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1.
背景:过氧化物酶体增生因子活化受体α是调节心脏脂肪酸氧化的重要核转录因子,利用基因工程技术构建其重组腺病毒载体对研究心脏能量代谢障碍机制具有重要意义。目的:构建大鼠过氧化物酶体增生因子活化受体α基因重组腺病毒载体,评价其在原代培养的乳鼠心肌细胞中的表达效率。方法:采用RT-PCR法自SD大鼠肝脏扩增过氧化物酶体增生因子活化受体α基因,将其克隆至带有增强型绿色荧光蛋白的穿梭质粒载体pAd-Track-CMV。线性化重组穿梭质粒载体并转化入含有腺病毒骨架质粒pAd-Easy-1的感受态大肠杆菌BJ5183构建重组腺病毒载体质粒。用脂质体将线性化的重组腺病毒载体质粒转染于人胚肾293细胞以包装、扩增,纯化病毒后计算滴度。用纯化的重组腺病毒转染心肌细胞,荧光显微镜观察转染效率;荧光定量PCR、免疫印迹法检测细胞过氧化物酶体增生因子活化受体αmRNA、蛋白表达。结果与结论:成功构建携带大鼠过氧化物酶体增生因子活化受体α基因的重组腺病毒载体,病毒滴度为3.5×1011pfu/L。重组腺病毒转染心肌细胞的效率达90%以上,被转染细胞目的基因mRNA、蛋白表达显著增高。该载体的成功构建为研究过氧化物酶体增生因子活化受体α基因在心肌能量代谢障碍中的作用奠定基础。 相似文献
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过氧化物酶体增殖因子活化受体γ在垂体腺瘤中的表达及其意义 总被引:1,自引:1,他引:0
目的:观察过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPARγ)在垂体腺瘤组织中的表达情况,分析PPAR7与垂体腺瘤激素免疫分型等之间的关系。方法:选取2002年1月-2005年5月38例手术切除的垂体腺瘤,利用RT—PCR和Western Blot技术分析PPARγ在垂体腺瘤中的表达情况及其与垂体腺瘤激素免疫分型等之间的关系。结果:所有肿瘤均发现有PPARγ的表达。按照垂体腺瘤激素免疫分型各组肿瘤表达的PPARγmRNA和PPARγ蛋白表达水平均无显著差异。结论:人类垂体腺瘤中有PPAR7的表达。 相似文献
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目的:分析过氧化物酶体增殖因子活化受体(PPAR-γ)的表达与大肠癌临床病理特征之间的关系,并探讨PPAR-γ对大肠癌细胞增殖活性的影响。方法:采用免疫组织化学法,检测56例带有癌旁正常黏膜的大肠癌组织中PPAR-γ与增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果:PPAR-γ在大肠癌组织中的表达显著高于癌旁正常黏膜组织(P〈0.001)。PPAR-γ的表达与肿瘤分化程度、浸润深度、Dukes分期以及淋巴结转移有密切关系(P〈0.05)。PPAR-γ的表达程度与PCNA显著相关(P〈0.001)。结论:PPAR-γ的表达与大肠癌的分化程度、浸润深度和Dukes分期及淋巴结转移有关;PPAR-γ可促进大肠癌细胞的增殖。 相似文献
4.
过氧化物酶体增殖体活化受体(PPARs)是配体活化的转录因子,属核激素受体超家族。它们参与调节脂质代谢、血糖平衡、炎症反应、细胞增生、分化及凋亡,并在肿瘤、动脉粥样硬化和骨质疏松症等多种病理生理过程中发挥重要作用。 相似文献
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过氧化物酶体增殖体活化受体(PPARs)属Ⅱ型核受体超家族成员。是一类由配体激活的核转录因子。PPARγ是它的一个亚型。它除了在脂肪组织中表达外。还在肝脏、脾脏、结肠、肾上腺、单核/巨噬细胞中表达。随着研究的深入,其功能也不断被发现。本文对PPARγ的结构、分型、组织分布、作用机制及生理功能等方面作一综述。 相似文献
6.
目的:检测过氧化物酶体增殖因子激活受体α(PPAR-α)在人肺癌组织和非癌肺组织中的表达,探讨PPAR-α的表达与肺癌临床病理之间的关系。方法:采用免疫组化SP方法分别检测13例非癌肺组织和59例肺癌组织中PPAR-α的表达,并通过图像分析系统检测各组的平均吸光度值。结果:PPAR-α在肺癌和非癌肺组织中均有表达,且非癌肺组织的吸光度值较肺癌组织高;各型肺癌中PPAR-α表达从高到低依次为鳞癌、腺癌、大细胞肺癌、小细胞肺癌;PPAR-α的表达与肺癌的分化程度、组织学类型、术后TNM分期有关,而与肺癌淋巴结转移无关。结论:PPAR-α在肺癌的发生及进展中起重要作用,该受体有望成为未来肺癌治疗的新靶点。 相似文献
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过氧化物酶体增殖物活化受体γ(peroxisome protiferator—activated receptor—gamma,PPARγ)是由配体激活的转录因子核受体家族的一个成员。主要存在脂肪组织,并促进脂肪细胞分化和参与脂肪酸代谢基因的表达。多种脂肪酸和类花生酸可作为PPARγ生理性配体,通过激活PPARγ发挥作用。近年来研究表明许多非脂肪组织也有 相似文献
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过氧化物酶增殖体激活受体αmRNA在急性肺损伤大鼠肺组织表达的变化 总被引:3,自引:0,他引:3
目的观察内毒素(LPS)复制的急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织过氧化物酶增值体激活受体α(PPARα)mRNA表达的变化,探讨PPARα在ALI中可能的作用.方法将40只雄性Wistar大鼠随机分为对照组,LPS致伤1、2、4、8 h组.用LPS(5 mg/kg)静脉注射复制大鼠ALI模型,分别在LPS致伤后1、2、4、8 h时处死大鼠,采用RT-PCR与ELISA法检测肺组织中PPARα和肿瘤坏死因子α(TNFα)mRNA的表达及肺组织匀浆中TNFα浓度.结果LPS致伤后2、4、8 h肺组织病理积分较对照组明显升高(P均<0.01);LPS致伤后2、4 h PPARα mRNA表达(IOD值)较对照组显著降低(P<0.05);LPS致伤后1、2、4、8 hTNFα mRNA(IOD值)和蛋白水平表达均较对照组显著升高(P均<O.01).结论PPARα mRNA在ALI大鼠肺组织表达降低;而肺组织TNFα mRNA和蛋白水平均升高.PPARα在ALI的发病机制中具有一定的作用. 相似文献
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过氧化物酶体增生激活受体γ的表达与肺癌生长机制研究 总被引:1,自引:1,他引:1
目的 研究过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPAR-γ)经配体活化后抑制肺癌生长的机制。方法 通过RT-PCR和Western blot检测肺癌细胞株上PPAR-γ的表达,并通过MTT和细胞计数检测经PPAR-γ的配体作用后的细胞增殖情况,以TUNEL检测细胞的凋亡情况。结果 两种细胞株上均有PPAR-γ的表达;PPAR-γ的配体作用后明显抑制细胞生长,且与时间和剂量有关;经配体活化的PPAR-γ能诱导细胞凋亡,使其增殖受抑。结论 PPAR-γ在肺癌细胞上表达,经配体活化后能通过诱导凋亡而抑制肺癌细胞的生长,作为肺癌治疗的新靶点。 相似文献
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过氧化物酶体增殖物活化受体与糖脂代谢 总被引:1,自引:0,他引:1
过氧化物酶体增殖物活化受体(PPAR)δ是新近发现与糖脂代谢及胰岛素抵抗相关的转录因子,PPARδ通过调节脂代谢所需酶的表达来调控机体的脂代谢,并调节胰岛素的敏感性。PPARδ可能是调控脂代谢及胰岛素敏感性的关键因子。 相似文献
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背景:过氧化物酶体增殖物激活受体γ是细胞分化重要的调控因子,通过调节其他转录因子的表达,参与调节骨髓间充质干细胞的分化.目的:构建pEGFP-N1-过氧化物酶体增殖物激活受体γ真核表达载体,体外转染兔骨髓间充质干细胞,为过氧化物酶体增殖物激活受体γ受体功能和基于过氧化物酶体增殖物激活受体γ受体靶点的药物筛选提供分子研究平台.设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-09/2008-07在南华大学附属一医院临床研究所完成.材料:选择雄性2-5月龄新两兰大白兔,用丁分离培养骨髓间充质干细胞.方法:应用密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞,贴壁法不断纯化.从正常小鼠的肝组织中提取总RNA,反转录-聚合酶链反应法获得过氧化物酶体增殖物激活受体γcDNA.经Xho Ⅰ,Apa Ⅰ双酶切,定向克隆到真核表达载体pEGFP-N1,构建重组质粒pEGFP-N1-过氧化物酶体增殖物激活受体γ.主要观察指标:经酶切分析和测序鉴定重组质粒中过氧化物酶体增殖物激活受体γ基因的完整性和真实性,脂质体介导下体外转染骨髓间充质干细胞,荧光倒置显微镜下观察瞬时表达及转染效率,提取总RNA和总蛋白,进行反转录-聚合酶链反应和Western blot检测.结果:获得的过氧化物酶体增殖物激活受体γ基因片段经酶切和测序鉴定正确,重组质粒经酶切和测序鉴定证实构建正确,成功转染骨髓间充质干细胞,在其中检测到目的基因及蛋白表达.结论:实验成功构建了pEGFP-N1-过氧化物酶体增殖物激活受体γ重组质粒,同时在转染的骨髓间充质干细胞中获得了过氧化物酶体增殖物激活受体γ的高效表达. 相似文献
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背景:过氧化物酶体增殖物激活受体γ是细胞分化重要的调控因子,通过调节其他转录因子的表达,参与调节骨髓间充质干细胞的分化。目的:构建pEGFP.N1过氧化物酶体增殖物激活受体γ真核表达载体,体外转染兔骨髓间充质干细胞,为过氧化物酶体增殖物激活受体γ受体功能和基于过氧化物酶体增殖物激活受体γ受体靶点的药物筛选提供分子研究平台。设计、时间及地点:单一样本观察,于2007—09/2008—07在南华大学附属一医院临床研究所完成。材料:选择雄性2~5月龄新西兰大白兔,用于分离培养骨髓间充质干细胞。方法:应用密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞,贴壁法不断纯化。从正常小鼠的肝组织中提取总RNA,反转录-聚合酶链反应法获得过氧化物酶体增殖物激活受体γcDNA,经XhoI,ApaI双酶切,定向克隆到真核表达载体pEGFP-N1,构建重组质粒pEGFP—N1-过氧化物酶体增殖物激活受体γ。主要观察指标:经酶切分析和测序鉴定重组质粒中过氧化物酶体增殖物激活受体γ基因的完整性和真实性,脂质体介导下体外转染骨髓间充质干细胞,荧光倒置显微镜下观察瞬时表达及转染效率,提取总RNA和总蛋白,进行反转录聚合酶链反应和Westernblot检测。结果:获得的过氧化物酶体增殖物激活受体γ基因片段经酶切和测序鉴定正确,重组质粒经酶切和测序鉴定证实构建正确,成功转染骨髓间充质干细胞,在其中检测到目的基因及蛋白表达。结论:实验成功构建了pEGFP-N1过氧化物酶体增殖物激活受体γ重组质粒,同时存转染的骨髓间充质干细胞中获得了过氧化物酶体增殖物激活受体γ的高效表达。 相似文献
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目的:研究有氧运动对代谢综合征(MS)大鼠炎症反应的影响以及心肌组织过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)的表达,探讨运动对MS心血管炎症反应调节的可能机制。方法:4周龄SD雄性大鼠随机分为基础对照组(C)和高脂高盐饲料喂养组。18周后将MS大鼠随机分为模型对照组(MC)、模型运动组(ME)。运动组大鼠行60min/d、27m/min、5%坡度跑台训练12周。ELISA法测定血清IL-6、TNF-α、MCP-1含量;荧光定量R-PCR测定心肌组织PPARαm RNA表达、Western Blot测定心肌PPARα蛋白含量。结果:(1)与C组相比,MC组血清IL-6、TNF-α、MCP-1含量显著升高(P0.05、P0.01、P0.01)、MC组心肌PPARαm RNA和蛋白表达显著降低(P0.05);(2)与MC组相比,ME组大鼠血清IL-6、TNF-α、MCP-1含量显著降低(P0.05、P0.01、P0.01)、ME组心肌PPARαm RNA和蛋白表达显著升高(P0.05、P0.01)。结论:MS大鼠炎症反应明显,长期有氧运动干预能有效降低其炎症反应,PPARα可能介导了机体的炎症反应。 相似文献
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重组腺病毒介导反义p38α基因抑制烧伤复合缺氧条件下乳鼠心肌细胞凋亡的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨烧伤血清复合缺氧条件下乳鼠心肌细胞p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)活化与细胞凋亡之间的关系.方法 采用原代培养的乳鼠心肌细胞,按照处理因素不同分为3组:正常对照组细胞自然生长;烧伤缺氧组细胞给予烧伤血清+缺氧刺激(含10%的40%总体表面积Ⅲ度烫伤大鼠伤后6 h血清的DMEM/F12培养液+1%O2、5%CO2和94%N2);反义阻断组在细胞转染反义p38α重组腺病毒(AD-ASp38α)后给予烧伤血清+缺氧刺激.细胞培养6 h后,采用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测p38磷酸化水平;采用DNA片断和流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况.结果 与正常对照组比较,烧伤缺氧组p38磷酸化水平(灰度值)明显提高(8.68±0.14比3.21±0.05,P<0.01),细胞凋亡率明显增高[(50.367±0.451)%比(2.063±0.111)%,P<0.01];心肌细胞转染AD-ASp38α后,p38磷酸化水平(灰度值)明显下降(5.46±0.16比8.68±0.14,P<0.01),细胞凋亡率明显降低[(13.200±0.121)%比(50.367±0.451)%,P<0.01].结论 烧伤血清复合缺氧条件下通过促使p38MAPK活化导致心肌细胞凋亡增多;阻断p38MAPK信号转导通路可减轻严重烧伤早期心肌细胞的损伤. 相似文献
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目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)基因遗传多态rs1800206(c.484C>G,L162V)与南方人群代谢综合征(MES)的相关性.方法 收集2010年3月至2011年3月在我院进行健康体检的40~60岁人员共1184名,采用real-time PCR技术(TAQMAN技术)分析PPARα基因遗传多态484C>G的基因型分布及其与人群MES的相关性.结果 该人群PPARα基因484C>G三种基因型CC、CG及GG频率分别为91.4%、8.4%及0.2%,符合遗传平衡定律(Hardy-Weinberg,P=0.845).与常见基因型CC相比,携带变异基因型CG+ GG者表现为血糖[(5.82±1.59) mmol/L与(5.49±1.17)mmol/L,t=2.630,P=0.009]和低密度脂蛋白胆固醇[(3.53 ±1.03) mmol/L与(3.36±0.65) mmol/L,t=2.376,P=0.018]增高,以及高密度脂蛋白胆固醇[(1.56±0.35) mmol/L与(1.65±0.43) mmol/L,t=2.430,P=0.015]降低.在调整性别、年龄、教育程度和吸烟、饮酒等生活方式及体质量指数后,484G变异基因型CG +GG降低与南方人群MES显著相关(调整OR=1.89;95% CI=1.09 ~3.23,P=0.012).结论 PPARα基因的遗传变异rs1800206可作为我国南方人群MES独立的预测指标. 相似文献
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过氧化物酶体增殖活化受体(PPAR)是一种调节脂类分化和代谢的核激素受体转录翻译因子。通过研究发现PPAR有三种亚型,α、β和γ。PPAR-γ的配体包括自然出现的复合物如羟基二十碳四烯酸(HETEs)、羟基十八烷酸(HODEs)和前列腺素D2的代谢产物15-脱氧前列腺素J2(15d—PGJ2), 相似文献
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目的:通过检测过氧化物酶体增生物激活受体(PPARγ)在人不同肺组织中的表达,探讨PPARγ在肺癌及肺炎性病变中的意义。方法:采用免疫组化法检测29例肺癌、7例肺良性肿瘤、15例肺炎性组织及7例正常肺组织中的PPARγ表达,并通过彩色医学图文分析系统检测PPARγ平均吸光度值。结果:PPARγ在肺癌及非肺癌组织中均有表达,正常肺组织主要表达于细胞核。细胞核中的PPARγ表达水平在正常肺组织显著高于肺癌及肺炎性组织,在肺良性肿瘤显著高于肺癌组织,差异均有统计学意义(P〈0.05)。肺癌组织中PPARγ表达从高到低依次为鳞癌、腺癌、大细胞癌、小细胞癌,鳞癌和腺癌显著高于大细胞癌和小细胞癌,中分化肺癌显著高于低分化肺癌。结论:PPARγ表达与肺癌及肺组织炎症反应有关。PPARγ可能参与了肺癌及肺组织炎症反应的发病。PPARγ表达高低反应了肺癌分化程度,其值越低恶性程度越高,可作为判断肺癌预后的指标之一。 相似文献
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背景:目前研究发现,基质细胞衍生因子1/趋化因子受体4轴具有介导骨髓间充质干细胞定向迁移的作用。目的:构建小鼠趋化因子受体4基因重组腺病毒载体。方法:从C57BL/6小鼠中提取总RNA,以RT-PCR方法获得小鼠趋化因子受体4基因全长1080bp的完整编码序列,通过穿梭质粒pAdTrack-CMV,将目的片段克隆入AdEasy-1腺病毒DNA中,获得重组腺病毒DNA,通过脂质体转染293细胞,经包装扩增后,获得重组腺病毒pAdTrack-CMV-CXCR4,并感染293细胞,PCR鉴定、Western blot检测蛋白表达。结果与结论:含趋化因子受体4基因的重组腺病毒pAdTrack-CMV-CXCR4构建成功,经PCR鉴定鉴定重组病毒中含有趋化因子受体4cDNA全长,经序列测定表明趋化因子受体4cDNA序列正确无丢失和错配现象,病毒滴度高,Western blot检测感染后293细胞趋化因子受体4的蛋白表达较未感染293细胞明显增加。 相似文献