大鼠不同部位的单核/巨噬细胞功能异质性的实验研究

目的:了解生理状态下不同部位单核/巨噬细胞功能的异质性。方法:健康Wistar大鼠以灌洗法分离肺泡巨噬细胞(AM)和腹腔巨噬细胞(PM),以密度梯度离心法分离外周血单核细胞(Mo)。采用无色孔雀绿比色法、流式细胞仪及放免法,分别测定不同部位单核/巨噬细胞的非特异性吞噬功能,IA抗原的表达及IL6、IL10的分泌水平。结果:AM的吞噬功能最强,Mo最弱。PM可高表达IA,而AM及Mo的表达量较低。PM分泌IL10的水平最高,Mo分泌IL6的水平最高。结论:生理状态下单核/巨噬细胞的功能及表型存在异质性。AM在天然免疫中有重要作用。PM可能在获得性免疫及拮抗炎症反应中有重要作用。     

Pg-LPS对兔单核/巨噬细胞炎症因子表达的影响

目的比较Pg-LPS对新西兰兔不同部位单核/巨噬细胞炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)表达的影响。方法分离新西兰兔不同部位(血液、肺、腹腔、肝脏)的单核/巨噬细胞(Mo、AM、PM、KC),将每一个部位的细胞分别用E.coli-LPS、Pg-LPS刺激。运用RT-PCR法检测各组Mo、AM、PM、KC中IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA的表达情况。结果各实验组的4个部位(Mo、AM、PM、KC)相比,IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA的表达均存在部位差异(P﹤0.05)。E.coli-LPS组和Pg-LPS组IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA的表达较对照组总体上均明显升高(P﹤0.05),并且E.coli-LPS组的升高作用强于Pg-LPS组(P﹤0.05)。结论不同部位的单核/巨噬细胞对Pg-LPS的刺激存在敏感性差异。Pg-LPS可以增强单核/巨噬细胞炎症因子基因的表达水平。     

改进的大鼠原代Kupffer细胞分离与鉴定方法

目的 改进原分离方法,探索出一种稳定性强、经济实用、高纯度的大鼠原代Kupffer细胞(Kupffer cells,KC)的分离方法.方法 (1)原位胶原酶灌注法;(2)Percoll液不连续的密度梯度离心以分离Kupffer细胞;(3)选择性贴壁纯化Kupffer细胞;(4)Kupffer细胞吞噬墨汁实验、CD68免疫荧光染色鉴定.结果 Kupffer细胞得率≥(7～8)×107/肝,纯度≥98.0%,Kupffer细胞吞噬活性强.结论 此方法稳定性强、经济实用、KC纯度高及性能优良,可满足PRC、Western blot等分子生物学所需要的原代细胞数.     

小鼠肝脏原代Kupffer细胞的分离和纯化

目的利用低速离心和差速贴壁的特性,探索一种高效分离纯化BALB/c小鼠Kupffer细胞(KC)的方法。方法采用0.5 g/L 4型胶原蛋白酶原位灌注和消化肝脏组织,低速分离肝脏的细胞后差速贴壁分离纯化KC,与Percoll密度梯度离心分离方法比较KC的产量和活性,应用F4/80免疫荧光染色鉴定细胞形态、流式细胞术检测F4/80的表达、墨汁吞噬实验进行吞噬功能鉴定。构建KC缺氧/复氧模型,流式细胞术检测主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ、CD40、CD68和CD86的表达,ELISA检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达。结果每只小鼠肝脏可获得(5.83±0.54)×106个KC,细胞存活率达92%,Percoll密度梯度分离仅能获得(2.19±0.43)×106个KC,F4/80免疫荧光染色显示贴壁后KC呈梭形或棘状,流式细胞术鉴定F4/80阳性细胞占比接近90%,吞墨实验可见胞质内大量被吞噬的碳颗粒。KC在缺氧复氧模型下MHC-Ⅱ、CD40、CD86分子表达增多,并分泌TNF-α参与炎症反应。结论成功建立了BALB/c小鼠KC分离纯化的方法。     

PM2.5对慢性阻塞性肺疾病患者巨噬细胞Toll样受体表达及吞噬功能的影响

目的:采用PM2.5干预慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者单核细胞来源巨噬细胞(MDM),研究PM2.5对COPD患者巨噬细胞Toll样受体(TLR)表达及吞噬功能的影响.方法:选择兰州大学第一医院COPD患者14例及健康志愿者14例,抽取肘静脉血,分离单核细胞,采用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子诱导培养为MDM,PM...     

大鼠铁过剩及铁缺乏对脾脏ED1,ED2表达的调控

单克隆抗体ＥＤ１，ＥＤ２可识别与巨噬细胞抗原提呈功能相关的决定族。我们用免疫组织化学法及组织化学法显示铁过剩，铁缺乏对脾脏单核巨噬细胞系统ＥＤ１，ＥＤ２表达及吞噬墨汁颗粒功能的影响。发现铁过剩时红髓及白髓的巨噬细胞，树突状细胞内可见大量含铁血黄素颗粒沉积、红髓ＥＤ１，ＥＤ２表达及墨汁颗粒吞噬功能减弱，铁缺乏时ＥＤ１，ＥＤ２表达及吞噬功能增强，认为铁过剩，铁缺乏可通过改变ＥＤ１，ＥＤ２表达及吞噬功能     

烟雾暴露对大鼠肺泡巨噬细胞曲霉防御功能的影响

目的研究烟雾暴露对大鼠肺泡巨噬细胞(AM)曲霉防御功能的影响。方法建立烟雾暴露大鼠模型,分离肺泡巨噬细胞,并用免疫荧光法进行鉴定。加入烟曲霉孢子共培养,测定AM的吞噬率及吞噬指数;用ELISA方法检测培养上清中TNF-α和IL-1β的浓度;用免疫组化检测树突状细胞相关性C型植物血凝素-1(Dectin-1)蛋白的表达。结果烟雾暴露组AM对烟曲霉孢子的吞噬率下降(P<0.05),吞噬指数无显著变化。孢子刺激后,烟雾暴露组培养上清中TNF-α和IL-1β的浓度显著低于对照组(P<0.05)。烟雾暴露组AM中Dectin-1蛋白的表达低于对照组(P<0.05)。结论烟雾暴露使大鼠AM吞噬能力下降,对曲霉的防御功能受损,这种功能变化可能与Dectin-1蛋白表达降低有关。     

神经降压素使激活的巨噬细胞产生IL-1增加

现已确定除了细菌产物、吞噬刺激、免疫调节剂外,一些非免疫因素如神经肽类也能调节单核吞噬细胞的功能,例如神经降压素(Neurotensin,NT)能提高腹腔巨噬细胞的吞噬功能及细胞毒作用。NT 广泛存在于肺尤其是与下呼吸道血管密切相关的神经纤维内,为了更好地了解肺微环境中免疫功能的调节,本文作者研究了NT 对肺泡巨噬细胞(AM)产生IL-1活性的影响。取250—300gWistar 大鼠,通过支气管肺泡灌洗制得AM,将AM(0.5×10~6/ml)与不同的诱导剂(如LPS、MDP,酵母多糖、NT、LTB_4、IFN-γ)孵育24hr 后,经离心     

微波行兔脾部分切除术后巨噬细胞吞噬功能的研究

探讨微波在行兔脾部分切除术后对脾免疫功能的影响。微波行兔脾部分切除术(PSM)组12只和假拟手术(SO)组6只术后4周,均经耳静脉注射肺炎双球菌悬浮液,并经门静脉注射印度墨汁,全组均行脾组织切片采用H-E染色,检测巨噬细胞的吞噬功能。脾巨噬细胞的吞噬功能分级在PSM组与SO组两组间无显著性差异(P>0.05)。脾重量在两组间也无显著性差异(P>0.05)。微波行兔脾部分切除术能较好保留脾巨噬细胞的吞噬功能,提示微波行保脾手术具有一定的临床应用价值。     

调衡方多糖增强体外培养巨噬细胞的吞噬能力

目的研究调衡方多糖对巨噬细胞吞噬功能的影响,探讨其多糖对巨噬细胞吞噬作用的免疫调节机制。方法依照中药多糖的制备方法从调衡方中提取粗多糖;从小鼠腹腔分离提取并培养巨噬细胞;(500、200、10)μg/m L调衡方多糖处理巨噬细胞48 h,光学显微镜下观察活细胞的形态,墨汁吞噬实验以及金黄色葡萄球菌吞噬实验观察巨噬细胞的吞噬能力,酶细胞化学染色观察巨噬细胞胞内酸性磷酸酶的变化。结果与对照组比较,(500、200、10)μg/m L调衡方多糖处理巨噬细胞后,巨噬细胞体积显著增大,对墨汁和金黄色葡萄球菌的吞噬能力均显著提高,酸性磷酸酶的活性也明显增强,并与多糖浓度呈正相关。结论调衡方多糖能增强巨噬细胞的吞噬功能,并提高细胞内酸性磷酸酶的活性。     

蝉拟青霉总多糖对老龄大鼠巨噬细胞的激活作用

目的：观察蝉拟青霉总多糖对老龄大鼠巨噬细胞的激活作用，探讨其对老龄大鼠的免疫调节作用。 方法： 以中性红吞噬试验测定巨噬细胞的吞噬功能，MTT比色法测定细胞转化率；分别以双试剂终点法、速率法在全自动生化分析仪上测定酸性磷酸酶(ACP)及乳酸脱氢酶(LDH)活力；以鸟氨酸的生成判断精氨酸酶(arginase)的活力；电镜观察大鼠脾脏细胞形态结构的变化。 结果： 蝉拟青霉总多糖使老龄大鼠肺泡巨噬细胞(AM)、腹腔巨噬细胞(PM)胞内和细胞培养上清液内ACP、LDH、arginase活力显著高于对照组（P<0.05或P<0.01）；使PM的吞噬功能及其刺激指数（SI）显著高于对照组（均P<0.01）；使老龄大鼠脾脏细胞胞质粗面内质网和溶酶体数量多于对照组。 结论： 蝉拟青霉总多糖对老龄大鼠的免疫功能具有增强作用。     

4T1荷瘤小鼠肿瘤相关巨噬细胞（TAM）的表型及吞噬功能的研究

目的:研究小鼠乳腺癌实验动物模型中,荷瘤晚期肿瘤相关巨噬细胞的表型和功能,并探讨其与M2型巨噬细胞的关系.方法:从4T1荷瘤4周的雌性BALB/c小鼠中获取肿瘤相关巨噬细胞,用RT-PCR方法检测其巨噬细胞相关分子CCL3、CCL22、iNOS和Arg Ⅰ的表达水平,用FACS检测巨噬细胞中CDl6/32+和CD206+细胞所占比例,并通过酵母菌吞噬试验评估其功能.结果:肿瘤相关巨噬细胞与荷瘤小鼠的脾脏巨噬细胞相比,表达较高水平的CCL22和CD206,并且对酵母菌的吞噬能力显著下降.结论:4T1荷瘤4周小鼠肿瘤相关巨噬细胞在表型和功能上倾向于替代性活化的巨噬细胞.     

系统性红斑狼疮患者巨噬细胞表型和功能初步研究

为了比较健康者与SLE患者巨噬细胞表型和吞噬功能的不同,收集性别、年龄匹配的健康对照者及SLE患者外周血,密度梯度离心法分离单个核细胞,磁珠分选CD14+单核细胞,巨噬细胞集落刺激因子诱导7d,分化为成熟巨噬细胞。FACS检测巨噬细胞表面CD163表达。取健康人CD4+T细胞标记CFSE,在抗CD3、CD28抗体刺激下,以5∶1比例分别与SLE和HC巨噬细胞共培养4d,FACS检测CD4+T细胞增殖比例。紫外辐照Jurkat T细胞株诱导人来源凋亡细胞,将pHrodo Green标记的凋亡细胞(5∶1)与SLE和HC巨噬细胞共培养2h,FACS检测pHrodo+CD14+巨噬细胞的百分率。结果显示,与HC相比,SLE巨噬细胞CD163表达量显著下降;SLE巨噬细胞对CD4+T细胞增殖抑制能力显著降低;SLE巨噬细胞对凋亡细胞的吞噬功能显著下降。这些结果提示SLE患者巨噬细胞表型、免疫调节能力和吞噬功能存在异常,可能参与其发病。     

源于细菌CpG基序的寡核苷酸激活单核/巨噬细胞抗白血病效应的研究

目的： 研究源于细菌CpG基序的寡核苷酸激活单核/巨噬细胞抗白血病细胞的作用。方法: 用血细胞分离机从健康人外周血分离并诱导出单核-巨噬细胞，流式细胞仪检测细胞表面CD14分子和CD16分子表达状况。设计合成含CpG基序的寡核苷酸(CpG-ODN)和不含CpG基序的寡核苷酸（nonCpG-ODN）分别作用于单核/巨噬细胞, MTT法检测经寡核苷酸作用后,单核/巨噬细胞抗白血病K562细胞的效应, 用ELISA法检测其分泌细胞因子IL-12、TNF-α的表达。结果: 从健康人外周血分离并成功诱导出单核/巨噬细胞，证实CpG-ODN作用于单核/巨噬细胞,可显著增强单核/巨噬细胞体外抗白血病细胞的作用，同时能促进单核/巨噬细胞分泌细胞因子IL-12、TNF-α。结论: 源于细菌CpG-ODN可增强单核/巨噬细胞介导的抗白血病细胞作用，此为白血病免疫治疗提供了新的途径。     

银杏内酯B对小鼠腹膜巨噬细胞体外增殖、吞噬及产生NO和ROS的影响

目的:银杏内酯B(GB)是已知的天然而强效的血小板激活因子(PAF)受体(PAFR)拮抗剂,本研究中GB对小鼠腹膜巨噬细胞的增殖、吞噬及产生NO和ROS的影响,初步探讨其潜在的免疫调节作用与机制,从而为临床应用提供可靠的实验依据。方法:分离纯化小鼠腹膜巨噬细胞(PM),以不同浓度的GB(1.25～20μmol/L)预孵后加以脂多糖(LPS)刺激并继续培养至相应时间点;以MTT法检测GB对PM活力及LPS诱导的增殖的影响;以荧光微球的摄入结合流式细胞术评价PM的吞噬作用;以Griess法检测GB对LPS诱导的NO释放的影响;以H2DCFDA标记结合流式细胞术检测PM的ROS水平。结果:LPS刺激后24 h时PM吞噬能力增强,ROS水平显著上升,并释放大量NO,至48 h时PM增殖明显,而经终浓度为5、10、20μmol/L GB在LPS刺激前对PM进行4 h预孵处理可以大幅下调PM对荧光微球的吞噬作用,显著降低PM的ROS水平及NO释放量,并能有效抑制PM的增殖。结论:GB能有效抑制LPS诱导的细胞增殖、吞噬作用、产生NO和ROS的水平,凭借GB对巨噬细胞的体外行为和功能的出色调节作用,理应将其作为天然的免疫抑制剂候选者进行更深入的研究。     

小鼠子宫巨噬细胞的分离纯化与鉴定

目的 建立一套简便易行、高效可靠的小鼠子宫巨噬细胞的分离纯化及鉴定方法. 方法 5只雌鼠处死并获取子宫,利用酶消化法和机械法相结合制备小鼠子宫组织单细胞悬液,密度梯度离心法收集子宫巨噬细胞,贴壁培养获得纯化的巨噬细胞.采用锥虫蓝拒染法鉴定巨噬细胞活率,利用鸡红细胞吞噬试验检测巨噬细胞吞噬活性,并通过酸性磷酸酶染色、非特异性酯酶染色和CD14免疫细胞化学染色鉴定巨噬细胞纯度. 结果 采用该法每只小鼠可获得子宫巨噬细胞3×105～5×105个,且活率达到(85.35±0.43)%,酶化学和免疫细胞化学鉴定阳性率分别达到了(86.12±1.19)%、(85.83±0.57)%和(84.02±1.64)%. 结论 成功建立了小鼠子宫巨噬细胞的分离纯化方法,并能获得较高的细胞存活率和纯度.     

大槐合剂对实验性高胆固醇血症大鼠LDL清除途径的影响

本文应用同位素双标记示踪方法、巨噬细胞功能测定和斑点杂交力法,观察了大槐合剂对实验性高胆固醇血症大鼠LDL清除的受体途径和非受体途径(单核巨噬细胞系统)的影响。与造型组比较,大槐合剂组LDL经受体途径和非受体途径的部分清除率(FCR)均显著增加(P<0.01,P<0.05),非受体途径的第二指数曲线半衰期(t1/2)明显缩短(P<0.05)。单核巨噬细胞系统吞噬功能显著增强,吞噬指数(K,K’)和校正吞噬指数(α)显著增加(P<0.001,P<0.001,P<0.05),半量清除时间(t1/2)显著缩短(P<0.001)。肝胞液LDL受体mRNA表达的相对水平显著增加(P<0.05)。结果提示:大槐合剂可同时促进受体和非受体途径清除LDL的作用。为通过刺激单核巨噬细胞系统功能以治疗纯合子家族性高胆固醇血症(FH)的可能性提供依据。     

牛膝多糖对老龄大鼠非特异性免疫功能的影响

目的: 探讨牛膝多糖(ABPS)对老龄大鼠非特异性免疫功能的影响。 方法: 牛膝多糖(ABPS) 在老龄大鼠背部皮下注射21 d，镜检计外周血白细胞数（WBC），HiCN法测定血红蛋白（Hb）含量，用全自动生化分析仪测定主要生化指标，用含10 ％小牛血清的RPMI-1640细胞培养液贴壁培养肺泡巨噬细胞（AMΦ）和腹腔巨噬细胞（PMΦ）2 h，并用全自动生化分析仪测定其乳酸脱氢酶（LDH）和酸性磷酸酶(ACP)活性，摄取中性红试验检测巨噬细胞(MΦ)的吞噬功能，比色法检测脾脏、肝脏、大脑、肾脏和血清中的脂质过氧化物(LPO)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量。结果: 牛膝多糖(ABPS)试验组老龄大鼠AMΦ和PMΦ内ACP、LDH的活性均高于对照组 （均P＜0.01），AMΦ和PMΦ摄取中性红的能力也高于对照组（均P＜0.01）； 且大脑、肝脏、脾脏中的LPO含量低于对照组（P＜0.05,P＜0.01），GSH含量高于对照组（P＜0.05）。 结论: 牛膝多糖(ABPS)具有激活老龄大鼠AMΦ和PMΦ作用，能增强机体非特异性免疫功能。     

二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌过程中肝内Kupffer细胞的改变—光镜及电镜观察

肝脏非实质细胞(NPC)是近年来肝脏疾病研究中比较活跃的领域之一。国际上已先后召开了3次有关NPC的座谈会。大量的研究表明Kupffer氏细胞(KC)是NPC的重要成员,它组成了体内最大的巨噬细胞(Mφ)群,在许多疾病的发生发展中起着重要作用。但是有关KC与肝癌的关系,我们尚未见国内外系统报道。为了进一步研究肝癌发生过程中KC的改变,我们采用印度墨汁吞噬法,在光镜和电镜下观察了二乙基亚硝胺(DEN)     

糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能及释放肿瘤坏死因子α变化的研究

目的:研究肺泡巨噬细胞变化在糖尿病机体肺组织局部防御功能减弱的机制中的作用.方法:链脲佐菌素一次性腹腔注射复制大鼠糖尿病(DM)模型,通过支气管肺泡灌洗(BAL)获取肺泡巨噬细胞(AM),HE染色测定对鸡红细胞吞噬率及AM体外培养ELISA法测定上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量.结果:糖尿病4周及8周组大鼠肺泡巨噬细胞对鸡红细胞吞噬率均明显下降,差别有统计学意义(P＜0.01),肺泡巨噬细胞体外培养上清糖尿病4周组与对照组比较有下降趋势,但差别不具有统计学意义,糖尿病8周组下降明显(P＜0.05).结论:糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞在非特异性及特异性免疫反应降低,随病程延长改变明显.