重组抗原(rK39)试纸条诊断黑热病

目的　了解rK39试纸条用于临床黑热病现症患者检测的效果。方法　以rK39试纸条结果与病原学结果比较或以rK39试纸条阳性结果与特效药物治疗结果比较,判断rK39试纸条检测黑热病的可靠性。结果　rK39试纸条和病原学 2种方法平行检查 49人,共查出阳性 36人,rK39试纸条阳性 35人 (97 .22% ),病原学检查阳性 21人(58.33% )。21例病原学阳性者中,rK39试纸条显示阳性 20例,假阴性为 4 76%。单一显示rK39试纸条阳性的 29例患者均用葡萄糖酸锑钠治疗有效,证实都是黑热病。在rK39试纸条检测的 72人中,通过病原学检查和疗效观察结果印证共有黑热病 51例,rK39试纸条显示阳性 49人 (96. 07% )。结论　应用rK39试纸条诊断黑热病现症患者的阳性检出率可达 96. 07%,与病原学方法相比,检出率明显提高(P<0. 01)。     

rK39免疫层析试条在新疆黑热病诊断和流行病学调查中的应用

目的观察rK39免疫层析试条对新疆不同类型黑热病的诊断及流行病学调查中的应用价值。方法用rK39试条检查不同地区确诊的黑热病患者;用rK39-ELISA和rK39免疫层析试条检查不同流行地区居民血清标本与利什曼素皮内反应结果进行比较分析。结果对来自新疆不同地区的黑热病患者共1204例,用rK39试条检测抗体阳性者1169例,阳性率97.09%。其中人源型黑热病患者1052例中1031例阳性,阳性率98.0%;荒漠型黑热病患者158例中阳性143例,阳性率90.5%。二者之间差异显著(P<0.001),荒漠型患者阳性率较低。人源型黑热病流行区居民中rK39抗体阳性率在既往有黑热病史者中为42.7%～59.3%,在无既往史的居民中仅为2.2%～5.8%。在随访的rK39阳性,皮内反应阴性的18人中有4人在4和6个月后出现症状,确诊为黑热病。在黑热病治愈后2年内94.6%的患者rK39抗体仍为阳性。9年后仍有82.5%保持阳性。结论rK39层析试条对新疆黑热病患者有很高的诊断价值。其保存、携带方便,操作简单适于在基层现场使用。由于其可在潜伏期中发现黑热病患者。故可用于在流行地区皮内反应阴性的居民中进行免疫学检测,早期发现病人。由于黑热病患者治愈后血清中rK39抗体长期存在,故不适用于预后判定和疗效评价。     

ELISA双抗原夹心法检测内脏利什曼病抗体的研究

目的观察rK39抗原酶联免疫吸附试验双抗原夹心法(ELISA夹心法)检测内脏利什曼病抗体用于内脏利什曼病诊断与宿主动物感染调查的可行性。方法采用ELISA夹心法与rK39免疫层析试条法(ICT)同步检测内脏利什曼病抗体。结果 5种家畜血清229份,7种鼠类标本238份,ELISA夹心法和rK39 ICT法抗体检测均阴性;接种利什曼原虫灰仓鼠、草原兔尾鼠标本33份,13份阳性,阳性率39.4%;塔里木兔标本119份,阳性7份,阳性率5.9%;非疫区儿童血清29份,全部阴性;疫区无内脏利什曼病症状人血清250份,4份两种方法均阳性,阳性率均为1.6%;住院内脏利什曼病病人血清67份,两种方法的阳性率分别为68.7%和67.2%。共检测人和其他动物标本965份,两种方法的阳性符合率98.6%,阴性符合率99.9%。ICT相同显色等级的阳性标本,ELISA跨10个滴度。结论 ELISA夹心法可检测多种动物内脏利什曼病抗体,抗体滴度具有定量意义。该方法适用于内脏利什曼病诊断、疗效观察和流行病学调查。     

基于利什曼原虫K26重组抗原检测黑热病特异抗体的免疫层析试条方法的建立与效果评价

目的 建立基于利什曼原虫K26重组抗原(Recombinant K26, rK26)检测内脏利什曼病特异抗体的胶体金免疫层析试条方法，并评价效果。方法 用胶体金标记链球菌G蛋白(Streptococcal Protein G, SPG),并将其吸附于交联释放垫上；将利什曼原虫K26重组抗原作为包被抗原包被于硝酸纤维素膜适当位置，制成检测特异抗体的免疫层析试条。用该试条检测病原学确诊的内脏利什曼病、其它寄生虫病以及健康者血清，以评价其检测的敏感性和特异性。同时用rK39(Recombinant K39, rK39)试条进行平行检测。结果 rK26试条法和rK39试条法检测内脏利什曼病患者血清的敏感性分别为91.82%(101/110)和93.64%(103/110);与10份疟疾患者血清、10份日本血吸虫病患者血清、10份细粒棘球蚴病患者血清、5份弓形虫病患者血清、5份并殖吸虫病患者血清和5份华支睾吸虫病患者血清均无交叉反应，40份健康者血清也均为阴性，rK26试条法和rK39试条法的总特异性均为100.00%。rK26试条法和rK39试条法阳性检出率之间的差异无统计学意义(χ^...     

山西省1例新发内脏利什曼病病例调查

2011年9月,山西省长治市疾病预防控制中心通过传染病网络直报系统报告1例幼儿内脏利什曼病新发病例。围绕该病例展开了相关的临床个案和现场流行病学调查。患儿,2岁,山西省长治市黄碾镇人。临床检查示患儿肝脾肿大,血常规检查示全血细胞呈持续性降低,骨髓病理涂片发现利杜体,rK39免疫诊断试条检测示强阳性,确诊为内脏利什曼病。患儿经葡萄糖酸锑钠治疗1个疗程(总剂量为150～200 mg/kg,分6 d注射,1次/d)后,症状明显好转。现场调查该病例所在地区无内脏利什曼病既往病例。居民家中犬和家养动物的数量较多。采用rK39免疫诊断试条对周围人群(17人)及部分家养动物(3只犬、1头羊和1只猫)血样进行检测,结果均为阴性。推测该地区存在内脏利什曼病潜在流行风险。     

检测特异抗体胶体金免疫层析试条诊断内脏利什曼病患者现场评价

目的 在现场评价检测内脏利什曼病特异抗体的胶体金免疫层析试条诊断内脏利什曼病患者的效果。方法 2013年采集动物源型内脏利什曼病流行区(四川省、甘肃省)和人源型内脏利什曼病流行区(新疆喀什市)疾病预防控制中心门诊就诊的病人血样和骨髓样本,用镜检法、内脏利什曼病试条和rK39试条进行平行测试,以镜检法为金标准,比较两种试条法检测的敏感性和特异性有无差异。结果 内脏利什曼病试条和rK39试条检测镜检确诊的97例内脏利什曼病患者的敏感性分别为98.87%(96/97),97.94%(95/97),二者无统计学差异(χ²=0.34,P>0.05)。两种试条检测非内脏利什曼病病例145例, 均有2例假阳性反应,特异性为98.62(143/145)。对来自动物源型内脏利什曼病流行区和人源型内脏利什曼病流行区的内脏利什曼病患者分别统计阳性率,结果显示内脏利什曼病试条和rK39试条法检测动物源型和人源型流行区的内脏利什曼病患者血样之间阳性率的差异均无统计学意义(χ²=0.22 /0.01,P>0.05)。两种试条法检测动物源型和人源型内脏利什曼病流行区非内脏利什曼病患者血样之间特异性的差异也均无统计学意义(χ²=0.29,P>0.05)。结论 快速检测内脏利什曼病的胶体金免疫层析试条适用于检测动物源型内脏利什曼病流行区患者血样中的特异性抗体。     

甘肃文县婴儿利什曼原虫无症状感染犬的检测

目的评价PCR法、ELISA法和试条法检测我国婴儿利什曼原虫无症状感染犬的潜能。方法用两组PCR引物RV1-RV2和K13A-K13B检测动物源型黑热病疫区健康犬静脉血和骨髓中利什曼原虫特异DNA，以利什曼原虫可溶性抗原为包被抗原的ELISA法和rk39-dipstick试条法分别检测利什曼原虫特异抗体，并比较各种检测方法的敏感性差异。结果PCR法检测抗凝静脉血和骨髓的阳性率分别为50．63％（40／79）和69．62％（55／79），两种样本总检出率为77．21％（61179）；ELISA法检测的阳性率为22．22％（16／72），而rk39-dipstick试条检测的阳性率为33．33％（19／57）。结论我国动物源性黑热病疫区利什曼原虫无症状感染犬的比例相当高，以骨髓为样本的PCR检测法为较精确的犬无症状感染检测方法。     

新发现的内脏利什曼病流行区新疆民丰县Ⅰ. 流行病学调查

目的 对新疆民丰县一个新发现的内脏利什曼病（黑热病）流行区进行现场流行病学调查。 方法 2007年6月采用回顾性调查和现况调查相结合,对民丰县安迪尔乡所有居民进行逐户入户调查。内容包括家庭成员中20年来的健康状况、既往有无疑似内脏利什曼病史（包括已过世者）,并对15岁以下儿童进行体查（触诊肝、脾）;对部分居民进行利什曼素皮内试验和rk39免疫层析试条检测。 结果 共调查居民313人,未见现症病例。既往有疑似内脏利什曼病史者60例,其中13例已过世。171人进行利什曼素皮内试验检测,阳性率为99.4%（170/171）,其中有疑似内脏利什曼病病史者的阳性率为96.6%（28/29）。197人进行rk39免疫层析试条检测,阳性率为10.2%（20/197）,其中有疑似内脏利什曼病史者的阳性率为19.4%（6/31）,追溯诊断为既往内脏利什曼病病例。 结论 新疆民丰县为内脏利什曼病流行区。     

四川省理县犬只管理防治黑热病效果观察

目的采用犬只管理为主的控制措施,观察防治黑热病效果,为疫区制订防治对策提供依据。方法政府负责组织,卫生和农牧部门负责技术与实施,采取全面灭犬、捕杀漏灭和新养家犬与禁养家犬3～5年的犬只管理;采用诊治现症患者、疫点处理、杀虫剂浴犬和灭蛉的巩固措施及家犬密度、犬利什曼病血清学检测的监测措施。结果1991-1993年理县采取犬只管理全面灭犬3 060只,捕杀漏灭与新养家犬3 420只;1994年疫区实施禁养家犬3～5年,黑热病发病人数逐年下降,1997年以来无病例发生。1997年以后,疫区养犬数增多,2006-2007年监测家犬密度平均为0.51～0.99只/户。2008年全面灭犬3 825只,家犬密度平均下降为0.02～0.18只/户;2010年用rk39试条检测家犬,阳性率为4.08%。监测显示理县黑热病传播已得到有效控制。结论理县实施犬只管理控制传染源,是防治犬源性黑热病最有效的措施,防治远期效果巩固,应大力推行。     

重庆主城首例输入性黑热病实验室诊断

目的报道重庆主城首例输入性黑热病,探讨黑热病的实验室诊断,降低误诊率。方法分析1例黑热病病例的临床资料及骨髓中利杜体的形态特点,结合rk39免疫层析试纸条检测。结果该患者有黑热病疫区生活史,有不规则发热、脾大、白细胞计数降低、贫血、血小板减少等症状,骨髓检查显示骨髓增生活跃,吞噬细胞内外可见杜氏利什曼原虫无鞭毛体,rk39免疫层析试纸条检测阳性,因此确诊为黑热病。结论根据患者的流行病学资料、临床表现和实验室检查结果,该病例确诊为黑热病。     

黑热病166例病例流行病学与临床分析

目的通过对黑热病病例的分析,探讨黑热病的流行病学与临床特点,为临床减少误诊提供依据。方法对就诊患者采用rk39试纸条检测,阳性者收集流行病学、发病情况、临床表现以及其在医院的病原学、辅助检查和病历记录等资料,免费给予锑剂药物治疗;对资料进行整理、统计和回顾性分析。结果病例均有传播季节在流行区居住史;全年各月均有发病,非流行区病例以到九寨沟县、黑水县和甘肃、新疆流行区感染后发病的居多。发病男性高于女性。流行区16岁以下发病较多,占35.09%;非流行区以16岁及以上发病居多,占97.85%。病程最短者为7d,最长者达2年;主要临床表现为长期不规则发热占100.00%,进行性肝脾肿大占98.00%;以白细胞为主的全血细胞减少及血浆球蛋白增高分别占83.33%和93.18%。rk39试纸条检查与骨髓穿刺的阳性符合率为100.00%,rk39试纸条的检出率明显高于骨髓穿刺(P0.01)。结论加强流行区居民和流动人口防病宣传,从流行病学入手控制黑热病;黑热病的早期诊断关键是了解流行病学资料,认识该病的临床特点,掌握骨髓或rk39试纸条检查方法,防止漏诊误诊。     

Use of the recombinant K39 dipstick test and the direct agglutination test in a setting endemic for visceral leishmaniasis in Nepal

We evaluated the field use of two serologic tests for visceral leishmaniasis (VL), the direct agglutination test (DAT) and rK39 dipstick test, in the context of a case-control study. Most VL cases in Nepal are currently diagnosed on clinical grounds and with relatively non-specific tests such as the formol-gel test. Among 14 newly diagnosed VL patients with bone-marrow slides confirmed positive in two independent laboratories, the sensitivity of both tests was 100%. Among 113 controls with no personal or household history of VL, the specificity of the rK39 was 100% while that of the DAT was 93%. The rK39 was less expensive than DAT, and has the advantages of ease of use and obtaining results within minutes. The wider use of the rK39 dipstick test could improve the specificity of VL diagnosis in Nepal.     

新疆库尔勒市哈满沟煤矿内脏利什曼病流行现况调查

目的 调查新疆库尔勒市塔什店镇哈满沟煤矿内脏利什曼病的流行现况。 方法 2008年6月采用回顾性调查与现况调查相结合, 对哈满沟矿区所有居民进行逐户入室调查。内容包括既往有无疑似内脏利什曼病病史, 部分居民进行利什曼素皮内试验, 并对15岁以下儿童皮内试验阴性者进行体检（肝、脾触诊）和rk39免疫层析试条检测, 具备内脏利什曼病症状和体征、试条阳性者进行骨髓穿刺, 镜检是否感染利什曼原虫无鞭毛体。在居民点及附近野外捕集白蛉, 解剖鉴定白蛉, 并检查前鞭毛体有无自然感染。 结果 接受利什曼素皮内试验185人, 阳性39例, 阳性率为21.1%（39/185）。在当地居住不足6年的成年人和在当地出生的5岁以下儿童共45人, 均为阴性;在当地居住6年以上者阳性率为27.9%（39/140）。15岁以下儿童皮内试验阴性者（81人）接受rk39免疫层析试条检测, 阳性1例, 经骨髓穿刺镜检见利什曼原虫无鞭毛体, 确诊为内脏利什曼病。捕获的12只白蛉, 经剖检鉴定为亚历山大白蛉（Phlebotomus alexandri）, 其中1只雌蛉利什曼原虫前鞭毛体阳性。 结论 哈满沟矿区为内脏利什曼病流行区。     

新疆维吾尔自治区伽师县卧里托格拉克乡居民内脏利什曼病流行现况调查

目的 调查新疆维吾尔自治区伽师县内脏利什曼病流行现况.方法 采用回顾性调查和现况调查相结合,对伽师县卧里托格拉克乡20村1组所有居民进行入户调查.调查内容包括既往有无疑似内脏利什曼病病史,部分居民进行利什曼素皮内试验,对3岁以下婴幼儿皮内试验阴性者进行查体(触诊肝、脾)和rk39免疫层析试条检测.在居民住宅内、外捕集白蛉,解剖鉴定并检查前鞭毛体有无自然感染.结果 接受利什曼素皮内试验149人,阳性率为68.46%(102/149);3岁以下年龄组阳性率为11.76%(2/17),4～75岁年龄组阳性率为75.76%(100/132).3岁以下年龄组皮内试验阴性者有15人接受rk39免疫层析试条检测,1例阳性者(女,1岁),确认为临床诊断病例.2001-2008年7月有既往病史者52例,其中治愈50例,死亡2例.捕获的374只雌蛉,经解剖鉴定为吴氏白蛉(Phlebotomus wui),其中3只雌蛉体内查见自然感染的利什曼原虫前鞭毛体.结论 伽师县仍有内脏利什曼病流行.     

Evaluation of a new recombinant K39 rapid diagnostic test for Sudanese visceral leishmaniasis

A new rK39 rapid diagnostic dipstick test (DiaMed-IT-Leish) was compared with aspiration and a direct agglutination test (DAT) for diagnosis of visceral leishmaniasis (VL) in 201 parasitologically confirmed cases, 133 endemic controls, and in 356 clinical suspects in disease-endemic and -epidemic areas in Sudan. The sensitivity of the rK39 test in parasitologically confirmed VL cases was 90%, whereas the specificity in disease-endemic controls was 99%. The sensitivity of the DAT was 98%. In clinically suspected cases, the sensitivity of the rK39 test was 81% and the specificity was 97%. When compared with the diagnostic protocol based on the DAT and aspiration used by Médecins sans Frontières in epidemic situations, the positive predictive value was 98%, and the negative predictive value was 71%. This rK39 rapid diagnostic test is suitable for screening as well as diagnosis of VL. Further diagnostic work-up of dipstick-negative patients with clinically suspected VL is important. The ease and convenience of the dipstick test will allow decentralization and improved access to care in disease-endemic areas in Sudan.     

Comparison of Parasitological,Serological, and Molecular Tests for Visceral Leishmaniasis in HIV-Infected Patients: A Cross-Sectional Delayed-Type Study

The aim of this study was to evaluate the accuracy of invasive and non-invasive tests for diagnosis of visceral leishmaniasis (VL) in a large series of human immunodeficiency virus (HIV)-infected patients. In this delayed-type cross-sectional study, 113 HIV-infected symptomatic patients were evaluated by an adjudication committee after clinical follow-up to establish the presence or absence of VL as the target condition (reference test). The index tests were recombinant K39 antigen-based immunochromatographic test (rK39), indirect fluorescent antibody test (IFAT), prototype kit of direct agglutination test (DAT-LPC), and real-time polymerase chain reaction (qPCR) in peripheral blood. Compared with parasitological test and adjudication committee diagnosis or latent class model analyses, IFAT and rk39 dipstick test presented the lowest sensitivity. DAT-LPC exhibited good overall performance, and there was no statistical difference between DAT-LPC and qPCR diagnosis accuracy. Real-time PCR emerges as a less invasive alternative to parasitological examination for confirmation of cases not identified by DAT.     

用重组 rK39抗原试纸条快速诊断内脏利什曼病

[目的 ]评价以恰氏利氏曼原虫类 kinesin基因中编码 39个氨基酸的基因片段 (r K39)为重组抗原 ,用于血清学诊断内脏利什曼病的价值。 [方法 ]在新疆喀什地区对 13例经脾检和骨髓穿刺阳性的内脏利什曼病患者 ,取一滴病人全血或血清滴在 r K39抗原试纸条底部的吸收垫上 ,血清中蛋白随缓冲液向试纸条上部移动 ,其中相应特异抗体可与 r K39抗原带结合 ,而产生阳性条带。同时 ,本文亦用相同阳性血清作了关于 r K 39抗原的 Western印迹分析对照。 [结果 ]EL ISA分析显示病人血清抗体滴度在 10 - 2～ 10 - 4 ,与所见到的 r K39试纸条上的反应强度符合。Western印迹分析亦显示阳性血清可识别 r K39蛋白条带。[结论 ]与传统诊断内脏利什曼病方法相比较 ,r K39试纸条更快速 ,特异 ,灵敏和低损伤性 ,可用于低发病率流行区的内脏利什曼病的诊断和筛选     

河南省1例输入性内脏利什曼病的实验室诊断

目的　分析河南省1例输入性内脏利什曼病病例，探讨内脏利什曼病的实验室诊断方法。方法　分析患者的流行病学资料和临床资料，镜检观察骨髓涂片中杜氏利什曼原虫无鞭毛体；rK39试纸条检测血清中利什曼原虫抗体；用两对引物K13A?K13B和 LITSR?L5.8S分别扩增利什曼原虫动基体DNA和核糖体DNA内转录间隔区基因片段。结果　 该患者曾去过内脏利什曼病流行区，有不规则发热、脾肿大、全血细胞减少、白蛋白/球蛋白比例倒置等症状，骨髓涂片查见杜氏利什曼原虫无鞭毛体，rK39试纸条检测阳性，两对引物K13A?K13B和 LITSR?L5.8S分别扩增出87 bp和285 bp的片段。两片段序列与杜氏利什曼原虫相应序列的相似性分别为94%和100%。结论　结合患者的流行病学资料和临床表现以及实验室检测结果，确诊该病例为内脏利什曼病病例，病原体为杜氏利什曼原虫。     

河南省1例输入性内脏利什曼病的实验室诊断

目的　分析河南省1例输入性内脏利什曼病病例,探讨内脏利什曼病的实验室诊断方法。方法　分析患者的流行病学资料和临床资料,镜检观察骨髓涂片中杜氏利什曼原虫无鞭毛体;rK39试纸条检测血清中利什曼原虫抗体;用两对引物K13A?K13B和 LITSR?L5.8S分别扩增利什曼原虫动基体DNA和核糖体DNA内转录间隔区基因片段。结果　 该患者曾去过内脏利什曼病流行区,有不规则发热、脾肿大、全血细胞减少、白蛋白/球蛋白比例倒置等症状,骨髓涂片查见杜氏利什曼原虫无鞭毛体,rK39试纸条检测阳性,两对引物K13A?K13B和 LITSR?L5.8S分别扩增出87 bp和285 bp的片段。两片段序列与杜氏利什曼原虫相应序列的相似性分别为94%和100%。结论　结合患者的流行病学资料和临床表现以及实验室检测结果,确诊该病例为内脏利什曼病病例,病原体为杜氏利什曼原虫。