抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨抗氧化剂吡略烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)的体外抗宫颈癌作用机制.方法:体外培养SiHa细胞,PDTC处理后采用WST-8方法检测SiHa细胞的增殖活性:Hoechst 33258染色、Annexin V-FITC/PI双标法细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡;凝胶迁移变动分析(EMSA)检测SiHa细胞核内核转录因子-kB(NF-kB)活性.结果:PDTC能有效抑制SiHa细胞增殖和诱导SiHa细胞凋亡;染色可见典型的凋亡细胞形态;各组间早期凋亡率比较差异有显著性(P＜0.01),100 μmol/L PDTC晚期凋亡率较其他组明显升高(P＜0.01):PDTC可抑制SiHa细胞核内NF-kB活性,其抑制强度与作用24 h细胞生长抑制率呈直线正相关(r=0.931,P=0.035),与作用48 h早期凋亡率呈曲线正相关(r=1.000,P=0.011).结论:PDTC抑制SiHa细胞增殖与其诱导细胞凋亡作用有关,而致凋亡作用可能与其抑制NF-kB信号转导通路,启动凋亡程序有关.     

吡咯烷二硫代氨基甲酸盐增强TNF-α对宫颈癌HeLa细胞的毒性作用及相关机制

目的研究核因子-κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)联合TNF-α对宫颈癌HeLa细胞生长及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法应用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度PDTC、TNF-α及两者联合作用对HeLa细胞生长抑制率的影响;采用光镜及DAPI法观察细胞形态学变化及凋亡情况;Westernblot法检测HeLa细胞A20和caspase-3蛋白的表达。结果 PDTC(50,100μmol/L)或TNF-α(30,60,120mg/L)可明显抑制细胞的增殖;低浓度PDTC(25μmol/L)不影响细胞增殖,但与TNF-α联合应用与单用TNF-α比较,细胞增殖抑制率明显增加(P<0.01);光镜与DAPI染色结果显示,不同浓度药物组的细胞均有明显的细胞凋亡特征,且联合用药组细胞凋亡率增高(P<0.01);PDTC(25μmol/L)与TNF-α(60mg/L)联合用药与单用TNF-α(60mg/L)或PDTC(50μmol/L)比较,胞质A20蛋白表达无明显变化,但caspase-3蛋白的表达明显增加(P<0.05)。结论 PDTC可增强TNF-α对宫颈癌HeLa细胞的毒性作用,其机制可能与PDTC抑制TNF-α诱导的核转录因子NF-κB的活性,最终上调凋亡蛋白caspase-3表达有关。     

吡咯烷二硫代氨基甲酸对百草枯肺损伤Nrf2激活的影响

目的 观察吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)对百草枯(PQ)中毒后SD大鼠肺损伤和Nrf2通路激活的影响.方法 48只成年雄性SD大鼠建立PQ肺损伤模型后随机(随机数字法)分为对照组(Control)和PDTC组.中毒后1、2、3周各处死3只动物取肺组织,HE染色行急性肺损伤(ALI)评分,Masson染色鉴定肺纤维化(LF)程度,组织匀浆测定MDA、GSH含量,Weston blot检测磷酸化Nrf2水平.两样本均数的比较用成组t检验,生存曲线用Wilcoxon (Gehan)检验.结果 大鼠中毒后出现了明显的中毒症状,Control组和PDTC组各有4只和9只动物存活到实验结束,PDTC明显延长动物的存活时间,Wilcoxon (Gehan)=10.17023,P=0.001.Control组肺内MDA水平都高于PDTC组,而GSH水平均低于PDTC组,差异有统计学意义.PQ中毒后PDTC组肺内p-Nrf2水高于Control组,1周:(0.32±0.04) vs.(0.23±0.05),P=0.003;2周:(0.62±0.06) vs.(0.33±0.03),P＜0.001;3周:(0.61±0.04) vs.(0.33±0.05),P＜0.001.PDTC组AIL评分低于Control组,ALI分别为1周:(5±0.95) vs.(8±1.23),P=0.002;2周:(9±1.18) vs.(11±1.02),P=0.019;3周:(11±1.33) vs.(12±1.42),P=0.002.Control组动物中毒后1至3周肺纤维化程度分别为(40.87±7.25)％、(43.38±5.71)％和(45.91±3.97)％,明显高于PDTC组的(32.92±2.34)％、(33.45±3.04)％和(35.27±3.81)％,P值分别为0.017、0.001和0.001.结论 PDTC减轻PQ中毒后肺损伤、肺纤维化,延长动物的存活时间与激活Nrf2通路及增强抗氧化能力有关.     

吡咯烷二硫代氨甲基甲酸盐对缺血再灌注所致肝损伤的保护作用

目的：探讨吡咯烷二硫代氨甲基甲酸盐(PDTC)对肝脏缺血再灌注(HIR)所致大鼠急性肝损伤(ALI)的保护作用及其作用机制。方法：Wister大鼠随机数字表法分为：HIR组，PDTC保护(HIR PDTC)组。HIR组阻断肝左叶及肝中叶的人肝血流60min后再灌注，PDTC组先经阴茎背静脉注射PDTC 120mg／kg后立即按HIR组致伤。分别采用EMSA法及免疫组化法检测再灌注后1，3，6，12h NF-κB活性及TNF-α表达，并用赖氏法检测血浆中ALT含量。另取大鼠20只，亦随机数字表法分为HIR组和PDTC保护组，观察ALT动态变化及生存率。结果：损伤后NF-κB结合活性明显升高，并于再灌注后3h达到高峰，TNF-α表达增加，同时血浆中ALT含量亦明显丹高，PDTC保护组NF-κB活性减弱，TNF-α表达减弱，ALT水平降低。PDTC保护组ALT异常时间缩短，生存率增加。结论：PDTC能通过抑制NF-κB的激活，减少致炎因子的基因表达与合成释放，减轻炎细胞浸润，从而对HIR所致ALI起到保护作用，有利于HIR损伤的康复。     

不同浓度吡咯烷二硫氨基甲酸对高糖下大鼠肾成纤维细胞单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的:探讨不同浓度吡烷二硫氨基甲酸(PDTC)时高糖下大鼠成纤维细胞(NRK)中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响.方法:体外培养大鼠NRK细胞;葡萄糖孵育下分6组,正常对照组、高糖1组、高糖2组含葡萄糖分别为5.6、15和30 mmol/L,干预组在葡萄糖30 mmo/L基础上分别加入PDTC 5、10和20 p.mol/L;RT.PCR检测24、48 h后各组MCP-1 mRNA表达水平,免疫细胞化学(ICC)法检测24、48 h各组的MCP.1蛋白表达情况.结果:与正常对照组相比.高糖组MCP.1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P＜0.05),且呈剂量时间依赖性;而不同浓度PDTC干预后,MCP.1 mRNA和蛋白表达水平显著下降(P＜0.05),且与PDTC呈剂量时间依赖性.结论:PDTC下调NRK细胞中MCP-1 mRNA和蛋白的表达.     

核因子-κB活化在大鼠急性坏死性胰腺炎肺损伤中的作用

目的研究核因子-κB (NF-κB) 活化在大鼠急性坏死性胰腺炎(ANP)肺损伤中的作用和NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)的作用. 方法实验动物随机分成3组,对照组,ANP组,PDTC组,然后逆行性胰胆管注射5%牛磺胆酸钠制作ANP模型.观察血清淀粉酶、动脉血氧分压(PaO2)、胰腺、肺组织病理变化、NF-κB抑制蛋白IκBα及NF-κB p65 mRNA在肺组织的表达.结果 应用PDTC后,PDTC组与ANP组比较,血清淀粉酶明显下降,由(8 231.20±848.70)U/L降至(4 205.20±1 611.49)U/L;PaO2升高,由(80.70±8.05)mmHg升至(86.80±3.58)mmHg;胰腺、肺组织损伤减轻;NF-κB迅速活化,肺组织中IκBα表达升高,NF-κB p65 mRNA表达下降.结论 NF-κB活化在ANP肺损伤发病机制中起作用,抑制NF-κB活化可改善大鼠ANP肺损伤.     

抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯对哮喘小鼠模型的作用研究

目的：通过使用抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯（PDTC）阻断核因子-κB（-κB）的激活以观察PDTC在哮喘小鼠发病中的作用。方法：将40只BALB／c小鼠随机分为对照组和PDTC组。采用卵清蛋白（OVA）致敏OVA激发的方法制备小鼠哮喘模型。PDTC组于OVA激发前腹腔注射-κB的特异性抑制剂PDTC（100mg／kg）。采用免疫组织化学方法检测两组小鼠肺组织P50蛋白的表达，肺组织病理切片观察两组小鼠炎症细胞浸润情况。结果：对照组P50蛋白的表达明显高于PDTC组[（30．3±3.2）％vs（14．7±2．6）％，P〈0．01]，小鼠肺组织病理结果显示PDTC组嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞等炎症细胞浸润较对照组明显减轻，结论：PDTC作为特异性的-κB抑制剂．可以显著减轻哮喘小鼠的肺部炎症细胞浸润，但是．抗氧化剂应用于临床哮喘的治疗还需要进一步的研究以寻找副反应小的药物。     

抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯对哮喘小鼠模型的作用研究

目的:通过使用抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)阻断核因子-κB(NF-κB)的激活以观察PDTC在哮喘小鼠发病中的作用.方法:将40只BALB/c小鼠随机分为对照组和PDTC组,采用卵清蛋白(OVA)致敏OVA激发的方法制备小鼠哮喘模型.PDTC组于OVA激发前腹腔注射NF-κB的特异性抑制剂PDTC(100 mg/kg).采用免疫组织化学方法检测两组小鼠肺组织P50蛋白的表达,肺组织病理切片观察两组小鼠炎症细胞浸润情况.结果:对照组P50蛋白的表达明显高于PDTC组[(30.3±3.2)%vs(14.7±2.6)%,P＜0.01],小鼠肺组织病理结果显示PDTC组嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞等炎症细胞浸润较对照组明显减轻.结论:PDTC作为特异性的NF-κB抑制剂,可以显著减轻哮喘小鼠的肺部炎症细胞浸润.但是,抗氧化剂应用于临床哮喘的治疗还需要进一步的研究以寻找副反应小的药物.     

吡咯烷二硫代氨甲基甲酸盐对缺血再灌注所致肝损伤的保护作用

目的:探讨吡咯烷二硫代氨甲基甲酸盐(PDTC)对肝脏缺血再灌注(HIR)所致大鼠急性肝损伤(ALI)的保护作用及其作用机制。方法:Wister大鼠随机数字表法分为:HIR组,PDTC保护(HIR+PDTC)组。HIR组阻断肝左叶及肝中叶的入肝血流60min后再灌注,PDTC组先经阴茎背静脉注射PDTC120mg/kg后立即按HIR组致伤。分别采用EMSA法及免疫组化法检测再灌注后1,3,6,12hNF-κB活性及TNF-α表达,并用赖氏法检测血浆中ALT含量。另取大鼠20只,亦随机数字表法分为HIR组和PDTC保护组,观察ALT动态变化及生存率。结果:损伤后NF-κB结合活性明显升高,并于再灌注后3h达到高峰,TNF-α表达增加,同时血浆中ALT含量亦明显升高,PDTC保护组NF-κB活性减弱,TNF-α表达减弱,ALT水平降低。PDTC保护组ALT异常时间缩短,生存率增加。结论:PDTC能通过抑制NF-κB的激活,减少致炎因子的基因表达与合成释放,减轻炎细胞浸润,从而对HIR所致ALI起到保护作用,有利于HIR损伤的康复。     

丙泊酚对大鼠肾缺血再灌注损伤细胞凋亡信号通路的影响

背景:肾移植中肾缺血再灌注损伤能引发凋亡程序的执行,丙泊酚可能的肾保护作用及其与细胞凋亡通路间的关系,有助于探讨丙泊酚的作用机制.目的:探讨丙泊酚对大鼠肾缺血再灌注损伤细胞凋亡通路的影响及可能的作用机制.设计,时间及地点:动物实验,细胞形态学观察,于2004/2005在北京友谊医院泌尿外科研究所实验室共同设计和完成.材料:选取封闭群SD成年雄性大鼠99只.兔抗鼠Bcl-2、Bax、caspase3、cytochrome C均为武汉博士德生物工程有限公司产品.方法:将动物随机分为对照组26只、缺血再灌注组35只、缺血再灌注+丙泊酚组38只.建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型,术前单次静脉缓慢输注乳酸林格液5 mL/kg,逐层正中切口开骏,切除右肾,用无创血管夹夹闭左侧肾蒂,缺血时间45 min,松夹再灌注后全层缝合腹壁,取再灌注0,3,12,24,72 h左侧肾脏,取肾同时采血处死动物.缺血再灌注+丙泊酚组在缺血前15 min用药,丙泊酚1 mg/(kg·min)直至再灌注后30 min,共用药75 min.对照组和缺血再灌注组以乳酸林格液等量输注.主要观察指标:观察损伤肾的形态学改变,用免疫组织化学观察细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase 3和细胞色素C的表达情况.结果:光镜可观察到肾缺血再灌注引起的肾损害,程度依次为近曲小管、远曲小管、集合管、肾小球;免疫组化图像分析观察到缺血再灌注组与对照组相比,Bax、caspase 3,细胞色素C表达增加,Bcl-2表达未见明显变化;缺血再灌注+丙泊酚组与对照组比较,前者Bax、caspase 3和细胞色素C表达下降,Bcl-2表达增高(P＜0.05).结论:丙泊酚对肾缺血再灌注损伤引起的细胞凋亡可能具有保护作用,可能机制是抑制促凋亡蛋白Bax、caspase 3和细胞色素C的表达,对Bcl-2的表达无影响,与细胞凋亡的线粒体通路途径有关.     

四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯对大鼠肠缺血再灌注损伤的影响响

目的：观察四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯（PTDC）对大鼠肠缺血再灌注后肠组织损伤的影响。方法：36只SD大鼠随机分为3组。每组12只。（1）缺血再灌注组（I／R组），暴露腹腔后夹闭肠系膜上动脉（SMA）60min。开放灌注120min；（2）PTDC组（P组），在肠缺血前5min静脉给予PTDC 100mg／kg；（3）假手术组（S组），仅暴露SMA，不行肠缺血再灌注及PTDC注射。所有动物于再灌注120min时处死，行肠组织苏木精-伊红染色观察肠损伤程度并评分：检测肠组织中丙二醛（MDA）含量及髓过氧化物酶（MPO）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性。结果：与S组相比，I／R组、P组GSH-PX活性明显降低（P〈0．01，P〈0．05），MDA含量、MPO活性及小肠损伤评分明显升高（P〈0．01．P〈0．05）。与I／R组相比，P组小肠损伤评分、MDA含量及MPO活性明显降低．GSH-PX活性明显升高（均P〈0．05）。结论：PDTC对大鼠肠缺血再灌注后的肠道有保护作用，该保护作用与抑制中性粒细胞浸润、减少脂质氧化程度及氧自由基有关。[著者文摘]     

银杏叶提取物对肾缺血-再灌注后细胞凋亡的影响

目的:观察银杏叶提取物对大鼠肾缺血-再灌注后细胞凋亡的影响.方法:采用动脉夹闭大鼠双侧肾蒂45 min、再灌注24 h的方法制成急性肾缺血-再灌注模型.光、电镜观察细胞结构改变;采用脱氧核苷酸末端转移酶介导的DNA原位末端标记技术检测细胞凋亡的情况,流式细胞仪定量分析细胞凋亡;测定血浆肌酐、尿素氮,并观察肾功能变化.结果:缺血-再灌注组较假手术组肾小管凋亡细胞数明显增多;银杏叶提取物处理组较缺血-再灌注组凋亡细胞数明显减少,组织损害明显减轻.结论:银杏叶提取物预防给药能减轻肾缺血-再灌注损伤,其机制可能与抑制细胞凋亡有关.     

维生素E在大鼠肾脏缺血再灌注中的作用

目的 观察维生素E(VE)对大鼠肾脏缺血再灌注(I/R)的作用.方法 18只健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、I/R组、VE+ I/R组,每组6只.所有动物于I/R术24h后处死,取肾组织进行光镜检查,留取血清测定尿素氮(BUN)和肌酐(SCr)的浓度.Western印迹测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白的表达.结果 HE、PAS染色结果显示,I/R组肾小管及间质病理损伤显著重于假手术组,VE+ I/R组小管间质损伤程度较肾脏I/R组明显减轻.与假手术组相比,I/R组以及VE+I/R组BUN和SCr均明显升高[BUN:(10.13±2.14)、(7.67±1.63)、(3.85±0.21) mmol/L,SCr:(80.33±7.15)、(63.67±5.40)、(48.67±3.61)μmol/L](P均＜0.05);VE+ I/R组较I/R组BUN和SCr水平显著降低(P均＜0.05).Western Blotting检测显示,VE+ I/R组肾组织TNF-α蛋白表达与I/R组相比显著降低(P＜0.05).结论 VE可能通过抑制TNF-α表达发挥对I/R中肾脏保护作用.     

中药对缺血/再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响

自1972年Kerr和Wyllie首次提出细胞凋亡后,一直是人们研究的热点.存在于心肌细胞中的细胞凋亡在心脏的病理生理发展过程中以及维持心脏正常形态结构方面起着重要作用,被认为是心脏由代偿性变化向病理性变化发展的细胞学基础.     

Anti-inflammatory effects of U74389F in a rat model of intestinal ischemia/reperfusion injury.

OBJECTIVE: To investigate the role of eicosanoid generation and neutrophilic infiltration in the protective effects of U74389F against ischemia/reperfusion injury in the small intestines of rats. DESIGN: Prospective, randomized, controlled study. SETTING: University research laboratory. SUBJECTS: Adult, male Sprague-Dawley rats weighing between 200 and 300 g. INTERVENTIONS: Groups (5-8) of rats treated with U74389F or vehicle were subjected to a sham operation and 30 mins of ischemia by occlusion of the superior mesenteric artery or 30 mins of ischemia followed by 60 or 120 mins of reperfusion. U74389F (2.5 mg/kg i.v.) or vehicle (citrate buffer) were slowly injected 2 mins before ischemia. MEASUREMENTS AND MAIN RESULTS: Ischemia significantly (p < .05) increased mucosal injury (0 [normal] to 5) in both U74389F and untreated rats. In contrast, U74389F significantly (p < .05) attenuated the severity of injury after reperfusion. In vehicle-treated rats, ischemia/reperfusion significantly reduced villus height in both U74389F and untreated groups. However, the surface epithelial layer was intact in the U74389F but not in the vehicle-treated group. In addition, compared with the vehicle-treated group, U74389F significantly reduced neutrophil infiltration and prevented the increase in leukotriene B4 and prostaglandin E2 in response to ischemia and reperfusion. CONCLUSIONS: This study demonstrates that the mechanism of U74389F against mesenteric ischemia/reperfusion includes a delay and reduction of neutrophilic infiltrate, an inhibition of leukotriene B4 production, and a facilitation of mucosal restitution.     

N-去硫酸肝素对肝和肾缺血-再灌流损伤防治作用的研究

目的：探讨N－去硫酸肝素对肝和肾缺血－再灌注损伤的防治作用。方法：分别建立大鼠肝及肾缺血－再灌流损伤模型，观察和比较经N－去硫酸肝素处理前后大鼠肝、肾组织P－选择素表达，组织病理学改变及肝、肾功能变化，以及对凝血指标（PT和KPTT）的影响。结果：肝、肾缺血再灌流后，大鼠肝、肾组织内P－选择素广泛表达，出现明显的组织病理学改变及肝、肾功能损伤。经给予N－去硫酸肝素处理后，肝、肾组织P－选择素表达受到抑制，组织病理学改变减轻，肝、肾功能得到改善，进一步发现N－去硫酸肝素对PT和KTPP无明显影响。结论：N－去硫酸肝素可能通过间接抑制P－选择素作用，而对肝和肾缺血－再灌流损伤起到防治效果，且对凝血指标无明显影响。