套式/多重PCR方法应用于疟疾诊断与监测的初步评价

目的 与镜检法比较评价标签引物-套式/多重PCR（UT-PCR）在疟疾监测中的应用价值。 方法 在海南、云南省恶性疟和间日疟混合流行区和广西疟疾控制区的疟疾监测中,采集初诊为疟疾或疑似疟疾的发热患者的血片与滤纸血样400份,在双盲条件下比较镜检法与UT-PCR的初检结果,对结果不一致的血片再次镜检复查,同时对其滤纸血样重复PCR 2～3次;评估UT-PCR与镜检法的敏感性和特异性。 结果 400例发热患者血样中,镜检法初检检出疟原虫阳性234例,其中恶性疟125例,间日疟109例;UT-PCR检出疟原虫阳性235例,其中恶性疟124例,间日疟109例;恶性疟和间日疟混合感染2例。两法初检结果一致的血样占92.5%（370/400）,其中阴性154例,阳性216例（间日疟117例,恶性疟99例）。复查25份初检结果不一致的血样,包括镜检阴性PCR阳性11例,镜检阳性PCR阴性10例,镜检为恶性疟PCR为间日疟3例,镜检为间日疟而PCR为混合感染1例,其中15份与UT-PCR的初检结果一致,7份“假阳性”原因不明,仅3份为PCR的假阴性。根据复查结果评估PCR的敏感性为99.6%,特异性为98.8%。 结论 采用更敏感的UT?鄄PCR疟疾诊断方法有助于解决疟疾诊断与鉴别诊断中的疑难问题,提高疟疾监测的质量和效率。     

聚合酶链反应（PCR）技术在恶性疟诊断中的应用

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测云南疟疾病人血样５３份，结果均为阳性，可出现一条４９２ｂｐ的特异条带，与镜检符合率达１００％；同时检测间日疟血样８份及上海正常人血样１２份，均为阴性，表明本法具有高敏感性及特异性。     

万孚疟疾快速诊断试剂盒效果评价

目的评价万孚恶性疟快速检测试剂盒的检测效果。方法以镜检法为金标准,采用单盲法检测临床"四热"患者血样。结果使用万孚恶性疟快速检测试剂盒检测"四热"患者547例,检出疟疾阳性323例。敏感性和特异性分别为95.00%和100.00%,与镜检符合率为96.89%。结论万孚恶性疟快速检测试剂盒敏感性和特异性高,质量稳定,适合于恶性疟流行区使用。     

末端标记间日疟寡核苷酸探针在疟疾监测中的应用

本文报道了应用合成间日疟ＤＮＡ片段经同位素末端标记作为探针．检测了２１份经镜检确诊的间日疟病人血样，结果全部阳性．敏感性可测出０．００１３３％的原虫血症，与培养的恶性疟及正常人血没有交叉反应。随后将该探针应用到疟疾监测中，在山东采集的３１０份发热病人血和２４５份流动人口血，应用本探针检测，未出现阳性结果，经镜检复核．结果相符．在安徽省滁州市采集３５２份病灶点人群血，有２８份出现了阳性，阳性率为７．９５％。对以上血样经ＩＦＡ方法进行抗体测定，显示合成间日疟ＤＮＡ探针杂交结果与抗体阳性率具有明显的一致性。结果表明本合成间日疟ＤＮＡ探对可应用于灭疟后期的疟疾监测．特别对流动人口集中检查和传染源检索具有潜在的应用价值。     

合成间日疟DNA探针在疟疾监测中的应用研究

本文报道了应用合成间日疟ＤＮＡ片段经同位素末端标记作为探针，检测了２ｌ份经镜检确诊的间日疟病人血样，结果全部阳性，敏感性可测出０．００１３３％的原虫血症，与培养的恶性疟及正常人血没有交叉反应。随后将该探针应用到疟疾监测中，在山东采集的３１０份四热病人血和２４５份流动人口血，应用本探针检测，未出现阳性结果，经镜检复核，结果相符。在安徽省滁州市采集３５２份病灶点人群血，有２８份出现了阳性，阳性率为７．９５％。对以上血样经ＩＦＡ方法进行抗体测定，显示合成间日疟ＤＮＡ探针杂交结果与抗体阳性率具有明显的一致性。结果表明本合成间日疟ＤＮＡ探针可应用于灭疟后期的疟疾监测，特别对流动人口集中检查和传染源侦查具有一定潜力。     

国产试剂RDT诊断疟疾效果评价

目的将国产试剂疟疾快速诊断试验（RDT）检测结果与镜检结果及进口试剂RDT和PCR结果进行比较,评价国产试剂RDT诊断疟疾的效果。方法收集160例疟疾病人或疑似疟疾病人血样,分别采用两种RDT、镜检和PCR进行检测,对检测结果进行比较。结果160份血样采用国产、进口试剂RDT及镜检和PCR检测疟疾感染,阳性率分别为45．00％、47．50％、41．25％和42．50％,经配对资料的Х^2检验,差异无统计学意义（P〉0．05）;镜检和PCR法均检出2例卵形疟,而国产和进口试剂RDT均为阴性。以镜检为标准．到产试剂RDT检测间日疟和恶性疟的敏感度为94％,特异度87%,假阳性率13％,假阴性率6％,阳性预测值83％,阴性预测值95％;以PCR为标准,国产试剂RDT检测间日疟和恶性疟的敏感度为94％,特异度89％,假阳性率11％,假阴性率6％,阳性预测值83％,阴性预测值95％。国产试剂RDT与进口试剂RDT检测结果比较差异无统计学意义（Kappa=0．95,P〉0．05）。结论国产试剂RDT与进口试剂RDT检测结果高度一致,在基层可取代进口试剂RDT进行疟疾病例主动监测。     

质粒型pBF_4DNA探针用于疟疾诊断的研究

质粒pBF_4DNA 用~(32)P 标记后,与现场采集的50份疟疾病人血样进行斑点杂交,9份镜检为恶性疟者杂交全为阳性,与镜检符合率为100%;41份镜检为间日疟的标本,有3份出现杂交弱阳性;10份正常人血两者检查均为阴性。DNA 探针检测恶性疟原虫的灵敏度为0.001%原虫血症。血样存放2年之久,仍可用于 DNA 杂交。     

合成间日疟DNA探针在疟疾监测中的应用研究

本文报道了应用合成间日疟ＤＮＡ片段经同位素末端标记作为探针，检测了２１份经镜检确诊的产是日疟病人血样，结果全产啊阳性，敏感性可测出０．００１３３％的原虫病血症，与培养的恶性疟及正常人血没有交叉反应，随后将该探针应用到疟疾监测中，在山东采集的３１０份四热病人血和２４５份流动人口血，应用于探针检测，未出现阳性结果，经镜检复核，结果相符，在安徽省滁州市采集３５２份病灶点人群血，有２８份出现了阳性，阳性率     

两种检测方法在间日疟和卵形疟诊断中的应用分析

目的分析疟原虫镜检和巢式PCR检测间日疟和卵形疟效果。方法收集2012～2016年输入性间日疟和卵形疟病例血样,巢式PCR检测疟原虫ssRNA基因,并与显微镜检结果进行比对。结果显微镜检和巢式PCR检测71份血样,间日疟、卵形疟、混合感染分别占74.6%、25.4%、0%和63.4%、29.6%、7%,符合率为81.7%;亚洲23份血样,镜检与巢式PCR均为间日疟,符合率为100%,巢式PCR检测非洲血样48份,间日疟、卵形疟和混合感染分别占45.8%、43.8%和10.4%,镜检与巢式PCR符合率为72.9%;巢式PCR检测26份卵形疟,经典curtisi、变种wallikeri和混合感染分别占80.8%、11.5%和7.7%,检出变种wallikeri总数占卵形疟19.2%。结论巢式PCR检测疟原虫虫种鉴别优于传统镜检法,可提高疟疾病例诊断水平。     

镜检、抗原检测和核酸检测方法在疟疾诊断中的应用比较

目的 比较镜检、抗原检测(RDT)和核酸检测(PCR)三种方法对疟原虫的检测效果,为基层选择合适的 诊断方法提供依据。 方法 收集腾冲市 2015-2018 年发热病人的血样进行疟疾检测,以确诊结果为标准,对比分析镜检、RDT 和 PCR 三种疟疾检测方法的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值等指标。 结果 610 份血样中,阴性 295 份,阳性 315 份,其中恶性疟 67 份、间日疟 245 份、混合感染 2 份、三日疟 1 份。 与确诊结果比较,镜检、RDT 和 PCR 的灵敏度分别为 95. 87%、94. 60%和 99. 37%,特异度均为 100%;假阴性率分别为 4. 13%、5. 40%和 0. 63%,阴性预 测值分别为 95. 78%、94. 55%和 99. 33%;假阳性率均为 0,阳性预测值均为 100%;三种方法与确诊结果的总符合率分别 为 97. 87%、97. 70%和 99. 67%,Kappa 检验结果显示均与确诊结果高度一致(P 均<0. 001);对单一虫种恶性疟的检测, 镜检、RDT 和 PCR 的符合率分别为 88. 06%、100%和 97. 01%;对其他三种疟原虫检测的符合率,分别为 97. 97%、 93. 9%和 100%。 结论 三种检测方法均具有较高的敏感性和特异性,但综合考虑当前防治工作实际,抗原检测(RDT) 更适宜在基层推广和使用。     

恶性疟原虫乳酸脱氢酶的快速电泳法检测及影响因素

目的建立一种敏感、特异的恶性疟快速诊断方法。方法：应用快速电泳法检测恶性疟病人血样中恶性疟原虫乳酸脱氢酶（ＬＤＨ－Ｐ），并对可能影响检测结果的几种因素进行观察。结果：检测４０份恶性疟病人血样，３８份检测出ＬＤＨ－Ｐ，阳性率为９５％，假阴性率为５％；同时检测４０份间日疟病人血样和２０份正常人血样，均为阴性，无假阳性；血样反复冻融可使ＬＤＨ－Ｐ受到破坏，蛋白酶抑制剂对保存血样中的ＬＤＨ－Ｐ保护作用明显；新鲜血样中加否蛋白酶抑制剂，检测结果差异不明显。结论：快速电泳法检测ＬＤＨ－Ｐ诊断恶性疟，方法简便、敏感性和特异性高，具有很好的现场应用价值。检测新鲜血样中ＬＤＨ－Ｐ效果好。     

Evaluation of the KAT-Quick Malaria Rapid Test for rapid diagnosis of falciparum malaria in Thailand

In recent years, several rapid diagnostic tests for falciparum malaria have been developed. KAT test results were compared with microscopy on 90 consecutive patients hospitalized at the Hospital for Tropical Diseases, Bangkok, Thailand. Fifty-one patients had P. falciparum infections while 49 had malaria due to other plasmodium species. For a geometric mean +/-SD (Min;Max;range) parasitemia of 11,481 +/- 5.0 (88;713,838;713,750), the sensitivity of the KAT test was 96% (95% CI = 86-99.5), the specificity was 92% (95% CI = 80-99), the accuracy was 94% and the reliability was 85%. These findings suggest that the KAT test is of potential interest in the diagnosis of falciparum malaria in Thailand.     

Performance appraisal of rapid on-site malaria diagnosis (ICT malaria Pf/Pv test) in relation to human resources at village level in Myanmar.

Logistic, economic and technical factors limit rapid access to microscopic confirmation of symptomatic diagnosis of malaria in many rural areas in endemic countries such as Myanmar. A study was conducted to evaluate a rapid on-site immunochromatographic test (ICT Malaria Pf/Pv) for detection of Plasmodium falciparum and P. vivax in two villages in the Taikkyi region of Myanmar. The ICT Malaria tests were performed by a volunteer health worker (VHW) in Yae-Aye-San village and by a professionally trained midwife (MW) in Kankone village. A total of 1000 symptomatic patients participated in the study by providing blood samples for an ICT test and for microscopy. The ICT performance indices, relative to microscopy, were better for the trained MW compared with the less experienced VHW. For P. falciparum and/or P. vivax infections, the sensitivities were 82.7% for the VHW compared with 93.7% for the MW. For P. falciparum infections, the sensitivities were 82.2% for the VHW and 91.3% for the MW, while the corresponding values for P. vivax infections were 66.7 and 79%, respectively. Although the test kit appeared to perform better in more experienced hands, this study questions whether this difference is related to the use of the ICT Malaria Pf/Pv test kit, or related to other factors such as differences in the quality of blood slides prepared by the VHW and MW for microscopic examination. Overall, the results suggest that a rapid diagnostic assay such as the ICT Malaria Pf/Pv test kit can be used in rural settings by relatively inexperienced persons, such as VHWs, with a reasonable degree of sensitivity, thus providing on-site confirmation of symptomatic diagnosis of malaria.     

Evaluation of a dipstick test for the rapid diagnosis of imported malaria among patients presenting within the network TropNetEurop.

Lack of experience on the part of involved laboratory personnel frequently complicates swift diagnosis of imported falciparum malaria in non-endemic areas. Diagnostic tools based on the dipstick principle for the detection of plasmodial histidine-rich protein 2 have been marketed for several years and have been extensively evaluated. Recently, a test kit capable of detecting antigen of Plasmodium falciparum and P. vivax has been introduced. In order to evaluate this newly available tool, specimens from 664 patients were screened during the course of a prospective multicentre study within the European Network on Imported Infectious Disease Surveillance (TropNetEurop). Among the screened specimens, samples from 82 patients (12.3%) were positive for falciparum malaria using expert microscopy. A further 17 samples were positive for vivax malaria. The evaluated test kit performed with a sensitivity of 87.8% and a specificity of 99% for detection of falciparum malaria. Respective values for vivax malaria were 76.5% and 100%. Dipstick tests have the potential of improving the speed and accuracy of the diagnosis of falciparum malaria, especially if non-specialized laboratories are involved. However, decreased values of sensitivity and specificity, in comparison with expert microscopy, still impose a clear limit on the usefulness of the currently available kits.     

应用巢式PCR评价低流行区疟疾诊断结果

目的初步评价大连市疾控人员对疟疾的诊断能力,为低流行区疟疾诊断方法的选择提供理论依据。方法收集2010--2012年大连市上报的27例疟疾阳性病例的血液样本．应用巢式PCR（nest—PCR）方法对诊断结果进行复核：以复核结果为标准,比较镜检和快速诊断试剂盒（rapid diagnosistest．RDT）方法的检测敏感性及对虫种鉴定的正确率。结果27份样本的巢式PCR结果为恶性疟23份,间日疟2份,卵形疟l份,阴性1份,无混合感染。镜检对阳性样本的敏感度为76．9％（20／26）,远低于RDT方法的96．2％（25／26）;镜检和RDT联合使用,敏感度可达100％。对虫种的鉴别,镜检对阳性样本的正确检测率为50％（13／26）：RDT方法仅能鉴别恶性疟和非恶性疟．对恶性疟阳性样本的正确检测率为100％（23／23）。结论采用镜检和RDT联合应用的方法,能够提高检测的敏感性。建议在有条件的疾控单位建立人体疟原虫的分子检测体系．更有效地防止对疟疾病例的漏诊和误诊。     

快速薄层色谱法用于诊断恶性疟的研究

为建立一种快速、简易而实用的恶性疟诊断方法,应用快速薄层色谱法检测恶性疟病人血样中的恶性疟原虫乳酸脱氢酶（Ｌａｃｔａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｏｆ Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ,ＬＤＨ－Ｐ）,诊断恶性疟感染。结果显示,该方法的敏感性和特异性分别为９０％和９３．７％。应用快速薄层色谱法检测ＬＤＨ－Ｐ诊断恶性疟,方法快速、简便、敏感性高、特异性强,具有很好的临床和现场应用前景。     

Rapid DNA extraction for molecular epidemiological studies of malaria

DNA isolation from blood samples collected in molecular epidemiological studies is crucial for the quality and reproducibility of data. Blood samples from two malaria endemic sites have been prepared by four different DNA isolation methods with subsequent PCR amplification of the msp2 locus of Plasmodium falciparum. We tested a rapid boiling method; the guanadine isothiocyanate DNA extraction; QIAmp blood kit; and the ISOCODE STIX PCR template preparation dipstick, and analysed the numbers of concurrent infections/sample. The rapid boiling method and the ISOCODE STIX provided overall the best sensitivity combined with ease of handling. The possibility to store and ship the ISOCODE STIX at ambient temperature adds further advantage to this method.     

快速诊断疟疾胶体金免疫层析试条方法的建立与评价

目的 建立一种能区分恶性疟的快速、简便诊断疟疾的胶体金免疫层析试条方法，并对其进行评价。 方法 筛选基于恶性疟原虫乳酸脱氢酶制备的单克隆抗体对，采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记筛选到的单克隆抗体F4H12、G4C9和D8F7，并将其吸附于样品垫；将单克隆抗体B2G10（针对恶性疟原虫与间日疟原虫）和D6A7（只针对恶性疟原虫）分别划线包被于同一硝酸纤维素膜适当位置，制成免疫层析检测试条。用该试条检测疫区非疟疾发热病人血样（107份）和内脏利什曼病患者血样（17份）以评价其特异性，检测确诊的疟疾患者血样（间日疟110份， 恶性疟54份）以评价其敏感性。均用单盲法检测。 结果 检测107份疫区非疟疾发热病人血样和17份内脏利什曼病患者血样，有119份显示为阴性，特异性约为96.0%；其中17份内脏利什曼病患者血样全部为阴性。检测164份疟疾患者血样，阳性153份，敏感性为93.3%，其中间日疟检出率为92.7%（102/110），恶性疟检出率为94.4%（51/54）。 结论 研制出的快速诊断疟疾胶体金免疫层析试条敏感性、特异性均较高。     

试条法快速诊断恶性疟的研究

目的 :探讨试条法检测恶性疟患者血液中富组氨酸蛋白 快速诊断恶性疟在海南疟区现场的诊断价值。方法 :用试条法检测 66例发热病人血样 ,将结果同血涂片镜检法进行比较。结果 :试条法检出恶性疟 (包括混合感染 )的敏感度和特异度分别为 85.7%和95.6% ,两种检测法的符合率为 92 .4 % ;用试条法检测 2 0例间日疟患者血样无交叉反应。结论 :试条法诊断恶性疟快速方便 ,能诊断早期恶性疟患者。