二聚体蝎型探针荧光定量PCR快速检测临床标本结核分枝杆菌DNA

目的比较二聚体蝎型探针荧光定量PCR与抗酸染色、L-J培养法、结核分枝杆菌直接试验（MTD）的检出率、检测时间等，探讨二聚体蝎型探针荧光定量PCR检测临床标本中结核分枝杆菌DNA（T＆DNA）的实际应用价值。方法以建立的结核二聚体蝎型探针荧光定量PCR方法为基础，对43例结核确诊患者的标本及11例非肺结核患者的痰标本进行检测，并与抗酸染色、L-J培养法、结核分枝杆菌直接试验（MTD）进行比较。结果二聚体蝎型探针荧光定量PCR能快速准确的检测临床标本中的TB-DNA。其标准品浓度在10^2～10^6copies／μl时，方法能够保持良好的线性关系（相关系数为0．9994），阳性检出率（100％）显著高于抗酸染色法（16．28％）和培养法（37．21％）的检出率，与MTD试验的检出率（100％）一致。MTD试验检测时间约4～5h，而二聚体蝎型探针FQ-PCR检测约需80min即可得到检测结果，检测费用仅为MTD的1／4。结论二聚体蝎型探针荧光定量PCR用于临床标本结核分枝杆菌DNA的检测具有快速价廉、敏感特异的特点，该方法作为定量检测结核分枝杆菌的分子诊断新途径值得临床推广应用。     

荧光染色法在结核分枝杆菌检测中的应用

目的 观察荧光染色法在肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌的阳性率检测中的临床应用价值.方法 250例肺结核患者,收集深咯痰标本,每份痰标本涂抹2张玻片,分别采用荧光染色法（荧光染色组）和抗酸染色法（抗酸染色组）检测结核分枝杆菌,比较两组阳性率.结果 荧光染色组检出结核分枝杆菌阳性109例,阳性率为43.60％,其中（＋）、（＋＋）、（＋＋＋）、（＋＋＋＋）阳性率分别占13.20％、11.60％、8.40％、10.40％;抗酸染色组阳性86例,阳性率为34.40％,其中（＋）、（＋＋）、（＋＋＋）、（＋＋＋＋）分别占6.80％、8.80％、8.00％、10.80％.两组总阳性率及（＋）阳性率比较P均＜0.01.与抗酸染色组比较,荧光染色组检测痰中结核杆菌的灵敏度、特异性均较高（P均＜0.05）.结论 荧光染色法检测肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌的阳性率高于抗酸染色法,且差异主要体现在含菌量少的痰标本上,这对于那些病变活动性轻,排菌量较少的肺结核的诊断具有重要意义.     

肺泡灌洗液不同检测方法在肺结核诊断中的临床价值

目的比较灌洗液标本的荧光定量PCR、纤支镜灌洗液刷片抗酸染色和结核分枝杆菌快速培养的灵敏度和特异性对于肺结核的临床诊断应用价值。方法选取安徽省胸科医院2016年1月-2016年12月临床确诊的649例肺结核患者、1328例肺炎、肺脓肿等其它呼吸系统疾病共1977例患者送检的纤维支气管镜灌洗液标本,同时进行灌洗液荧光定量PCR、纤支镜灌洗液结核分枝杆菌快速培养和灌洗液刷片抗酸染色3种方法的检查,比较其灵敏度和特异性。结果灌洗液荧光定量PCR、灌洗液结核分枝杆菌快速培养和灌洗液刷片抗酸染色的灵敏性分别为80. 3%,66. 3%和38. 1%,特异性分别为97. 7%,97. 4%和97. 1%。结论纤维支气管镜肺泡灌洗液的荧光定量PCR对于辅助肺结核的快速诊断较其他方法有较明显的优势,对肺结核的诊断有重要意义。     

探讨荧光定量PCR在结核菌检测中的应用

目的探讨荧光定量PCR技术在检测临床标本中结核分枝杆菌的应用价值。方法通过荧光定量PCR技术鉴定350株临床分离株,进行结核分枝杆菌的菌种鉴定和定量分析,同时进行抗酸染色和培养法。结果荧光定量PCR、染色和培养法阳性检出率分别为38．8％（128／330）,21．8％（72／330）,29．7％（98／330）,提高阳性检出率（涂阴）16．97％（56／330）,菌种鉴定特异性实验符合率为100％。结论荧光定量PCR技术是一种快速、敏感、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法。     

荧光定量PCR测定支气管肺泡灌洗液中TbDNA诊断肺结核的临床价值

目的探讨纤支镜肺泡灌洗液中结核分枝杆菌DNA在肺结核诊断中的价值。方法对187例初治肺结核患者及41例肺炎患者分别应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测结核分枝杆菌DNA、肺泡灌洗液结核菌培养、纤维支气管镜刷片抗酸染色。结果肺结核患者肺泡灌洗液结核分枝杆菌DNA阳性率为:78.6%、肺泡灌洗液结核菌培养阳性率为28.8%、刷片抗酸染色阳性率为21.9%。肺炎患者肺泡灌洗液结核分枝杆菌DNA、肺泡灌洗液结核菌培养、刷片抗酸染色均阴性。结论荧光定量聚合酶链反应检测肺泡灌洗液结核分枝杆菌DNA,特异性高,用于肺结核诊断可提高肺结核诊断的敏感性和准确性,明显优于纤维支气管镜刷片抗酸染色,亦较肺泡灌洗液结核菌培养诊断灵敏、快速,可作为肺结核诊断较可靠指标。     

分子信标荧光定量PCR在肺结核早期诊断及疗效评价中的初步应用

目的探讨分子信标荧光定量PCR在肺结核早期诊断及疗效评价中的应用价值。方法采集2010年3—7月间在彭州市CDC结核病防治所门诊就诊患者的痰标本382份,其中初诊疑似肺结核患者的痰标本305份,肺结核患者随访痰标本77份,用分子信标荧光定量PCR法和抗酸染色法检测Mtb。结果382份痰标本抗酸染色法、分子信标荧光定量PCR法检测总阳性率分别为12.6%(48/382)、42.4%(162/382),分子信标荧光定量PCR法阳性率显著高于抗酸染色法,差异有统计学意义(χ2=74.5,P<0.001)。结论分子信标荧光定量PCR较抗酸染色法具有更高的灵敏度,不仅提高了肺结核早期诊断的检出率,还能间接反映药物疗效,在肺结核防治工作中具有重要意义。     

细针吸取细胞学联合荧光定量聚合酶链反应在诊断淋巴结结核中的作用

目的 比较细针吸取细胞学联合荧光定量PCR检测结核分枝杆菌DNA与抗酸染色法对淋巴结结核的诊断价值.方法 选取合肥市第一人民医院2004年6月至2008年6月的72例患者,均为体表有肿块、针吸活检为肉芽肿性改变、随访抗结核治疗有效的病例,其中男22例,女50例,年龄1～83岁,中位年龄48岁.用细胞学剩余材料或重新取材进行荧光定量PCR检测结核分枝杆菌DNA(TB-DNA),直接涂片抗酸染色,同时对病例的细胞学表现进行分型,分别计算不同类型病例的TB-DNA和抗酸染色检测结果.不同细胞学类型及抗酸染色结果TB-DNA拷贝数比较采用Wilcoxon法进行秩和检验.结果 72例标本中46例TB-DNA为阳性(46/72,64%);细胞学分型为1型、2型、3型的患者分别有7、34和31例,其中TB-DNA阳性分别为0/7、21/34(61%)和25/31(81%).72例中有64例进行抗酸染色(14/64,22%),且此14例TB-DNA均为阳性.2型和3型之间TB-DNA的拷贝数比较差异有统计学意义(z=-2.514,P<0.05).抗酸染色阳性和阴性组TB-DNA拷贝数比较差异有统计学意义(z=-4.778,P<0.05).结论 细针吸取细胞学联合荧光定量PCR检测TB-DNA,较抗酸染色法可更加准确、快速地诊断淋巴结结核引起的体表肿块.     

噬菌体生物扩增法检测尿液结核分枝杆菌对肾结核的诊断价值探讨

目的 利用噬菌体生物扩增法检测尿液结核分枝杆菌,评价其对肾结核诊断价值。 方法 对肾结核患者63例应用涂片抗酸染色法检测结核分枝杆菌、结核分枝杆菌培养、噬菌体生物扩增法进行尿液结核分枝杆菌检测,聚合酶链反应法检测结核菌DNA。同时选正常人群21人作为对照组行尿液噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌,聚合酶链反应法检测结核分枝杆菌DNA。结果 肾结核患者尿液行噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌阳性率明显高于涂片抗酸染色法检测结核分枝杆菌及结核分枝杆菌培养（P<0.01）。与PCR法比较差异无统计学意义（P>0.05）,噬菌体生物扩增法检测尿液中结核分枝杆菌对肾结核诊断有较高的特异度(95.2%)和灵敏度(69.8%)。 结论 噬菌体生物扩增方法检测尿液结核分枝杆菌对肾结核诊断具有重要的参考价值。     

荧光定量PCR对痰涂片阴性肺结核的临床诊断价值

目的探讨荧光定量PCR检测对痰涂片阴性的肺结核的诊断价值。方法采集180例痰涂片阴性的肺结核病患者及100例非结核性肺部疾病患者(肺炎、肺癌及矽肺患者)的支气管灌洗液(BALF),应用荧光定量PCR检测BALF中的TB-DNA,同时进行BALF结核杆菌培养及抗酸染色法检查结核杆菌,比较不同方法对肺结核的临床诊断效率。结果肺结核组中BALF中TB-DNA阳性检出率为62.77%,显著高于BALF抗酸染色法的阳性检出率33.89%(P0.05),与BALF结核杆菌培养法无明显统计学差异(P0.05),治疗1个月后TB-DNA的阳性检出率也高于抗酸染色法(P0.05)。结论荧光PCR定量检测TB-DNA能提高结核杆菌的检出率,可作为诊断及判断疗效的方法。     

利用荧光定量RT-PCR和PCR方法检测结核分枝杆菌复合群

目的建立一种新的检测结核分枝杆菌复合群的荧光定量试验方法(R/P分析),探讨R/P分析检测临床标本中结核分枝杆菌复合群的应用价值。方法根据结核分枝杆菌复合群基因保守序列设计引物和探针构建质粒标准品。运用R/P分析检测54例确诊结核病人临床样本,检测的结果同时与培养法、荧光定量PCR法进行比较。结果不同临床标本用R/P分析诊断结核病,其敏感性高于荧光定量PCR法和培养法,阳性检出率分别为96.3%、83.3%和55.6%。结论 R/P方法是一种快速、特异的直接检测方法,它可以区分结核分枝杆菌复合群的死菌与活菌,因此可以更好的指导医生进行治疗,更准确地做出公共卫生决策。     

石蜡包埋组织实时荧光定量聚合酶链反应检测在结核病诊断中的价值

目的探讨石蜡包埋组织实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测结核分枝杆菌DNA在结核病诊断中的价值。方法275例组织标本行常规组织病理学检查、抗酸染色,并对石蜡包埋组织应用实时荧光定量聚合酶链反应检测结核分枝杆菌DNA。结果275例FQ-PCR检测结核分枝杆菌DNA阳性211例(76.7%),病理诊断为结核183例(66.5%),抗酸染色阳性23例(8.4%)。病理诊断为结核者FQ-PCR阳性率为93.4%,抗酸染色阳性者FQ-PCR阳性率95.7%。结论实时荧光聚合酶链反应技术敏感性高、其与组织病理学相结合可以提高诊断率。     

FQ-PCR技术在肺外结核中的诊断价值

目的探讨FQ-PCR技术对活动性骨关节结核和泌尿系结核的诊断价值。方法选择118例疑似结核病患者,其中关节炎患者52例,泌尿系感染患者66例,应用FQ-PCR技术分别检测患者关节腔积液和尿液中的TB-DNA,并与抗酸染色法的检出率比较。结果 52例关节炎患者中,确诊结核性关节炎患者36例,TB-DNA阳性22例,22例全部为确诊病例,阳性率61.1%。抗酸染色的阳性数为2,均为TB-DNA阳性者,阳性率5.6%;66例泌尿系统疾病患者中,确诊泌尿系结核患者52例,TB-DNA阳性32例,32例全部为确诊病例,阳性率为61.5%,抗酸染色的阳性数为4,均为TB-DNA阳性者,阳性率7.7%。结论应用FQ-PCR技术检测患者关节腔积液和尿液中的TB-DNA,具有高度敏感性和特异性,可作为结核性关节炎和泌尿系统结核早期诊断的一个可靠指标。     

结核感染T细胞斑点实验临床检测研究

目的探讨结核感染T细胞斑点实验（T-SPOT.TB）在临床快速诊断结核病中的应用价值。方法利用T-SPOT.TB方法检测外周血中结核感染特异的效应T淋巴细胞的频率。同时与涂片抗酸染色、BACTEC960培养及实时定量PCR方法做比对。结果164例结核病患者中,155例T-SPOT.TB阳性,提示方法敏感度为94.5％（155/164）,显著高于其他方法。60例非结核呼吸道疾病对照组中有5例阳性,20例健康对照均为阴性,方法的特异度为93.8％（75/80）。结论T-SPOT.TB方法敏感度和特异度均非常高,可用于结核病的快速诊断,尤其是对于结核病和非结核分枝杆菌病的早期鉴别。     

聚合酶链反应在诊断结核性胸腔积液中的应用

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对６２例胸水进行结核菌ＤＮＡ检则，并同时与胸水涂片及培养结果进行比较。结果显示：３４例结核性胸水涂片抗酸染色、结核菌培养和ｐＣＲ检测阳性率分别为５．９％、８．８％和５２．９％，后者显著高于前二者（Ｐ均＜０．０１）。２８例非结核性胸水涂片和培养结果均呈阴性，但ＰＣＲ有４例（１４．３％）出现阳性。结果表明ＰＣＲ直接检测胸水中结核菌显示出快速、敏感和高效等优点。同时还对影响ＰＣＲ检测结核菌的某些因素作了分析。     

不同感染途径对建立SD大鼠结核杆菌感染模型的影响

目的 探讨SD大鼠结核杆菌感染模型的建立方法,比较不同感染途径对动物模型的影响.方法 60只SD大鼠随机分成4组,使用标准人型H37Rv结核杆菌菌株0.01 mg,分别从右侧胸腔、腹腔、尾静脉、尾部皮内注入,注菌8周后处死各组大鼠,观察大鼠肺、肝、脾大体病变及病理改变,注射部位迟发超敏反应情况,取肺组织匀浆作抗酸染色涂...     

抗酸染色全自动显微扫描识别系统的临床应用评价

目的 评价抗酸染色全自动显微扫描系统(AFB-AS)检测肺结核患者痰液标本应用价值。方法 搜集2019年1月至8月于北京结核病控制研究所确诊的462例肺结核患者作为研究对象,每例患者留取3份初诊痰液标本,共计1386份。所有标本均完成萋-尼抗酸染色,采用双盲法使用传统抗酸杆菌染色镜检和AFB-AS检查;每例患者选取2份痰液标本进行分枝杆菌分离培养,共计完成924份;其中1份同时进行GeneXpert MTB/RIF(简称“Xpert”)检测,共计完成462份。比较不同方法检测肺结核患者痰标本结果;以分枝杆菌分离培养结果为参照,分析传统抗酸杆菌染色镜检和AFB-AS检测肺结核患者痰标本的效能;分析传统抗酸杆菌染色镜检和AFB-AS检测均为阳性结果的等级相关性。结果 各方法检测肺结核患者痰标本阳性率从高到低依次为Xpert(69.26%,320/462)、分枝杆菌分离培养(43.61%,403/924)、AFB-AS(43.22%,599/1386)、传统抗酸杆菌染色镜检(38.24%,530/1386)。AFB-AS检测痰标本阳性率明显高于传统抗酸杆菌染色镜检,差异有统计学意义(χ²=67.015,P<0.01)。AFB-AS与传统抗酸杆菌染色镜检判读阳性结果等级的相关系数为0.954。以分枝杆菌分离培养结果为参照,AFB-AS检查肺结核患者痰标本敏感度为94.29%(380/403)、特异度为90.40%(471/521)、阳性预测值为88.37%(380/430)、阴性预测值为95.34%(471/494),Kappa值为0.841。结论 AFB-AS检测肺结核患者痰液标本具有较好的应用价值,检验性能能够满足实施萋-尼抗酸染色查找抗酸杆菌项目的要求。     

Routine culture for Mycobacterium tuberculosis from bronchoscopy in Taiwan

BACKGROUND AND OBJECTIVE: The value of routine culture for mycobacterium from bronchoscopic washings and the cost-effectiveness is still uncertain in countries where tuberculosis is endemic. This study examined the epidemiology of positive cultures for M. tuberculosis obtained by bronchoscopy to determine the health benefit and cost of a policy of routine culture and smear. METHODS: All positive cultures for Mycobacterium tuberculosis in bronchial washings and the corresponding CXR features were analysed. RESULTS: The incidence of tuberculosis in routine bronchoscopy was 3.71%, and in patients who presented with typical tuberculosis features on CXR was 6.5%. Up to 10.6% of culture-proven pulmonary tuberculosis relied on bronchoscopy for diagnosis. The total cost of routine mycobacterium culture and acid-fast bacillus smear during the 2-year period was approximately US $24,800. CONCLUSION: Routine mycobacterium culture and acid-fast staining from bronchoscopic specimens appears to be valuable in countries where tuberculosis is prevalent.     

Real-time PCR assay for improved detection of Mycobacterium tuberculosis complex in paraffin-embedded tissues.

OBJECTIVE: To test the usefulness of a commercially available real-time polymerase chain reaction (PCR) kit for the detection of Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC) in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues. RESULTS: The examination of 24 specimens of patients with a final diagnosis of TB shows that the real-time PCR assay exhibits a higher sensitivity (66.7%) for the detection of MTBC DNA than an alternative in-house IS6110 PCR (33.3%), whereas staining detected acid-fast bacilli in only two cases (8.3%). CONCLUSION: The real-time PCR assay provides a highly sensitive and specific means for the detection of MTBC DNA in histopathological specimens.