行季节,我们在流行区采集发病2～5天以内的急性期病人血清,用大白鼠乳鼠原代肺细胞(简称 RL)同样分离到 EHF 病毒。方法:将典型 EHF 病人急性期血液按常规方法分离血清,各取0.5ml 接种 RL 单层细胞青霉素小瓶,37℃吸附2小时,     

应用EHF-A549细胞抗原片检测流行性出血热抗体的初步报告

以往检测流行性出血热(EHF)抗体采用的间接兔疫荧光试验是以KHF-A549细胞作为底物的。最近,我国已分离成功流行性出血热病毒,并可在A549细胞中传代。本文应用国产EHF-A549细胞涂片检查本地区EHF病人血清特异性抗体。检测结果与临床诊断符合率较高,急性期测IgM,阳性率为84.4％;恢复期测定IgG,阳性率为90.6％。由此认为国产抗原片更适宜于检测本国EHF患者的血清抗体。     

从流行性出血热患者血清中分离病毒的研究

应用Vero—E_6细胞从流行性出血热(EHF)患者血清中分离出两株病毒,经初步鉴定表明:病毒不耐酸,对脂溶剂敏感,不被5—碘脱氧脲嘧啶核苷所抑制,属RNA病毒;所分离病毒与流行性出血热病毒(EHFV)抗血清和EHF患者血清做间接免疫荧光抗体法试验(IFA)均为阳性,其感染性可被EHF恢复期病人血清中和;将该病毒感染细胞做超薄切片在电镜下查到EHF病毒颗粒。     

流行性出血热病原体在A-549细胞中的繁殖及其特性检查

从黑线姬鼠肺分离并传至第8代的EHF相关抗原A9和A10,能在A-549细胞中繁殖、传代。用A-549细胞抗原检查160份血清,76份EHF恢复期血清中72份免疫荧光反应阳性,57份正常人和非EHF病人血清56份阴性,27例EHF病人双份血清抗体滴度均有4倍以上升高;KHF病毒抗血清显若阻断EHF相关抗原同EHF病人血清的阳性反应,呼肠孤病毒多价抗血清和类似环状病毒抗血清均无此阻断作用;编码血清双盲法检查获得可重复的预期结果。结果表明,EHF的A-549细胞抗原和鼠肺抗原血清学特性一致,同为EHF病毒,并与KHF病毒相近或相同。汉坦病毒在形态学上与我们分离的类似环状病毒相似,但后者与EHF病人血清无明显关系。     

我省首次从长尾鼩鼱、褐家鼠、黄胸鼠以及流行性出血热(EHF)患者血清中分离出EHF病毒

1984年10月至85年4月,作者等在达县地区采集各种鼠肺标本共646份,用 Vero E—6细胞,从长尾鼩鼱肺中分离 EHF 病毒1株,褐家鼠肺中分离2株,黄胸鼠肺中分离1株;在南充地区采集 EHF 急性期患者血清中分离5株。已稳定传代4～5代,用 EHF 单克隆抗体(McAb25—1),A_9家兔免疫血清及患者恢复期血     

安徽省流行性出血热健康人群的隐性感染调查

<正> 为了调查流行性出血热(简称EHF)在人群中的隐性感染,我们于1982年7月至1985年6月对全省43个市县(占全省50％以上)进行了健康人群血清中EHF特异性抗体IgG的检测,共检血清5341份,其中发现阳性193份。现将结果报告如下。一、材料与方法 1.标本来源:43个市县健康人群中,经无菌操作静脉采血2ml,分离血清待检。 2.细胞抗原片:由安徽省医学科学研究所提供:A_1株、A_(96)株、陈株感染的A-_(549)及Vero～E_6细胞制备的抗原片。 3.荧光抗体:羊抗人IgG、IgM系上海生物制品研究所生产。 4.方法:间接免疫荧光抗体染色法。 5.判断标准:EHF·V·IgG抗体测定血清     

流行性出血热(EHF)病毒的抗原性研究

<正> 流行性出血热(EHF)的病原研究,近年来进展较快。我国不仅从疫区黑线姬鼠和褐家鼠体内分离出EHF病毒,而且从病人血清中,直接应用A—549细胞分离病毒亦获成功。最近洪涛等证实,三种不同来源的病毒,在形态上是一致的。但我国各地发生的EHF,不仅临床症状表现轻重不一,其流行特     

无血清培养联合多柔比星诱导A549细胞耐药

目的： 探索快速建立肺癌耐药细胞模型的新方法,并探讨肺癌耐药和干细胞的相关性。方法： 应用无血清培养联合药物筛选法建立肺腺癌细胞耐药株A549/ADM;MTT法检测其对多种常用化疗药物的耐药程度;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡、ABCB1和ABCG2的表达水平及细胞内多柔比星的浓度;细胞免疫荧光及流式细胞仪通过特异性表面抗原标记法（CD133）检测肿瘤干细胞含量。裸鼠皮下种植瘤试验评估A549/ADM的致瘤性。结果： A549细胞经无血清培养可见细胞球形成;A549/ADM细胞对多柔比星、长春新碱、紫杉醇均产生了耐药,其耐药指数分别为A549的13.167,12.86,3.4倍;与亲代A549相比, 耐药株A549/ADM S期细胞比例由(45.76±1.41)% 降低至(23.33±1.32)%,细胞凋亡百分率由(58.23±0.82)% 减少至(16.49±0.77)%;耐药株A549/ADM中ABCB1和ABCG2的表达水平明显增高(P<0.05),且细胞内多柔比星浓度明显低于A549细胞; CD133细胞在A549/ADM和A549中的比例分别为(6.2±0.7)％和(1.9±0.2)％(P<0.05),免疫荧光检测A549/ADM细胞CD133表达水平较A549细胞高;A549/ADM具有高致瘤性。结论： 无血清培养联合多柔比星诱导能高效富集肺癌干细胞,成功建立了人肺腺癌A549/ADM多药耐药细胞模型。     

安徽省流行性出血热疫区分布的血清流行病学调查

<正> 近年来,由于国内外在流行性出血热(EHF,以下简称“出血热”)病原分离方面相继获得成功,应用间接免疫荧光试验检测特异性的抗原和抗体,已广泛应用于临床及血清流行病学调查。本文报道用从出血热患者血清中分离所获的“陈株”,适应到A—549细胞后制作的细胞抗原片,用间接免疫荧光试验对全省临床报病的48个市、县及有疑似病人的7个县部分病人进行血清学调查情况。     

广东省首次从褐家鼠分离出流行性出血热病毒

用Vero E-6纯系细胞,接种EHF病毒相关抗原阳性的褐家鼠(Rattus norvegicus)肺13份,从中分离得5株可在Vcro E-6细胞中连续传代的病原因子,分离阳性率为38.5％。通过以其中一株分离物G9感染的第五代Vero E-6细胞制作抗原片,检测EHF患者恢复期血清12份中有11份(91.7％)免疫荧光阳性,而12份非EHF病人血清全部阴性;20倒EHF惠者双相血清抗体滴度均呈4倍以上增长;与呼肠弧Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型病毒抗血清免疫荧光阴性;G9病毒与国内已知EHF病毒16、63、S3、R1株抗血清有高滴度交叉,并且,可被16、R1株抗血清完全中和其感染性,证明G9等分离物是EHF病毒。另外,G9病毒对5-IUDR不敏感,不耐热(56℃1小时),不耐酸(pH3.0),对脂溶荆乙醚敏感,这些理化特性也与EHF病毒完全相符。     

从罗赛鼠及社鼠中分离出流行性出血热病毒及其抗原性鉴定

本文报告从流行性出血热疫区江西省宜丰县野外捕捉的罗赛鼠和社鼠中分离出两株流行性出血热(EHF)病毒。鼠肺标本冰冻切片,用 EHF 单克隆抗体免疫荧光染色反应阳性;接种 Vero—E6细胞,经 IFA、ELISA 及电镜检查,证实为 EHF 病毒;用十种 EHF 单克隆抗体对其抗原性进行了比较研究,结果表明新分离出的两株病毒其抗原性与家鼠型 EHF 代表株 R_(22)比较接近。     

人肺癌细胞系A549中肿瘤干细胞样细胞的分离及鉴定

目的从人肺癌细胞系A549中分离并鉴定肺癌干细胞。方法将A549细胞置于无血清条件培养基中培养,形成细胞球,采用平皿克隆形成实验、MTT细胞增殖实验、RT-PCR、Western blot、免疫荧光技术,检测并比较A549细胞和A549细胞球的增殖能力及干细胞相关标记的表达水平,鉴定细胞球的肿瘤干细胞特性。结果利用无血清条件培养基从A549细胞中分离出肿瘤干细胞样细胞;相比A549细胞,细胞球呈悬浮生长,增殖能力和克隆形成数目(104±7)高于贴壁细胞[(37±3)(P<0.05)],且干细胞相关标记Sox2(2.68±0.39)和Oct4(1.23±0.12)表达水平明显提高[贴壁细胞Sox2(0.05±0.02)、Oct4(0.10±0.02),P<0.05]。结论运用无血清条件培养基可以从A549细胞系中有效富集肺癌干细胞样细胞。     

流行性出血热病毒湖南株-79的分离和研究

用A-549细胞首次从湖南疫区流行性出血热(EHF)病人血中分离出两株病毒(湖南株79和湖南株103),其中湖南株79经鉴定为EHF病毒,类似野鼠型,但其抗原性不同于我国已分出的病毒株,有其抗原特异性,可能是一株新的EHF 病毒株。     

耐药肺癌细胞caspase8、bcl-2、细胞色素C及bcl-2 mRNA的异常表达

目的探讨肺癌细胞耐药性与凋亡蛋白caspase8、bcl-2、细胞色素C及bcl-2 mRNA异常表达的关系。方法培养肺癌A 549耐药株(A 549R)和敏感株(A 549S),采用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)对两株细胞bcl-2 mRNA进行扩增并作琼脂糖电泳,设-βactin为内对照比较其表达水平;W estern B lot法检测caspase8、bcl-2、细胞色素C蛋白表达并比较两株细胞中上述蛋白质表达水平。结果A 549S凋亡启动蛋白caspase8及细胞色素C的表达高于A 549R(P<0.05),而bcl-2蛋白表达低于后者(P<0.05);bcl-2 mRNA表达相对丰度分别为:A 549S 8.74±1.81,A 549R 10.29±2.92,差异无统计学意义(P>0.05)。结论bcl-2的过度表达可能使caspase8和细胞色素C蛋白表达降低从而造成细胞耐药,但bcl-2的这种过度表达可能是在转录或其后的过程而非基因水平发生。     

益气除痰方对A549细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

【目的】研究益气除痰方对肺癌A549细胞凋亡的影响及其分子作用机制。【方法】应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测益气除痰方对A549细胞的生长抑制作用,流式细胞术碘化丙啶(PI)单染法测定细胞凋亡率,逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)法测定用药前后调亡相关基因p53、bcl-2、bax mRNA表达的变化。【结果】益气除痰方含药血清对A549细胞具有生长抑制作用,且具有一定的时间—浓度依赖性;流式细胞术结果显示:益气除痰方含药血清对A549细胞具有显著诱导凋亡的作用,其低、中、高剂量组凋亡率分别为(8.40±1.67)%、(15.80±2.95)%、(27.4±0.96)%(P<0.05);RT-PCR结果显示:益气除痰方可显著上调p53 mRNA、bax mRNA表达,下调bcl-2 mRNA表达(P<0.05或P<0.01)。【结论】益气除痰方可促使A549细胞凋亡,其机制可能与提高p53表达,下调bcl-2/bax比例有关。